实验8 酵母RNA的提取----苯酚法-20090301
苯酚法提取酵母RNA
苯酚法提取酵母RNA（一）原理细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。
因此，提取RNA时要把RNA与蛋白质分离并除去。
将细胞置于含有十二烷基磺酸钠（Sodium dodecyl sulfate,SDS）的缓冲液中，加等体积水饱和酚，通过剧裂振荡，然后离心形成上层水相和下层酚相。
核酸溶于水相，被苯酚变性的蛋白质或者溶于酚相，或者在两相界面处形成凝胶层。
本实验采用的0.15mol/L 缓冲液系统可使大部分RNA-蛋白复合物解离，而DNA-蛋白复合物只有极少部分解离；用酚处理时DNA-蛋白复合物变性，在低温条件下从水相中除去，这样得到的RNA 制品中混杂的DNA 极少。
用氯仿-异戊醇继续处理RNA 制品，可进一步除去其中少量的蛋白质。
最后用乙醇使RNA 从水溶液中沉淀出来。
本法得到的RNA 不仅纯度高，而且多呈自然状态，可供继续研究之用。
（二）主要仪器和试剂1、仪器（1）台式高速离心机（10 000r/min）（2）水浴（3）Eppendorf 管（1.5mL）（4）紫外可见分光光度计（5）冰箱或冷柜（0~4℃）（6）振荡器（7）分析天平（精确至0.1mg）（8）真空干燥器2、试剂（均为分析纯）（1）SDS-缓冲液：0.3% SDS,0.1mol/L NaCl,0.05mol/L 乙酸钠，用乙酸调到pH5.0。
（2）饱和酚液：重蒸苯酚用（1）溶液饱和。
（3）氯仿-异戊醇液：24﹕1（V/V）。
（4）含2%乙酸钾的95%乙醇溶液。
（5）无水乙醇（6）乙醚（7）溶菌酶（B.R.）（1mg/mL）（三）操作步骤1、取1g 活性干酵母在研钵中研碎，加10mL SDS-缓冲液使成匀浆，洗入各Eppendorf管（略少于管容积的一半），加溶菌酶0.1mL，混匀，室温静置10min,再加等体积饱和酚液，室温下剧烈振荡5min。
2、置冰浴中分层，在0~4℃低温环境下，10 000r/min 离心10min.吸出上层清液，转入新的Eppendorf 管，加等体积氯仿-异戊醇，室温下剧烈振荡2.5min，然后10 000r/min 离心5min。
生化实验 酵母RNA的提取及组分鉴定
酶的特异性及影响酶活性的因素
滴瓶、滴管与细口瓶 生 物 化 学 实 验
1、提出滴头，排出空气。 2、伸入液面下，吸取液体。 3、按量排出液体。 4、将剩余液体排出，放松手指，将滴 头自然放入滴瓶内
Exit
生命科学学院
蛋白质的提取、分离纯化及定量
离心机
生 物 化 学 实 验
⑴将字心机置于平坦结实的地面或实验台上。 ⑵检查离心机调速旋钮是否处在0置 ⑶装入待离心液体后，把离心机转头对称位 置上的离心管（包括外套管）放在天平上平 衡，装入液体量以距管口1--2cm为宜
反应，产生显色复合物。
⑶ 嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤银化合物沉淀。
Exit
生命科学学院
酵母RNA的提取及组分鉴定
实验步骤
生 物 化 学 实 验
一、RNA的粗提取：
二、水解RNA
三、RNA组分鉴定
生命科学学院
酵母RNA的提取及组分鉴定
实验步骤
生 物 化 学 实 验
一、RNA的提取 1.7g酵母悬浮于0.2％ 氢氧化钠溶液70ml中。
生命科学学院
Exit
酵母RNA的提取及组分鉴定
实验原理
⑵ 核糖：RNA与浓盐酸共热时，发生降解，形成的核
生 物 化 学 实 验
糖继而转变成糠醛，后者与地衣酚反应，在Fe3+或Cu2+催化
下生成鲜绿色复合物。脱氧核糖与二苯胺试剂反应成蓝色
化合物，而核糖无此反应。 地衣酚鉴定戊糖时特异性较差， 凡属戊糖均有此反应。微量DNA无影响，较多DNA存在时有 干扰作用，在试剂中加入适量CuCl2· 2H2O可减少DNA的干扰， 甚至某些戊糖持续加热后生成的羟甲基糠醛也能与地衣酚
酵母RNA的提取
目录
• 实验准备 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验结论 • 参考文献
01 实验准备
实验材料
01
02
03
04
新鲜酵母样品
确保酵母样品新鲜且无污染， 以保证RNA提取的质量。
无菌水
用于清洗实验器具和稀释提取 液。
离心管和离心机
