免疫组化、免疫荧光、流式细胞术的应用比较及常见问题分析
实验常见问题
实验常见问题流式、wb、rt－pcr等实验所需细胞数问题编辑词条发表评论(0)1.流式细胞术所需的细胞数问：我目前准备做流式，要做10个标本，但是细胞总数不多了，我能不能把原来在100ml培养瓶培养的细胞转移到25ml里培养，这样把细胞重悬后，1个100ml的可以分到4个25ml里。
请问这样可以嘛？细胞数够嘛？据说做流式至少要105次方个细胞以上才行。
一位名叫丁香的网友认为：细胞的数量足够了。
你用流式细胞仪测量什么指标？你会用其他药物来治疗吗？如果你讲得很详细，你就能知道你的方法是否合适问：我要用流式测细胞周期，要加抑制细胞增殖的药物，然后自加药的不同时间取样测细胞周期。
这样可行不？丁香网友游荡想：抑制率是多少？建议使用至少50毫升的培养瓶问：请教大家一个问题：因为我做流式需要做很多次，就想到用六孔板做，六孔板的一个孔内的细胞数够不够做一次流式用？有没有人用过这个方法？请大家给个建议。
丁香网友文超认为：够了，流媒体标准的索引需要1X105。
我做到了。
没问题问：因为我做流式需要做很多次，就想到用六孔板做，六孔板的一个孔内的细胞数够不够做一次流式用？有没有人用过这个方法？请大家给个建议。
丁香网友赵一恒认为：够了！流式细胞术所需的细胞数为105，而六孔板的全长可达到106。
问：96孔板的转染能否通过流式细胞术进行分析？流式细胞术分析应使用多少微升悬浮液？非常感谢。
丁香网友赵一恒认为：一般来说，我们用500μl的悬浮液进行电脑检测！！！问：请问流式检测的最小的细胞数量是多少，如果小于一个细胞的话是否就不能采用流式检测了。
流式要求的细胞的最小体积是多少，我最近收集了少量细胞团，30-50微米，因为将细胞团中的各个细胞分离开较难，是否可以用于流式的检测？丁香网网友xtyang认为，如果细胞不能分散成单个细胞悬浮液，就不能用流式细胞仪进行分析。
丁香网友swarm认为，测试中应该至少有2000个细胞，但在最初制备样本时，如果只做了外部标准，样本可以比最小细胞数大一个数量级；但是，如果需要内标，固定液和穿膜液的粘度大，细胞损失也大。
免疫学检验的方法和特点
免疫学检验的方法和特点免疫学检验是一种通过检测和分析机体免疫系统相关指标来评估机体免疫功能的方法。
它可以用于疾病的诊断、预防和治疗过程中，对于研究免疫系统的功能和疾病的免疫机制也具有重要意义。
免疫学检验的方法主要包括体外诊断试验、免疫组化技术和流式细胞术等。
下面将逐一介绍这些方法的特点和应用。
1. 体外诊断试验：体外诊断试验是最常用的免疫学检验方法之一，包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫分析（RIA）、免疫印迹（Western Blot）等。
这些试验通过检测血清中的抗体或抗原来评估机体的免疫状态。
其特点是操作简单、结果准确可靠、样本来源广泛，可以用于检测多种疾病，如感染病、自身免疫病等。
体外诊断试验的优势在于可以进行大规模筛查，对于人群健康状况的监测和疾病的早期诊断具有重要意义。
2. 免疫组化技术：免疫组化技术是利用抗体与组织或细胞中特定分子的结合反应来检测和定位这些分子的方法。
常用的免疫组化技术包括免疫组织化学（IHC）和免疫荧光染色（IF）等。
这些技术可以用于检测和定位肿瘤标志物、炎症细胞因子、免疫细胞表面标志物等，对于疾病的诊断和治疗有重要的指导意义。
免疫组化技术的优势在于可以直接观察到分子的表达和分布情况，具有较高的灵敏度和特异性。
3. 流式细胞术：流式细胞术是一种通过检测和分析细胞表面标志物来鉴定和分类细胞的方法。
通过标记细胞表面的抗原或抗体，结合流式细胞仪的高速流式分析技术，可以对单个细胞进行高通量的检测和分析。
流式细胞术可以用于检测和鉴定免疫细胞亚群、肿瘤细胞、干细胞等，对于疾病的诊断和治疗选择有重要的指导作用。
流式细胞术的优势在于可以同时检测多个指标，对于复杂的样本分析有较高的效率和准确性。
免疫学检验的特点包括以下几个方面：1. 高度特异性：免疫学检验方法可以通过特异的抗体-抗原反应来检测和定量分析特定的分子或细胞，具有较高的特异性。
这使得免疫学检验方法在疾病的诊断和治疗中具有重要的优势，可以准确地鉴定和区分不同的疾病类型。
排雷攻略：一文教会你免疫组化、免疫荧光如何制片看片
排雷攻略：⼀⽂教会你免疫组化、免疫荧光如何制⽚看⽚最近带着新进门的研⼀师妹做实验，师妹问了三个问题：1、免疫组化和免疫荧光的区别？2、这两种实验该在什么情况下选择？3、组织是不是只能做免疫组化，细胞是不是只能做免疫荧光？4、免疫荧光为什么要做DAPI染⾊？我听完之后笑了，这种思考的态度是好的，但其实，师妹问的这⼏个问题就是⼀个问题。
归根结底，涉及到“免疫”⼆字总是离不开抗原抗体反应的，⼆者都属于免疫检测技术⼿段，⽽免疫组化和免疫荧光两项技术都可以应⽤在组织和细胞⽅⾯，前者采⽤的是化学发光的⽅法，后者是荧光。
因为我们在⽂献中看到的，很多⼈都会选择做组织的免疫组化、细胞的免疫荧光，所以这就给初⼊实验室的新⼿们带来了误区。
其实⽹上已经有很多详细的操作步骤，所以⼩六⼉今天想为各位新⼿朋友们总结⼀下我认为的免疫组化和免疫荧光制⽚看⽚的⼩技巧，帮助⼤家排雷区，同时也提出⾃⼰的⼀些疑问，希望能得到解答（因为本⼈只做过组织的免疫组化和细胞的免疫荧光，以下内容以这两⽅⾯为主，内容若有⽋缺，欢迎⼤家补充）。
免疫组化1、取材时要尽量去除⾎液的⼲扰：⼩⿏⿇醉后，从左⼼⽿插⼊针头，⼼尖处剪开⼀个⼩⼝，然后将PBS缓慢打⼊⼼脏中，缓慢跳动的⼼脏会将PBS运送⾄全⾝。
50ml的PBS⽤量对于Balb/c或昆明⼩⿏的体积⽽⾔就已⾜够，这⼀步骤对于像肺、肝和脾脏这样⾎管丰富的脏器取材极为重要。
2、取材时要尽量做到表⾯积⼤、厚度⼩：理想的取材厚度是2mm，这样的尺⼨可以让后续的固定、脱⽔等操作达到理想的效果。
器材选择上，⼿术⼑和超市购买的⼑⽚都可以，只要⼑⽚锋利即可，切勿反复切割揉搓组织。
因为脏器的表⾯都是弧形，并且质地很软，如果你直接取材，第⼀是不好切，第⼆是弧形的⼀⾯肯定是厚度超标，所以这⾥建议各位将组织置于碎冰上后，沿着长轴在横切⾯处再切⼀⼑取材（针对实质性器官，且不要求取材部位）。
3、取材后的组织需⽴即固定：固定不仅是要保留组织原有的形态，也是在保留组织中的抗原。
免疫组化法和免疫荧光染色法的区别
免疫组化法和免疫荧光染色法是生物医学领域常用的实验技术，它们在细胞和组织的研究中扮演着重要的角色。
