精子形态与核蛋白组型转换及DNA完整性的相关性_李俊
男性不育实验诊断方法及临床应用
灰度CASA的特点
精子识别: 根据成像灰度识别精子,易将精液杂质误 识别为精子,需要人工干预帮助识别。
荧光CASA的特点
识别原理：
荧光色素与活精子（双链DNA）结合 后出现绿色荧光反应，而与死精子（单链 DNA）结合时则呈橙色荧光。除精子和极 少数非精子细胞外，精液中的其他细胞和 颗粒碎片均不发荧光。
临床意义:
精浆柠檬酸来自前列腺，其作用是 络合钙离子，通过与钙离子结合，而调 节精浆钙离子浓度，并影响射精后精液 液化过程的功能。
前列腺分泌功能指标:精浆酸性磷酸酶
临床意义：
前列腺炎患者精浆酸性磷酸酶含量降低, 前列腺肥大或早期前列腺恶性肿瘤者其含量 增高。
前列腺分泌功能指标:精浆锌
临床意义:
① 锌缺乏可引起性腺发育不良或性腺功能 减退。 ② 锌可调节雄激素代谢，锌含量降低时可 促进睾酮转变为双氢睾酮。
精子形态学分类标准(Kruger & menkfeld)
精子形态学计算举例
计数的精子数： 200 正常精子数： 78 正常精子百分比：（78/200×100%） 39% 缺陷精子数：（200-78） 122（61%） 头部缺陷精子数： 110（55%） 中段缺陷精子数： 18（9%） 尾部缺陷精子数： 16（8%） 缺陷总数：（110+18+16） 144 畸形精子指数(TZI) = (缺陷总数/ 缺陷精子数) =1.18 精子畸形指数(SDI) = (缺陷总数/所数精子总数) =0.72
人类射出的精液中，活性氧类物质是由中段带 有多残留细胞质的异常或不成熟精子精子和白 细胞产生的。 精浆中有抗氧化物清除剂和酶，某些病人的这 些物质可能不足。
在制备辅助受孕的精子时去除精浆，有可能使 精子更易受到氧化损害。
探讨精子核蛋白组型转换异常对精子DNA碎片指数的影响
探讨精子核蛋白组型转换异常对精子DNA 碎片指数的影响作者：甄国志麦福劲林冰叶宇庞颖仪梁洁珩梁宇玲来源：《中国实用医药》2020年第22期【摘要】目的探讨精子核蛋白组型转换异常对精子DNA碎片指数（DFI）的影响。
方法400份精液检查标本为研究对象，按核蛋白组型转换异常率分为<30%组（200例）和≥30%组（200例）。
比较两组的精子数及DFI。
结果≥30%组的大晕环精子数（68.9±11.5）条少于<30%组的（78.6±8.9）条，无晕环精子数（11.9±8.1）条多于<30%组的（4.3±8.5）条， DFI （23.5±9.6）%高于<30%组的（13.8±8.7）%，差异均具有统计学意义（P<0.05） ;两组中晕环精子数、小晕环精子数比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。
结论精子核蛋白组型转换异常对DFI有影响，可作为评价精子功能的一项有重要意义的参考指标。
【关键词】精子核蛋白组型转换异常;精子DNA碎片指数;不育症DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2020.22.013Discussion on the influence of abnormal sperm nucleoprotein transition on sperm DNA fragment index; ;ZHEN Guo-zhi， MAI Fu-jin， LIN Bing，et al. Shunde Women and Children’s Hospital of Guangdong Medical University， Foshan 528300， China【Abstract】 Objective; ;To discuss the influence of abnormal sperm nucleoprotein transition on sperm DNA fragment index （DFI）. Methods; ;A total of 400 specimens of semen were taken as the research objects， and were divided into <30% group （200 cases）and ≥30% g roup （200 cases）according to the abnormal rate of nucleoprotein transition. The sperm count and DFI of the two groups were compared. Results; ;The number of spermatozoa with large halos （68.9±11.5）pieces of ≥30% group was less than that of <30% group （78.6±8.9） pieces， number of spermatozoa with no halos （11.9±8.1） pieces was more than that of <30% group （4.3±8.5） pieces， and DFI （23.5±9.6）% was higher than that of <30% group （13.8±8.7）%， and the difference was statistically significant （P<0.05）. There was no statistically significant difference in number of spermatozoa with medium-sized and small-sized halosbetween the two groups （P>0.05）. Conclusion; ;Abnormal sperm nucleoprotein transition affects DFI and can be used as an important reference index for evaluating sperm function.【Key words】 Abnormal sperm nucleoprotein transition; Sperm DNA fragment index; Infertility男性不育症是临床常见的一种生殖疾病，根据世界卫生组织（WHO）的统计， 15% 的育龄夫妇存在不育问题，其中，男方因素占40%[1]， DFI是目前评估男性精子质量及功能的重要指标。
