奥氮平有关物质的产生途径探讨及检测研究

2 方法与结果
2.1 色谱条件 磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾 6.8g，加水 800ml 使溶解，加三乙胺 10.0ml，用磷酸调
节 PH 值至 6.0，再加水至 1000ml，摇匀）-甲醇-乙腈（25：10：10）流动相、检测波长 254nm、 柱温 30℃、流速 1.0mL/min、进样量 20μL。 2.2 系统适用性试验
记录峰面积。平均加样回收率为 100.40%, RSD =0.85% ( n = 9),结果表明加样回收率良好。
2.7 有关物质测定
称取 1 对照品 10.0mg 于 50ml 容量瓶，用流动相溶解并定容作为供试品溶液；量取供试
品溶液 1.0ml 于 100ml 容量瓶中，流动相定容作为对照溶液。上述两种溶液按“2.1”项下
NH2
N
H
.HCl
N
+
N H
S
CH3
N H
2
reflux
CH3 N
N
O2
N
NH
N N
N H
S
CH3
5
O CH3 N
N N
N H
S
CH3
1
NH2 N
N H
S
.HCl CH3
2
base
N H
S
CH3
6
HO N
N H
S
CH3
7
图2 奥氮平制备工艺中有关物质的可能产生途径
为了提高奥氮平质量控制标准，对3个有关物质进行了定性检测。
称取 1 对照品 5.0mg 三份于 50ml 容量瓶中，用流动相溶解并定容作为标准液。称取 1
供试品 10.0mg 于 100ml 容量瓶中，用流动相溶解并定容作为供试液。量取 1.0ml 供试液于
10ml 容量瓶中，依次加入标准液 0.6ml、1.0ml、1.4ml，流动相定容。按“2.1”项下测定,
5.9
3584.38
1.20
3
8.5
12303.74
1.15
4
12.8
9781.69
0.76
5
7.7
8969.41
1.15
6
10.3
9030.93
1.21
7
13.8
14485.62
1.12
2.3 专属性考察 奥氮平原料药中可能引入的杂质有：奥氮平的合成原料 2，合成中间体 3、4，有关物质
5、6、7。分别取这 6 种样品按“2.1”项下测定，记录色谱图，保留时间依次为：5.5min、 8.4min、12.6min、7.6min、10.2min、13.7min。1 的保留时间为 16.9min，与这 6 种物质的 分离度均大于 5.0（其中 3 和 5 较难分离，两者分离度为 2.6）。此色谱条件下各物质均得 到良好分离。
The study on possible generation paths and detection of
Olanzapine’s related substances
ABSTRACT: The generation paths of Olanzapine’ related substances were investigated in the process of preparation and storage, three of which were synthesized and characterized. The related substances’ content was determinated by HPLC according to the National Drug Standard.
1 仪器与试药 日本Jasco高效液相色谱仪，包括UV1575 型检测器和LC-NetⅡ工作站。色谱柱：Agilent
TC-C18 (4.6 mm×250 mm, 5μm )（美国Agilent公司）。1对照品（国家药品生物制品检定 所，批号:100948-200801）；1原料药（批号：20100325、20100514、20100517）；1的合成原 料2，合成中间体3、4及有关物质5、6、7均为本室自制，经NMR、MS表征。
奥氮平有关物质的产生途径探讨及检测研究
崔道平，孟庆伟
（大连理工大学 化工环境与生命学部制药科学与技术学院 大连 116024） 摘要: 根据现制备奥氮平（Olanzapine）工艺，对制备和贮存过程中有关物质的可能产生途 径进行探讨，对最有可能产生的 3 个有关物质进行制备和表征，依据国家药品标准 HPLC 法 测定奥氮平原料药中有关物质。 关键词：奥氮平；有关物质；检测
测定，记录峰面积。按不加校正因子的主成分自身对照法，计算原料药的有关物质含量，结
果见表 1。
表 2 有关物质测定结果
批号
含量（%）
20100325
0.23
20100514
0.23
20100517
Байду номын сангаас
0.21
