【新步步高】2017版高考生物一轮复习 生物技术实践 第1讲 微生物的利用 浙科版选修1
《步步高》2017-2018学年高二人教版生物选修一课件：专题整合提升：专题2 微生物的培养与应用
高温的物品
例1 下列有关微生物培养与应用的说法，正确的是 A.天然培养基是指直接取自自然界不需加工的培养基 B.接种前需对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手等
进行严格
的灭菌处理 C.大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配制和纯化大肠杆菌 两个阶段 D. 分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源和碳源 解析 天然培养基是成分不明确的培养基，并不是不需加工配
制的培养基；实验操作者的双手需进行消毒处理；分离分解尿
素的细菌时，尿素是唯一氮源但不是唯一的碳源。
解析
答案
例2
微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，现代生物学实
验中的许多方面也要进行无菌操作，以防止杂菌污染，请分析下
列操作，错误的是
①煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢 ②接种操作 要在酒精灯火焰附近进行 ③家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄 进行灭菌 ④培养基要进行高压蒸汽灭菌 ⑤加入培养基中的指 示剂和染料不需要灭菌 A.① B.②③ C.③④ D.③⑤
紫外线 消毒法
30 W紫外灯照射 30 min
接种室空间消毒 微生物接种工具如接种环、
灼烧灭
菌法
酒精灯火焰灼烧
接种针或其他金属用具等，
接种过程中试管口或锥形 瓶口等 玻璃器皿(如吸管、培养皿
干热灭 干热灭菌箱160～ 等)、金属用具等凡不适宜 菌法 高压蒸 170 ℃加热1～2 h 用其他方法灭菌而又能耐
为异养型，所以培养基中加了乳糖等含碳有机物。由于生物的变异具有不 定向性，且通过图示可以看出，将A试管中10 mL菌液先均分到50支试管
中再培养24 h以后涂布到50个含噬菌体的平板上，菌落数有了明显差异，
说明抗性发生了差异；B试管中10 mL菌液先一起培养24 h后再均分为50份
高考生物一轮复习 微生物的培养与应用
培养基中不同的营养成分可以由同一物质提供，有些物质，
如NH4HCO3，既是氮源也是某些自养生物的碳源。
3．消毒和灭菌的不同点。
栏
目
比较项 目
理化因素的作用强 度
消灭微生物的数量
芽孢和孢子能否被 消灭
链 接
消毒
较为温和
部分生活状态的微 生物
不能
灭菌
强烈
全部微生物
能
要点探究
特别提醒
不能正确区分消毒和灭菌
要点探究
2.培养基的种类：
栏
目
特别提醒
链
(1)并不是所有培养基的营养成分都相同。
接
①自养微生物能够利用空气中的CO2合成有机物，培养 基中不需加入有机碳源(可加入无机碳源)。
②固氮微生物能够固定空气中的N2，合成氨态氮，培养 基中不需添加氮源。
要点探究
(2)培养基中的不同营养成分不一定是不同物质提供。
含碳有机物和含 碳无机物
目 链
氮源
能够提供氮元素 的物质
合成蛋白质、核 酸以及含氮代谢
产物
含氮无机物和含 氮有机物
接
生长因 子
生物生长不可缺 少的微量有机物
酶和核酸的成分
维生素、氨基酸、 碱基等
无机盐
为微生物生长提 细胞内的组成成
供C、H、O以 分，生理调节物
外的各种重要元 质，酶的激活剂
素
等
培养基及大气
基础回顾
(2)筛选方法：_刚__果__红___染色法，即通过是否产生_透__明__圈___来筛 选纤维素分解菌。
(3)培养基：以__纤__维__素__为唯一碳源的选择培养基。
(4)实验流程。
栏
土壤取样：富含_纤__维__素___的环境
2017高考生物一轮复习 生物技术实践 专题二 微生物的培养和利用课件
消毒
灭菌
_____ 强烈
全部微生物
2.两种纯化细菌方法优缺点的比较 (1)倒平板的方法及注意事项
a．请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程： 丙→乙→甲→丁 ______________________ 。 灼烧灭菌 b．甲、乙、丙中的灭菌方法是______________ 。 平板冷却凝固 才能进行。 c．丁中的操作需要等待_____________
板法，这两种方法所用的接种工具分别是接种环和涂布 器。由于在酒精灯火焰附近存在着无菌区域，因此接种 常在火焰附近进行。在微生物培养过程中会产生水，对
微生物的生长造成影响，故需要倒臵培养。
答案 布器 (1) 平板划线 稀释涂布平板 接种环 涂 灼烧灭菌Βιβλιοθήκη (2)火焰附近存在着无菌区域
(3)避免培养过程产生的水分影响微生物的生长 (4)图乙
重要环节。下图甲、乙是大肠杆菌分离和培养过程中部
分操作和实验结果示意图，请据图回答有关问题：
(1) 上图甲所示的是制备固体培养基时的实验操作 步骤之一，它称为________________，若用该培养基培 养大肠杆菌，除考虑营养条件外，还要考虑 ________________ 、 ________________ 和 渗 透 压 等 条