虽然它们都是用于检测特定蛋白在生物样本中的表达情况，但在操作方法、原理和应用范围上却有着明显的区别。
在本文中，我将深入探讨这两种技术的区别，并就其在生物医学研究中的应用进行全面评估，以期帮助读者更深入地理解并灵活运用这两种技术。
1. 免疫组化法免疫组化法是一种用于检测组织或细胞中特定蛋白表达的技术。
它的操作流程大致包括取材、固定、脱水、包埋、切片、脱蜡、抗原修复、蛋白质检测、染色和显微镜观察等步骤。
在实验过程中，首先需要将样本切片，并通过特定的固定、脱水和包埋步骤将其固定在载玻片上。
随后，利用抗原修复方法还原蛋白的空间结构，以便后续的免疫染色。
接下来，通过加入特定的抗体和标记物，可以对目标蛋白进行特异性染色，并最终通过显微镜观察蛋白在组织或细胞中的表达情况。
2. 免疫荧光染色法免疫荧光染色法是利用特定抗体与荧光染料结合，通过检测荧光信号的方式来标记和检测生物样本中的特定蛋白表达。
它的操作流程也包括取材、固定、脱水、包埋、切片等步骤，与免疫组化法的操作步骤较为类似。
不同的是，在免疫荧光染色法中，需要利用特定的荧光标记的二抗或荧光素-抗素进行染色，通过激光共聚焦显微镜等设备观察样本中荧光的分布情况，从而检测目标蛋白的表达位置和水平。
在应用范围方面，免疫组化法主要用于研究组织切片或细胞样本中特定蛋白的表达情况，可以定量地评估蛋白的表达水平和分布情况，适用于体内和体外实验样本。
而免疫荧光染色法由于其高灵敏度和高分辨率的特点，适用于细胞共聚焦显微镜观察，可以用于检测细胞中蛋白的定位、表达和相互作用等，是细胞生物学和免疫学研究中常用的技术手段。
在本文中，我主要介绍了免疫组化法和免疫荧光染色法的操作原理、步骤和应用范围，并就其在生物医学研究中的应用进行了全面评估。
通过对这两种技术的深入了解，我们可以更好地选择合适的技术手段，并在实验设计和结果分析中更加灵活地运用这些技术来开展生物医学研究。
免疫因子检测方法
免疫因子检测方法免疫因子检测方法是一种用于检测免疫因子（如抗体、细胞因子、细胞表面标记物等）存在和活性的方法。
这些免疫因子在机体中起着重要的免疫监测和调节作用，因此其检测对于研究和诊断免疫相关疾病具有重要意义。
以下将介绍几种常见的免疫因子检测方法。
一、酶联免疫吸附测定法（ELISA）酶联免疫吸附测定法是一种常用的免疫因子检测方法，可用于检测抗体、细胞因子等免疫因子的含量和活性。
它基于免疫反应原理，利用固相底物上的抗原或抗体与待测物特异性结合，并通过化学反应使结合物表现出可测量的信号。
ELISA方法操作简便，灵敏度高，可以同时检测多个样本，并可定量测定免疫因子的浓度。
二、流式细胞术流式细胞术是一种用于检测细胞表面标记物和细胞因子的免疫因子检测方法。
它基于细胞免疫荧光染色原理，通过给细胞标记上特定的荧光抗体，再通过流式细胞仪进行检测和定量分析。
流式细胞术具有高通量、高灵敏度和高分辨率等优点，可以同时检测多个标记物，并通过细胞表面标记物的多参数分析来分辨不同细胞亚群。
三、免疫组化法（IHC）免疫组化法是一种常用的组织免疫因子检测方法，可用于检测组织内抗体、细胞因子等的存在和表达情况。
免疫组化法通过将待测物与特异性抗体结合，再通过染色反应可使抗体反应物表现出可见的颜色或荧光信号。
免疫组化法可以定位和定量分析免疫因子在组织中的分布、表达和定位，对于研究免疫相关疾病的病理机制具有重要意义。
四、免疫电泳法免疫电泳法是一种常用的免疫因子检测方法，可用于检测抗体、抗原等的存在和相互作用。
它利用电泳原理，将待测物分离并定位在凝胶上；再通过将特异性抗体与待测物结合，并通过化学反应可呈现出可测量的信号。
免疫电泳法可以用于检测免疫复合物的形成以及免疫因子间相互作用的强弱关系。
总结起来，免疫因子检测方法包括酶联免疫吸附测定法、流式细胞术、免疫组化法和免疫电泳法等。
这些方法根据免疫原理和检测目标的不同，具有不同的优点和适用范围。
简述猪细小病毒检测方法的研究情况
简述猪细小病毒检测方法的研究情况猪细小病毒是一种来自疱疹病毒家族的病毒，它可以引起猪的呼吸道疾病和生殖系统疾病。
这种病毒对猪的生长和生产性能产生了负面影响，给猪养殖业造成了巨大的经济损失。
猪细小病毒的检测方法对于疾病的控制和预防至关重要。
在过去的几十年里，猪细小病毒的检测方法得到了长足的发展。
早期的检测方法主要是依靠临床症状和病理学检查，这种方法的准确性和灵敏度都比较有限。
随着生物技术的进步，现代的猪细小病毒检测方法变得更加快速、准确和可靠。
本文将对目前常用的猪细小病毒检测方法进行简要介绍，并对各种方法的优缺点进行分析。
一、传统的病原学检测方法1.1 病理学检查病理学检查是一种直接观察病变组织的方法，通过镜下观察来确定病变类型和程度。
对于猪细小病毒感染的猪只，病理学检查可以发现呼吸道和生殖系统等部位的病变，但这种方法缺乏特异性和灵敏度，往往不能准确地确定感染的病原体。
1.2 病毒分离和培养病毒分离和培养是一种通过将样本接种到合适的细胞系或实验动物中，然后观察细胞病变或动物病症来确认病毒感染的方法。
这种方法可以获得活病毒，便于进行进一步的鉴定和研究，但需要较长的时间和较高的操作技能，且不适用于大规模的检测。
1.3 血清学检测血清学检测是通过检测病毒抗体或抗原来确定感染情况的方法。
目前常用的血清学检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、补体结合试验（CFT）和中和试验等。
这些方法能够快速、简便地检测到猪细小病毒的感染情况，但无法区分活病毒感染和病毒携带状态。
以上传统的病原学检测方法在猪细小病毒检测中均存在一定的局限性，无法满足疾病监测和控制的需求。
近年来，研究人员不断地探索和开发新的检测方法，以提高猪细小病毒检测的准确性和灵敏度。
二、分子生物学检测方法近年来，随着PCR技术和核酸序列分析技术的发展，分子生物学检测方法在猪细小病毒检测中得到了广泛的应用。
PCR技术可以快速扩增病毒的核酸序列，然后通过电泳或荧光探针等方法来检测扩增产物，具有高度特异性和灵敏度，成为目前猪细小病毒检测的金标准。
细胞生物学中的细胞免疫检测和分析技术
细胞生物学中的细胞免疫检测和分析技术细胞免疫检测技术是细胞生物学领域中的重要研究方法之一，它可以用于检测和分析细胞的免疫状态和功能。
这些技术可以帮助我们更全面地了解细胞免疫过程，促进对疾病机制的理解和疾病诊断的提高。
本文将就细胞免疫检测和分析技术的原理、方法和应用进行探讨。