精子DNA检测系列简介
包装规格：10人份/盒、20人份/盒 、 40人份/盒
存储条件及有效期： 试剂盒于2-8℃避光保存，有效期为12个月。
（三）
精子活体染色试剂盒 （拒染法）
检测原理：
利用荧光络黄染料（吖啶橙）具有高度的异 染性的特性，以插入的方式与双螺旋的DNA分子
结合，染色后断裂的单DNA精子呈绿色荧光。
医生可通过计算红色和黄色荧光精子即单链DNA
精子的百分率评估精子受精几率。
3、检测操作过程
检测样本：液化后的新鲜精液标本 精子洗涤 涂片 固定
三明市和众生物技术有限公司内部培训资料
生殖医学检测试剂盒系列
精子五联检
1、精子DNA检测试剂盒 2、精子DNA碎片检测试剂盒 3、精子活性检测试剂盒 4、精子形态学检测试剂盒 5、精子核蛋白检测试剂盒
影响精子受精或男性不育的因素
精子死亡率过高 精子畸形率过高 精子成熟率过低 精子染色体异常 精子数量过少 精子活动力过低 精子液化能力过低
完
正常参考值：核蛋白不成熟精子≤30%
结果： 核蛋白不成熟的精子（IM）染紫蓝色或紫色 核蛋白成熟的精子（M）染红色。
操作方法
精子液化 精子洗涤 精子洗涤
涂片
复染 洗脱 染色 固定
镜检
染色效果
不成熟精子
成熟精子
正常参考值：核蛋白不成熟精子≤30%
产品基本信息
产品注册证号：闽明食药监械（准）字2013第1400022号 执行标准号：YZB/闽明0033-2013 生产许可证号：闽食药管械生产许第20110297号
精子染色质扩散法检测精子DNA完整性方法探讨及临床意义
研 究 表 明 阳性 率 小 于 １ 组 的正 常 受 精 率 显 著 高 于大 于 １ ｏ Ｏ
对 照 。年 龄 ２ ～４ ５ Ｏ岁 ， 均 （ １ ２ 岁 。 平 ３± ）
２ １ 不 同 年 龄 段精 子 Ｄ ． ＮＡ 碎 片 完 整 性 检 测 结 果 ， 表 １ 见 。从
表 １ 以看 出 ， 着 年 龄 的 增 长 ， ＮＡ 碎 片 阳性 率 大 于 １ 可 随 Ｄ Ｏ 者 所 占 比 例 越 来 越 高 ， 次 为 ２． 、２ 、 ８ ２ 、 依 ３ １ ３ ．３ ３． ４ ． 、５ ０ 、 ６ ７ ， 后 两 组 因 统 计 量 太 小 予 以 剔 除 ， ２ ９ ２ ． ６ ． 最 有
（ ）： ３ － ３ ． ４ ８ ０ ８ ９
核 蛋 白组 型 转 换 、 二硫 键 交 联 等 一 系 列 过 程 ， 易 受 到 环 境 因 容 素 、 物 因 素 、 物 接 触 、 染 、 烟 等 作 用 会 导 致 染 色 质 结 构 生 药 感 吸 异 常 ］同 时 ， ， 高度 浓 缩 的 结 构 造 成 精 子 缺 乏 修 复 Ｄ ＮＡ 缺 陷 的 能 力 ， 构 损 伤 比较 稳 定 ， 一 直 存 在 。染 色 质 结 构 异 常 的 结 可 发 生 机 制 假 说 包 括 染 色 质 包 装 缺 陷 、 亡 异 常 及 氧 化 应 激 凋 等 ［ ， 现 为核 蛋 白组 型 异 常 和 Ｄ ８表 ］ ＮＡ 链 碎 片 化 。核 蛋 白 核 型
目前 ， 约 １ 的 夫 妇 患 有 不 孕 不 育 ， 与 遗 传 、 态 环 有 ５ 这 生
转换蛋白2及其调节和生理病理作用
转换蛋白2及其调节和生理病理作用宁毅;郑晓旭;孙睿【摘要】转换蛋白（TRA）2为前体mRNA剪接蛋白，是一族富含丝氨酸-精氨酸重复剪接因子（SR）家族的相关蛋白，包括TRA2α和TRA2β两个亚族。
它们在结构上与SR蛋白有着一定的相似性，在功能上与SR蛋白有着明显的差异，即TRA2蛋白不为组成性剪接所必需，但在选择性前体mRNA剪接中决定剪接位点方面却起着重要的作用。
在哺乳动物中，TRA2蛋白家族在生理和病理过程中发挥着诸多关键性作用，且在疾病的发生发展过程中错误地调控剪接过程产生异常的RNA可引起分子病或者导致原来的疾病更加严重。
迄今为止，人们还不清楚TRA2蛋白与疾病间的关系，所以对其引起疾病的治疗研究还处在初级阶段。
%The transformer(TRA)2 protein belongs to the serine/arginine-rich(SR) protein family. The protein possesses two homologs, namely, TRA2α and TRA2β. These homologs exhibit structures similar to those of the SR proteins but significantly differ in function. TRA2 is not necessarily implicated in composition splicing but plays an important role in selecting the splicing sites of precursor mRNA. Further studies found that in mammals, the TRA2 family protein plays a key role in many physiological and pathological, as well as disease occurrence and development, processes. Moreover, the abnormal splicing process of RNA molecules can cause disease or aggravate existing pathological problems. However, the relationship between TRA2 proteins and diseases remains to be completely understood. Additional energy and effort are required to achieve success in investigating disease causes and in developing treatments【期刊名称】《国际口腔医学杂志》【年(卷),期】2016(043)003【总页数】4页(P357-360)【关键词】转换蛋白;前体mRNA剪接蛋白;生理病理作用;疾病防治【作者】宁毅;郑晓旭;孙睿【作者单位】山西医科大学口腔医学系太原 030001;马里兰大学医学院附属医院肾内科巴尔的摩 21201;山西省人民医院口腔颌面外科太原 030012【正文语种】中文【中图分类】Q51前体mRNA剪接转换蛋白（transformer，TRA）2是一族富含丝氨酸-精氨酸重复剪接因子（splicing factor containing serine-arginine repeat，SR）家族相关蛋白，它包括TRA2α和TRA2β亚族。