________________________________________________
_______________。 (4) 如图是采用上述接种方法接种后培养的效果图 解 ， 其 接 种 方 法 是 ________________( 填 “ 图 甲 ” 或 “图乙”)。
解析
图甲和图乙分别是平板划线法和稀释涂布平
布。利用稀释涂布平板法统计菌落数时需要设臵对照
高考生物一轮复习方案 11 微生物的培养和利用 新人教
选修一 生物技术实践 第1讲 微生物的培养和利用(1)微生物的分离和培养 (2)某种微生物数量的测定 (3)培养基对微生物的选择作用 (4)利用微生物发酵来生产特定的产物以及微生物在其他方面的应用知识点一 微生物的培养1．培养基概念：人们按照微生物对①________的不同需求，配制出的供其②________的营养基质营养构成⎩⎪⎨⎪⎧1一般都含有③ 、④ 、⑤ 、⑥ 2还需满足不同微生物对pH 、⑦ 以及⑧ 的要求议一议：高温灭菌的原理是什么？ 2．无菌技术消毒⎩⎪⎨⎪⎧特点：使用较为⑨ 的物理或，化学方法仅杀死物体表面或，内部一部分对人体○10 不包括⑪ 和⑫ 常用方法：⑬ 、⑭ 、化学药剂消毒法灭菌⎩⎪⎨⎪⎧特点：指使用强烈的理化因素杀死物体内外⑮ ，包括芽孢和孢子常用方法：⑯ 灭菌、⑰ 灭菌、⑱ 灭菌想一想：接种过程为什么要在酒精灯的火焰旁进行？ 3．微生物培养的基本技术(1)配制培养基：称量→混合→溶化→调pH→分装→包扎(2)灭菌：加水→加培养基→密封→排冷气→维持压力→取出倒平板(或搁置斜面) (3)接种⎩⎪⎨⎪⎧接种过程：洗净双手→点燃酒精灯→接种→贴标签接种工具：包括⑲接种方法：⑳ 法、○21 法注意事项：整个操作过程都要在○22 旁完成(4)培养：接种后的培养皿放入恒温箱内培养 查一查：什么是菌落？它有什么用途？知识点二 微生物的利用1．菌种保藏(1)临时保藏⎩⎪⎨⎪⎧操作：采用○23 培养基，○24 长成后，放入○25 冰箱中保藏，以后每3～6个月，转移一次新的培养基缺点：保存时间○26 ，菌种易被○27 或产生变异(2)长期保存法：○28________法，放在○29________下保存 2．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (1)菌种筛选⎩⎨⎧培养基：○30 特点：○31 是唯一氮源(2)统计菌落数目⎩⎨⎧方法⎩⎨⎧○32 ○33 计算公式：○34(3)设置对照⎩⎨⎧对照实验：是指除了○35 外，其他条件都相同的实验主要目的：排除实验组中○36 对实验结果的影响3．分解纤维素的微生物的分离——纤维素分解菌的筛选 (1)土壤取样：选择富含○37________的环境 (2)将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 A ．制备鉴别培养基：主要碳源是○38________ B ．刚果红染色法a ．先培养○39________，再加入刚果红进行颜色反应 b.○40________时加入刚果红 (3)进一步鉴定a ．为确定得到的菌是否是纤维素分解菌，还需进行○41________的实验 b ．测定方法一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的○42________进行定量测定 想一想：什么叫选择培养基？看一看：纤维素分解菌筛选的原理是什么？1．培养基的配制原则(1)目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。
高考生物一轮复习资料 专题一微生物的利用课件 新人教版选修1
•4．两种纯化细菌的方法的比较
项目 优点 缺点 平板 可以观察菌落特 划 征，对混合菌进 不能计数 线法 行分离 吸收量较 稀释 少，较麻 涂布 可以计数，可以 烦，平板 不干燥效 平板 观察菌落特征 果不好， 法 适用范围 适用于好 氧菌
适用于厌 氧菌和兼 性厌氧菌
小贴士
S161A.TIF
微生物的培养与应用
•(2)微生物培养的无菌技术 •进行无菌操作主要是为了防止外来杂菌的入侵，重点是消毒和灭 菌。 •①消毒和灭菌的区别
使用方法
结果 仅杀死物体表面或内 部一部分对人体有害 的微生物(不包括芽孢 和孢子) 杀死物体内外所有的 微生物，包括芽孢和 孢子
常用的方法 煮沸消毒法、巴氏 消毒法、化学药剂 消毒法、紫外线消 毒法等 灼烧灭菌、干热灭 菌、高压蒸汽灭菌
工业生产
化学
培养基成分明确( 成分 合成培养基 用化学成分已知的 化学物质配成)
分类、鉴定
培养基中加入某种化 选择培 养基 用途 学物质，以抑制不需
培养、分离出特定微生物(如培养酵 母菌和霉菌，可在培养基中加入青 霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在 培养基中加入高浓度食盐)
要的微生物的生长，
促进所需要的微生物 的生长
•知识点二
微生物的利用
23 固体斜面 答案： ○
24 菌落 25 4 ℃ 26 不长 27 污染 ○ ○ ○ ○
30 选择培养基 ○ 31 尿素 ○ 32 稀释 28 甘油管藏 ○ 29 －20 ℃ ○ ○
涂布平板法 件
○ 显微镜直接计数
33
C ○ V ×M
34
35 被测试的条 ○
36 非测试因素 ○
⑭巴氏消毒法
⑮所有的微生物
最新高考生物专题《生物技术实践》讲义及配套练习题(共22页 附答案 通用版)
最新高考生物专题《生物技术实践》讲义及配套练习（共22页附答案通用版）考点一微生物的利用1．图解微生物的培养、分离与计数(填空)2．把握微生物分离与计数的两个实例(填空)(1)土壤中分解尿素的细菌的分离与计数：①筛选菌株：利用选择培养基筛选菌株。