用于离心分离酵母细胞和上清 液。
滤纸和过滤器
用于过滤上清液和去除杂质。
价值的信息。
05 参考文献
参考文献
01
[请在此处插入参考文献1]
02
[请在此处插入参考文献2]
[请在此处插入参考文献3]
03
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破碎条件优化
为了获得最佳的破碎效果，可能 需要优化破碎条件，如破碎时间 、破碎次数、破碎温度等。
沉淀与洗涤
沉淀
在破碎后的酵母细胞液中加入适量的沉淀剂，如异丙醇或乙醇，使RNA沉淀下 来。
洗涤
将沉淀物洗涤干净，去除杂质和残留的沉淀剂。洗涤过程中需注意洗涤液的更 换和洗涤次数。
RNA的提取与纯化
提取RNA
将沉淀物溶解在适量的缓冲液中，通过离心或过滤的方法将 RNA从细胞残渣中分离出来。
纯化RNA
去除提取液中的蛋白质、DNA等杂质，获得纯度较高的RNA 。纯化方法包括凝胶电泳、离心机分离、酶解等方法。
03 结果分析
RNA浓度测定
总结词：准确测量
详细描述：使用紫外分光光度计测定提取的RNA溶液的吸光度，根据标准曲线计 算RNA浓度。
实验结果可重复
通过实验操作，成功从酵母细胞中提 取出RNA，且质量较高，无明显杂质。
酵母rna的提取实验报告
酵母rna的提取实验报告酵母RNA的提取实验报告引言：RNA是一种重要的生物分子，它在细胞内承担着转录和翻译的重要功能。
在分子生物学研究中，提取RNA是一项常见的实验操作。
本实验旨在通过提取酵母细胞中的RNA，探究RNA的提取方法和应用。
材料与方法：1. 实验材料：酵母细胞、细胞裂解缓冲液、RNA提取试剂盒、异丙醇、氯仿、异丁醇、乙醇、载玻片、显微镜等。
2. 实验步骤：a. 酵母细胞的培养与收获：将酵母细胞培养于培养基中，通过离心将细胞收获。
b. 细胞裂解：将收获的细胞用细胞裂解缓冲液裂解，以释放RNA。
c. RNA提取：使用RNA提取试剂盒，按照说明书中的步骤进行RNA提取。
d. 纯化RNA：通过异丙醇沉淀和氯仿萃取，去除DNA和蛋白质等杂质。
e. 洗涤与干燥：使用异丁醇和乙醇进行洗涤，最后将RNA干燥。
f. 检测RNA：将提取得到的RNA溶解于适当的缓冲液中，使用紫外可见光谱仪或显微镜观察RNA的浓度和纯度。
结果与讨论：通过上述实验步骤，我们成功地提取到了酵母细胞中的RNA。
在实验过程中，我们注意到以下几点：1. 细胞裂解的缓冲液选择：细胞裂解缓冲液的选择对RNA提取至关重要。
合适的缓冲液可以有效地破坏细胞膜，释放细胞内的RNA。
在本实验中，我们选择了一种经充分验证的缓冲液，以确保细胞能够完全裂解。
2. RNA提取试剂盒的使用：RNA提取试剂盒是一种常用的RNA提取方法。
它通过特定的试剂和离心步骤，将RNA从细胞裂解物中分离出来。
在本实验中，我们按照试剂盒的说明书进行操作，成功地提取到了RNA。
3. RNA的纯化：RNA的纯化是为了去除细胞裂解物中的杂质，如DNA和蛋白质。
在本实验中，我们使用了异丙醇沉淀和氯仿萃取的方法，成功地纯化了RNA。
这些方法可以有效地去除DNA和蛋白质，提高RNA的纯度。
4. RNA的检测：在实验中，我们使用紫外可见光谱仪或显微镜对提取得到的RNA进行检测。
通过观察RNA的浓度和纯度，我们可以评估提取的RNA是否适用于后续的实验操作。
分子生物学实验报告
根据测得的O.D值，从标准曲线上查出相对应的RNA含量，按下式计算出制品中RNA的百分含量：
×100%
（4）醋酸纤维素薄膜电泳法分离测定RNA的四种碱基
1）RNA的碱水解：
称取0.20gRNA，溶于5ml 0.3mol/L KOH溶液中，使RNA的浓度达到20～30mg/ml。沸水浴加热30min。将水解液转入到锥形瓶中。冰浴，在冰浴过程中用高锰酸溶液滴定到水解液的PH值为3.5.在2500rpm离心10min。出去沉淀，上层液即是样品。
2）RNA基团鉴定和地衣酚法测定RNA含量的基本原理：
RNA含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸组分，加硫酸煮沸可使其水解，用硝酸银、地衣酚和定磷试剂可分别鉴定嘌呤碱、核糖和磷酸组分。
A：嘌呤鉴定：
嘌呤碱与硝酸银反应可生成白色的嘌呤银化物沉淀。
H2SO4AgNo3
RNA嘌呤嘌呤银化物（白色或红棕色）
100℃
