分离纯化

名词解释
1分配系数:在一定温度、一定压力下，某一溶质在互不相溶的两种溶剂间分配时，达到平衡后，在两相中的浓度之比为一常数，这个常数称为分配系数。

2盐析法:
3双水相萃取:利用物质在互不相溶的两水相间分配系数的差异来进行萃取的方法。

4超临界流体萃取:是利用超临界流体作为萃取剂的一种高效萃取技术。

5喷雾干燥采用雾化器将料液分散成雾滴，用干燥介质（通常为热空气）排除水分而获得干燥产品的一种技术。

6冷冻干燥是先将制品完全冻结，并在一定的真空条件下使制品中的冰直接变成水蒸气（升华），从而获得干燥产品的一种干燥技术。

7生物分离:从发酵液或动植物细胞培养液中分离、纯化生物产品的过程
8色谱法
9离子交换法:通过静电引力将带相反电荷的物质吸附在离子交换剂上，并用合适的洗脱剂将吸附物依次从离子交换剂上洗脱下来，达到分离纯化目的
11等电点沉淀法:调节体系pH值至电解质的等电点，使其溶解度下降并析出的操作称为等电点沉淀。

12离子交换树脂:是一种不溶于酸、碱和有机溶剂的，具有网状立体结构并含有活性基团，能与溶剂中其他带电粒子进行离子交换的固态高分子聚合物
13精制（纯化）即由多种物质的聚集体，通过物理、化学或生物方面的方法作用，变成一类或一种物质的过程。

除去与产物性质差异较小的杂质。

14提取（分离）通过溶剂(如乙醇)处理、蒸馏、脱水、经受压力或离心力作用，或通过其他化学或机械工艺过程从物质中制取除去与产物性质差异较大的杂质，为高度纯化操作创造有利条件
二、其他题型
1离子交换树脂由哪几部分组成？
骨架、活性基团、可交换离子
（2）离子交换树脂的交联度与网孔之间的关系？
树脂的交联度越大，则网眼越小
（3）根据可交换离子的不同，离子交换树脂一般分为什么型？
阳离子型、阴离子型
（4）如何选择离子交换树脂？
1）对阴阳离子交换树脂的选择
被分离物质带正电荷，应采用阳离子交换树脂；被分离物质带负电荷，应采用阴离子交换树脂。

2）对离子交换树脂强弱的选择
强碱性离子宜用弱酸性树脂，弱碱性离子宜用强酸性树脂；弱酸性离子宜用强碱性树脂，强酸性离子宜用弱碱性树脂
3）对树脂理化性能的选择
如吸附大分子离子选择交联度较低的树脂。

离子交换树脂如何进行预处理？
1.阳离子交换树脂树脂处理成氢型：
水溶胀－酸泡（或搅拌）－水洗至中性－碱泡（或搅拌）－水洗至中性－酸泡（或搅拌）－水洗至中性
2.阳离子交换树脂处理成钠型：
水溶胀－碱泡（或搅拌）－水洗至中性－酸泡（或搅拌）－水洗至中性－碱（或NaCl）泡（或搅拌）－水洗至中性
3.阴离子交换树脂：
处理和转型方式与上述相似，可简单描述为：羟型按碱－酸－碱顺序处理；处理成氯型按酸－碱－酸（或NaCl）顺序处理。

离子交换树脂的交换容量如何计算？
离子交换法的洗脱方式主要有哪些？
按活性基团分类时，离子交换树脂可分为哪些主要种类，其主要特征如何？
1.阳离子交换树脂(含酸性活性基团)：
2.强酸性阳离子交换树脂
3.弱酸性阳离子交换树脂
4.阴离子交换树脂(含碱性活性基团)
2大孔吸附树脂有何特点？主要应用在哪些方面？选用大孔吸附树脂主要要考虑的因素
有？大孔吸附树脂如何进行预处理？
1.特点：1.具有三维空间网状结构、
2.能通过范德华力选择性吸附]高分子聚合物，
3.理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶剂
2. 考虑的因素：吸附物的极性、吸附物的分子大小、比表面积大的树脂。

3.预处理：
3要将阳离子交换树脂处理成H型，其预处理和转型的程序如何？
水溶胀－酸泡（或搅拌）－水洗至中性－碱泡（或搅拌）－水洗至中性－酸泡（或搅拌）－水洗至中性
4生物分离的一般工艺流程是什么？胞外产物和胞内产物的生物分离工艺过程有何不同？凝胶型离子交换树脂和大孔型离子交换树脂的不同之处？
1.流程：预处理和固液分离、初步纯化（分离、提取）、高度纯化（纯化、精制）、成品制作
2.胞内与胞外的不同：胞内产物需经细胞破碎，细胞碎片分离等步骤、胞外产物则将细胞去除后，余下的液体即可进行初步纯化。