一、细胞免疫检测技术概述细胞免疫检测技术是指利用特定的抗体标记、细胞共轭物、细胞分选仪等工具，对细胞表面的免疫分子进行检测、分析和表征的方法。
这些技术可以定量地测量细胞免疫分子的表达水平，研究细胞亚群的多样性和功能差异。
常用的细胞免疫检测技术包括流式细胞术、免疫组织化学、免疫荧光显微镜等。
二、流式细胞术流式细胞术是细胞免疫检测和分析最常用的方法之一。
它基于对细胞表面或胞内某些特定抗原的免疫反应，将标记有荧光染料的抗体与细胞免疫分子结合，并通过流式细胞仪进行颜色和强度的定量检测。
流式细胞术可以同时分析多个参数，对细胞的表型特征进行高通量分析，帮助研究者了解免疫细胞的数量、分布和功能等。
三、免疫组织化学免疫组织化学是用特异性抗体标记来检测组织切片中的特定抗原分布。
它基于免疫染色的原理，通过对组织切片进行抗原修复、抗体反应和染色处理等步骤，将抗原定位于组织切片中的特定部位，并利用显微镜观察和分析免疫染色产物的分布和强度。
免疫组织化学在疾病诊断和组织形态学研究中起到重要的作用，可以帮助研究者确定细胞免疫分子的存在和表达水平。
四、免疫荧光显微镜免疫荧光显微镜是通过使用特异性荧光标记的抗体来检测和分析细胞免疫分子的表达和分布。
它可以帮助研究者观察和记录细胞表面或胞内的免疫分子分布和定位，通过荧光信号的强度和分布情况了解细胞免疫的状态和功能。
免疫荧光显微镜可以提供高分辨率和空间定位的免疫信息，对于细胞免疫功能的研究具有很高的研究价值。
五、细胞免疫检测技术的应用细胞免疫检测技术广泛应用于细胞免疫学、医学研究和临床诊断等领域。
例如，在肿瘤免疫学研究中，流式细胞术可以用来分析和鉴定免疫监视细胞亚群的变化以及肿瘤细胞的免疫逃逸机制。
免疫组化与免疫荧光的区别
免疫组化与免疫荧光一、两者都是蛋白定位的检测（也就是确定蛋白是表达在细胞核/浆/膜）。
二、区别是：1、概念和基本原理免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。
它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜的现像和放大作用，在细胞，亚细胞水平检测各种抗原物质，并可在原位显示相应的基因和基因表达产物。
免疫组织化学技术现已有：免疫荧光组织（细胞）化学技术、免疫酶组织（细胞）化学技术、亲和组织化学技术、免疫金银及铁标记免疫组织化学技术等。
免疫荧光组织（细胞）化学技术是采用荧光素标记的已知抗体（或抗原）作为探针，检测待测组织、细胞标本中的靶抗原（或抗体），形成的抗原抗体复合物上带有荧光素，在荧光显微镜下，由于受高压汞灯光源的紫外光照射，荧光素发出明亮的荧光，这样就可以分辨出抗原（或抗体）的所在位置及其性质，并可利用荧光定量技术计算抗原的含量。
以达到对抗原物质定位、定性、定量测定的目的。
2、标本制作：免疫荧光一般用冰冻切片，减少杂质干扰；而酶免疫组化一般用石蜡切片或冰冻切片均可以。
3、实验步骤：免疫荧光染色步骤简单，而酶免疫组化方法较为复杂，多了DAB显色过程。
4、染色后的标本保存：免疫荧光染色后的标本一般短时间拍照，时间长了荧光衰退；而酶免疫组化染色标本可以长期保存。
5、免疫组化结果除了知道蛋白是在细胞浆还是细胞膜表达高些，还可以用软件做相对定量分析。
6、免疫荧光得到的图片是彩色的，漂亮些，可以发高档次文章。
免疫学三大工具：免疫组化、Western、ELISA，分别用于定位，定性和定量。
免疫组化：是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。
免疫荧光和免疫组化
免疫荧光和免疫组化问题如下：1. 免疫荧光好还是做免疫组化好？我倾向于做免疫组化，但老板倾向做荧光，我想两种方法都了解一下，能否介绍一下两种方法的详细步骤（protocol）。
2. 一抗、二抗抗体（包括荧光抗体）如何选择，哪个公司的比较好？浓度怎么掌握？其实IHC和IFC本质都是一样的。
只是最后的显色方法不一样，IHC是用酶加底物进行显色反应，用普通光镜观察；IFC是直接用带有荧光物质连接的二抗与一抗结合，在相应波长的激发光下观察。
我也倾向于IHC，理由如下：IHC的级联放大作用使得抗原比较少的组织也能有很强的着色。
我一般用Vector公司的Elite系列ABC kit，HRP－DAB显色系统。
IHC的切片可以长期保存。
很多时候试验做出来了，需要反复的看片子。
而IFC的有荧光猝灭，无法长久保存。
所以不利于反复阅片。
IFC有利于做Multiple Labeling，比如在同一location的两种或多种抗原的比较，通常用IFC；IFC还多用于活细胞的staining，但如果是石蜡切片，总会有一些自发荧光现象存在。
所以个人认为，能用IHC的时候建议不用IFC。
详细protocol请在本版内search一下，已经有很多的讨论了。
一抗通常买DAKO、SIGMA、VECTOR，二抗可以选择相应公司的，也可以买SANTA CRUZ的，比较便宜一些。
荧光二抗建议买Molecular Probe的，现在和Invitrogen合并了。
浓度先参考data sheet上的，不过还是自己要optimize一下，比如建立个浓度梯度。
阴性对照用相同种属来源动物的IgG。
供参考。
GOOD LUCK!免疫荧光结果分析及抗体选择——许多问题你思考过吗？/bbs/topic/24548838?keywords=%E5%85 %8D%E7%96%AB%E8%8D%A7%E5%85%89%E7%BB%93%E6% 9E%9C%E8%83%BD%E4%BB%A3%E6%9B%BF%E5%85%8D%E7 %96%AB%E7%BB%84%E5%8C%96%E5%90%97免疫荧光因其直观、色彩鲜明而被广泛用于检测各种蛋白的定位表达。
简述免疫荧光的原理和应用
简述免疫荧光的原理和应用免疫荧光的原理免疫荧光技术是一种通过荧光标记物与特定抗原或抗体相结合的方法，以检测和分析生物体内特定分子的存在和分布情况的技术手段。
其原理基于免疫学中免疫反应的特性和荧光标记物的发射特性。
免疫荧光的原理基于以下几个关键步骤：1.抗原与抗体结合：抗原是指能够触发机体免疫反应的物质，而抗体是机体免疫系统产生的一种针对特异性抗原的蛋白质。
在免疫荧光技术中，首先将荧光标记的抗体与待检测样品中的目标抗原进行结合。
2.洗涤除非特异性结合物：为了减少非特异性结合物的干扰，需要对结合物进行洗涤。