酵母含RNA 达2.67—10.0%，DNA 则少于0.03—0.516％。为此，提取RNA多以酵母为原料。
由于RNA得来源很多，因而提取制备方法也各异，一般有苯酚法、稀碱法和浓盐法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验室最常用的方法，次方法能够较好地除去DNA和蛋白质，提取的RNA具有生物活性，两种常见的方法原理为：
核糖定量反应：
RNA
HCl
93℃
4）使用电泳技术进行RNA鉴定的基本原理：
任何物质质点，由于其本身在溶液中的解离或是由于其表面对其他带电质点的吸附，会在电场中向一定的电极移动。一般来说，在碱性溶液中，分子带负电荷，在电场中向正极移动；而在酸性溶液中，分子带正电荷，在电场中向负极移动。不同质点在电场中的移动速度不同，常用泳动度（迁移率）来表示。即带电质点在单位电场强度下的泳动速度。电泳快慢与电场强度、溶液的PH值、溶液的离子强度、电渗现象有关。
酵母RNA 的提取、鉴定和定量测定实验
用蒸馏水定容到刻度，混匀。取1.0 ml样品液稀释40
倍后，分别取2份2.0 ml的稀释液，加入2.0 ml的地衣 酚试剂，混匀，与标准曲线的各管同时臵沸水浴中加 热45分钟，冷却，测定O.D 670。
（3）RNA含量的计算 根据测得的O.D值，从标准曲线上查出相对应的 RNA含量，按下式计算出制品中RNA的百分含量：
核酸的分布
DNA：细胞核（95%） 细胞器（5%） RNA：细胞质（75%) 细胞核(10%) 细胞器(15%)
RNA以rRNA的数量最多（80％-85%)
核酸提取的主要步骤
破碎细胞
去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等
生物大分子
去除其它不需要的核酸分子
沉淀核酸，去除盐类，有机溶剂等杂质
管号
试剂 标准RNA溶液 （ml） (100g/ml) 蒸馏水（ml） 地衣酚试剂 （ml） 0 1 2 3 4 5
0
2.0
0.4
1.6
0.8
1.2
1.2
0.8
1.6
0.4
2.0
0
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
（2）样品的测定 准确称取0.1 g提取的酵母RNA，放入小烧杯中，加少 量蒸馏水调成糊状，溶解，若不溶，则滴入少量5%-6% 氨水助溶，调pH至7.0，小心转移到25 ml容量瓶中，
醋酸纤维薄膜电泳装臵示意图
1. 滤纸桥 2. 电泳槽 3. 醋酸纤维素薄膜 4. 电泳槽膜支架 5. 电极室中央隔板
3．电泳
将点样后的膜条臵于电泳槽架上，放臵时， 无光泽面(即点样面)向下，点样端臵于负极，槽 架上以双层滤纸作桥垫，滤纸的一端与支架的前 沿对齐，另一端浸入电极槽的缓冲液中。用缓冲 液将滤纸全部浸润并驱除气泡。膜条与滤纸需贴 紧，待平衡5 min后通电，电压为160 V，电流为 0.4～0.7 mA/cm，通电30 分钟左右关闭电源。
酵母RNA的提取实验报告
酵母RNA的提取紫外吸收法测RNA浓度实验报告一、实验目的1、掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。
2、掌握紫外线（UV吸收法测定核酸浓度的原理。
3、熟悉紫外分光光度计的使用方法。
二、实验原理核酸是生命的最基本物质之一，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内。
对核酸的研究是更深入研究生命体的基本前提之一。
研究核酸需要纯度很高的核酸，所以核酸的提取方法也就在生物学研究中相当重要。
本次实验提取酵母的核糖核酸（RNA o RNA离体后稳定性很差，含量低，所以在提取的时候就要注意防止核酸的降解和变性，防止过酸、过碱、避免剧烈搅拌，尤其重要的是防止RNA 酶的作用。
本实验是医药卫生领域与大工业生产的基础方法。
核酸（RNA都是由核苷酸组成的多聚核苷酸化合物，而核苷酸是由糖、碱基和磷酸以等分子比例构成的，故测定组成核苷酸的任意一种组分即可以测定生物体内核酸的含量或者是提取出来的核酸的含量。
提取RNA的方法很多，在工业生产上常用的是稀碱法和浓盐法。
前者是利用碱使细菌细胞壁溶解，是RNA释放出来，后者是在加热的条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来。
