2种常用肺炎克雷伯菌碳青霉烯类抗菌药物敏感性试验卡性能评价

文章编号：1673-8640（2019）03-0263-04 中图分类号：R373.9 文献标志码：B DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2019.03.017 2种常用肺炎克雷伯菌碳青霉烯类抗菌药物敏感性试验卡性能评价张保华，余桂香，江燕，潘泓，蒋翔宁（黄山市人民医院检验科，安徽黄山 245000）摘要：目的评价2种常用全自动微生物鉴定系统配套药物敏感性试验卡（GN13、NM38）检测肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物敏感性的可靠性。

方法收集2016年1月—2017年8月黄山市人民医院分离自临床样本的168株肺炎克雷伯菌，分别采用 GN13、 NM38及微量肉汤稀释法测定其对碳青霉烯类抗菌药物的敏感性。

以微量肉汤稀释法为金标准，对GN13和NM38的检测结果进行分析。

采用改良碳青霉烯类灭活试验（mCIM）检测碳青霉烯酶，分析经仪器高级专家系统（AES）推测或预警提示为产碳青霉烯酶的可靠性。

结果以微量肉汤稀释法为金标准， GN13与NM38检测结果的分类一致率（CA）均>90%。

检测结果经 AES 修正后，GN13对亚胺培南的一般错误（MIE）和重大错误（ME）均降低了0.6%，对厄他培南的MIE增加了0.6%，均未出现严重错误（VME）； NM38对亚胺培南的MIE、ME、VME分别为1.19%、1.19%、2.97%，对厄他培南的MIE、ME、VME分别为3.6%、0.0%、0.6%。

mCIM表型检测结果显示碳青霉烯酶阳性率为27.4%（46/168），经AES修正后 GN13推测和NM38预测产碳青霉烯酶的阳性率分别为31.0%和30.4%，与mCIM一致（P>0.05）。

结论 GN13与NM38检测肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物的性能均可靠，但应重视AES的修正或预警作用。

关键词：肺炎克雷伯菌；碳青霉烯酶；药物敏感性；CN13；NM38Performance evaluation of GN13 and NM38 to determine the drug susceptibility of carbapenems against Klebsiella pneumoniae ZHANG Baohua，YU Guixiang，JIANG Yan，PAN Hong，JIANG Xiangning.（Department of Clinical Laboratory，Huangshan People's Hospital，Huangshan 245000，Anhui，China）Abstract：Objective To evaluate the reliabilities of VITEK 2-Compact GN13 and MicroScan WalkAway 96 Plus NM38 to determine the drug susceptibility of carbapenems against Klebsiella pneumoniae. Methods GN13，NM38 and broth micro-dilution method were used to determine the drug susceptibility of carbapenems to 168 isolates of Klebsiella pneumoniae which were isolated from Huangshan People's Hospital from January 2016 to August 2017. The determination results of GN13 and NM38 were judged by broth micro-dilution method as gold standard.A modified carbapenem inactivation method （mCIM） was used to determine carbapenems and to analyze theirreliabilities of advanced expert system（AES） as a predictor or early warning indicator for carbapenem production.Results Using broth micro-dilution method as gold standard，GN13 and NM38 classification categorical agreement （CA） was >90%. Minor errors （MIE） and major errors （ME） for imipenem were reduced by 0.6%，and MIE for ertapenem was increased by 0.6% without very major errors （VME） after AES modification. The MIE，ME and VME determined by NM38 for imipenem accounted for 1.19%，1.19% and 2.97%，and MIE，ME and VME for ertapenem accounted for 3.6%，0.0% and 0.6%. The mCIM phenotype determination showed that the positive rate of carbapenems was 27.4% （46/168），and the positive rates of carbapenems after GN13 AES modification and NM38 prediction were 31.0% and 30.4%，respectively. Compared with mCIM，there was no statistical significance （P>0.05）. Conclusions The results of GN13 and NM38 are reliable in determining the drug susceptibility of carbapenems against Klebsiella pneumoniae. However，attention should be paid to the modification or early warning of AES.Key words：Klebsiella pneumoniae；Carbapenems；Drug susceptibility；GN13；NM38作者简介：张保华，男，1977年生，学士，主管技师，主要从事细菌耐药监测和耐药机制研究。