3.不同：
5湿法装柱的操作要点是什么？有哪些注意事项？
将吸附剂加入合适量的色谱最初用洗脱剂调成稀糊状，然后徐徐灌入柱子，让吸附剂自然下沉。

注意：不要将气泡压入吸附剂中，而且要始终吸附剂上有溶剂，切勿流干。

6某一60ml料液中乙醇浓度为25%，要将乙醇浓度调整到65%，需往料液中加入多少ml的无水乙醇？
7有一40ml的料液，要采用直接加固体硫酸铵的方式进行盐析。

其硫酸铵饱和度为30%，需要达到的硫酸铵饱和度为60%，问需加多少固体硫酸铵？
8生物产品的分离主要包括哪四个过程？
1.预处理和固液分离
2.初步纯化（分离、提取）
3.高度纯化（纯化、精制）
4.成品制作
9发酵液常用的固液分离方法有哪些？
1.过滤法
2.离心法
3.沉降法
1 0.多糖基离子交换剂主要应用在哪些方面？主要包括哪些种类？
1.纯水的制备
2.干扰离子的去除
种类：1.离子交换纤维素
2.离子交换葡聚糖
3.离子交换琼脂糖
11固相析出技术主要有哪两种方法？
1.沉淀法、
2.结晶法
12生物分离的最后一步是什么？常用的方法有？
喷雾干燥
冷冻干燥
13常用的膜分离过程有？有何异同？
14溶剂萃取的应用范围？溶剂萃取中，什么是萃取剂、萃取液、萃取液和料液？
1.应用范围：广泛用于抗生素、氨基酸、等生物大分子提取。

（2）难于应用于蛋白质分离
2.萃取剂：用以进行萃取的溶剂
3.萃取液：萃取平衡后，含有溶质的萃取剂溶液
4.料液：溶剂萃取中，被提取的溶液
5.萃余液：被萃取出溶质以后的料液
15常用的双水相萃取体系有？双水相萃取胞内酶的工艺过程？
常用体系：1.聚乙二醇(PEG)/葡聚糖(Dex)体系。

2.磷酸盐体系。

2.工艺过程：
1.萃取
2.上下相的分离
3.目的酶和多聚物的分离：
16常用的吸附剂有哪些？
1、传统吸附剂
活性炭
硅胶
氧化铝
聚酰胺
2、大孔吸附树脂
17色谱法可分为哪几类？
18什么是阳离子交换剂？什么是阴离子交换剂？
如果树脂的活性离子带正电荷，则可和溶液中的阳离子发生交换，称为阳离子交换树脂。

如果树脂的活性离子带负电荷，则可和溶液中的阴离子发生交换，称为阴离子交换树脂。

19亲和层析和凝胶层析的分离机理是什么？
凝胶层析：照蛋白质分子量大小进行分离的技术
凝胶层析：利用生物大分子间特异的亲和能力来纯化生物大分子
20超临界流体的特性是什么？应用最广的超临界流体是？
1.特性：1.粘度接近气体
2.密度接近液体
2.应用最广：超临界CO2流体
21什么是盐析？应用最广的盐析用盐是？常用的加盐方式有哪些？
常用的盐析用盐主要有:氯化钠、硫酸铵、硫酸钠、磷酸钾等。

加盐方式：（1）加饱和硫酸铵溶液。

（2）直接加固体硫酸铵。

22细胞破碎有哪些方法？如何进行分类？
机械法非机械法
高压匀浆法
高速珠磨法
超声波破碎法化学法
酶解法
物理法：渗透压冲击法、冻融法
23喷雾干燥和冷冻干燥的工艺过程？
喷雾：1）料液雾化2）雾滴与热空气接触（3）雾滴干燥（4）干燥产品和空气的分离
冷冻：1）预冻：2）升华干燥3）二次干燥
24沉淀法有哪些种类？各有何应用？有机溶剂沉淀法应如何操作？有机溶剂沉淀中，最常用的有机溶剂是？
1.种类：有机溶剂沉淀法：适合于多糖的分离纯化
2.等电点沉淀法：用作去蛋白质手段
3.选择性变性沉淀法：蛋白质作为杂质，需去除的情况下常用
（2）操作：
（3）常用溶剂：乙醇、丙酮
25硅胶和氧化铝型号的含义，如何进行活化？
表示方法为Sephadex G－阿拉伯数字，G 后的数字为凝胶吸水值的10倍，例如Sephadex G
G 反映凝胶的交联程度、膨胀程度。

26什么是发酵液的预处理？预处理的目的是什么？有哪些方法？
生物材料
↓
目的产物转移到溶液中
↓
去除其他悬浮颗粒
（培养基残渣、菌体、细胞）
（2）目的：1.改变发酵液（培养液）的物理性质，以利于固液分离。

2.去除发酵液（培养液）中部分杂质以利于后续各步操作。

（3）方法：1、加热
2.凝聚和絮凝
27凝胶层析有哪些方面的应用？
其型号如何表示？
不同型号的凝胶颗粒应该如何应用？
凝胶颗粒用于蛋白质溶液的浓缩时，如何计算凝胶颗粒的用量
凝胶颗粒如何进行预处理？
1.应用：1）生物大分子物质的分离纯化
2）分子量的测定
3溶液浓缩
2.型号如何表示：
凝胶的预处理：溶胀：称取适量凝胶干粉，用约10倍蒸馏水浸泡24小时或以上将干胶加入水里，边加边搅，然后放到沸水浴中加热接近100℃，保持数个小时。

平衡：用起始缓冲液浸泡凝胶，直至凝胶液pH与起始缓冲液相同。