洗涤过程通常采用缓冲液，可以去除未结合的抗体和其他非特异性结合物。
3.荧光标记物的激发和发射：荧光标记物通常是能够发射出可见光的染料或荧光蛋白。
在免疫荧光技术中，荧光标记的抗体与目标抗原结合后，通过激发荧光标记物，使其发射特定波长的荧光信号。
4.荧光信号的检测和图像分析：荧光信号可以通过荧光显微镜或荧光光度计进行检测。
这些设备会记录荧光信号的强度和位置，可以生成荧光图像或通过分析软件进行进一步的图像分析。
免疫荧光的应用免疫荧光技术在生命科学研究和临床诊断中有着广泛的应用。
以下是免疫荧光技术的一些常见应用：1.抗体检测：免疫荧光技术可以用于检测和定量特定抗体的存在和浓度。
通过标记特定抗体并与待检测样品中的目标抗原结合，可以通过荧光信号来确定特定抗体的存在和水平。
2.细胞标记：免疫荧光技术可以用于细胞和细胞器的标记。
通过标记染色剂或荧光蛋白的抗体，可以检测和观察特定蛋白在细胞中的分布和表达情况。
3.病原体检测：免疫荧光技术可以用于检测和鉴定病原体。
通过标记特定抗体并与待检测样品中的病原体结合，可以确定病原体的存在和种类。
4.免疫组织化学：免疫荧光技术可以用于检测和定位特定抗原在组织中的分布情况。
通过标记特定抗体并与组织样品中的目标抗原结合，可以通过观察荧光信号来确定抗原的分布情况。
5.流式细胞术：免疫荧光技术可以用于流式细胞术中的免疫细胞分析。
免疫荧光和免疫组化的相同点和不同点
免疫荧光和免疫组化是生物医学领域中常用的实验技术，它们在研究细胞和组织中蛋白质的表达和定位方面都发挥着重要作用。
虽然它们在某些方面有相似之处，但在其他方面又有明显的不同。
接下来，我将从深度和广度两个方面对免疫荧光和免疫组化进行全面评估，并撰写一篇高质量、深度和广度兼具的文章，以便您能更加全面、深刻地理解这两种实验技术。
深度上看，免疫荧光和免疫组化都是通过特异性的抗体与待检测蛋白质结合，从而实现对蛋白质检测的技术手段。
在免疫荧光中，待检测的蛋白质通常会与荧光素标记的抗体结合，形成荧光复合物，通过荧光显微镜或流式细胞术等来观察和分析。
而在免疫组化中，通过酶标记的二抗结合来对蛋白质进行检测，进而通过染色反应观察和分析。
两者均能够实现对蛋白质的高度特异性检测，但在技术操作和结果分析方面存在着一定的差异。
在广度上看，免疫荧光和免疫组化在研究领域中的应用也存在差异。
免疫荧光广泛应用于细胞生物学和免疫学研究中，因其高灵敏度和高分辨率的特点，常用于检测和定位细胞内蛋白质的表达和分布情况。
而免疫组化则更多用于组织学研究中，通过对组织切片进行染色反应，实现对蛋白质在组织结构中的定位和表达水平的分析。
两者在生物医学研究中各有侧重，但都对蛋白质研究提供了重要的技术支持。
免疫荧光和免疫组化在原理和应用上存在着一定的相似性和差异性。
深度上看，它们在技术操作和结果分析方面具有明显的差异；广度上看，它们在生物医学研究领域中的应用也存在差异。
然而，无论是免疫荧光还是免疫组化，都为蛋白质检测和定位提供了重要的实验手段，对于生物医学领域的发展具有重要意义。
在我的个人观点和理解方面，我认为免疫荧光和免疫组化作为生物医学研究中常用的实验技术，虽然在原理和应用上存在差异，但在实际研究中往往需要根据具体的研究目的和对象选取合适的技术手段。
在未来的研究中，可以通过结合这两种技术手段，实现对蛋白质表达和定位的更全面和深入的研究，为生物医学领域的发展提供更多的可能性。
临床分析中的免疫学检测技术研究进展
临床分析中的免疫学检测技术研究进展免疫学检测技术在临床分析中的应用广泛，为疾病诊断、预后评估和治疗策略制定提供了重要依据。
随着科技的不断进步，免疫学检测技术也在不断发展和完善。
本文将对近年来临床分析中的免疫学检测技术研究进展进行探讨。
一、流式细胞术流式细胞术是一种常见的免疫学检测技术，它通过对细胞表面分子的荧光标记，结合激光扫描和计算机分析，可以对细胞进行准确快速的分析。
近年来，流式细胞术在临床分析中的应用得到了广泛关注。
例如，流式细胞术可以用于研究免疫细胞亚群的分布和功能，对某些免疫相关疾病的诊断和治疗具有重要意义。
二、ELISA技术ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种高度敏感、特异性强的免疫学检测技术。
它通过将待测物抗原或抗体与酶标记的试剂结合，然后通过底物的酶法反应来检测目标分子的含量。
ELISA技术广泛应用于临床分析领域，如肿瘤标志物检测、感染性疾病的诊断和药物浓度的监测等。
三、免疫组化技术免疫组化技术通过对组织标本中的特定蛋白进行染色和检测，来评估组织中相应蛋白的表达情况。
免疫组化技术在癌症诊断和分子病理学研究中广泛应用。
它不仅可以区分不同类型的肿瘤，还可以评估肿瘤的分级和预后。
随着免疫组化技术的发展，越来越多的免疫标记物被用于临床分析中，为疾病的早期筛查和治疗提供了重要参考。
四、免疫荧光技术免疫荧光技术是通过标记抗体或抗原的荧光物质来进行免疫学检测的一种方法。
它具有高度特异性和灵敏性，是疾病诊断和免疫细胞识别的重要工具。
免疫荧光技术在自身免疫性疾病、感染性疾病和器官移植等方面的应用得到了广泛研究和推广。
五、蛋白质芯片技术蛋白质芯片技术是一种高通量的免疫学检测技术，可以在一个小的芯片上同时检测成百上千个蛋白质的表达水平。
蛋白质芯片技术在研究蛋白质组学、蛋白质互作和生物标志物鉴定方面具有重要的应用。
在临床分析中，蛋白质芯片技术可以用于疾病早期诊断、个体化治疗和预后评估等方面。
六、单细胞技术传统的免疫学检测技术主要依赖于大量的细胞样本，而单细胞技术可以对单个细胞进行分析，为细胞免疫学研究提供了新思路。
免疫组化、免疫荧光、流式细胞术的应用比较及常见问题分析
二 抗
IHC
一
反
抗
应 原
抗
理
原
示
意
图
辣根过氧化物酶（HRP）
棕褐色络合物
3，3-二氨联苯胺（DAB） 显色剂
细 胞
组织切片/芯片制作
组织芯片/切片应用
1. 组织芯片
组织芯片（或组织微阵列）是将数十个甚 至上千个不同个体的组织标本集成在一张固 相载体上，组织芯片中含有蛋白，RNA及 DAN分子，是一种高通量的研究分析工具。 研究者一次可有效利用成百上千份正常或疾 病状态下的组织标本来研究特定基因及其所 表达的蛋白质与疾病之间的关系。
细胞浆衬染染料： 鬼笔环肽（phalloidin ）由鬼笔鹅膏真菌（Amanita phalloides）产生的一种 环肽。可与F肌动蛋白结合，使F肌动蛋白保持稳定。其荧光标记物是鉴定F 肌动蛋白的重要试剂。