0.125~16 μg/mL 。

mCIM ：（1）从过夜孵育的血平版上用1 μL 接种环取1满环待测细菌，乳化在2 mL 胰蛋白胨大豆肉汤培养基中，涡旋震荡10~15 s ；（2）将10 μg 美罗培南纸片完全浸没在已制备好的菌悬液中，（35±2）℃空气孵育4 h ±15 min ；（3）在完成胰蛋白胨大豆肉汤培养基-美罗培南纸片悬液孵育前后应立即用营养肉汤或0.9%氯化钠溶液制备0.5麦氏单位大肠埃希菌（ATCC 25922）悬液；（4）将大肠埃希菌（ATCC 25922）（指示菌）悬液均匀涂布于MH 琼脂培养基上，菌悬液和涂布MHA 培养基的步骤均各自在15 min 内完成，在贴美罗培南纸片前先干燥接种后的血平板3~10 min ；（5）采用10 μL 接种环从胰蛋白胨大豆肉汤培养基-美罗培南纸片悬液中取出美罗培南纸片，取出过程中排出多余液体，然后将其贴在之前接种好指示菌[大肠埃希菌（ATCC 25922）]的MH 琼脂培养基上，（35±2）℃空气孵育18～24 h 后测量抑菌圈直径。

微量肉汤稀释法和mCIM 结果判读按照2017年CLSI M100-S27文件执行[3]。

1.3.2 药物敏感性试验结果可靠性分析 分类一致性（categorical agreement ，CA ）指待测方法与参考方法判读结果完全一致；严重错误（very major error ，VME ）指参考方法判读为耐药，待测方法判读为敏感；重大错误（major error ，ME ）指参考方法判读为敏感，待测方法判读为耐药；一般错误（minor error ， MIE ）指参考方法或待测方法任一方判读为中介，另一方判读为敏感或耐药。

1.4 统计学方法2种仪器检测肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶的阳性率与mCIM 结果比较采用χ2检验。

以P <0.05为差异有统计学意义。

2 结果2.1 不同方法检测肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物的敏感性GN13未设美罗培南项，不予统计。

GN13经AES 修正前后、NM38、微量肉汤稀释法检测肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物的药物敏感性试验结果见表1。

2.2 GN13和NM38检测结果的可靠性分析GN13与NM38检测结果的CA 均>90%，商品化全自动微生物分析系统的广泛应用大大提高了临床微生物检测的效率，在测定临床常见病原菌的抗菌药物敏感性及常见细菌耐药表型方面均具有较高的可靠性[1] 。

近年来，肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药率的不断攀升，美国临床实验室标准化协会（the Clinical and Laboratory Standards Institute ，CLSI ）推荐的耐药折点的变迁，造成仪器的高级专家系统（advanced expert system ，AES ）修正或预警信息的比例也逐渐增加。

本研究对本实验室常用的VITEK 2 Compac 全自动微生物鉴定系统及MicroScan WalkAway 96 Plus 全自动微生物鉴定系统配套的药物敏感性试验卡GN13和 NM38检测肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物的敏感性进行评价，为临床微生物实验室的常规检测工作提供参考。

1 材料和方法1.1 菌株来源随机选取2016年1月—2017年8月黄山市人民医院分离自临床科室的168 株肺炎克雷伯菌非重复株，所有菌株在测试前均未知其耐药表型。

质控菌株为大肠埃希菌（ATCC 25922）、铜绿假单胞菌（ATCC 27853） 和肺炎克雷伯菌（ATCC 700603），购自国家卫生健康委临床检验中心。