使用浓盐法提取RNA勺时候应该注意掌握温度，直接至90~100C浸提，避免在20~70C的时间过长，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶的作用活跃的温度范围，会使RNA降解而降低提取率。
这两种方法是从废弃的啤酒酵母中提取RNA的—般方法。
但是这两种方法各有利弊，如浓盐法提取的RNA纯度高，而稀碱法提取的时间短，提取率高，更利于工业化生产。
RNA在260nm处有最大吸收峰，一定浓度范围内其浓度与吸光度成正比，故可以用紫外分光光度计通过比色来测定RNA t量。
由于蛋白质在280nm波长处也有光吸收，对RNA测定有一定的干扰作用，但蛋白质的最大吸收峰在280nm 处，如同时测定280nm的光吸收，通过计算可消除其对RNA M定的影响。
因此如其中含有蛋白质时必须同时测定280nm和260nm的吸光度，可通过计算测定溶液中RNA的含量。
酵母RNA提取
酵母RNA的提取一、目的：学习稀碱法提RNA的原理与技术。
二、原理：由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也各异，一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。
其中苯酚法又是实验室最常用的。
组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中，向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好地除去DNA和蛋白质。
上述方法提取的RNA具有生物活性。
工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这2种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。
浓盐法是用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3―4h，迅速冷却，提取液经离心后，上清液用乙醇沉淀RNA。
稀碱法使用稀碱（本实验用0.2%NaOH溶液）使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA（本实验）或调pH2.5利用等电点沉淀。
提取的RNA 有不同程度的降解。
酵母含RNA达2.67―10.0%，而DNA含量仅为0.03―0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。
三、器材与试剂：1．器材：[1]干酵母粉（市售）。
[2]鲜酵母（市售）。
[3]pH试纸（pH1―10）。
[4]台天平（100g）。
[5]烧杯100ml（×1）。
[6]量筒50ml（×1）、10ml（×1）。
[7]抽滤瓶500ml（×1）、布氏漏斗φ10cm（×1）。
[8]吸管0.5ml（×1）、1ml（×2）、2ml（×2）、5ml（×1）。
[9]离心机5000r・min-1。
2．试剂：[1]0.2%氢氧化钠溶液：2gNaOH溶于蒸馏水并稀释至1000ml。
[2]乙酸（A・R）。
[3]95%乙醇。
[4]无水乙醚（C・P）。
[5]氨水（C・P）。
[6]10%硫酸溶液：浓硫酸（比重1.84）10ml，缓缓倾于水中，稀释至100ml。
生化实验 酵母RNA的提取及组分鉴定
验
迅速冷却，提取液离心后，上清液用乙醇沉淀RNA。稀
碱法是用稀碱溶液使细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋
白质和菌体后
,的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。
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酵母RNA的提取及组分鉴定
实验原理
生
酵母含RNA,2.62---10％,DNA含量仅为0.03-0.516%，所 以提取RNA多以酵母为原料。
甚至某些戊糖持续加热后生成的羟甲基糠醛也能与地衣酚 反应，产生显色复合物。 ⑶ 嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤银化合物沉淀。