荧光抗体的选择： 绿色荧光素：FITC，Alex488，Dylight488等。 红色荧光素：PE，Alex546等。
4. BCIP/INT显色法
产品描述：BCIP/INT（5-溴-4-氯-3-吲哚磷 酸/p-碘硝基四唑）是一种冷藏稳定的、单一 组分溶液，用于免疫组化、原位杂交、 western blot、northern blot和southern blot， 特异性地与碱性磷酸酶反应生成橙色/棕褐 色物质。
试剂盒组成：
操作过程中冲洗不充分，建议增加冲洗的 次数与冲洗时间。
组织富含内源性的生物素与过氧化物酶， 建议使用相关试剂进行封闭。
发生抗原异位。
蛋白封闭不充分，建议增加蛋白封闭时间。
3.显色强度弱
一抗浓度过低或孵育时间过短，建议增加 一抗浓度或延长孵育时间。
免疫荧光间接法流式细胞法
免疫荧光间接法流式细胞法引言免疫荧光间接法流式细胞法是一种常用的细胞学技术，通过结合免疫荧光染色和流式细胞术，能够快速、准确地分析细胞表面或内部的蛋白质表达情况。
本文将介绍该方法的原理、步骤以及应用领域。
一、原理免疫荧光间接法流式细胞法基于免疫荧光染色的原理，利用免疫学技术中的特异性抗原与抗体结合的原理，将标记有荧光物质的二抗与目标细胞上的特定抗原结合，通过流式细胞仪的激光器激发荧光物质，从而实现对细胞的定量和定位分析。
二、步骤1. 细胞准备：将待检测的细胞样本收集并处理，如血液样本需要进行红细胞溶解，组织样本需要进行细胞分离等。
2. 免疫反应：将细胞与特异性的一抗进行孵育，使一抗与细胞表面或内部的特定抗原结合。
3. 洗涤：用含有缓冲剂的洗涤液洗去未结合的一抗。
4. 二抗结合：加入标记有荧光物质的二抗，使其与一抗结合。
5. 洗涤：用洗涤液洗去未结合的二抗。
6. 流式细胞术：将样本放入流式细胞仪中，通过激光激发荧光物质，收集并分析细胞的荧光信号。
三、应用领域免疫荧光间接法流式细胞法在许多领域都有广泛应用。
1. 免疫学研究：该方法可用于分析细胞表面或内部的蛋白质表达情况，从而研究免疫细胞的功能和相互作用机制。
2. 肿瘤学研究：通过检测肿瘤细胞上的特异性抗原，可以实现肿瘤细胞的鉴定和分类，进而指导肿瘤的诊断和治疗。
3. 感染病原体检测：该方法可用于检测感染病原体在宿主细胞中的定位和表达水平，为感染病原体的诊断和治疗提供重要依据。
4. 免疫监测：通过定量分析细胞表面的特定抗原，可以评估免疫功能的状态，如淋巴细胞亚群的分析、免疫细胞活化的检测等。
5. 药物研发：该方法可用于评估药物对细胞表面或内部蛋白质的影响，为药物研发提供重要参考。
结论免疫荧光间接法流式细胞法是一种快速、准确的细胞学技术，通过免疫荧光染色和流式细胞术的结合，能够对细胞表面或内部的蛋白质表达进行分析。
该方法在免疫学研究、肿瘤学研究、感染病原体检测、免疫监测以及药物研发等领域有着广泛的应用前景。
流式细胞术的医学应用现状与前景
流式细胞术的医学应用现状与前景流式细胞术是一种通过细胞标记物的免疫荧光染色，利用流式细胞仪对细胞进行高速连续流动检测和分析的技术。
该技术具有高通量、高灵敏度和高专一性等优势，因此在医学领域有着广泛的应用前景。
在临床诊断方面，流式细胞术可用于血液系统疾病的诊断和分类。
对于急性白血病患者，流式细胞术可以通过标记不同的细胞表面标志物来鉴定不同的白血病亚型，从而为个体化治疗方案的制定提供依据。
流式细胞术还可用于监测免疫性疾病患者的免疫细胞变化，判断疾病的活动程度和预测疾病的发展趋势。
在肿瘤学研究方面，流式细胞术可用于肿瘤细胞的检测、分析和排序。
通过将肿瘤标志物与细胞表面标志物共同染色，流式细胞术可以实现癌细胞的特异性检测，并对癌细胞的数量和表型进行定量和定性的分析。
流式细胞术还可以通过细胞的特异性标记物分选出肿瘤干细胞，从而为肿瘤精准治疗提供新的思路。
在免疫学研究方面，流式细胞术可用于免疫细胞的表型鉴定和功能分析。
通过标记细胞表面标志物和功能分子，流式细胞术可以鉴定不同类型和亚型的免疫细胞，并分析它们在免疫应答中的功能变化。
流式细胞术还可以用于深入研究免疫学领域的热点问题，如免疫耐受、免疫记忆和免疫微环境等。
尽管流式细胞术具有许多优点，但也还存在一些挑战和限制。
流式细胞术是基于细胞的免疫染色，对样本中的细胞数量和表型有一定的要求，因此在临床样本的获取和处理上需要特别注意。
流式细胞术在标记细胞时需要使用荧光染料，不同荧光染料之间的光谱重叠可能会影响测量结果的准确性。
流式细胞仪的设备和维护成本较高，限制了其在一些医疗机构的推广和应用。
流式细胞术在医学领域的应用前景广阔。
随着技术的不断发展和改进，流式细胞术将更加方便、高效和准确，为临床诊断和治疗提供更多的新方法和新思路。
与其他新兴技术的结合也将进一步拓展流式细胞术在医学研究中的应用领域。
检验科免疫学常见检测与分析方法
检验科免疫学常见检测与分析方法为了满足你的要求，我将按照“检验科免疫学常见检测与分析方法”的格式来书写文章。
以下是文章的正文：检验科免疫学常见检测与分析方法免疫学是研究机体免疫系统结构、功能及其介导的免疫反应的科学。
在检验科中，免疫学检测和分析方法广泛应用于疾病诊断、药物研发和医学研究等领域。
本文将介绍免疫学常见检测与分析方法，包括间接免疫荧光法、酶联免疫吸附法、流式细胞术和酶联免疫斑点法。
一、间接免疫荧光法间接免疫荧光法是一种检测抗体和抗原相互作用的方法，其原理是利用荧光素标记的二抗结合到已与目标抗原结合的抗体上，通过荧光显微镜观察荧光标记的二抗与抗原结合的情况。
这种方法具有高灵敏度、高特异性和高分辨率的优点，因此被广泛应用于疾病的早期诊断和研究中。
二、酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法（ELISA）是一种常用的免疫学检测方法，用于检测抗体或抗原的存在和浓度。
该方法利用酶和底物的反应产生可见的颜色变化，从而判断目标物的存在和数量。
ELISA方法具有操作简单、灵敏度高和可扩展性强的特点，被广泛应用于病原微生物的检测、药物筛选和免疫学研究中。
三、流式细胞术流式细胞术是一种光学技术，用于分析和计数悬浮在流动液体中的细胞。
该方法通过染色和荧光素标记的抗体等实验步骤，通过流式细胞仪实时检测细胞的形态、大小、荧光强度等特征，从而实现对细胞种类和状态的分析。
流式细胞术在免疫学研究和临床诊断中的应用广泛，如检测白细胞亚群、免疫球蛋白等。
四、酶联免疫斑点法酶联免疫斑点法（ELISPOT）是一种高灵敏度、高特异性的单细胞分析技术，用于检测细胞产生的蛋白质分子。
该方法通过将待检细胞分泌的蛋白质与荧光素标记的抗体结合，通过荧光显微镜观察形成的颗粒斑点。
ELISPOT方法被广泛应用于评估免疫细胞的功能和活性，例如检测细胞因子的分泌和细胞毒性。
总结：免疫学在检验科中的检测和分析方法多种多样，包括间接免疫荧光法、酶联免疫吸附法、流式细胞术和酶联免疫斑点法。
免疫组化鉴定菌种的方法
免疫组化鉴定菌种的方法免疫组化是一种常用的实验技术，用于鉴定菌种和研究细胞和组织之间的相互作用。
该技术基于免疫学原理，通过特异性抗体与靶分子结合来检测菌种的存在和特有的生物学功能。
本文将介绍免疫组化鉴定菌种的原理和常见的实验方法。
一、免疫组化原理免疫组化利用抗体与其特异性蛋白质抗原结合的特性，通过荧光染料或酶标记来检测目标分子的存在。
该技术主要包括以下几个步骤：1.样品处理：菌株或细胞培养液通常需要经过固定、包埋或脱水等处理，以保持其形态和结构的完整性。
2.抗体孵育：将标记有特异性抗体的荧光染料或酶标记与待检测的样品接触，使其与目标抗原结合。
3.清洗：将未结合的抗体去除，以减少非特异性背景信号。
4.信号检测：通过荧光显微镜或酶标测定，观察目标分子的位置和表达水平。
二、免疫组化实验方法1.免疫组化染色法免疫组化染色法是一种常用的实验方法，用于在细胞和组织中检测特定抗原的分布和表达。
该方法可分为直接法和间接法：直接法：将已标记的抗原直接与待检测的组织或细胞接触，然后观察染色结果。
这种方法操作简单、快速，但特异性较差，主要适用于已知抗原的情况。
间接法：通过与辅助抗体结合来增强染色信号的强度和特异性。
首先将待检测样品孵育于特异性抗原的抗体中，然后孵育与特异性抗体结合的辅助抗体，最后使用荧光染料或酶标记的二抗进行检测。
该方法灵敏度高，适用于未知抗原的情况。
2.免疫组化电镜法免疫组化电镜法结合了免疫组化和电子显微镜技术，可用于检测细胞和组织中微小结构的特异性抗原。
该方法主要分为直接法和间接法：直接法：直接将标记有特异性抗体的金或其他金属胶体颗粒与待检测的组织或细胞接触，观察金颗粒在电镜下的位置。
间接法：与免疫组化染色法类似，通过辅助抗体结合来增强信号强度和特异性。
在免疫反应后，使用标记有金或其他金属胶体颗粒的二抗进行检测。
3.免疫组化流式细胞术免疫组化流式细胞术常用于检测细胞表面或细胞内特异的蛋白质抗原。
该方法主要分为两种：直接流式细胞术：将标记有荧光染料的特异性抗体与待检测细胞接触，然后通过流式细胞仪测定细胞的荧光强度和受体数目。
免疫学检验的方法和特点
免疫学检验的方法和特点免疫学检验是一种通过检测机体免疫系统产生的抗体或抗原来诊断疾病的方法。
它基于免疫反应的原理，利用特定的抗体和抗原之间的相互作用来检测人体内的免疫反应物质。
目前，免疫学检验已经成为临床诊断和科研领域中不可或缺的重要手段之一1.免疫层析：免疫层析是一种将待检测物质（抗体或抗原）移动到特定层析纸或凝胶柱上，通过与特异抗体或抗原的结合来检测它们的方法。
这种方法操作简单，成本较低，适用于检测体液中的抗体或抗原。
2.酶联免疫吸附实验（ELISA）：ELISA是一种利用酶的催化作用检测抗体或抗原的方法。
它包括直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA等多种形式。
ELISA具有高灵敏度、高特异性、操作简便和成本低廉等优点，广泛应用于临床诊断和科研领域。
3.放射免疫分析（RIA）：RIA是一种利用放射性标记物来检测抗体或抗原的方法。
它的原理是将放射性同位素标记在待测抗体或抗原上，通过测量标记物的放射活性来确定待测物质的含量。
RIA具有高灵敏度和高特异性的优势，但由于放射性标记物的使用，操作相对复杂且安全性要求较高。
4.免疫荧光：免疫荧光是一种利用荧光标记的抗体或抗原来检测待检测物质的方法。
它通过检测标记物的荧光强度或光谱来确定待测物质的存在。
免疫荧光具有高灵敏度、高特异性、操作简便等优势，广泛应用于病原微生物、肿瘤标志物等的检测。
5.流式细胞术：流式细胞术是一种通过流式细胞仪检测细胞表面或细胞内的免疫分子的方法。
它通过将目标细胞与标记有特定抗体的荧光染料反应，再用流式细胞仪对标记的细胞进行激光照射并收集荧光信号来测定免疫分子的表达水平。
流式细胞术具有高灵敏度、多参数分析等优势，广泛应用于细胞免疫学研究和临床诊断。
6.免疫组化：免疫组化是一种利用特异抗体与待检测抗原结合，再通过染色等方法来检测组织或细胞中特定抗原的方法。
免疫组化具有高特异性、高灵敏度、可定量等优势，广泛应用于病理学研究和临床诊断。
2024年免疫组化市场前景分析
2024年免疫组化市场前景分析引言免疫组化是一种重要的实验室技术，用于检测和定量分析细胞和组织中的特定蛋白质表达情况。
随着疾病的不断增多，免疫组化市场得到了快速发展。
本文将对免疫组化市场的前景进行分析，探讨其发展潜力。
免疫组化市场的现状目前，免疫组化技术已在医学诊断、生物学研究等领域得到广泛应用。
通过对组织或细胞的染色，可以检测特定蛋白质的表达情况，从而帮助医生诊断疾病和确定治疗方案。
免疫组化技术还可以用于研究细胞和分子的功能、相互作用等，为生物学研究提供了重要的手段。
市场上存在着多种免疫组化试剂盒和设备，供应商众多。
同时，免疫组化技术的自动化和标准化水平也在不断提高，使得检测结果更加准确且易于解读。
这些技术的成熟和普及为免疫组化市场的发展提供了有利条件。
免疫组化市场的发展趋势1. 应用领域不断拓展免疫组化技术在医疗诊断、生物科研以及药物开发等领域都有广阔的应用前景。
随着人们对个性化医疗和精准治疗的需求增加，免疫组化将发挥越来越重要的作用。
此外，随着细胞治疗和基因编辑技术的不断发展，免疫组化在这些新兴领域的应用也将得到拓展。
2. 技术创新不断推动市场发展随着生物医学技术的快速发展，涌现出许多创新的免疫组化技术。
例如，流式细胞术的改进提高了细胞表面标记的准确性和检测的速度，单细胞免疫组化技术的出现使得研究人员可以在单个细胞水平上进行分析。
这些技术的不断创新将推动免疫组化市场的进一步发展。
3. 云计算和人工智能的应用随着云计算和人工智能技术的快速发展，其在免疫组化领域的应用也将日益增加。
通过使用云计算平台，可以实现大规模数据的存储和处理，从而加速免疫组化数据的分析和解读。
同时，人工智能算法的应用可以帮助研究人员快速筛选和识别免疫组化数据中的关键信息，提高研究效率。
4. 市场竞争格局逐渐形成随着免疫组化市场的快速发展，各个供应商之间的竞争也日益激烈。