3 讨论 3.1 用流动相配制的 1 溶液室温不稳定，故本品在配制好 12h 以内测定，冰箱中保存，以
见图2，3个有关物质均进行制备和结构表征。
NC +
H2N S 3 NO2 CN
NS H 4
NO2 KOH
F
DMF
SnCl2· 2H2O HCl
NH2 N
· HCl + HN
N H
S
2
N CH3
NO2 CN
NS H
4
+ HF
N NH2
· HCl
N H
S
2
CH3 N
reflux
N N
N H
S
图1 奥氮平制备工艺
将合成原料2，合成中间体3、4，有关物质5、6、7与1对照品配成适当浓度的混合溶液， 按“2.1”项下测定,色谱图见图3。
图3 混合溶液的HPLC色谱图
混合溶液中，1～7各峰的HPLC参数见表1。 表1 HPLC色谱图各峰参数
峰号 保留时间/min
塔板数
托尾因子
1
16.9
12612.04
1.12
2
保证结果的准确性。 3.2 国家药品标准采用的色谱条件，主峰与各物质均能有效分离。1 的理论塔板数为 12612
（规定理论塔板数不低于 3000），与各物质分离度均大于 1.5，专属性良好。 3.3 国家标准采用主成分自身对照法测定有关物质含量，规定有关物质总量不超过 1.0%，
未对单个有关物质做出定量规定,对各有关物质进行定性及定量研究，可更好地对奥氮 平进行质量控制。
称取 1 对照品 10.0mg 于 50ml 容量瓶，用流动相溶解并定容，再稀释成 20μg/ml 的溶 液。按“2.1”项下测定，连续进样 6 次，记录峰面积，RSD 为 0.23%。
称取对照品适量， 配制 20μg/ml 的溶液 6 份。按“2.1”项下测定，记录峰面积，RSD 为 0.54%。 2.6 加样回收率试验
KEYWORDS: Olanzapine; Related substances; Determination 奥氮平（Olanzapine，1，见图1）是Lily研制的新型非典型抗精神病药，由于独特的疗
效和更少的锥体外副作用,得到了广泛的应用。本文对奥氮平合成工艺中可能产生的有关物
质进行制备、结构表征,依据药品标准WS1-(X-181)-2004Z对有关物质定性检测[1]。
5627178, 1997-05-06. [4] Poornachander, Ramesh, et al. Synthesis and characterization of impurities of
an Anti-psychotic drug substance, Olanzapine. ARKIVOC, 2008(xi):195～201.
奥氮平1的合成工艺：以2-氨基-3-氰基-5-甲基噻吩（3）和邻氟硝基苯缩合得到2-(2-
硝基苯胺基)-3-氰基-5-甲基噻吩（4），4再经还原制备2-甲基-4-氨基-10H-噻吩苯并二氮杂
卓盐酸盐（2），2再与4-甲基哌嗪合成奥氮平（1）[2，3],见图1。
奥氮平在制备过程中4-甲基哌嗪脱甲基产生有关物质2-甲基-4-哌嗪基-10H-噻吩并
称取 1 对照品 10.0mg 于 100ml 容量瓶，流动相溶解并定容，作为储备液。依次量取 2.0ml 储备液 3 份置于 10ml 容量瓶，分别加 1mol/L 氢氧化钠溶液 1.0ml、1mol/L 盐酸 1.0ml、30% 双氧水溶液 1.0ml，70oC 水浴加热 2h，冷却至室温（前两者分别加 1mol/L 盐酸 1.0ml、1mol/L 氢氧化钠溶液 1.0ml 中和），再用流动相定容制成 20μg/ml 的溶液，作为碱破坏、酸破坏、 氧化破坏试验供试液。按“2.1”项下测定，结果显示 1 在酸、碱、氧化条件下均不稳定且 分解产物较多，其中对氧化条件最敏感，然而此色谱条件下分解产物与 1 均得到良好分离。
2.4 线性范围 称取 1 对照品 10.0mg 置 50ml 容量瓶中，用流动相溶解并定容，再分别稀释成 4、8、
16、20、30、40、60μg/ml 的溶液。按“2.1”项下测定，记录色谱图，以峰面积 A 对浓度 c 进行线形回归。线性方程为 A=74125c（r=0.9998），说明 1 在 4～60μg/ml 浓度范围内线 性良好。 2.5 精密度与重复性
参考文献
[1] 国家药品标准 WS1-(X-181)-2004Z，国家食品与药品监督管理局. [2] Dolitzky, Benzion, Diller, Dov. Methods of preparing olanzapine [P]. WO:
2005-063771A1, 2005-07-14. [3] Chakrabarti JK, Hotten TM, Tupper DE. 2-Methyl-thienobenzodiazepine [P]. US: