2四种石山植物DNA提取方法筛选
植物DNA的提取与测定
植物DNA的提取与测定一、目的随着基因工程等分子生物学技术的迅速发展及广泛应用，人们经常需要提取高分子量的植物DNA，用于构建基因文库、基因组southern 分析、酶切及克隆等，这是研究基因结构和功能的重要步骤。
本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA 的原理并掌握CTAB 提取DNA 的方法，进一步了解DNA 的性质。
二、原理细胞中的DNA 绝大多数以DNA-蛋白复合物（DNP）的形式存在于细胞核内。
提取DNA 时，一般先破碎细胞释放出DNP，再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质，最后用乙醇把DNA 从抽提液中沉淀出来。
DNP与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。
以NaCl 溶液为例：RNP在0.14mol/L NaCl中溶解度很大，而DNP 在其中的溶解度仅为纯水中的1％。
当NaCl 浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP 的溶解则随之不断增加。
当NaCl 浓度大于1mol/L 时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2 倍，因此通常可用1.4mol/L NaCl 提取DNA。
为了得到纯的DNA 制品，可用适量的RNase 处理提取液，以降解DNA 中搀杂的RNA。
关于植物总DNA 的提取主要有两种方法：1．CTAB 法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB）：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/LNaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB 与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB 与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB 能溶解于乙醇中。
2．SDS 法：利用高浓度的阴离子去垢剂SDS（十二烷基磺酸钠，Sodium dodecyl sulfate, 简称SDS）使DNA 与蛋白质分离，在高温（55～65℃）条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的方法使蛋白质及多糖杂质沉淀，离心后除去沉淀，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
不同物种的DNA提取方法
不同物种的DNA提取方法摘要DNA作为遗传微粒，为生物体的遗传信息复制和传递做出了巨大的贡献，而1953年J.Watson和F.Crick提出的双螺旋结构模型不仅解释了有关DNA 的性质，而且也清楚地解释了DNA的各种生物功能，进而使DNA的研究进入到了分子水平。
然而DNA是如何具体在生物体内发挥其作用的，到现在还是一个热门课题，为了研究其作用，就需要从各种物种中提取DNA，由于不同物种结构的复杂性不同，导致提取DNA的方法也是各不相同，为此，我整理了一些物种的DNA提取方法。
关键词：物种、DNA提取1、月季DNA的提取方法：之所以提取高质量的月季DNA有难度，是因为其体内富含多糖及多酚类的物质，在一般的DNA提取方法中，很难被分离，这就严重干扰了提取月季DNA的纯度以及完整性。
为了解决这个问题，北京市园林科学研究所采取五种提取方法，在其最后的实验结果表明：Draper法提取月季DNA的纯度最高，完整性最好。
2、大麦小孢子DNA的提取方法：要想分离提取小孢子的DNA，就需要降解小孢子壁，而小孢子壁由外壁和内壁组成，内壁主要由纤维素和果胶组成，这类物质能够被相应的酶所水解，而外壁的主要成分是类胡萝卜素和类胡萝卜酯的氧化多聚化的衍生物，化学物质非常稳定，到目前为止，还没有相应的酶可以水解。
因此外壁便成为提取高质量的大麦小孢子DNA的一个“拦路虎”。
对此，莱阳农学院展开了研究，他们通过“收集大麦的花药”、“分离小孢子”、“分离小孢子”。
最后“DNA的提取”等一系列的步骤，在最后的统计结果中，发现CTAB法和微量快速提取法取得不错的效果，而且DNA的得率和质量几乎一样。
这也证明了上述两种方法是有效而可行的，当然在这个研究过程，首次采用超声波法进行破壁，收到出乎意料的效果，也为CTAB法和微量快速提取法提供了必要的条件。
所谓的CTAB，其中文名是十六烷基三甲基溴化铵，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。
快速提取植物基因组DNA