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酵母RNA的提取及组分鉴定
实验步骤
生 物
一、RNA的粗提取：
化
二、水解RNA
学
三、RNA组分鉴定
实
验
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实验步骤
酵母RNA的提取及组分鉴定
生 一、RNA的提取 物 1.7g酵母悬浮于0.2％ 化 氢氧化钠溶液70ml中。 学 2.将悬浮液转移至 实 150ml锥形瓶中，在沸 验 水浴上加热30分钟，冷
开吸耳球，立即用右手的食指按住管口，大拇指和中指拿住管刻度线
上方，再使管离开液面，管末端仍靠在盛溶液器皿的内壁上。略松食
指，使液面平稳下降，直到溶液的弯月面与刻度标线相切。
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酶的特异性及影响酶活性的因素
移
液
生 物 化 学 实 验
生 入水解液1ml ，加入三氯
物
化铁的浓盐酸溶液2ml和
化
苔黑酚的乙醇溶液3滴，
学
实
在沸水浴中加热，观察试
验
管内颜色变化。解释原因。
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酵母RNA的提取及组分鉴定
推荐一个综合化学实验_酵母中RNA的提取和鉴定
2 实验步骤
2. 1 酵母中 RNA的提取 称取 5. 0g药用酵母于 100mL 锥形瓶中 ,加入 50mL 5%的氯化钠溶液 ,使成酵母悬浮液 , 再加入 20mL 5%的氯化钠溶液 ,搅匀 ,在 100W 功率 CQ2200型超声波清洗器里抽提 45m in,冷 却至室温 ,将混合物转入离心杯中 , 3000 r/m in离心 30m in。上清液经漏斗过滤于 150mL 烧杯 里 ,放于冰浴中冷却 20m in, 在搅拌下用 6mol/L 盐酸小心调节 pH 至 2. 5, 在冰 浴中 静置 20m in,使 RNA 沉淀完全 。以 3000 r/m in离心 15m in,弃去上清液 。沉淀用 70%乙醇洗两次 (每次约 10mL ) ,再用 95%乙醇洗两次 (每次约 10mL ) 。干燥 ,即得 RNA 制品 。 实验时间约为 2. 5h。 2. 2 紫外吸收法测定核酸含量 准确称取 0. 1～0. 2g RNA 粗制品 ,加少量蒸馏水调匀后 ,再加 30mL 水 ,用 50g /L 氨水溶 液调节 pH 至 6以助溶解 。氨水要慢慢地逐滴加入 ,调匀后再加第 2滴 ,以防局部因碱过多引 起 RNA 降解 。将溶液移入 50mL容量瓶中 ,稀释至刻度 。用以配置溶液 1和溶液 2。 溶液 1 取 2mL 稀释液加 2mL 水 ,摇匀后 ,吸出 2mL放入 50mL 容量瓶中 ,稀释至刻度 。 溶液 2 取 2mL 稀释液加 2mL 核酸沉淀剂 ,待充分沉淀后 ,离心 ,取 2mL 上清液置于 50mL 容量瓶中 ,稀释至刻度 。 以蒸馏水为空白 ,在 260nm 波长下 ,分别测定溶液 1和溶液 2的吸光度 A260 。 实验时间约为 1h。 2. 3 RNA组成成分的分析 取 5mL 上述实验配制的 RNA 溶液 ,加入 2mL 3mol/L 硫酸溶液 ,在沸水浴中加热 10m in, 将 RNA 水解 ,待冷却至室温后过滤 ,滤液用于下列实验 。 2. 3. 1 戊糖的检出 取 0. 5mL 水解液 ,加 1mL苔黑酚试剂 ,加热至沸 1m in,溶液呈蓝绿色 。 2. 3. 2 嘌呤碱的检出 取 2mL 水解液 ,加浓氨水和 10g /L 硝酸银溶液各 1mL。放置 10m in后 ,可看到白色嘌呤 银化合物的絮状沉淀 。
酵母RNA的提取实验报告
酵母RNA的提取紫外吸收法测RNA浓度实验报告一、实验目的1、掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。
2、掌握紫外线（UV）吸收法测定核酸浓度的原理。
3、熟悉紫外分光光度计的使用方法。
二、实验原理核酸是生命的最基本物质之一，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内。
对核酸的研究是更深入研究生命体的基本前提之一。
研究核酸需要纯度很高的核酸，所以核酸的提取方法也就在生物学研究中相当重要。