2009年度南京师范大学国家自然科学基金资助项目清单
2009年度南京师范大学国家自然科学基金资助项目清单学院姓名申请项目名称资助类别金额(万元)数科院（6项）纪春岗L-函数，二次域以及其它数论问题面上项目27魏加群有限维猜测及其相关问题与理论研究面上项目24陈二才动力系统中的拓扑压与维数理论面上项目26曹海涛二维光正交码及相关设计的研究面上项目25王丽大型稀疏非对称线性方程组的预处理及高效算法研究面上项目26赫海龙辛几何中的开“格罗莫夫-威腾”不变量青年基金16物科院（4项）童培庆准周期与非周期系统的若干动力学和相关问题的研究面上项目34马青玉基于声偶极振动矢量的磁感应磁声衍射层析成像技术研究面上项目36肖振军B介子物理高阶QCD修正计算和唯象研究面上项目36张宁异型（复合）铁磁∕铁电复合材料中的电致变磁导效应与微振发电面上项目42化科院（7项）黄晓华稀土作用于辣根细胞膜的若干生物无机化学行为研究面上项目35孙培培高活性纳米金属的制备及其催化有机反应的研究面上项目35魏少华酞菁/二氧化硅靶向给药体系的构建及其光动力活性研究面上项目35杨维本不同结构吸附树脂对典型抗生素类有机物的吸附行为与机理面上项目36韩敏金属纳米晶的可控合成、组装及多功能异质纳米结构的构筑青年基金18李卉卉环境中有机污染物分子与人类肿瘤相关DNA作用机制的研究青年基金19张卉纳米界面上蛋白质构象及其电化学性能青年基金20生科院（11项）陈双林黏菌代表种的DNA标识区段及遗传多样性的研究面上项目25戴亦军不同共代谢基质控制嗜麦芽寡养单胞菌的吡虫啉代谢途径的机理研究面上项目35邵蔚蓝一株嗜冷菌及镶嵌其细胞壁的大型颗粒的研究面上项目35蒋国芳黄脊雷篦蝗的种群遗传结构和系统地理格局研究面上项目31马飞脊椎动物miRNA基因的起源与进化分析面上项目32杨州微囊藻表型转化的野外原位研究面上项目32戴传超广谱植物内生菌优化花生连作土壤微生物区系的研究面上项目30陈龙镉激活神经细胞mTOR通路诱导凋亡及雷帕霉素靶向调控抗凋亡分子机理面上项目31陈华群内皮细胞肌球蛋白轻链激酶调节小鼠肾脏发育及其机制面上项目31裴建军嗜热厌氧乙醇杆菌中还原力感应蛋白介导乙醇代谢调控的分子机理青年基金20陈玉清抗菌肽CM4对癌细胞与正常细胞的选择性与机理青年基金20地科院（17项）汤国安基于DEM的黄土高原地貌形态空间格局研究重点项目150汪涛基于知识网络视角的高科技园区产业空间集聚研究——以苏南为例面上项目30黄震方基于文化视角的区域旅游发展机制与模式研究——以长江三角洲地区为例面上项目30方斌我国东部地区耕地利用的综合优化模式研究——以浙江省浦江县为例面上项目30李云梅面向湖泊水色遥感的多源数据融合与生成研究面上项目35刘学军融合地形结构的DEM质量分析研究面上项目35张雪英面向GIS的文本空间关系解析机制研究面上项目35赵媛中国石油资源流动空间格局演化规律与形成机制研究面上项目36吴江滢辽宁暖和洞年纹层状石笋全新世东亚季风气候记录与驱动机制研究面上项目49张茂恒中更新世以来大九湖盆地泥炭沉积的气候地层学研究面上项目50刘金娥互花米草对苏北盐沼沉积物有机碳库功能格局影响机理面上项目49齐相贞不同繁殖方式的外来入侵植物的扩散机制研究青年基金18周年兴旅游地景观格局演变机制及优化研究：以武陵源为例青年基金18刘会玉植物入侵对不同尺度栖息地时空变异的响应及其预测青年基金20杨昕基于DEM的黄土高原流域边界剖面谱研究青年基金18吴明光基于庞加莱对偶的三维自由拓扑模型青年基金18张卡基于非下采样Contourlet变换的多源影像自动匹配方法研究青年基金18电自院（1项）田恩刚网络控制系统的随机建模、分析与综合面上项目19动院（2项）杨宏旻烟气中单质汞的等离子放电协同光催化氧化特性研究面上项目30王延华生态土壤污水处理系统温室气体的量化和产生机制研究—太湖流域为例面上项目20请项目主持人按照国家自然科学基金项目及经费管理办法，填报项目计划书。
精子核蛋白染色液(苯胺蓝染色法)
精子核蛋白染色液(苯胺蓝法)产品简介：正常情况下，与精核DNA 结合的碱性蛋白（核蛋白）将经历从组蛋白到鱼精蛋白的自然成熟过程，这种成熟后的鱼精蛋白对精子基因（DNA ）具有特殊保护作用。
组蛋白被鱼精蛋白逐渐取代的过程，称之为精子核蛋白组型转换，这种组型转换具有重要的生理意义。
精子核携带着全部来自父方的遗传信息，这些基因必须在受精后才能开始表达。
受精前精子基因在鱼精蛋白的特殊保护下，紧密浓集，无任何DNA 转录作用。
但当核蛋白组型转换异常可引起男性不育或胚胎早期夭折流产，其机理为：①精子DNA 不稳定且易受损伤而难以受孕；②一旦受精，由于核蛋白组型异常，精子核不能正常解聚，从而影响了雌雄原核的融合；③胚胎不能正常发育，造成胚胎夭折而流产。
因此，组蛋白的多少是精子成熟度的一个重要指标，酸性条件下苯胺蓝能特异地与精子核组蛋白富含的赖氨酸残基结合生成紫蓝色化合物，根据着色的深浅来判断精子的成熟程度。
产品组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 新鲜精液样本3、 恒温箱4、 防脱载玻片操作步骤(仅供参考)：1、配制洗涤工作液: 取适量的10×浓缩洗涤液，以蒸馏水10稀释后即为洗涤工作液。
2、取新鲜精液标本置于恒温箱37℃或常温放置，至完全液化。
3、取上述液化精液0.2~0.5ml 置于EP 管，再加入1-1.5ml 洗涤工作液，用吸管或移液器反复吹打数次，室温2000rpm 离心5min ，弃去上清液，保留管底精子沉淀团；重复操作编号 名称DA1201 20T DA1201 40T Storage 试剂(A): 10×浓缩洗涤液 10ml 20ml RT 试剂(B): 固定液 10ml 20ml 4℃ 避光 试剂(C): 苯胺蓝染色液 5ml10ml RT 避光使用说明书1份3次。
4、向第3步的EP管中加入洗涤工作液约0.1-0.2ml，制成混合精子悬液。
5、取上述已制备好的精子悬液15μl，均匀涂布于防脱载玻片上，自然干燥。
男性不育实验诊断检测项目基本内容及意义