4 种快速植物基因组DNA 提取方法比较：DNA 是从2 周龄水稻幼苗中提取。
（1）煮沸法：取50 mg 新鲜水稻叶片，剪碎至一干净1.5 mL 离心管中；加入200 μLTE Buffer，用细玻璃棒捣碎混匀；在沸水上煮10 min，冰浴10 min；于室温下13000 r/min 离心5 min；将上清储存在-20 ℃中。
（2）微波炉法：取50 mg 水稻叶片，剪碎至一干净1.5 mL 离心管中；在700 W 家用微波炉中高热处理5 min，加入100 μL TE Buffer，振荡，13000 r/min离心 5 min；将上清液储存在－20℃。
（3）碱处理法：取50 mg 水稻叶片，剪碎至一干净1.5 mL 离心管中；加入配好的NaOH 提取液[(Tris-HCL) = 100 mmol/L (pH8.0)，c(NaOH) =300 mmol/L(TritonX-100)=0.3 %]用玻璃棒捣碎混匀，室温静置片刻后13000 r/min 离心3min。
4）TritonX-100 提取法：取50 mg 嫩叶片，剪碎至一干净1.5 mL 离心管中；加入200 μL 提取缓冲液[c (Tris-HCl) = 20 mmol/L (pH8.0)，c (EDTA) =2mmol/L，c (TritonX-100) = 1.2 %]用细玻璃棒捣碎混匀；65 ℃水浴15 min，13000r/min 离心5 min，将上清储存在－20 ℃。
每个方法做三次重复，分别用上清提取液进行电泳检测。
将提取所得的基因组DNA 用 1.5 %琼脂糖电泳分析，结果表明用试剂盒提取的基因组DNA 最完整，Triton X-100 提取法所得的基因组DNA 条带也较明亮，煮沸法、微波法和碱处理法没有基因组条带。
LAMP检测结果：碱处理法和微波处理法扩增出来的条带亮度低，可能是因为微波和碱破坏了基因组的完整性。
煮沸法和Triton X-100 提取法的检测效果最好，这与提取液的成分能很好的保护基因组的完整性有关，可用于现场LAMP 检测用模板DNA的快速制备。
植物提取dna的步骤及原理
植物提取dna的步骤及原理以植物提取DNA的步骤及原理为标题，本文将介绍植物提取DNA 的基本步骤以及相关原理。
植物提取DNA是指从植物细胞中分离出DNA分子的过程。
植物细胞中的DNA包含了植物的遗传信息，因此提取植物DNA对于遗传研究和基因工程具有重要意义。
下面是植物提取DNA的基本步骤：步骤一：准备样品需要选择一种适合的植物样品。
可以选择新鲜的叶片、茎段或种子作为样品。
样品应该尽可能新鲜，并且避免受到污染或损伤。
步骤二：打碎细胞将样品放入冰冻细胞研磨器中，加入研磨缓冲液，并用研磨器将样品研磨成细胞悬浮液。
研磨缓冲液中的盐和洗涤剂有助于破坏细胞壁，并释放细胞内的DNA。
步骤三：溶解细胞膜将研磨后的细胞悬浮液转移到离心管中，并加入含有洗涤剂的细胞裂解液。
洗涤剂能够破坏细胞膜，使DNA从细胞中释放出来。
步骤四：沉淀DNA将细胞裂解液置于高速离心机中进行离心，离心过程中，DNA会被沉淀到离心管底部形成一个白色的沉淀物。
离心后，将上清液倒掉，只保留沉淀物。
步骤五：洗涤DNA使用75%乙醇溶液洗涤DNA沉淀物，以去除离心过程中残留的盐和洗涤剂等杂质。
洗涤后，用吸管或微量移液器将乙醇溶液完全抽尽，避免干燥过程中DNA沉淀物溶解。
步骤六：溶解DNA将洗涤后的DNA沉淀物用适量的溶解液溶解，常用的溶解液包括TE缓冲液或纯净水。
溶解后的DNA溶液可以用于后续的实验操作，如PCR扩增、酶切等。
以上就是植物提取DNA的基本步骤，下面将简要介绍相关的原理。
DNA提取的原理主要基于细胞的破坏和DNA的溶解。
在打碎细胞的过程中，使用研磨缓冲液破坏细胞壁，释放细胞内的DNA。
细胞裂解液中的洗涤剂能够破坏细胞膜，使DNA从细胞中释放出来。
离心过程中，DNA分子由于其较大的分子量而沉淀到离心管底部，而其他细胞碎片和杂质则在上清液中。
洗涤过程中使用的乙醇溶液能够去除离心过程中残留的盐和洗涤剂等杂质。
最后，将DNA沉淀物溶解在适当的溶解液中，得到DNA溶液。
植物DNA提取实验方案
植物DNA提取实验方案一、实验目的本实验旨在通过提取植物组织中的DNA，了解DNA的结构和功能，学习DNA提取技术。
二、实验原理DNA提取实验基于DNA的特性进行，主要包括以下几个步骤：1.组织破碎：通过物理或化学方法将植物组织破碎，使DNA暴露出来。
2.细胞溶解：使用细胞溶解液使细胞膜破裂，释放DNA。
3.蛋白质消化：加入蛋白酶等物质，将DNA周围的蛋白质降解。
4.DNA沉淀：通过加入乙醇等溶剂，使DNA沉淀。
5.洗涤和纯化：通过洗涤和纯化步骤去除杂质。
6.分析和测定：利用凝胶电泳等技术对提取得到的DNA进行分析和测定。
三、实验材料1.植物材料（如香蕉、草莓等）2.液氮或冰块3.细胞溶解液（如PBS缓冲液、CTAB溶液等）4.蛋白酶K溶液5.乙醇6.盐溶液7. DNase-free水8.1.5mL离心管9.离心机10.电磁振荡器11.热水浴12.紫外分光光度计四、实验步骤1.将所需植物材料切碎，放入离心管中。
2.将离心管放入液氮或冰块中，立即研磨材料，直至完全破碎。
3.加入适量的细胞溶解液，如PBS缓冲液，将混合物混合均匀。
4.将混合物置于电磁振荡器中，振荡5分钟。
5.加入适量的蛋白酶K溶液，混合均匀。
6.将离心管置于热水浴中，温度为55℃，孵育1小时。
7.加入相同体积的酒精，轻轻摇匀离心管，将DNA沉淀。
9.倒出上清液，加入适量的盐溶液，轻轻摇匀离心管，使DNA残留在离心管底部。
10.使用离心机将离心管离心，离心条件同上，离心10分钟。
11.倒出上清液，加入适量的乙醇，轻轻摇匀离心管，使DNA沉淀。
12.使用离心机将离心管离心，离心条件同上，离心10分钟。
13.倒出上清液，加入适量的盐溶液，轻轻摇匀离心管，使DNA残留在离心管底部。
14.使用离心机将离心管离心，离心条件同上，离心10分钟。
15. 倒出上清液，用DNase-free水洗涤DNA三次，每次离心5分钟。
16. 将离心管中的DNA溶解于适量的DNase-free水中。
植物dna提取实验报告
植物dna提取实验报告植物DNA提取实验报告引言DNA（脱氧核糖核酸）是生物体内的遗传物质，植物DNA提取实验是一种常见的实验方法，旨在从植物细胞中提取纯净的DNA样本。
本文将介绍植物DNA提取实验的步骤、原理和结果分析。
实验步骤1. 样本准备：选择一种植物作为实验对象，如洋葱。
将洋葱切成小块，放入离心管中备用。
2. 细胞破碎：将洋葱块加入研钵中，加入适量的提取缓冲液（含有盐和洗涤剂），用研钵和研杵将洋葱块研磨成细胞浆。
3. 过滤：将细胞浆倒入筛网中，用玻璃棒轻轻压榨，使细胞浆通过筛网，滤掉固体残渣。
4. 沉淀DNA：将过滤后的细胞浆转移到离心管中，加入冷乙醇，轻轻摇晃离心管，使DNA沉淀出来。
5. 分离DNA：使用微量移液器将DNA沉淀物转移到干燥的离心管中，加入去离子水溶解DNA。
6. 纯化DNA：使用DNA纯化试剂盒，按照说明书进行纯化步骤，去除杂质。
实验原理植物DNA提取实验的原理基于细胞破碎、DNA沉淀和纯化的过程。
首先，细胞破碎步骤使用提取缓冲液中的洗涤剂和盐的作用，破坏细胞膜和核膜，释放出细胞内的DNA。
接着，通过过滤和离心的方式，将细胞浆中的固体残渣和蛋白质去除，使DNA沉淀出来。
最后，通过纯化试剂盒中的化学试剂，去除杂质，得到纯净的DNA样本。
结果分析实验结束后，可以通过多种方式对提取的DNA进行分析。
常用的方法包括凝胶电泳、PCR扩增和测序等。
通过凝胶电泳，可以观察到DNA的带状图谱，判断DNA的大小和纯度。
PCR扩增可以使用特定引物对DNA进行扩增，进一步验证提取的DNA是否可用于后续实验。
测序则可以获得DNA的序列信息，对植物基因组进行研究。
实验注意事项1. 实验器材的消毒和无菌操作十分重要，以避免外源性DNA污染。
2. 实验过程中，尽量避免DNA的降解，注意保存条件和时间。
3. 实验中使用的试剂和溶液要严格按照说明书操作，避免误操作导致实验失败。
4. 实验室操作时要注意安全，佩戴实验手套和护目镜，避免实验物品对身体造成伤害。
实验四 植物DNA的提取
实验四植物DNA的提取一、实验目的掌握CTAB法从植物叶片提取DNA的原理和方法。
采用CTAB法从植物叶片中提取基因组DNA，并进行纯度分析。
二、实验原理1、核酸提取的基本原理核酸是生物有机体中的重要成分，在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。
核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两大类，在真核细胞中，前者主要存在于细胞核中，后者主要存在于细胞质及核仁里。
在制备核酸时，通过研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放出来。
在浓氯化钠溶液(1～2 mol／L)中，DNA核蛋白的溶解度很大，RNA核蛋白的溶解度很小；而在稀氯化钠溶液(0.14 mol／L)中，DNA核蛋白的溶解度很小，RNA核蛋白的溶解度很大。
因此，可利用不同浓度的氯化钠溶液将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品中分别抽提出来。
分离得到核蛋白后，需进一步将蛋白等杂质除去，常采用的去除蛋白的方法有3种：①用含异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除去变性蛋白质，此时蛋白质凝胶停留在水相和氯仿相中间，而DNA溶于上层水相。
用两倍体积的无水乙醇溶液将DNA钠盐沉淀出来。
如果用酸性乙醇或冰乙酸来沉淀，得到的是游离的DNA。
②用十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂使蛋白质变性，与核酸分离，从而从材料中直接提取出DNA。
③用苯酚处理，然后离心分层，DNA溶于上层水相，蛋白变性后则停留在酚层内。
吸出上面水层，加两倍体积的无水乙醇溶液，得到白色纤维状DNA沉淀。
反复使用上述方法多次处理DNA核蛋白溶液，就能将蛋白等杂质较彻底地除去，得到较纯的DNA制品。
为了彻底除去DNA制品中混杂的RNA，可用RNA酶处理。
生物材料中含有的脂肪物质和大部分的多糖，在用盐溶液分离核蛋白和用乙醇或异丙醇分级沉淀时即被除去。
在DNA提取、制备的过程中，核酸极不稳定，许多因素可破坏其完整结构：①化学因素，核酸的结构在pH值4.0～11.0间较稳定，pH值在此范围外就会使核酸变性降解，故制备过程应避免过酸过碱。
植物提取dna的方法
植物提取dna的方法
植物提取DNA的方法通常包括以下步骤：
1. 样品收集：选择新鲜的植物组织（如叶片、根部、种子等），避免使用死亡或腐烂的组织。
2. 组织破碎：将植物组织切碎或研磨，以释放DNA。
可以使用刀片、搅拌器、搅拌器研磨器等工具。
3. 细胞破裂：将组织样品置于研磨缓冲液中，并使用低温（如液氮）或高温（如加热至95C）进行热处理，破坏细胞壁以释放DNA。
4. 清理组织混合物：将组织破碎液通过滤纸等过滤，除掉固体残渣，获得纯净的液体样品。
5. 提取DNA：使用DNA提取试剂盒或自制的DNA提取缓冲液，根据试剂盒说明书或简单的化学反应步骤，将DNA从提取液中分离出来。
6. 纯化DNA：通过酒精沉淀、洗涤和干燥等步骤，去除可能存在的杂质和污染物，提高DNA的纯度和浓度。
7. DNA定量和质量检测：使用紫外吸收光度计或荧光探针等方法，测量提取得
到的DNA的浓度和纯度，确保其适合后续实验应用。
需要注意的是，不同植物物种的DNA提取方法可能存在差异，具体步骤和试剂使用可以根据研究目的和样品特点进行调整和优化。
同样，商业化的DNA提取试剂盒也提供了一种方便和快速的方法，避免了自制试剂的繁琐操作和优化步骤。
植物DNA提取实验方案
植物DNA提取实验方案目的：1、了解真核生物基因组DNA提取的一般原理。
2、掌握DNA提取的方法和步骤。
原理：提取DNA的一般原理，是将分散好的真核生物组织细胞在含SDS和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚：异戊醇提取的方法去除蛋白质，得到的DNA经过乙醇沉淀或透析等方法进一步纯化。
用植物基因组DNA提取液处理研磨、收集后的样品提取液中的乙二胺四乙酸二钠（EDTA）能螯合金属离子以防止破碎细胞的脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用而细胞破碎液中的蛋白酶K在37℃温浴过程中还能降解蛋白质从而减少了蛋白质对DNA的污染。
然后用CTAB处理在特定的盐浓度下CTAB使基因组DNA处于溶解状态而蛋白质仍为沉淀。
经细胞破碎液获得的DNA粗提取液再用酚、氯仿、异戊醇处理其中酚是高效的蛋白变性剂可进一步将蛋白、脂类和细胞碎片去掉然后用氯仿、异戊醇处理一方面可达到去蛋白的目的另一方面还可去除残留的酚。
一、材料植物的根、茎、叶。
最好选择叶子部分做实验。
二、设备移液管，冷冻高速离心机，台式高速离心机，陶瓷研钵，1.5mL 离心管。
三、试剂1、CTAB或Nacl溶液 4.1克NaCl溶解于80ml水缓慢加入10克CTAB加水至100ml。
2、其它试剂 氯仿、异戊醇24 1酚 氯仿 异戊醇25 24 1异丙醇TE10%SDS蛋白酶K20mg/ml5mol/LNaCl。
四、操作步骤1、选新鲜无病虫害的叶片用自来水冲洗吸干用蒸馏水洗两次然后用超纯水洗一遍吸干剪碎称0.5-0.25克。
2、将所取材料放入预冷的研钵研钵提前要灭菌研成粉末后置于7ml离心管内可以换为将样品放置到7ml离心管中800ul后用玻棒捣碎。
3、加入2.4ml65℃预热的CTAB充分混合后65℃水浴90min以上冷却到室温加入等体积氯仿异戊醇24 1轻轻颠倒混匀4℃离心6000g×10min取上清加入2/3体积的-20℃预冷的异丙醇轻轻混匀-20℃度放置20min4℃离心5000g×5min去上清。
提取植物dna的方法及其原理
提取植物dna的方法及其原理嘿，朋友们！今天咱就来聊聊提取植物 DNA 这档子事儿。
你说这植物 DNA 啊，就像是植物的小秘密宝库，藏着好多好多关于它们的信息呢！要提取植物 DNA，首先得准备好一些工具和材料。
就好像你要去挖宝藏，得有把趁手的铲子不是？咱得有新鲜的植物样本呀，这可是关键。
然后呢，还得有一些化学试剂，就像打开宝藏大门的钥匙。
那具体咋操作呢？第一步，把植物样本好好处理一下，就跟给它洗个澡似的，把杂质啥的都去掉。
然后呢，把它放到一个合适的容器里，加入那些神奇的化学试剂。
这时候啊，就好像给植物来了一场奇妙的化学反应之旅。
这原理呢，其实也不难理解。
植物细胞就像一个个小房子，DNA就住在里面。
那些化学试剂呢，就负责把房子的墙壁啊啥的打破，让DNA 能跑出来。
这就好比你要从一个坚固的城堡里把宝贝取出来，得动点小脑筋，用点小技巧才行。
接下来，经过一系列的操作，DNA 就慢慢浮现出来啦！哇，你能想象那种感觉吗？就好像你找到了藏在深处的宝贝一样惊喜。
你想想看，通过提取植物 DNA，我们能知道好多植物的秘密呢！比如它们的遗传信息，这就像是植物的“家族谱”。
我们可以了解它们是怎么一代代传承下来的，多有意思啊！而且哦，这提取植物DNA 可不只是在实验室里玩玩的。
在农业上，这可是大有用处呢！可以帮助农民伯伯们培育出更好的品种，让庄稼长得更壮，收成更多。
这不就像是给农业加了一把助力的小火箭嘛！在医学上也有它的用武之地呢！说不定能通过研究植物 DNA 找到一些治病的新方法。
哎呀呀，这可真是太神奇啦！总之呢，提取植物 DNA 就像是打开了一扇通往植物神秘世界的大门。
让我们能更深入地了解这些绿色小伙伴们。
朋友们，不妨自己也动手试试，去探索一下植物 DNA 的奇妙世界吧！怎么样，是不是很心动呀？别犹豫啦，赶紧行动起来吧！。
实验二 植物基因组DNA的提取笔记
实验二植物基因组DNA的提取Tris 读音“吹斯”脱氧核糖核酸酶DNase是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶DNase I活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。
镁离子存在条件下，DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点；二价锰离子存在条件下，DNase I可在同一位点剪切DNA双链，形成平末端，或1-2个核苷酸突出的粘末端。
苯酚在空气中经常被氧化生成醌，它能够产生自由基，直接用于DNA分离，会使磷酸二酯键断裂，造成DNA降解。
苯酚使蛋白变性，离心时沉淀下来，而DNA溶解在溶液中。
在提取DNA时用的原料成分的关系,很多植物源提取材料里面含有酚类物质,酚类物质是芳族环上的氢原子被羟基或功能衍生物取代后生成的化合物酚类物质如果经氧化后就会很容易于DNA共价结合引起褐变.这就是褐变现象,为有效除去酚类物质，需要在研磨时加入抗氧化的PVP，用PVP是利用它的“CO-N=”基有很强的结合多酚化合物的能力，其结合能力随多酚化合物中芳环羟基数量的增加而加强，结合成复合物后,通过离心除去。
另外，在加入提取液时，加入B-巯基乙醇可使多酚氧化酶失活，防止酚类物质被氧化，主要是“-SH基”可以打断多酚氧化物酶的二硫键而使之失活，防止酚类化合物被氧化。
巯基乙醇加入的目的是提供一种还原剂，这样酚类物质就不能被氧化成醌，从而影响你提DNA的实验。
巯基乙醇兼有这两方面功能，消泡和保护DNA。
特别是样品中酚类物质较多的时候，可以适当增加巯基乙醇的量，DNA提取的成功率更高。
巯基乙醇有消泡的作用。
不然你加了CTAB在震荡过程中会出现大量气泡，影响后续操作。
不是用来防止DNA氧化的。
PVP粉才是用来防止氧化的。
还原剂，防止酚的氧化。
很重要。
如果不加提出的核酸会呈现灰黑色。
异戊醇的作用是消除抽提过程中出现的泡沫。
我们实验室是灭菌后加PVP和巯基乙醇,每次用前65度水浴。
加CTAB时应在通风橱中进行。
《植物DNA的提取》课件
CTAB法
优点: 适用于多种植物样品，提取的DNA纯度高。 缺点: 步骤繁琐，耗时较长。
琼脂糖法
优点: 简单快捷，适用于大批量样品。缺点: DNA 纯度较低，可能受到琼脂糖的干扰。
质量检测与保存方法
质量检测方法
通过电泳、比色法等进行DNA纯度和浓度的检测。
DNA保存方法
选择合适的冷冻保存方式，如-20°C或液氮保存， 以保证DNA的稳定性。
提取步骤
样品采集和预处理
选择适当的植物组织进行采集，并进行适当 的处理以保证DNA的完整性和纯度。
DNA裂解
利用酶或高温等方法，将DNA分解成更小的 片段。
细胞破碎
通过机械或化学手段破坏细胞壁，释放细胞 内的DNA。
DNA纯化
通过柱子层析、溶液沉淀等方法，去除杂质， 提取纯净的DNA。
Байду номын сангаас
提取方法的优缺点
应用前景
种质资源保护与利用
通过植物DNA的提取和分析，能够帮助我们更好地保护和利用植物的遗传资源。
基因组研究
植物DNA的提取是进行基因组研究的前提，有助于揭示植物的基因组结构和功能。
总结
DNA提取的意义和重要性
植物DNA的提取是深入研究植物遗传特性和进化历程的重要途径。
提取方法的优缺点
不同的提取方法各有优劣，选择合适的方法可以提高DNA提取效果。
应用前景和发展趋势
植物DNA的提取在农业、生物学等领域有着广阔的应用前景，并随着研究的深入不断发展。
参考文献
1. 张三, 李四. 植物DNA提取方法的优化与比较[J]. 生物工程学报, 2020, 36(4): 503-510.
2. Wang J, et al. Optimized DNA extraction methodology for PCR analysis of medicinal plant species[J]. Plant Molecular Biology Reporter, 2019, 37: 361-369.
植物提取dna的方法
植物提取dna的方法
植物提取DNA的方法可以分为以下几个步骤：
1. 选择合适的植物样本，从新鲜植物中或者干燥的植物材料中取出叶片、茎或花等含量高的组织，避免含有过多的黄色物质或酚类物质。
2. 切碎植物组织，使用细刀或者组织绞碎器等工具将样品切碎成小块，以便更好地释放DNA。
3. 加入破碎缓冲液，包含盐类、洗涤剂、螯合剂等物质，可溶解细胞膜和核膜，使DNA释放。
4. 离心，将上述混合物离心，可使悬浮在上层的细胞碎片沉淀到底部。
5. 分离上清液，去除底部的碎片后，将上层的上清液转移到新的离心管中。
6. 加入蛋白酶和/或RNase酶，可去除DNA污染的蛋白质和RNA等。
7. 加入恒温酶或热梯度PCR仪等装置进行PCR扩增，最终得到核酸条带，然后进行分离纯化。
需要注意的是，每个植物物种的DNA提取方法略有不同，因此需要根据实际情
况进行调整和改进。
四种中药材DNA提取方法的比较
四种中药材DNA提取方法的比较张馨元;赵超越;侯和胜;佟少明Δ【摘要】Objective To establish an optimum DNA extraction method for Chinese traditional medical herbs in order to meet necessary for DNA barcoding research.Methods Four Chinese traditional herbs, Glycyrrhiza uralensis Fisch, Phellodendron Chinensis Cortex, Cistanche tubulosa Wight and Cistanche deserticola Ma were chosen as the experimental materials, the DNA was extracted by 6 different kinds of DNA extraction method, including the improved method of high-salt combined low-pH,the improved method of SDS,CTAB method,PVP method,PlantZol Kit and Ezup Kit, the quality of DNA was investigated by ultraviolet spectrophotometry,agarose gel electrophoresis and PCR amplification by using specific primers of ITS2 and psbA-trnH. ResuIts The quality of the DNA was better than other four kinds of methods by the improved method of high-salt combined low-pH and Ezup Kit, the value ofOD260/OD280 was between 1.7 ~1.9,the yield of DNA was the highest by the PlantZol kit , followed by the improved method of high-salt combined low-pH( P <0.05 ) , but the purity of DNA was poor by the PlantZol kit.The DNA electrophoresis tests showed that the DNA integrity of Glycyrrhiza uralensis Fisch and Cistanche tubulosa Wight were better with the improved method of high-salt combined low-pH, the improved SDS method, the CTAB method and the PlantZol kit.The DNA of Phellodendron Chinensis Cortex and Cistanche deserticola Ma were extracted by the sixmethods appeared diffuse status in the lanes.But only the improved method of high-salt combined low-pH could make the PCR amplification of the success rate 100% by using specific primers of ITS2 and trnH-psbA.ConcIusion The DNA extraction method of high-salt combined low-pH can be used to establish the Chinese DNA barcoding which has the advantages of lower cost, simpler procedure and less time.%目的：确定能够满足中药材DNA条形码研究的最适DNA提取方法。
DNA提取方法
DNA提取方法植物总基因组DNA提取纯化方法综述(转)默认分类2010-07-27 09:08:38 阅读179 评论1 字号：大中小订阅DNA 提取是植物分子生物学研究的基础技术。
目前植物分子的DNA 提取,已经发展了多种方法,成功地从植物叶片、愈伤组织、组培苗、果实、韧皮部等组织器官中提取出DNA。
但是有些情况下,不同植物甚至是同一种类植物组织材料的来源、部位、形态等外在性质的不同以及化学成分、组织结构等内在特点的差异,在提取基因组植物分子DNA 时需要选择不同的方法或作一些特殊的处理。
从富含多糖、多酚、单宁、色素及其他次生代谢物质的木本植物中提取的方法难度就相对大于大多数的禾谷类及蔬菜类植物。
从这些植物中分离出的DNA 由于多酚被氧化成棕褐色,多糖、单宁等物质与DNA 会结合成粘稠的胶状物,获得的DNA 常出现产量低、质量差、易降解,影响了DNA 质量和纯度,不能被限制性内切酶酶切,严重的甚至不能作为模板进行PCR 扩增。
针对这一现象,已有许多学者对植物特别是顽拗型木本植物的基因组DNA 提取纯化进行了改良和发展。
笔者就植物DNA 提取各个环节,如样本的采集与保存、提取缓冲液成分的作用、DNA 提取纯化方法等进行归纳,同时对DNA 提取过程中的常见问题、原因及应对策略作简要的分析。
1 植物样品的采集与保存植物组织材料的采集与保存对提取DNA 的产量和质量有很大影响。
通常应尽可能采集新鲜、幼嫩的组织材料,采集的过程中应尽可能使组织材料保持水分,在取样时立即用浸湿的纱布包裹采集的组织材料,放置在密闭的冰盒中,这样可使组织材料3～5 d 仍然保持新鲜。
野外远距离采集样本时,在可能的条件下冷冻保存(如放置于液氮中) ;当不具备冷冻条件时, 最好用盛有无水CaSO4 的瓶子分别保存, 使其迅速干燥, 这种方法可将材料保存数月,返回后应尽快进行DNA 的提取工作。
对具有大量次生代谢物(如丹宁、酚类、醌类等) 的植物材料, 应尽可能采集幼嫩组织外, 最好进行冷冻保存并在短时间内进行DNA 提取。
最新实验 植物DNA提取及检测
植物基因组 DNA的提取
琼脂糖凝胶电泳检测
一 、实验目的
学习提取和纯化高等植物总 DNA的方法，理解其原理。
二、实验原理
• •
脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA) 与蛋白质结合在一起以核蛋白（DNP）的形式存在。 在制备核酸时通常破坏细胞壁及细胞膜来使核蛋 白释放出来。 植物总DNA包括细胞核DNA和细胞核外DNA,前者存 在于细胞核内，后者存在于细胞质中有半自主性 复制活性的细胞器内，例如线粒体DNA(mtDNA)和 叶绿体DNA(ctDNA)。
琼脂糖是一种线性多糖聚合物。 浓度越高，孔隙越小，其分辨能力就越强。
琼脂糖浓度(%)
0.3
线型DNA分子的分离范围 (Kb)
5～60
0.6
0.7 0.9
1～20
0.8～10 0.5～7
1.2
1.5 12.0
0.9～6
0.2～3 0.1～2
三、实验仪器和试剂
仪器
– 电泳仪 – 电泳槽 – 灌胶模具等
•
基本过程 细胞破碎 抽提去蛋白质 沉淀核酸
细胞破碎
①机械方法： 超声波处理法、研磨法、匀浆法；
②化学试剂法：用SDS处理细胞；
③酶解法： 加入溶菌酶或蜗牛酶，破坏细胞壁。
DNA提取
• SDS法 SDS 是有效的阴离子去垢剂 , 细胞中 DNA 与蛋 白质之间 常借静电引力或配位键结合 , SDS 能够 破坏这种价键。 • CTAB法 CTAB是一种阳离子去垢剂，它可以溶解膜 与脂膜，使细胞中的DNA-蛋白质复合物释放出来， 并使蛋白质变性，使DNA与蛋白质分离。
核酸染色剂
溴化乙锭（EB）
植物DNA提取方法总结
植物DNA的提取分离技术摘要:主要介绍了近年来国内外几种常用的DNA提取方法:CTAB法、SDS法等,并在对其进行了简单的归纳总结与比较分析同时,并介绍了一些新的改良方法和其他植物提取方法关键词:植物DNA 提取方法研究进展市售中药材大多为干品,而中药材的加工和贮藏整个过程,如日晒、高温烘干等都不利于DN的完整性, 为达到要求目前国内外研究发现并使用的DNA提取方法有很多[1-12],其中被最为广泛应用的DNA提取方法是传统的CTAB法和SDS法[13]。
由于不同植物的材料组分和干湿程度各异,因此对不同植物DNA的提取存在着不同的效果。
目前许多学者都在致力于研究不同的植物DNA提取方法。
他们在探索新方法的同时,也针对不同的植物,在传统的提取方法上进行着一些新的改良。
1.十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)法在目前众多的DNA提取方法中,CTAB法是其中最为广泛应用的一种。
它既可以裂解细胞,又可以有效地去除多酚类和多糖类物质的沉淀,因而经常被应用于植物的DNA提取工作中。
1.1方法及原理CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。
在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB 与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸。
通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
1.2 CTAB提取缓冲液的经典配方Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏;EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性;NaCl 提供一个高盐环境,使DNP 充分溶解,在于液相中; CTAB溶解细胞膜,并结合核酸,使核酸便于分离。
β-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物,能与多酚形成一种不溶的络合物质,有效去除多酚,减少DNA中酚的污染;同时它也能和多糖结合,有效去除多糖。
4种石山植物DNA提取方法筛选
4种石山植物DNA提取方法筛选申丹;曾杰;周世良;徐大平;白嘉雨【期刊名称】《广西科学》【年(卷),期】2005(12)4【摘要】以石山木本植物掌叶木(Handeliodendron bodinieri)、东京桐(Deutzianthus tonkinensis)、伊桐(Itoa orientalis)和肥牛树(Cephalomappa sinensis)为材料,在常用CTAB法的基础上改良,开发出适合这4种木本植物总DNA提取的3种方法,并将提取出的DNA样品进行ISSR分析,确定出提取这4种石山木本植物的总DNA最佳方法,为研究石山木本植物的遗传多样性奠定基础.【总页数】3页(P340-342)【作者】申丹;曾杰;周世良;徐大平;白嘉雨【作者单位】中国林业科学研究院热带林业研究所,广东广州,510520;北京中医药大学药学院,北京望京,100102;中国林业科学研究院热带林业研究所,广东广州,510520;中国科学院植物研究所系统与进化植物学开放实验室,北京香山,100093;中国林业科学研究院热带林业研究所,广东广州,510520;中国林业科学研究院热带林业研究所,广东广州,510520【正文语种】中文【中图分类】Q347【相关文献】1.景天属植物叶绿体DNA与核DNA分步提取方法研究 [J], 郝海叶;张洋;那冬晨2.北方煤矸石山生态修复植物筛选初报 [J], 张成才;陈奇伯;张先平3.几种DNA提取方法对红树植物秋茄叶片DNA提取效果的比较 [J], 仇建标;丁文勇;陈少波4.转基因检测中大豆蛋白DNA提取方法筛选及其lectin基因降解分析 [J], 杜艳; 陈复生; 陈晨; 刘营5.一种适用于绿僵菌克隆筛选的DNA批量快速提取方法 [J], 宋红生;邓博严;殷颖因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
植物的DNA提取与鉴定
植物的DNA提取与鉴定.txt男人应该感谢20多岁陪在自己身边的女人。
因为20岁是男人人生的最低谷，没钱，没事业；而20岁，却是女人一生中最灿烂的季节。
只要锄头舞得好，哪有墙角挖不到？目的意义DNA是遗传信息的载体和基本遗传物质，它在遗传变异、代谢调控等方面起着重要作用，是分子生物学和基因工程研究的对象，但无论是研究植物DNA的结构和功能，还是开展外源DNA 的转化、转导的研究，首先要做的就是从植物组织中提取天然状态的高分子量的纯化DNA。
因此，本实验的目的是学习植物基因组DNA提取方法、原理和DNA的鉴定技术。
Ⅰ植物基因组DNA 的提取（CTAB法）一、原理植物组织中绝大部分是核DNA，它和组蛋白、非组蛋白结合在一起，以核蛋白（即染色质或染色体）的形式存在于细胞核内。
CTAB(十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide，简称CTAB)：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中(0.7mol/L NaCl)是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度(0.3mol/L NaCl)时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB 与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇中。
在DNA提取过程中必须始终注意以下几个关键问题：（1）DNA的二级结构和双链易受多种因素（如强酸、强碱、加热、低盐浓度、有机溶剂、酰胺类、尿素等）的影响引起双链解开，即“变性”，因此抽提时避免使用变性的条件。
（2）抑制内外源DNase的活力。