②测定微生物数量的常用方法：活菌计数法和显微镜直接计数。
③过程：土壤取样→样品稀释→微生物的培养与观察。
④鉴定方法：含酚红指示剂以尿素为唯一氮源的培养基→细菌→出现红色透明圈，则该菌能分解尿素。
(2)分解纤维素的微生物的分离：①实验原理：即：可通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
②流程：土壤取样→选择培养→梯度稀释→涂布平板→挑选菌落。
(1)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上(×)(2)某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。
接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养(×)(3)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法(√)(4)在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌(×)(5)检测土壤中细菌总数实验操作中，确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数(×)(6)培养微生物的培养基分装到培养皿后进行灭菌(×)1．(2018·全国卷Ⅰ)空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。
某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。
实验步骤如下：①配制培养基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)；②制作无菌平板；③设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；④将各组平板置于37℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。
回答下列问题：(1)该培养基中微生物所需的氮来源于______________________。
若要完成步骤②，该培养基中的成分X通常是____________。
【步步高】（全国通用）2017年高考生物一轮复习71练第70练梳理发酵技术、微生物和培养和利用
【步步高】（全国通用）2017年高考生物一轮复习71练第70练梳理发酵技术、微生物和培养和利用梳理发酵技术、微生物和培养和利用1．将图中果酒发酵装置改装后用于探究酵母菌呼吸方式的实验，相关操作不正确的是( )A．探究有氧条件下酵母菌呼吸方式时打开阀aB．经管口3取样检测酒精和CO2的产生情况C．实验开始前对改装后整个装置进行气密性检查D．改装时可将盛有澄清石灰水的试剂瓶与管口2连通2．下列关于腐乳制作的叙述，错误的是( )A．毛霉可利用其体内的酶将豆腐中的蛋白质分解成小分子肽和氨基酸B．卤汤中酒的含量越高，杂菌繁殖越快，豆腐越易腐败C．用盐腌制腐乳的过程中，要控制盐的用量，过低则难以抵制杂菌的生长，导致豆腐腐败D．其制作过程可以表示为让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制3．以下关于泡菜制作过程的说法中，错误的是( )A．泡菜制作过程产生的亚硝酸盐有可能转化为亚硝胺，亚硝胺具有致癌作用B．乳酸菌在有氧的环境下大量繁殖并发酵产生乳酸C．对氨基苯磺酸溶液和N－1－萘基乙二胺盐酸盐溶液应避光保存D．泡菜腌制时间的长短会影响亚硝酸盐含量4．(2015·成都质检)下列关于制作泡菜和测定亚硝酸盐含量实验操作的有关叙述，正确的是( )A．泡菜制作需要配制盐水，其中盐与水的质量比为4∶1B．在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应形成玫瑰红色染料C．制备样品处理液，加入氢氧化铝乳液的目的是除去色素等杂质，得到澄清溶液D．泡菜腌制时间长短会影响亚硝酸盐含量，但温度和食盐的用量不影响其含量5．(2015·北京朝阳区质检)下列关于果酒和果醋制作的叙述，不正确的是( )A．制作果酒时瓶口要密闭，而制作果醋时中断通氧会引起醋酸菌死亡B．在变酸的果酒表面观察到的菌膜是醋酸菌在液面大量繁殖而形成的C．温度对酵母菌进行酒精发酵的影响很大，而对醋酸菌进行的发酵影响不大D．制作果酒和果醋时都应用体积分数为70%的酒精对发酵瓶进行消毒，并注意无菌操作6．下列有关传统发酵技术的叙述，正确的是( )A．制作果酒最快捷的途径是先制果醋，再制果酒B．酿制果醋所需酵母菌和醋酸菌的发酵底物、条件完全相同C．制作腐乳需利用毛霉产生的酶分解豆腐中的蛋白质等物质D．制作果酒、果醋和腐乳过程都应防止微生物的生长繁殖7．平板划线法和稀释涂布平板法是接种微生物的两种常用方法，下列描述正确的是( ) A．都要将菌液进行一系列的梯度稀释B．平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作C．稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养D．都能在培养基表面形成单个菌落8．(2015·深圳模拟)某学者欲研究被石油污染过的土壤中细菌的数量，并从中筛选出能分解石油的细菌，下列操作错误的是( ) A．利用平板划线法对细菌进行计数B．利用以石油为唯一碳源的培养基筛选C．采用稀释涂布平板法分离菌种D．称取和稀释土壤时应在火焰旁9．使用液体选择培养基培养纤维素分解菌的目的是( )①用液体选择培养基可获得大量纤维素分解菌②用液体培养基便于稀释涂布平板③纤维素分解菌只能在液体培养基中生长④用液体培养基可鉴别纤维素分解菌A．①② B．①③C．②④ D．③④10．(2015·上海，9)在涂布有大肠杆菌的培养基上进行抑菌实验，在a、b、c处分别贴浸有不同抗生素(浓度相同)的无菌滤纸片，d处滤纸片浸有无菌水。