男性不育实验诊断检测项目基本内容及意义暨南大学医学院附属深圳市人民医院（518020，深圳）刘瑜何林随着基础研究的深入，与男性不育相关实验检测项目愈来愈多，内容涉及形态学、免疫学、生物化学及分子生物学等多学科领域。
在这些繁冗的检测项目中究竟哪些最具诊断价值以及如何正确运用这些检测项目来进行不育症的病因学诊断，是长期困扰男性不育实验诊断临床应用的技术难题。
现将当今较为成熟、有良好应用价值并获得国际专家学者广泛认可的实验检测指标介绍如下：一、静止性生殖道感染检测指标精液中的泌尿生殖道上皮细胞、前列腺细胞、生精细胞和白细胞形态在湿片状态下是无法区分开的，它们统称为圆细胞（Round cells）。
只有通过特殊检查才能将白细胞与其他类型圆细胞区别开，从而达到判断感染是否存在的目的。
精液白细胞过氧化物酶(Leukocyte Peroxidase)染色、精液白细胞群(Leukocyte subpopulations)定量和精浆弹性蛋白酶(Elastase)定量是目前用于精液感染性检测的常用指标。
其中前二者是WHO推荐指标，后者是近几年被国内外学者广泛研究认可的检测指标。
精液白细胞过氧化物酶染色、精液白细胞群定量主要用于判断白细胞精子症，精液白细胞数大于1×106/ml即可确诊。
但二者在诊断准确性上是有差别的。
过氧化物酶染色只能检测到精液中分泌过氧化物酶的中性粒细胞，不能检出精液中所有白细胞，故假阴性率高。
而白细胞群定量是迄今为止最准确可靠的白细胞精子症检测方法，可检测出精液中所有类型白细胞。
精浆弹性蛋白酶定量检测的是白细胞抗炎效应复合物。
精液中弹性蛋白酶浓度与白细胞量不一定总是成正比。
有研究表明，精液弹性蛋白酶浓度与精液中白细胞（过氧化物酶法检测）呈良好相关性。
精液白细胞浓度>1×106/ml时，精浆弹性蛋白酶浓度均>1000ng/ml。
但当精液白细胞浓度<1×106/ml时，亦有一些标本精浆弹性蛋白酶浓度>1000ng/ml[1]。
宝宝灯塔：做试管婴儿前需要检查及注意事项
做试管婴儿前需要检查及注意事项内容可反复阅读，适合想要了解做试管婴儿前需要做哪些检查的人群，以下内容由宝宝灯塔网整理提供。
一、准备试管婴儿前的备孕工作在决定进行试管婴儿后，就应该开始着手准备一些孕前工作，要知道孕前的准备工作其实是非常重要的但是很多姐妹说，对孕前准备如下：1、提前去医院进行身体检查，如果有问题得先治疗好了再决定要孩子，跟医生详细咨询一下需要的准备工作以及孕期需注意什么。
2、一旦打算要孩子好尽早受孕，否则年龄越大，受孕的机率越小，也会影响胚胎的质量。
3、每天保持充足的睡眠，尽量保持心情愉悦。
4、每天保持摄入新鲜蔬菜、水果、鸡蛋、牛奶、肉类等含高蛋白质的食物，储存营养。
5、保持适量的运动，运动能让人精神状态良好。
二、备孕不能做哪些体检从甜蜜的二人世界，到幸福的三口之家，备孕的过程很重要，备孕前检查项目更是必不可少。
不事先了解自身情况，盲目备孕不但耽误时间还浪费精力。
孕前检查女性篇1、妇科B超：检查女方生殖系统，子宫及双侧附件有无异常，如幼稚型子宫、纵隔子宫、子宫肌瘤、息肉，卵巢囊肿等等。
2、阴道超声：利用B超阴道探头探查，可更为准确观察子宫内膜、卵巢，了解卵巢卵泡发育情况。
平时说的监卵，即是利用阴道超声动态观察卵泡发育，确定排卵日。
(检查前需排空膀胱)3、阴道/宫颈分泌物检查：有无杂菌、真菌、毛滴虫、支原体/衣原体感染。
4、生殖激素六项：雌二醇E2、促黄体生成素LH、促卵泡激素FSH、泌乳素PRL、睾酮T、孕酮P(了解判断女性卵巢功能)5、AMH ：抗谬勒氏管激素(了解判断女性卵巢功能)6、甲功五项：促甲状腺激素TSH、总T3、总T4、游离T3、游离T47、TORCH检查(优生检查)：包括弓形虫抗体、风疹病毒抗体、巨细胞病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体检测，检测IgM和IgG两种抗体，前者表示处于感染期，后者代表既往感染过。
处于感染期妊娠可能会导致流产、死胎、早产、畸形、神经发育障碍、先心病等。
男性不育症精子DNA损伤研究进展
道感染 、 睾丸温度 升高 、 精索静脉曲张、 激素 、 环境污 染等 因素有关。Ｔｒ 等 研究表 明， ｏ ｏ 辅助生殖技术 （Ｒ ） Ａ Ｔ 对精液进行体外处理 ， 室温培养和深低温保藏 操作均会加重精子 Ｄ Ａ损伤 。患 Ｂ地 中海贫 血的 Ｎ － 男性其精子 Ｄ Ａ损伤程度会增加 。某些药物 ， Ｎ Ｊ 如 合成除虫菊 酯杀虫剂 与治 疗抑 郁症 的药物 选择 性 ５羟色胺重摄取抑制剂也会造成精子 Ｄ Ａ损伤 。 一 Ｎ １２ 损伤机制 精子 Ｄ Ａ碎片化的发生机制 尚不 ． Ｎ 完全清楚 ， 一般认为与精子发生过程中的异常染色质 包装 、 氧化应激或凋亡异常有关 ， 也可能是几种机制
Ｄ Ａ断裂指数 （ Ｎ ａｔ ｅ ｎ ｅ， Ｆ ） Ｎ Ｄ Ａｆ ｃ ｒ ｉ ｘ Ｄ Ｉ呈显著正相 ｒ ｕ ｄ
彗星细胞 总长、 尾长与 头部 直径 比值等 ， 以评 估 用
Ｄ Ａ损伤程 度 。 Ｎ
２ ３ 脱氧核 糖核 苷 酸末端 转移酶 介 导的缺 口末端标 ．
关 。Ｅｅｐｅ ｓ ｒ ｒｓ 等 根据精液参数正常 与异 常将不 ｎ ｉ
症病 人 中发现 Ｄ Ａ损 伤 加 重 和 氧化 应 激 增 强 ， 虑 Ｎ 考
１ 精子 Ｄ Ａ损伤病 因及 发病机制 Ｎ
１１ 病 因 与男性不育本身一样 ， ． 精子 Ｄ Ａ损伤也 Ｎ
是多 因 素共 同作 用 的结 果 ， 与化 疗 、 疗 、 放 吸烟 、 殖 生
氧化应激与 Ｄ Ａ损伤有关 。精 子的 Ｄ Ａ损伤阻 Ｎ ｊ Ｎ 碍氧化应激有关的甲基化过程 ， 而抗氧化剂如维生素 ｃ等药物的补充似乎可以减少 Ｄ Ａ损伤精子的 Ｄ Ａ Ｎ Ｎ 甲基化和正常化 ＿ 。这些研究也为临床提高了新思 ９ Ｊ 路， 对于精子 Ｄ Ａ损伤严重的病人有可能通过药物 Ｎ 治疗提高精液质量 。
2014年南方医科大学华银病理诊断中心不育症检验项目名称及收费标准
2个工作日。
是不育男性必须进行的基础精液质量分析。按照世界卫生组织最新实验手册的要求和标准进行检查，可以确保获得准确的实验结果，为临床男性不育症分类和进一步的病因学诊断提供基础检测数据。
临床正常参考值：精液量≥1.5ml；液化时间≤1hr；粘稠度≤2cm；精子浓度≥15x106/ml；PR≥32%或PR+NP≥40%；圆细胞浓度<5x106/ml。
2、精液液化异常的不育男性；
3、有尿道感染史的不育男性；
4、行过睾丸穿刺、输精管吻合术或精索静脉结扎术的不育男性；