本次实验提取酵母的核糖核酸（RNA）。
RNA离体后稳定性很差，含量低，所以在提取的时候就要注意防止核酸的降解和变性，防止过酸、过碱、避免剧烈搅拌，尤其重要的是防止RNA酶的作用。
本实验是医药卫生领域与大工业生产的基础方法。
核酸（RNA）都是由核苷酸组成的多聚核苷酸化合物，而核苷酸是由糖、碱基和磷酸以等分子比例构成的，故测定组成核苷酸的任意一种组分即可以测定生物体内核酸的含量或者是提取出来的核酸的含量。
提取RNA的方法很多，在工业生产上常用的是稀碱法和浓盐法。
前者是利用碱使细菌细胞壁溶解，是RNA释放出来，后者是在加热的条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来。
使用浓盐法提取RNA的时候应该注意掌握温度，直接至90~100℃浸提，避免在20~70℃的时间过长，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶的作用活跃的温度范围，会使RNA降解而降低提取率。
这两种方法是从废弃的啤酒酵母中提取RNA的一般方法。
但是这两种方法各有利弊，如浓盐法提取的RNA纯度高，而稀碱法提取的时间短，提取率高，更利于工业化生产。
RNA在260nm处有最大吸收峰，一定浓度范围内其浓度与吸光度成正比，故可以用紫外分光光度计通过比色来测定RNA含量。
由于蛋白质在280nm波长处也有光吸收，对RNA测定有一定的干扰作用，但蛋白质的最大吸收峰在280nm处，如同时测定280nm的光吸收，通过计算可消除其对RNA测定的影响。
因此如其中含有蛋白质时必须同时测定280nm和260nm 的吸光度，可通过计算测定溶液中RNA的含量。
酵母rna的提取实验原理
酵母rna的提取实验原理宝子们，今天咱们来唠唠酵母RNA提取这个超有趣的实验原理呀。
咱先来说说酵母是个啥。
酵母呢，就像是微生物界的小魔法师。
它小小的，但是可神奇啦。
酵母细胞里有好多宝藏呢，RNA就是其中之一。
RNA这个东西呀，就像是细胞里的小信使。
它在细胞的各种活动里都扮演着超级重要的角色。
那怎么把RNA从酵母里弄出来呢？这就涉及到一些很巧妙的办法啦。
咱知道酵母细胞有细胞壁，这细胞壁就像一个小城堡的城墙一样，把细胞里的东西保护起来。
要提取RNA，首先就得打破这层“城墙”。
通常呢，会用到一些化学试剂，就像是一群小工兵一样，去把这细胞壁给攻破。
比如说用碱，碱这个东西可厉害了，它就像一个大力士，能够让细胞壁变得脆弱，然后就可以把细胞里面的东西释放出来啦。
当把细胞壁打破之后呀，细胞里的各种成分就都混在一起了。
这时候就像是打开了一个装满宝贝的宝箱，里面啥都有。
但是咱只想要RNA呀。
这里面就有一个很重要的原理，那就是RNA和其他物质在不同条件下的溶解度不一样。
RNA在酸性的环境下，会变得比较容易沉淀下来。
就像它在酸性的环境里突然变得很害羞，想要躲起来，然后就聚集在一起，形成沉淀啦。
而其他的一些物质呢，在这种酸性环境下还能够乖乖地待在溶液里，不会跟着RNA一起沉淀。
这就像是在一群小伙伴里，只有RNA这个小机灵鬼听到了特殊的召唤，然后就从溶液里跑出来啦。
还有一个很关键的点呢，就是在提取的过程中，要尽量避免RNA被分解。
RNA酶这个小坏蛋到处都是，它就像一个专门搞破坏的小怪兽，要是不小心让它得逞了，那咱辛辛苦苦提取的RNA就会被它咬得七零八落的。
所以在整个提取过程中，要使用一些能够抑制RNA酶活性的东西。
就像是给RNA穿上一层保护铠甲，让RNA酶这个小怪兽没办法靠近。
而且呀，在提取过程中，各种试剂的浓度、温度啥的都很重要呢。
就像是做菜的时候，盐放多放少、火大火小都会影响菜的味道一样。
如果试剂浓度不对，可能就没办法很好地把RNA提取出来，或者会把其他杂质也一起带出来。
酵母rna提取工艺初步研究
酵母rna提取工艺初步研究近年来，随着科技的发展，RNA在一些生物学方面，如遗传学、细胞学、发育生物学、分子生物学等研究中发挥着重要作用。
特别是在分子遗传学研究中，RNA的提取成为当今科学家关注的主要问题。
而rna提取的工艺研究一直是分子遗传学研究的基础工作。
研究发现，酵母rna提取是应用最为广泛的技术之一。
由于其简单、快速、可靠和成本低，酵母rna提取已经成为生物学家研究rna 信息的基本方法。
因此，酵母rna提取工艺的研究是近年来受到关注的一个重要课题。