(新人教版)高考一轮复习第十单元生物技术实践第01讲微生物的利用教案(生物)
考点一 微生物的实验室培养1．培养基(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
(2)种类：液体培养基和固体培养基，二者的区别是是否添加凝固剂。
(3)营养成分①主要营养物质：碳源、氮源、水和无机盐。
②其他条件：pH 、特殊营养和氧气。
2．无菌技术(1)目的：获得纯净的培养物。
(2)关键：防止外来杂菌的入侵。
(3)常用方法：灭菌和消毒。
(4)无菌技术的主要方法及适用对象(连一连)答案 a —Ⅲ—⑤ a —V —④ a —Ⅵ—③ b —Ⅰ—⑥ b —Ⅱ—① b —Ⅳ—② 3．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基(1)计算：依据配方比例，计算配制100 mL 的培养基时，各种成分的用量。
(2)称量：准确地称取各种成分。
溶化⎩⎪⎨⎪⎧①牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯②加入少量水，加热③牛肉膏溶化后取出称量纸④加入称量好的蛋白胨和氯化钠，搅拌⑤加入琼脂，加热使其熔化，并不断搅拌⑥补加蒸馏水定容(5)倒平板：待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。
4．纯化大肠杆菌(1)菌落：由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。
(2)主要方法及纯化原理(选修1 P 18旁栏小资料改编)微生物的接种方法只有平板划线法和稀释涂布平板法吗？微生物接种的核心是什么？答案 不是。
微生物的接种方法还包括斜面接种、穿刺接种等，其核心是防止杂菌污染，保证培养物的纯度。
诊断辨析(1)培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，有时还需要加入一些特殊的物质。
(√) (2)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上。
(×) (3)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害。
(√) (4)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落。
(×)(5)用稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高，就能在培养基表面形成单个菌落。
(√)1．(2018·全国卷Ⅱ)在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。
新高考生物一轮复习生物技术实践第1讲微生物的利用浙
生物技术实践第1讲微生物的利用1．下图为“大肠杆菌的培养和分离”实验的基本流程，请回答下列问题。
A.配制培养基→B.灭菌→C.扩大培养液体培养基→D.划线分离和培养固体培养基→E.菌种保存(1)A过程配制的是通用细菌培养基，称为________培养基。
配制时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，以维持________。
对培养基酸碱度的调节，应该在B过程的________(前面或后面)。
(2)D过程与C过程相比，培养基中增加的物质是________。
E过程所需的温度是________。
(3)D过程后，一个菌体便会形成一个________，这种分离方法是________的通用方法，也是筛选特定菌株的最简便方法之一。
(4)植物组织培养时，先配制MS培养基，再加入一定比例的植物激素，当生长素相对较多时，可促进________。
(5)植物组织培养和微生物培养都需要无菌操作，下列不适宜用高压蒸汽灭菌的是________。
A．接种环和镊子B．三角瓶和广口瓶C．发芽培养基和生根培养基D．用于培养的幼茎和幼芽解析LB液体培养基是通用的细菌培养基，LB固体平面培养基则用于划线分离，氯化钠充当溶质的作用是维持培养基的渗透压，调整好酸碱度后才能进行灭菌，若灭菌后再进行调整酸碱度的话，又会产生新的污染。
在液体培养基的基础上加入一定量的琼脂就成了固体培养基，培养好后的菌种置于4 ℃冰箱中保存。
通过划线分离后一个菌体就会繁殖出一个菌落。
植物组织培养中生长素多，有助于生根，而细胞分裂素多，则利于生芽。
高压蒸汽灭菌常用于培养基、培养器材等的灭菌，而用于培养的幼茎和幼芽则不能进行任何的灭菌操作，否则会导致细胞死亡。
答案(1)LB 渗透压前面(2)琼脂 4 ℃(3)(单)菌落消除污染杂菌(纯化菌种)(4)生根(5)D2．急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌和病毒通过消化道进入人体导致的。