5、有性病感染史的不育男性；
6、无/少弱/畸形精子症的不育男性；7、一次射精量异常的不育男性；
8、精液常规检查存在精子聚集现象的不育男性；
9、包皮过长的不育男性；
10、有不洁性生活的不育男性；
样本要求：
男性禁欲2-7天之间的精液，要求手淫取精完整，以洁净取精杯加盖常温下保存，3小时内送检。
报告时间：
3个工作日。
近十年的研究表明，男性精子DNA损伤是女性习惯性流产尤其是胚胎早停的重要因素。较严重的精子DNA损伤，也会影响精子的受精能力，从而导致不育。采用荧光染色技术通过流式细胞仪检测精子DNA完整性，具有准确性高、重复性好等特点，是国际上评估精子DNA损伤的金标准。
临床正常参考值：有效精子浓度≥4.8x106/ml；受精指数≥30；精子凋亡率≤10%。
含取精和优劣精子分离、精子顶体完整率检查、精子受精能力测定和精子存活率试验。
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精子DNA完整性流式细胞仪检测（SCSA）
2x++
2x115+120+115=465
检测对象：
1、女方习惯性流产的配偶；
聚精颗粒对弱精子症CDY基因表达变化的作用研究
予聚精颗粒治疗 ３个月 ， 观察治疗前后精 液常规参数 以及 核蛋 白组 型转换 、 Ｄ Ｃ Ｙ基 因定量 表达 的变 化 。并 以 ５ ６例正常生育者作为对照 。结 果 与正 常对照组 比较 ， 精子密度 差异有统计 学意 义 （ Ｐ＜ ００ ）且精子核蛋 白组 型转换半定 量值 、 级精 子 、 ａ＋ｂ 级精子 和活动 率差异均 有统计学 意义 （ ．５ ， ａ （ ） Ｐ ＜ ． １ 。在聚精颗粒治疗 ３个月后 ， ００ ） 精子密度与治疗前 比较 ， 差异有统计 学意义 （ ０ ０ ） 且 治疗 Ｐ＜ ． ５ ， 后精子核蛋 白组型半定量值 和 ａ级精子 、ａ＋ ） 精子 、 （ ｂ级 活动率等 主要精 液参数指标 与治疗前 比较 ，
・
临床研究 ・
聚 精颗 粒 对 弱 精 子症 Ｃ Ｙ基 因表 达 变 化 的 Ｄ 作 用研 究
卞廷松 曾庆琪 谈 小林 史兵 伟 杨光 徐福松
【 摘要 】 目的 评价聚精颗粒治疗核蛋 白组 型转换 异常弱精子 症 的有效 性和安 全性 以及 Ｃ Ｙ Ｄ
（ ｈｏ ｄｍ ｉ Ｙ—ｌ ｅｐｏｅ ） 因 表 达 变 化 。 方 法 选 择 核 蛋 白组 型 异 常 弱 精 子 症 患 者 ６ Ｃｒ ｍｏｏ ａ ｎ ｉ ｒｔｉ 基 ｋ ｎ ３例 ， 给
・
Hale Waihona Puke ２ ２・ ２ 世 界 中西 医结 合 杂志 ２ １ ０ ２年第 ７卷 第 ３期
Ｗｏｌ Ｊｕｎｌ ｆｎｅｒｔ ｒｄｔｎ ｎ ｓ ｒ ｅｉｉ ２ １ Ｖ １７ Ｎ ． ｒ ｏｒａ ｔ ａ ｄＴａｉｏａ ａｄＷｅｔ Ｍ ｄｃ ｅ ０２，ｏ． ， ｏ３ ｄ ｏＩ ｇ ｅ ｉｌ ｅ ｎ ｎ
【 关键词 】 弱精子症 ； 精液参数 ； 精子核蛋 白组型转换 ； Ｄ Ｃ Ｙ基因 【 中图分类号】Ｒ ８． ；６ ８ ２ 【 ２ ５６ Ｒ ９ ． 文献标识码 】 Ａ 【 文章编号】１７ ６ １ （０２ ０ ０ ２ ０ ６ ３— ６３ ２１ ）３— ２ ２— ４
精子核蛋白组型严重异常的临床病例治疗分析
精子核蛋白组型严重异常的临床病例治疗分析作者：董树林曲文玉王立名王蔓来源：《中国实用医药》2011年第32期【摘要】目的探讨孕早期自发流产或胚胎停育的精液实验指标。
方法 38例精子核蛋白组型严重异常的实验与治疗统计。
结果 38例精子核蛋白组型严重患有经过治疗后，连续监测病例发现核蛋白恢复正常后，其配偶自发性流产或胚胎停育发生机率明显下降，正常分娩率显著提高。
结论精子核蛋白组型异常是导致自发性流产和胚胎停止发育的非遗传危险因素，但通过药物等治疗途径可以得到改善。
【关键词】自发性流产；胚胎停育；精子核蛋白组型临床自发性流产或胚胎停止发育发病率约占妊娠率的3.6%~5.5%，因其发病机制尚未完全阐明，有学者认为可能与解剖异常、免疫失调、内分泌紊乱、感染、染色体异常及基因多态性有关，临床对此病的总体疗效不太理想。
近些年通过对自发性流产或胚胎停止发育病例分析发现男性因素逐渐增多，特别是对男性精子的研究逐渐成为热点。
本文通过精子核蛋白组型严重异常病例及治疗，总结对自发性流产及妊娠结局的研究对照仅供同行参考。
1 资料与方法1.1 一般资料统计2006~2009年我院男科门诊就诊38例精子核蛋白组型严重异常(组型转换超过50%)。
临床上其配偶有2次以上孕早期自发性流产或胚胎停止发育。
双方检查未发现其他异常阳性体征，包括双方染色体检查、免疫及感染项目检查，男女生殖内分泌检查、血糖、甲功及妇科检查。
但这38例患者精液检查发现精子核蛋白组型存在严重异常。
其中9例精子核蛋白组型超过60%，29例介于50%~60%之间。
1.2 研究指标按照WHO技术规范采集和处理检测精液标本，检测精子核蛋白成熟度。
1.3 检测方法将洗涤后精子固定于载玻片，以0.5 g/L苯胺蓝,4%醋酸溶液染色5 min后洗涤、脱色、干燥后显微镜下至少观察400个精子，计算头部染成蓝色精子数量，染成蓝色精子为不成熟精子，计算不成熟精子的百分比(%)。
1.4 检测原理精子成熟过程中，与精子核DNA结合的碱性蛋白发生组型转换，富含赖氨酸残基的组蛋白逐渐被富含赖氨酸和胱氨酸的鱼精蛋白所取代，酸性条件下苯胺蓝与赖氨酸残基结合生成蓝色化合物。
精子的形态结构与化学组成课件(共18张PPT)《动物繁殖》同步教学(中国农业出版社)
2.尾部 （1）线粒体：产生ATP。在精子尾 部的中段，是动力车间。 （2）磷脂类：卵磷脂和缩醛磷酯， 氧化供能。 （3）精子尾部主段还含有Fe、Cu等 元素，其中Fe主要对构成细胞色素有关。
顶体帽 顶体
核后帽
质膜
顶体外膜 顶体内膜
核膜 核
精 子 顶 体 的 基 本 结 构
2.颈部 颈部是连接头部和尾部 的部分，位于头的基部，含有2～3个 基粒，由近端中心小体衍生而来，尾 部的纤丝即以此为起点。
颈部长约0.5µm，是精子最脆弱 的部分。在精子成熟过程中，不利因 素极易影响尾部而形成无尾精子。
（3）无尾精子是由于机械应 激或渗透压的突然改变，出 现这类问题应对整个采精及 其操作过程进行分析。原生 质滴位于精子头尾交界处， 原生质滴是由于精子的成熟 度不够或公猪使用过度。
二、精子的化学及功能
1.头部 牛精子的含量为3.38×10-9mg。 （1）DNA（脱氧核糖核酸）：细胞核的主要成分，携 带遗传信息，其遗传特性决定仔代的性别。 （2）蛋白质与氨基酸：组蛋白占精子干重的50％； 含17种氨基酸，主要是精氨酸，对顶体机能有保护作用； 组蛋白与DNA结合，对遗传信息的表达起控制作用。 （3）无机盐类：K+、Na+和无机P，与精子的运动有关。 P构成核苷酸中的磷酸分子；K+与精子活力有关。
精子的形态结构与化学组成
一、精子的形态结构
凡是哺乳动物射出的精子，在形 态和结构上具有共同特征，长50～ 70µm，由头部、颈部和尾部三部分构 成，表面有一层脂蛋白膜，是具有活 性和遗传物质的雄性生殖细胞。
精子长度不与个体大小成正比，有的甚 至相反。如大白鼠精子全长190µm，而大象 只有50µm。
第三章-精子发生与成熟
第三章精子发生与成熟在有性生殖的生物体中，细胞可以分为两大类：体细胞（somatic cells）和生殖细胞（germ cells）。
有性生殖周期是体细胞与生殖细胞相互转变的过程。
在胚胎发育的早期，部分体细胞可分化为生殖细胞。
生殖细胞在分化过程中发生了减数分裂，由二倍体的细胞产生了单倍体细胞：精子和卵子。
精、卵通过受精重新形成二倍体的细胞，开始下一轮的生命周期。
在高等生物的机体中，只有一小部分细胞为生殖细胞，然而它们是正常生命周期中的一个关键环节。
二倍体细胞在形成单倍体细胞的过程中，发生了减数分裂。
其间，同源染色体间DNA发生重组，产生的每个单倍体生殖细胞都含有不完全相同的基因组合。
因此，精卵结合形成的子代在遗传学上互不相同，也不同于他们的亲代，这一生殖模式最大的优点是保持着物种的多样性。
在多数物种中，只有两类生殖细胞：卵子和精子。
这两种细胞具有很大的区别，卵子是机体中最大的细胞，而精子通常最小。
这种结构最适合于所带基因的扩增。
卵子是不运动的，但通过提供大量生长发育所需的原料来帮助保存母本基因。
与此相反，精子通过利用这一母本资源来扩增父本基因：它通常有较强的运动能力，为流线形，以适应有效的受精。
精子起源于原始生殖细胞。
在胚胎发育的早期，少数细胞形成配子（gamete）的前体，称之为原始生殖细胞（primordial germ cells, PGCs）。
其后，原生殖细胞迁移到早期的性腺——生殖嵴（genital ridge），在那里进行一段时间的有丝分裂繁殖，然后部分细胞进入减数分裂，并进一步分化为成熟的配子：精子或卵子。
睾丸是精子发生的场所，在这里PGCs发育为原始精原细胞（primitive spermatogonia），进入精子发生过程，经过减数分裂、及一系列形态变化，最后形成特殊形态的完整精子。
在曲细精管中形成的精子并没有完全成熟，需要进入附睾，在附睾管运行过程中，吸收多种物质，发生一系列形态、生理和生化方面的变化，完成成熟过程，形成具有一定活力的精子。
精子染色质结构分析
精子染色质结构分析董语可153******** 1980年，精子染色质结构分析(Sperm Chromatin Structure Assay,SCSA)首次在Science(240:1131)上提出，精子染色后呈现红色或绿色荧光的显微照片被用作这一期杂志封面。
这一项生物技术发展至今，已被广泛应用于检测精子亚临床损伤、评估男性生育力和预测体外受精胚胎移植的成功率。
一、技术原理精子染色质分析利用吖啶橙的异染性与专用软件计算机界面的流式细胞仪相结合，快速识别带有不正常染色质结构的精子。
[6]哺乳动物精子DNA是遗传信息的载体，对繁衍后代具有重要意义。
这一特殊使命要求精子的染色质具有特殊结构。
与其他细胞不同，精子的染色质形成经过了加倍浓缩与组装。
在精子发生过程中，与DNA结合的核蛋白发生了从组蛋白→过渡蛋白→精核蛋白的组型转换。
早期精子形成阶段，圆形精子细胞伸长，合成的过渡蛋白取代了染色质内的组蛋白；晚期精子形成阶段，过渡蛋白又被精核蛋白取代，精子头部凝缩，精子核外形形成。
精核蛋白的体积仅有组蛋白的一半。
精子双链DNA围绕这些体积较小的精核蛋白形成染色质基本结构，而后通过精核蛋白分子内外的二硫键交联进一步浓缩，从而使染色体更为稳定。
在前列腺液Zn+作用下，余下的精子染色体形成过程（图片来源：/virtue/woocommerce/mammalian-protamines/）Science封面：精子染色后的荧光显微照片(v.240,p.1131,1980)游离巯基间形成共价键，精子核成熟。
这样的成熟精子遇酸能维持双链结构的稳定。
而对于受到损伤的不成熟精子，其精核蛋白中不具备二硫键，形成松散结构的染色质，DNA 在酸的作用下则会变性成单链。
吖啶橙(Scridine Orange,AO)可与双链DN A 结合呈单体形式发出绿色荧光,与单链DNA 结合呈聚合物形式发出红色荧光。
红荧光在总荧光中所占的比例反映了精子染色质结构的缩合水平,可通过各计算机界面流式细胞仪来评价。
PDF-精子染色质扩散法检测精子DNA完整性方法探讨及临床意义
常规检查 #不以 $ 次检查结果为准 ) 精 液 样 本 准 备! 将精液标本用 " A& D!: , 8 实验 ! $ $& W E& =磷 酸盐缓冲 液 $ 充 分 洗 涤 后 离 心# 弃 上 清# 再用 + + 6 :& 6 :调至 & 制 片! 取 $ 管 $? 低 熔 点 琼 脂 糖 $ 于 $ (>$ (" I 7)$ % E (# 7& % 每管加入处 A '$@ ( b水浴箱融化并于* E b恒温放置*I 5 D
=( 但多在早期发生自 然 流 产 ' )精子 8 成胚胎 # S; 是 遗 传 信 息
但是精子生成 过 程 中 染 色 质 的 浓 缩 异 常 * 受损精原细 的载体 # 胞的凋亡异常 * 环境毒物以及不良的生活习惯都会造成精子 8 S; 损伤
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) 本研究对 % ( ( 例不育者进行精液常 规 检 查 后 用
b5ccdae0文献标识码文章编号ae0的夫妇患有不孕不育这与遗传生态环境内分泌等多种因素密切相关而由男性精子质量下降引起者约占不孕不育人群的一半常规的精液分析能够从精子密度精子活力和精子形态等方面反映精液质量但是其在精子功能的评价方面价值有限不能直接反映精子受精能力和对胚胎发育的影响近年来的研究表明精子8s
目的 ! 探讨精子染色质扩散法检测精子 8 S; 完 整 性 这 一 实 验 方 法 的 操 作 及 其 应 用 价 值 方 法 ! 对 % ( (例男性不 !! 摘 ! 要 育患者及 ' 用染色质 扩 散 法 进 行 8 观察实验条件的改变对检测结果的影 ( 例健康对照者进行精液常规检查后 S; 完 整 性 分 析 从而为这一实验方法的应用和改进提供参考价值 结果 !8 并且晕环 响 S; 完 整 性 正 常 的 精 子 染 色 质 扩 散 而 在 核 周 形 成 晕 环 的宽度不小于精子头部的半径 而受损伤产 生 8 碎 片 的 精 子 则 不 形 成 晕 环 或 晕 环 的 宽 度 小 于 精 子 头 部 的 半 径 实 验 中 试 S; 剂 实验条件及操作方法的改变均影响检测结果的判读 从而为临床诊断带来一定困难 结论 ! 精子染色质扩散法对男性不育 患 该实验过程中应掌握好实验条件及操作方法 者的病因诊断有较大临床意义 关键词 不育 男性 S; ! 精子染色质扩散 ! 精子 !8 ! " & 5 C C D & $ A E * 0 = $ * (& % ( $ %& $ =& ( % ) ! " # $ (& * @ A @ B 文献标识码 ; 文章编号 $ A E * 0 = $ * ( % ( $ % $ = 0 $ E % * 0 ( %
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doi：10．3969 ／ j．issn．1006-5725．2015．07．033 基金项目： 河北省人口和计划生育委员会基金项目 （编号： 2013－A08 ） 作 者 单 位 ：050031 石 家 庄 市 ，河 北 医 科 大 学 第 一 医 院 生 殖 医 学科 通 信 作 者 ：刘 芳 E-mail：liufydyy＠163．com
（收 稿 ：2014－11－30 编 辑 ：吴 淑 金 ）
精子形态与核蛋白组型转换及 DNA 完整性的相关性
李俊 杨雪梅 赵婷婷 宋亚曼 刘芳
摘 要 目 的 ：探 讨 精 子 形 态 与 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 及 DNA 完 整 性 的 相 关 性 。 方 法 ：选 取 248 例 精 液 标 本 ，依 据 正 常 形 态 四 分 位 数 将 标 本 分 为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四 组 ，采 用 苯 胺 蓝 法 检 测 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 比 例 ，染 色 质 扩 散 法 检 测 精 子 DNA 完 整 性 ，分 析 精 子 形 态 与 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 及 DNA 完 整 性 的 相 关 性 。 结 果 ：检 测 标 本 中 精 子 形 态 异 常 发 生 率 为 27．82％，Ⅰ组 （正 常 形 态 ＜4％）精 子 总 数 、前 向 运 动 精 子 比 例 、核 蛋 白 组 型 转 换 比 例 均 显 著 低 于 其 他 组 （P ＜ 0．05），且 其 DNA 完 整 性 比 例 显 著 低 于Ⅲ组 （正 常 精 子 形 态 6％ ～ 8％）、Ⅳ 组 （正 常 精 子 形 态 ＞ 8％）。 正 常 精 子 形 态 与 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 （r ＝ 0．235， P ＝ 0．000）、精 子 DNA 完 整 性 （r ＝ 0．189，P ＝ 0．003）之 间 均 存 在 显 著 正 相 关 ，精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 与 DNA 完 整 性 间 存 在 显 著 正 相 关 （r ＝ 0．219，P ＝ 0．001）。 结 论 ：精 子 形 态 异 常 可 降 低 精 子 总 数 、前 向 运 动 能 力 、精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 及 DNA 完 整 性 比 例 ， 精 子 形 态 与 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 及 DNA 完 整 性 之 间 存 在 显 著 正 相 关 ， 且 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 与 DNA 完 整 性 之 间 存 在 显 著 正 相 关 。
统 手 术 的 比 较 ［J］． 齐 齐 哈 尔 医 学 院 学 报 ， 2014，12（2）：54－ 55． ［10］ 陈 荣 恒 ， 甄 作 均 ， 谭 家 驹 ， 等 ． 乳 腺 Mammotome 微 创 旋 切 系 统在日间手术中心的应用分析 ［J］． 中华 普通外科学文献 ： 电 子 版 ，2014，1（12）：42－44．
2 结果
2．1 不同精子形态组精子参数比较 检测人群中 正 常 精 子 形 态 分 布 范 围 为 1％ ～ 15％ ， 平 均 为 （5．80 ± 3．047）％（图 1）。 其 中 ，正 常 精 子 形 态 1％
图 1 精子正常形态频数分布图
～ 5％的患 者 占 检 测 人 群 的 51．21％，异 常 精 子 形 态 比例（＜ 4％）的患者占 27．82 ％。 不同精子形态组别 各精子参数的比较见表 1。 Ⅰ组 （正常精子形态 ＜ 4％）精 子 总 数 、 前 向 运 动 精 子 比 例 、 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 比 例 分 别 为 （361．51 ± 296．86） × 106、（34．55 ± 16．92）％、（57．93 ± 17．87）％， 均显著低于其他组（P ＜ 0．05）， 此 外 ， 其 DNA 完 整 性 比 例 为 （68．55 ± 16．94）％， 显 著 低 于Ⅲ组 （正 常 精 子 形 态 为 6％ ～ 8％）和Ⅳ组（正常精子形态＞8％）（均 P ＜ 0．05）。 2．2 精 子 形 态 与 核 蛋 白 组 型 转 换 及 DNA 完 整 性 的相关性分析 正常精子形态比例与核蛋白组型 转 换 呈 正 相 关 （r ＝ 0．235，P ＜ 0．01），与 DNA 完 整 性间亦存在显著正相关（r ＝ 0．189， P ＜ 0．01）。 见 图 2。