酵母rna提取工艺可以分为两大类：水溶性提取技术和脂溶性提取技术。
水溶性提取技术包括醋酸提取法、重结晶提取法、大量沉淀法等。
脂溶性提取技术是利用脂质与rna结合的能力，将rna从细胞内的有机相中分离出来的一种技术，它包括硫酸及其氯化物提取法、硅油提取法、苯醌油提取法、石蜡提取法、苯乙烯提取法等。
水溶性提取技术和脂溶性提取技术各有优劣。
水溶性法可以简便有效地完成提取，但提取效率有限，而且也可能损坏rna的结构；脂溶性提取技术具有较高的提取效率，但有污染的风险。
目前，针对酵母rna提取的研究大都集中在不同的技术原理和应用方法的比较上。
其中，常用的水溶性提取技术包括重结晶提取法、大量沉淀法和醋酸提取法，这些技术可以更好地提取有酵母rna。
利用重结晶提取酵母rna可以通过加入易溶酶类溶解蛋白质，减少细胞内蛋白质和rna的杂质，使rna更加纯净，最终提取到纯粹的rna。
大量沉淀法对酵母rna的提取有较强的抗干扰能力，特别适用于精细的rna提取和提取背景噪声极低的情况。
醋酸提取法的优点在于可以完成提取的简便、快速、可靠、成本低等优势，而这正是分子遗传学研究中需要的。
随着科技的进步，研究人员的研究也在不断更新和完善，新型的酵母rna提取技术也正在不断出现，希望能更好地满足不同研究领域需求。
综上所述，酵母rna提取工艺在不同研究领域有着重要作用，通过研究可以更加有效地提取有效的rna，以解决分子遗传学中的研究问题，有利于深入研究rna的遗传信息，为科学家开展更深入和准确的研究工作打下坚实的基础。
酵母RNA的提取
酵母RNA的提取一实验目的：1．了解从植物、动物等材料中提取有效成分的方法途径，掌握在实验过程中细胞破壁的方法。
2．了解酵母RNA提取的不同方法，掌握稀碱法提取RNA的技术。
二实验原理：稀碱法使用稀碱（0.2%氢氧化钠）使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清夜用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。
三实验技术：1．细胞破壁的方法：（1）物理方法：研磨法，组织捣碎器法（低温操作，防止变性），超声波法，压砸法，冻融法。
（2）溶胀和自溶：溶胀—细胞壁内外存在渗透压差，溶剂分子大量进入细胞，引起细胞膜发生胀破的现象称溶胀。
自溶—细胞结构在本身所具有的各种水解酶作用下，发生溶解的现象称自溶。
（3）化学方法：用脂溶性的溶剂或表面活性剂处理细胞时，可把细胞壁、细胞膜的结构部分溶解，进而使细胞释放出各种有效成分，导致整个细胞破碎。
（4）生物酶降解法：如溶菌酶有降解细胞壁的功能。
2．生物材料的选择：原材料丰富，易得、廉价、有效成分含量高。
3．溶剂的选择：有效成分溶解度尽可能的大，不发生化学反应，不改变有效成分的化学性质，价格低，成本低，收益高。
4．影响提取的因素：溶液PH值，溶剂的极性和离子强度，温度，水解酶，搅拌，金属离子，抽提液与抽提物的比例要适当，一般5：1。
5．酵母RNA的提取方法：苯酚法—保存了生物活性，去污剂法，浓盐法，稀碱法。
四试剂：1. 0.2%氢氧化钠2. 95%酸性乙醇：500毫升乙醇加5毫升浓盐酸。
3. 95%乙醇4. 无水乙醇五仪器：离心机、电炉、氺浴锅、天平等六操作：称取4克干酵母粉置于200毫升锥形瓶中，加入40毫升0.2%氢氧化钠溶液，沸水浴30分钟，经常搅拌，后流水冷却，4000转/分离心15分钟，取上清液，加入40毫升95%酸性乙醇，边加边搅拌，后静置5分钟，再4000转/分离心5分钟，保留沉淀，再用95%乙醇20毫升洗涤两次，每次洗后3000转/分离心5分钟，再用20毫升无水乙醇分两次洗涤，每次洗后3000转/分离心5分钟，收集沉淀于滤纸上干燥备用。
实验8 酵母RNA的提取----苯酚法-20090301
三、实验材料与试剂 1、实验材料 市售干酵母粉 2、实验试剂 ⑴ 90%苯酚水溶液 (含0.1% 8-羟喹啉)
⑵ 95%乙醇 四、实验器材与仪器 1、 离心机、离心管（7ml） 2、 制冰机 3、 分析天平 4、 托盘天平（平衡离心管） 5、 摇床 6、 具塞锥形瓶 (150ml) 7、 量筒(10ml)、烧杯、滴管和小玻棒