因此检验饮用水的细菌含量和病毒含量是有效监控疾病发生的必要措施，请回答下列与检验饮用水有关的问题。
新高考生物一轮复习 生物技术实践 第1讲 微生物的培养和利用习题(含解析)北师大版选修1
生物技术实践第1讲微生物的培养和利用1．用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时( )①可以用相同的培养基②都需要使用接种针进行接种③都需要在火焰旁进行接种④都可以用来计数活菌A．①②B．③④C．①③ D．②④解析平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基，故①正确；平板划线法采用接种针进行操作，而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作，故②错误；纯化时，要进行无菌操作，需要在火焰旁接种，避免空气中的微生物混入培养基，故③正确；平板划线法一般用于分离而不是计数，故④错误。
答案 C2．下列有关培养基和菌种鉴定的叙述不正确的是( ) A．植物组织培养常用的是固体培养基B．可利用固体培养基上菌落的特征来判断和鉴别细菌的类型C．利用刚果红培养基上是否形成透明圈来筛选纤维素分解菌D．在无氮培养基中加入酚红指示剂鉴定尿素分解菌解析在只含有尿素作为氮源的培养基中加入酚红指示剂鉴定尿素分解菌。
答案 D3．通过实验测定土壤中的细菌数量，下列与此操作有关的叙述中，不．正确的是( ) A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B．取104、105倍的土壤稀释液0.1 mL，分别涂布于各组平板上C．将培养皿倒置，37℃恒温培养24～48小时D．选择菌落数在300个以上的培养皿进行计数解析检测土壤中细菌总数，用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上，将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时，在确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的平板进行计数。
答案 D4．用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是( )A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233解析在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B不正确。
【新步步高】高二生物浙科版选修1课件：1.1 大肠杆菌的培养和分离
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后 再进行划线？
答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为 什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起 始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能 使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少， 最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
大肠杆菌
细菌的外形与大小
大肠杆菌属于杆状菌
细菌的营养类型
• 根据细菌所利用的能源和碳源的不同 将细菌分为两大营养类型。 • 自养菌:
光能自养型:光合细菌
化能自养型:硝化细菌,铁细菌,硫细菌
• 异养菌: 腐生菌 寄生菌
大部分病原菌
大肠杆菌属于异养兼性厌氧菌
细菌的革兰氏染色
革兰氏染色法是一种用于细菌的染 色法。此法将细菌分为两类，即革兰 氏阳性菌和革兰氏阴性菌。所谓革兰 氏阳性菌就是用革兰氏染液染色后， 再用脱色液处理，细菌仍保留染色液 的颜色；革兰氏阴性菌则相反。这两 种菌的差别在于细胞壁的成分不同。
3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳 源、和氮源、 无机盐、生长因子等营养 物质，另外还需要满足微生物生长对 pH 、氧气、渗透压的要求．
4.培养基的用途
液体培养基：扩增细菌、工业生产 固体培养基：纯化（分离），鉴定、保 藏菌种
☆ 菌落
• 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖 时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定 形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 • 菌落是鉴定菌种的重要依据。
病毒 微小生物的总称． 病毒界 细菌
微生物包括哪五类： 放线菌 真菌 原生动物
真菌界
原生生物界 原核生物界
特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用 光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细 胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用.
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生物技术实践
第1讲微生物的利用
1．下图为“大肠杆菌的培养和分离”实验的基本流程，请回答下列问题。
A.配制 培养基→
B.灭菌→
C.扩大培养 液体培养基
→D.划线分离 和培养 固 体培养基 →E.菌种 保存
(1)A过程配制的是通用细菌培养基，称为________培养基。
配制时除了加入特定的营养
物质以外，还要加入一定量的氯化钠，以维持________。
对培养基酸碱度的调节，应该在B过程的________(前面或后面)。
(2)D过程与C过程相比，培养基中增加的物质是________。
E过程所需的温度是
________。
(3)D过程后，一个菌体便会形成一个________，这种分离方法是________的通用方法，
也是筛选特定菌株的最简便方法之一。
(4)植物组织培养时，先配制MS培养基，再加入一定比例的植物激素，当生长素相对较
多时，可促进________。
(5)植物组织培养和微生物培养都需要无菌操作，下列不适宜用高压蒸汽灭菌的是
________。
A．接种环和镊子
B．三角瓶和广口瓶
C．发芽培养基和生根培养基
D．用于培养的幼茎和幼芽
解析LB液体培养基是通用的细菌培养基，LB固体平面培养基则用于划线分离，氯化钠充当溶质的作用是维持培养基的渗透压，调整好酸碱度后才能进行灭菌，若灭菌后再进行调整酸碱度的话，又会产生新的污染。
在液体培养基的基础上加入一定量的琼脂就成了固体培养基，培养好后的菌种置于
4 ℃冰箱中保存。
通过划线分离后一个菌体就会繁殖出一个菌落。
植物组织培养中生长
素多，有助于生根，而细胞分裂素多，则利于生芽。
高压蒸汽灭菌常用于培养基、培养器材等的灭菌，而用于培养的幼茎和幼芽则不能进行任何的灭菌操作，否则会导致细胞死亡。
答案(1)LB 渗透压前面(2)琼脂 4 ℃(3)(单)菌落消除污染杂菌(纯化菌种)
(4)生根(5)D
2．急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌和病毒通过消化道进入人体导致的。
因此检验饮用
水的细菌含量和病毒含量是有效监控疾病发生的必要措施，请回答下列与检验饮用水有关的问题。
(1)检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的
水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为________________________。
在下面所示的四种菌落分布图中，不可能是用该方法得到的是________。
(2)用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？________。
为什么？_________。
(3)已知大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，现提供足量的已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和
具塞试管，应如何判断待检水样中是否含有大肠杆菌？________。
解析纯化大肠杆菌的方法——稀释涂布平板法和平板划线法。
删除偏差太大的数据，对剩下的多个培养数据进行平均处理就可以得到水样中的大肠杆菌数。
大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，通过密封培养，大肠杆菌可以进行厌氧呼吸产生气体，以气泡的形式释放出来。
答案(1)稀释涂布平板法 D (2)需要因为需要判断培养基是否被杂菌污染(培养基灭菌是否合格)
(3)通过无菌操作向试管内注入一定量待检水样，再注入已灭菌的乳糖蛋白胨培养液将
试管充满，塞上塞子，混匀后置于37 ℃恒温箱培养24 h。
若试管内有气泡生成，则说明水样中有大肠杆菌
3．尿素是一种高浓度氮肥且长期施用没有不良影响，但尿素只有通过土壤中某些细菌的分解作用，才能被植物吸收利用。
某同学要分离出土壤中能分解尿素的细菌，并尝试进行计数，培养基配方如下：
(1)
________。
写出细菌分解尿素的方程式______。
(2)根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌？________(能/
不能)，原因是_________。
(3)分离得到分解尿素的细菌后，如果要扩大培养，则应选择__________培养基进行培
养。
培养一段时间后，使用________对微生物细胞进行计数。
计数过程中，下列哪种行为会影响计数的准确性________。