34．55 ± 16．92a 39．59 ± 15．59b 41．55 ± 16．06bc 46．89 ± 13．56c
精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 比 例 （％）
57．93 ± 17．87a 64．52 ± 15．96b 65．30 ± 17．11b 68．27 ± 1表 示 P ＜ 0．05
肿 块 中 的 应 用 ［J］． 中 国 医 学 创 新 ， 2014，29（10）：130－132． ［8］ 周勇，陈玉琣． 微创外科治疗乳腺良性疾病临床疗效及并发
症 分 析 ［J］． 现 代 预 防 医 学 ，2013， 40（23）：4472－4474． ［9］ 陈勇，梁万炯，陈建安． 乳腺良性 肿 瘤 微 创 旋 切 术 治 疗 与 传
鉴于上述研究结果的不一致性， 本研究依据 正 常 精 子 形 态 四 分 位 数 将 248 例 精 液 标 本 分 为 四 组， 分别检测其精子核蛋白组型转换 比 例 及 DNA 完整性， 以期明确精子形态与核蛋白组型转换、 DNA 完整性的相关性， 探讨精子形态异 常 的 可 能 发生机制。
1 资料与方法
［4］ Rajan S， Wason AM， Carder PJ． Conservative management of screen-detected radial scars ：role of mammotome excision ［J］． J Clin Pathol，2011，64 （1）：65－68．
表 1 不同精子形态组各精子参数的比较
组别
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ
正常精子 比 率 （％ ）
＜4 4～5 6～8 ＞8
例数
69 58 73 48
精 子 总 数 （× 106）
361．51 ± 296．86a 546．74 ± 342．98b 564．79 ± 350．78b 558．86 ± 310．45b
前 向 运 动 精 子 比 例 （％）
著低于头部异常精子。 此外，异常形态精子其 DNA 碎 片 比 例 高 于 正 常 形 态 精 子 ［3］， 精 子 形 态 与 DNA 完整性之间存在直接相关性。 但也有学者发现精 子 形 态 与 DNA 碎 片 比 例 无 明 显 相 关 性 ［4］， 正 常 形 态 精 子 的 DNA 碎 片 比 例 亦 较 高 ［5］， 精 子 头 部 异 常 与 DNA 碎 片 无 相 关 性 ［6］， 核 成 熟 度 与 精 子 形 态 间 亦 无 明 显 相 关 性 ［7］。
1144
实 用 医 学 杂 志 2015 年 第 31 卷 第 7 期
4 参考文献
［1］ Krishnamurthy A， Ramshankar V． Giant cell tumour of the anterior rib arc masquerading as a primary breast lump ［J］． Indian J Surg Oncol， 2013， 4（4）：393－394．
关 键 词 精 子 形 态 ； 核 蛋 白 组 型 转 换 ； DNA 完 整 性
精子染色质及 DNA 完整性是保证遗传信息准 确传递的物质基础。 精子核成熟过程中，经历了组 蛋白－过渡蛋白－鱼精蛋白的核蛋白组型转换，在 此过 程 中 85％的 组 蛋 白 被 鱼 精 蛋 白 取 代 ， 核 蛋 白 组 型 转 换 异 常 可 阻 碍 鱼 精 蛋 白 与 DNA 的 正 常 结 合，使精子 DNA 稳定性降低。 研究［1］发现鱼精蛋白 缺乏时精子 DNA 碎片化程度显著升高。 精子核蛋 白成熟度与 DNA 完整性间存在显著正相关［2］。
x±s
精 子 DNA 完 整 性 比 例 （％）
68．55 ± 16．94a 71．45 ± 14．45ab 74．67 ± 14．07b 74．88 ± 13．53b
2．3 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 比 例 与 DNA 完 整 性 的 相 关 性 分 析 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 与 DNA 完 整 性间存在线性相关，Pearson 相关系数为 0．219（P ＜ 0．01）。 见图 3。
［5］ 储新年，高福智，张蕾． 麦默通乳腺 微 创 手 术 并 发 症 的 防 治
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1．1 一 般 资 料 精 液 样 本 选 自 2014 年 2－8 月 来 我 科 就 诊 的 248 例 不 育 男 性 患 者 ， 年 龄 20 ～ 45
实 用 医 学 杂 志 2015 年 第 31 卷 第 7 期
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岁 ，平 均 （29．71 ± 5．00）岁 ，均 无 遗 传 病 家 族 史 ，除 外无精症患者。 1．2 精 液 常 规 分 析 严 格 按 照 第 五 版 WHO 人 类 精液实验室手册行标本检测。 患者禁欲 2 ～ 7 d， 手淫法将精液标本完全收集于广口采集杯中，并 置于 37℃水浴锅中， 待标本液化后测量 pH 值、称 量精液体积，使用计算机辅助分析法（北京伟力） 检测精子浓度、 前向运动精子比率等参数， 采用 Diff-Quick 法 行 精 子 染 色 ， 分 析 正 常 精 子 形 态 比 例。 1．3 精子核蛋白组型转换检测 采用苯胺蓝染色 法（深圳博瑞德）分析精子核蛋白成熟度，操作步 骤参照试剂盒说明书。 1．4 精 子 DNA 完 整 性 检 测 采 用 精 子 染 色 质 扩 散法（深圳博瑞德 ）检测精子 DNA 完 整 性 ，具 体 检 测方法参照试剂盒说明书。 1．5 统 计 学 方 法 应 用 SPSS 16．0 软 件 进 行 数 据 分析。 采用频数分析法计算正常精子形态的四分 位 数 （3％ ，5％ ，8％ ） 并 依 据 四 分 位 数 将 标 本 分 为 四 组；采用单因素方差分析比较各组均数差异；将正 常精子形态、精子核蛋白组型转换比例、DNA 完整 性 比 例 行 Pearson 相 关 性 分 析 ，P ＜ 0．05 为 差 异 具 有统计学意义。