供应商通过不断提高产品质量、降低成本、加强售后服务等方式争夺市场份额。
医学研究中的免疫学研究方法
医学研究中的免疫学研究方法在医学研究中，免疫学研究方法起着重要的作用。
免疫学研究方法是通过对生物体免疫系统的研究，来揭示免疫系统的结构和功能特点，以及免疫反应的机制和调控方式。
以下将介绍几种常见的免疫学研究方法。
第一种方法是流式细胞术。
流式细胞术是通过流式细胞仪来对大量单个细胞进行分类、鉴定和计数，以研究免疫细胞亚群在不同状态下的变化。
在流式细胞仪的帮助下，研究人员可以利用特定的荧光染料对细胞进行标记，并通过激光的照射和散射光的检测来对细胞进行定性和定量分析。
流式细胞术广泛应用于免疫细胞的表型分析、功能评估以及免疫衰老和免疫相关疾病的研究。
第二种方法是ELISA法。
ELISA（酶联免疫吸附试验）法是一种常用的免疫学实验方法，用于检测抗原或抗体的存在和浓度。
ELISA法通过将特定的抗原或抗体固定在酶标板上，然后通过特异性抗原-抗体反应来检测目标物质。
ELISA法可以用于检测病毒、细菌和其他微生物的感染情况，以及自身免疫性疾病的诊断和监测。
第三种方法是免疫组化技术。
免疫组化技术是通过特异性抗体的作用来检测和定位组织或细胞中的抗原。
免疫组化技术广泛应用于研究肿瘤标记物、免疫细胞的浸润和组织学病理学的研究。
免疫组化技术的原理是将特异性抗体与抗原结合，并通过标记物如酶或荧光染料来检测抗原的存在和定位。
第四种方法是单克隆抗体技术。
单克隆抗体技术是通过体外培养和克隆的方法获得对某一特定抗原高度特异性的单一种类的抗体。
单克隆抗体技术具有高度特异性和单一性，广泛应用于免疫组织化学、免疫诊断、免疫检测等领域。
通过单克隆抗体技术，研究人员可以获得高质量的特异性抗体，从而更加准确地进行免疫学研究。
另外，还有许多其他的免疫学研究方法，如免疫印迹法、免疫荧光法、免疫沉淀法等。
这些方法在免疫学研究中各有特点，可以根据具体的研究课题和需求选择合适的方法。
综上所述，免疫学研究方法在医学研究中起着至关重要的作用。
通过流式细胞术、ELISA法、免疫组化技术、单克隆抗体技术等方法的应用，我们可以更加深入地了解免疫系统的结构和功能，为免疫相关疾病的预防、诊断和治疗提供理论依据和实验支持。
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3.荧光猝灭快
荧光素本身特性决定，光稳定性差，建议 选用光稳定性好的荧光素二抗。
4.细胞有自发荧光
使用了戊二醛固定，建议在固定后荧光染 色前进行荧光淬灭，如使用NaIO4，NaBH4， 甘氨酸等，染色前检查自发荧光。 材料本身（如石蜡）有自发荧光，建议设 立阴性对照，通过降低荧光显微镜的参数来 消除背景染色。 细胞成分中能够产生自发荧光的分子（例 如核黄素、细胞色素等）的含量高；培养细 胞中死细胞／活细胞比例高；
2. 组织芯片应用领域
组织芯片的应用领域包括与生命科学相关的 基础研究、临床研究、应用研究和新药开发 等。 免疫组化染色（IHC）； 原位杂交（ISH）； 荧光原位杂交（FISH）； 原位末端标记分析（TUNEL）； 原位PCR 以及激光捕获显微分离系统辅 助的cDNA杂交。
3. Abgent 现有组织切片/芯片产品
2. AEC显色法
产品描述：3-氨基-9-乙基咔唑(3-amino-9ethylcarbazole，AEC) 是过氧化物酶 (Peroxidase) 的显色底物，在过氧化物酶的 催化下，AEC显色工作液会于反应部位产生 溶于酒精的红色沉淀，必须在水溶性介质中 复染和封片。本试剂盒适用于辣根过氧化物 酶（HRP）系统的免疫组化显色，包括AEC 显色原和与之配套的稀释液。 试剂盒组成： AEC显色原（试剂A） AEC底物缓冲液（试剂B）
一 抗
抗 原
细 胞
3，3-二氨联苯胺（DAB） 显色剂
组织切片/芯片制作
组织芯片/切片应用
1. 组织芯片
组织芯片（或组织微阵列）是将数十个甚 至上千个不同个体的组织标本集成在一张固 相载体上，组织芯片中含有蛋白，RNA及DAN 分子，是一种高通量的研究分析工具。研究 者一次可有效利用成百上千份正常或疾病状 态下的组织标本来研究特定基因及其所表达 的蛋白质与疾病之间的关系。
免疫荧光常见问题分析
1.背景过高
一抗质量不高，建议使用特异性高、效价 高的一抗。 一抗/二抗浓度太高，建议降低一抗/二抗 浓度。 封闭不完全，建议增加蛋白封闭时间。 洗涤不充分，建议增加冲洗次数与时间。 可通过调节荧光显微镜的参数来减低背景。
2.信号弱或无信号
无目的蛋白或表达量极少，建议选用表达 量高的细胞或组织。 细胞通透性差，建议增加通透剂的作用时 间或浓度。 一抗/二抗浓度太低，建议增大其浓度。 二抗选择错误（种属不匹配），建议选用 与一抗种属相匹配的二抗。
全套鼠类器官组织切片； 全套猴类器官组织切片； 人类常见癌症组织切片； 组织芯片客户定制服务。
免疫组化流程示意图
IHC二抗原理及选择
1. SABC法
原理：SABC法是利用链酶亲和素 (Streptavidin)与生物素(Biotin)特有的高度亲 和力这一生物学性质，先将生物素与辣根过 氧化物酶(HRP)结合，形成生物素化HRP， 然后与链酶亲和素按一定比例混合，形成 SABC复合物。用生物素化二抗与第一抗体 结合，再与SABC复合物联结形成抗原～抗 体～生物素化二抗～ SABC复合物。最后用 底物显色剂显色。 特点：该法具有灵敏度高以及低背景染色 等特点。
3. BCIP/NBT显色法
产品描述：BCIP/NBT（5-溴-4-氯-3-吲哚磷 酸/氮蓝四唑）是一种冷藏稳定的、单一组 分溶液，用于免疫组化、原位杂交、
western blot、northern blot和southern blot， 特异性地与碱性磷酸酶（AP）反应生成紫色
4. BCIP/INT显色法
免疫荧光原理示意图
免疫荧光实验过程
细胞爬片（多聚赖氨酸处理，生长密度70-80%）
细胞固定（合适的固定液，如4%甲醛溶液等）
细胞膜穿透（ Triton X-100 等）
封闭（3%BSA-PBS等）
一抗孵育
荧光二抗孵育
胞浆/核衬染（鬼笔环肽/DAPI/PI）
封片荧光显微镜拍照
免疫荧光结果分析
免疫荧光双染色抗体的选择
荧光补偿示意图
Annexin V-FITC/PI凋亡检测原理