五、实验操作方法和步骤 1、酵母细胞破碎、提取RNA ： 酵母细胞破碎、提取RNA 称取干酵母粉1.0g , 入150 ml具塞锥形瓶中，加蒸馏水5ml , 再小心加 入90%苯酚5ml（苯酚有毒！并具腐蚀性），盖好锥形瓶的塞子，在摇床上振 摇反应 40 mi00rpm离心10min。用吸管小心吸取上清液（含RNA)转移到另一 支干净离心管中。见图1。 图
六、注意事项 1、离心前样品离心管一定要先平衡，并对称放入离心机中。 2、吸取上清液时，不能搅动界面，更不能吸入界面物质。 3、苯酚不要弄到手上、皮肤上或桌上，以免损伤皮肤和衣物。
20090228
实验八 酵母RNA的提取——苯酚法 酵母RNA的提取——苯酚法 RNA的提取——
一、实验目的和要求 1、 了解核酸的组成及RNA提取技术。 2、 掌握用苯酚法制备RNA的原理和方法 二、实验基本原理 苯酚法适用于tRNA的提取。从细菌或酵母细胞中提取tRNA，可在不经细胞 破碎，直接用被水饱和的中性苯酚抽提，苯酚可以改变细胞壁的通透性，使 tRNA (分子量在25000左右)从细胞中释入出来，而大分子核酸仍留在细胞内。 通过离心，将含有酚水和细胞碎片的乳浊液分成两相， 上层水相为水溶性RNA、 多糖及小分子极性物质，下层酚相为被水饱和的酚、变性蛋白质和DNA（大多与 变性蛋白质缠连）菌体残渣等。在酚相和水相界面有一层凝集的变性蛋白质。 用乙醇沉淀水相中的大分子物质，tRNA即呈白色絮状沉淀析出，同时除去可溶 性的酯类等杂质。再离心，弃上清液，得到tRNA沉淀样品。苯酚法是提取具有 生物活性的，不降解RNA的简便而有效的方法。 酵母RNA的提取→乙醇沉淀 →得到粗品RNA
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一、实验目的和要求 1、 了解核酸的组成及RNA提取技术。 2、 掌握用苯酚法制备RNA的原理和方法 二、实验基本原理 苯酚法适用于tRNA的提取。从细菌或酵母细胞中提取tRNA，可在不经细胞 破碎，直接用被水饱和的中性苯酚抽提，苯酚可以改变细胞壁的通透性，使 tRNA (分子量在25000左右)从细胞中释入出来，而大分子核酸仍留在细胞内。 通过离心，将含有酚水和细胞碎片的乳浊液分成两相， 上层水相为水溶性RNA、 多糖及小分子极性物质，下层酚相为被水饱和的酚、变性蛋白质和DNA（大多与 变性蛋白质缠连）菌体残渣等。在酚相和水相界面有一层凝集的变性蛋白质。 用乙醇沉淀水相中的大分子物质，tRNA即呈白色絮状沉淀析出，同时除去可溶 性的酯类等杂质。再离心，弃上清液，得到tRNA沉淀样品。苯酚法是提取具有 生物活性的，不降解RNA的简便而有效的方法。 酵母RNA的提取→乙醇沉淀 →得到粗品RNA
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图1. 苯酚提取液离心后分层的情况 1. 水层（RNA、多糖 多糖） 多糖 2. 中层（变性蛋白层 变性蛋白层） 变性蛋白层 3. 酚层（DNA及蛋白质 及蛋白质） 及蛋白质
2、有机溶剂（乙醇）纯化RNA： 有机溶剂（乙醇）纯化RNA： RNA 含有RNA溶液中加入2倍体积的95%乙醇，混匀，于冰浴中放置20 min， RNA结絮沉淀出来。5000rpm 离心5min。小心弃去上清液，用小玻棒将沉淀 小心转移到称量纸上，自然风干或烘干。RNA粗制品供定量实验用。
五、实验操作方法和步骤 1、酵母细胞破碎、提取RNA ： 酵母细胞破碎、提取RNA 称取干酵母粉1.0g , 入150 ml具塞锥形瓶中，加蒸馏水5ml , 再小心加 入90%苯酚5ml（苯酚有毒！并具腐蚀性），盖好锥形瓶的塞子，在摇床上振 摇反应 40 min后，把具塞锥形瓶中的内容物转入2支7ml离心管中,将2支离心 管平衡后，8000rpm离心10min。用吸管小心吸取上清液（含RNA)转移到另一 支干净离心管中。见图1。 图
三、实验材料与试剂 1、实验材料 市售干酵母粉 2、实验试剂 ⑴ 0%苯酚水溶液 (含0.1% 8-羟喹啉)
⑵ 95%乙醇 四、实验器材与仪器 1、 离心机、离心管（7ml） 2、 制冰机 3、 分析天平 4、 托盘天平（平衡离心管） 5、 摇床 6、 具塞锥形瓶 (150ml) 7、 量筒(10ml)、烧杯、滴管和小玻棒
六、注意事项 1、离心前样品离心管一定要先平衡，并对称放入离心机中。 2、吸取上清液时，不能搅动界面，更不能吸入界面物质。 3、苯酚不要弄到手上、皮肤上或桌上，以免损伤皮肤和衣物。
20090228