A ．计数时直接从静置培养的试管底部取培养液进行计数
B ．如果方格内微生物细胞数量多于300个，培养液先稀释后再计数
C ．如果微生物细胞有粘连，要数出团块中的每一个细胞
D ．压在方格线上的细胞只计左线和上线上的细胞数
(4)为了提高尿素肥效，可以将分解尿素的酶和尿素混合，制成“加酶尿素”。
为了提高“加酶尿素”中酶的利用率，可采用________技术。
解析 (1)含有脲酶的细菌通过降解尿素为氨获得生长的氮源，从而也起到维持生物圈中氮元素平衡的作用。
(2)从培养基的成分看因为含有琼脂，所以不能分离出分解尿素的细菌，因为琼脂是一种未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物，不利于以尿素为氮源的细菌的筛选。
(3)扩大培养需要使用液体培养基，对微生物或者酵母菌等进行计数时常用血细胞计数板。
计数过程需要注意操作规范，如A 选项所述的操作会影响计数的准确性，应该把试管上下倒转数次，使细菌分布均匀后取样。
(4)固定化酶技术可以提高酶的利用率。
答案 (1)脲酶 参与了氮循环(或维持氮平衡)
CO(NH 2)2＋H 2O ――→脲酶2NH 3＋CO 2(分子式、符号、条件缺一不可) (2)不能 琼脂是未被纯
化的混合物，内含一定的含氮化合物，尿素不是唯一氮源，不能选择出只以尿素为氮源的微生物 (3)液体 血细胞计数板 A (4)固定化酶
4．为了探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。
培养基成分如下表所示，实验步骤如下图所示。
请分析回答问题。
(1)简述
_____________。
(2)培养基中加入尿素的目的是筛选________，这种培养基属于
________培养基。
(3)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的
________和________，该实验需要振荡培养，原因是_____________。
(4)转为固体培养基时，常采用________接种，获得单菌落后继续筛选。
(5)实验结束后，使用过的培养基应该进行________处理，才能倒掉。
解析本题考查从土壤中分离分解尿素的细菌的方法。
解题时，应从分解尿素的细菌的代谢特征入手，对整个过程中需要控制的环境条件进行分析。
尿素是培养基中的唯一氮源，因此原则上只有能够利用尿素的微生物才能够在此培养基上生长。
由于细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，pH升高，故在以尿素为唯一氮源的培养基中加入的酚红指示剂将变成红色；这种培养基属于选择培养基，可筛选目的菌；目的菌生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的尿素和葡萄糖；振荡培养的目的是提供充足的氧气；固体培养基培养时的接种方法常用稀释涂布平板法或平板划线法；倒掉培养基之前应对其进行灭菌处理。
答案(1)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，pH升高，使酚红指示剂变为红色(2)目的菌选择(3)尿素葡萄糖为目的菌提供氧气(4)稀释涂布平板法(平板划线法) (5)灭菌
5．下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题。
(1)图甲是利用________法进行微生物接种，图乙是利用______________法进行微生物
接种。
这两种方法所用的接种工具分别是________和________；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是________和酒精消毒。
(2)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？
_____________________________。
(3)接种后，在固体培养基上培养细菌时为什么进行倒置培养？
______。
(4)右图是采用上述接种方法接种后培养的效果图解，其接
种方法是________(填图甲或图乙)。
解析图甲和图乙分别是平板划线法和稀释涂布平板法，这两种方法所用的接种工具分别是接种环、涂布器。
由于在酒精灯火焰附近存在着无菌区域。
因此接种常在火焰附近进行。
在微生物培养过程中会产生水，对微生物的生长造成影响，故需要倒置培养。
答案(1)平板划线稀释涂布平板接种环涂布器灼烧灭菌(2)火焰附近存在着无菌区域(3)避免培养过程产生的水分影响微生物的生长(4)图乙。