在细胞凋亡早期，磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS） 可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中 。 Annexin V是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白 ，能与磷脂酰丝氨酸PS高亲和力特异性结合。 将Annexin V进行荧光素（FITC、PE）或Biotin标记，以标记了 的Annexin V-FITC作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微 镜可检测细胞凋亡的发生。 碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一种核酸染料，它不能透 过完整的细胞膜，但在细胞凋亡中晚期的细胞和死细胞，碘化 丙啶PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将 Annexin V 与 PI 匹配使用，就可以将细胞凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分 开来。
直接法： 一抗种属来源无要求 标记两种不同荧光素 的一抗。
间接法： 一抗种属来源来源不 同 二抗分别标记不同荧 光素。
各种荧光染料原理及选择
细胞核衬染染料： DAPI是一种能够与DNA强力结合的荧光染料它可以透过完整的细胞膜，因 此以用于活细胞和固定细胞的染色。最大吸收波长为358nm，最大发射波长 为461nm，其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。 Hoechst 33342 是一种DNA结合型荧光染料,可以嵌合到碱基分子中,在紫 外激发光作用下发出兰色荧光.能够透过完整的细胞膜，可用于活细胞染色。 碘化丙啶(PI)是一种溴化乙啶的类似物，它在嵌入双链DNA后释放红色荧 光。尽管PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PIDNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和 615nm。 细胞浆衬染染料： 鬼笔环肽（phalloidin ）由鬼笔鹅膏真菌（Amanita phalloides）产生的一种 环肽。可与F肌动蛋白结合，使F肌动蛋白保持稳定。其荧光标记物是鉴定F 肌动蛋白的重要试剂。 荧光抗体的选择： 绿色荧光素：FITC，Alex488，Dylight488等。 红色荧光素：PE，Alex546等。
试剂超过保质期，建议实验前确认试剂的 保质期。
操作过程冲洗过度，建议适度冲洗。
免疫荧光 （Immunofluorescence, IF）
免疫荧光原理及特点 免疫荧光就是利用抗原与抗体的特异性结合原理及特殊的 荧光素标记技术，通过激光激发使荧光素发出荧光，在荧光 显微镜下观察荧光的变化从而对细胞内的抗原进行分析的技 术。用免疫荧光显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质 等方法称为免疫荧光细胞（或组织）技术。 免疫荧光具有特异性强、敏感性高、速度快等特点。
免疫组织化学结果分析
免疫组织化学常见问题分析
1.显色过深
一抗浓度过高或孵育时间过长，建议降低 一抗浓度或减少孵育时间。 孵育温度过高，建议室温或4℃孵育。
HRP标记二抗孵育时间过长，建议缩短时
2.非特异性显色
石蜡切片脱蜡不彻底，建议延长脱蜡时间。 操作过程中冲洗不充分，建议增加冲洗的 次数与冲洗时间。
产品描述：BCIP/INT（5-溴-4-氯-3-吲哚磷 酸/p-碘硝基四唑）是一种冷藏稳定的、单一 组分溶液，用于免疫组化、原位杂交、
western blot、northern blot和southern blot，
物质。 试剂盒组成： 有机溶剂中的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸和氮蓝四 唑
特异性地与碱性磷酸酶反应生成橙色/棕褐 色物质。 试剂盒组成： 有机溶剂中的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸和p-碘硝 基四唑
免疫组织化学原理及特点
利用抗原与抗体的特异性结合原理和特殊的标记 技术，通过化学反应使标记抗体显色，对组织细 胞内的特异性抗原进行定位、定性、定量检测的 一门技术。 免疫组化具有操作简单，特异性强，敏感性高， 定位准确，形态与功能相结合等特点。
辣根过氧化物酶（HRP）
二 抗
棕褐色络合物
IHC
反 应 原 理 示光猝 灭剂封片。
流式细胞术
（Flow Cytometry, FC）
流式细胞术定义及原理 流式细胞仪（FLOW CYTOMETOR）： 进行流式细胞分析的仪器，是集光电子物理，光电测量， 计算机，细胞荧光化学，抗体技术为一体的高科技细胞 分析仪。 流式细胞术（FLOW CYTOMETRY）:
LR 22.3
常用细胞表型及意义：
（Cluster of Differentiation, CD）
CD3 CD4 CD8 CD19
总T细胞 T辅助/诱导细胞亚群 T抑制/细胞毒细胞亚群 B细胞抗原
LL: CD3-CD4- B细胞群+细胞 毒T细胞亚群 LR：CD3+CD4- 细胞毒T细胞亚 群 UR：CD3+CD4+ T辅助细胞亚 群
利用流式细胞仪对处于快速流动的细胞或生物颗粒进行 多参数、快速（每秒可达1000-10000个）的定量分析和 分选（纯度可达99%以上）的技术。
荧光物质（FITC,PE等）
二 抗
不同颜色的 激发光
反 应 原 理 示 意 图
FC
一 抗
抗 原
细 胞
激光源
转化为计算机 识别数据
流式细胞仪工作原理图
流式细胞术实验过程
间。
组织富含内源性的生物素与过氧化物酶， 建议使用相关试剂进行封闭。
发生抗原异位。 蛋白封闭不充分，建议增加蛋白封闭时间。
3.显色强度弱
一抗浓度过低或孵育时间过短，建议增加 一抗浓度或延长孵育时间。
4.无染色
组织中无目的抗原的表达。 一抗种属来源与二抗不匹配，建议实验前 确认一抗的种属来源。 显色物质与HRP系统不匹配，建议实验前 确认显色体系。
细胞悬浮液制备（浓度为1～5×106个/ml）
细胞固定（合适的固定液，如4%甲醛溶液等）
细胞膜穿透（ 冰冷的甲醇等）