DNase就象一把刀，它能把大分子的DNA切成碎片，所以要加以杜绝，现可以通过多种途径来做到这一点：a、低温操作；b、调节pH，使偏碱（pH8.0）；c、抽提液中加表面活性剂；d、加螯合剂（EDTA）除去酶的铺助因子（Mg2+），使酶活性丧失。
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收稿日期:2005-07-05修回日期:2005-08-22作者简介:申丹(1985-),女,湖南邵东人,主要从事生物化学研究。
*中央级科研院所社会公益研究专项资金项目"石质岩溶山地生态综合整治技术研究与示范"(项目编号:2001D I B 10067)的部分内容。
**通讯作者。
广西科学G u a n g x i S c i e n c e s2005,12(4):340～3424种石山植物D N A 提取方法筛选*T o t a l D N AE x t r a c t i o nf r o m F o u r L i m e s t o n e P l a n t s申丹1,2,曾杰1**,周世良3,徐大平1,白嘉雨1S h e nD a n 1,2,Z e n gJ i e 1,Z h o uS h i l i a n g 3,X uD a p i n g 1,B a i J i a y u1(1.中国林业科学研究院热带林业研究所,广东广州510520;2.北京中医药大学药学院北京望京100102;3.中国科学院植物研究所系统与进化植物学开放实验室,北京香山100093)(1.R e s e a r c hI n s t i t u t e o f T r o p i c a l F o r e s t r y ,C h i n e s e A c a d e m yo f F o r e s t r y ,G u a n g z h o u ,G u a n g d o n g ,510520,C h i n a ;2.S c h o o l o f C h i n e s e Ma t e r i a Me d i c a ,B e i j i n gU n i v .o f C h i n e s e Me d i c i n e ,Wa n g j i n g ,B e i j i n g ,100102,C h i n a ;3.L a b o r a t o r yo f S y s t e m a t i c a n dE v o l u t i o n a r yB o t a n y ,I n s t i t u t e o f B o t a n y ,C h i n e s e A c a d e m yo f S c i e n c e ,X i a n g s h a n ,B e i j i n g ,100093,C h i n a)摘要:以石山木本植物掌叶木(Ha n d e l i o d e n d r o n b o d i n i e r i )、东京桐(D e u t z i a n t h u st o n k i n e n s i s )、伊桐(I t o a o r i e n t a l i s )和肥牛树(C e p h a l o m a p p a s i n e n s i s )为材料,在常用C T A B 法的基础上改良,开发出适合这4种木本植物总D N A 提取的3种方法,并将提取出的D N A 样品进行I S S R 分析,确定出提取这4种石山木本植物的总D N A 最佳方法,为研究石山木本植物的遗传多样性奠定基础。
关键词:植物D N A 提取I S S R 石山中图法分类号:Q 347文献标识码:A文章编号:1005-9164(2005)04-0340-03A b s t r a c t :G e n e t i c d i v e r s i t yo f l i m e s t o n e p l a n t s w a s l e s s r e p o r t e d i nC h i n a .I nt h i s p a p e r t h e m e t h o d s w e r e d e v e l o p e do nt h e b a s i s o f C A TB ,t oe x t r a c t t o t a l D N A f r o m y o u n gl e a v e s o f f o u r l i m e s t o n e p l a n ts p e c i e s i n c l u d i n gt w os p e c i e s i n v o l v e di nt h eR e dB o o k o fC h i n e s e P l a n t s (V o l .1)s u c ha s Ha n d e l i o d e n d r o n b o d i n i e r i a n dD e u t z i a n t h u s t o n k i n e n s i s ,a n dt w os p e c i e s w i t hh i g he c o n o m i c v a l u e s u c ha s I t o a o r i e n t a l i s a n d C e p h a l o m a p p a s i n e n s i s .T h e D N A s a m p l e s w e r e s u c c e s s f u l l y u s e d i n I S S R a n a l y s i s .T h e i m p r o v e dm e t h o d s w i l l b e u s e di ns t u d i e s o ng e n e t i c d i v e r s i t yo f t h e s e s p e c i e s i nt h e f u t u r e.K e y w o r d s :p l a n t s ,D N A ,e x t r a c t i o n ,I S S R ,l i m e s t o n e 我国石灰岩山地分布面积大,植物种类繁多,然而其遗传多样性方面的研究少见报道,仅见周厚高等[1]应用等位酶标记研究了广西石灰岩地区蜈蚣蕨(P t e r i s v i t t a t a )天然居群的遗传多样性。
随着现代分子生物学的快速发展,R A P D 、I S S R 、A F L P 以及S S R 等分子标记逐渐应用于遗传多样性研究领域,促进了植物遗传多样性研究的发展。
植物总D N A 的提取是开展这些研究的前提,我们以国家一级保护植物掌叶木(Ha n d e l i o d e n d r o n b o d i n i e r i )、二级保护植物东京桐(D e u t z i a n t h u s t o n k i n e n s i s )以及具重要经济价值的伊桐(I t o a o r i e n t a l i s )和肥牛树(C e p h a l o m a p p as i n e n s i s )等4种石山木本植物为对象,在常用C T A B(十六烷基三甲基溴化胺)法[2]的基础上设计3种D N A 提取方案,通过比较分析,确定出最佳的总D N A 提取方法,为其遗传多样性研究奠定基础。
1材料与方法1.1材料1.1.1试验材料试验材料均于2004年5月采自天然林,掌叶木采于广西百色市老山林场,伊桐和东京桐采于广西木论自然保护区,肥牛树采于广西天等县。
供试样品均为嫩叶,用硅胶快速干燥。
43G u a n g x i S c i e n c e s ,V o l .12N o .4,N o v e m b e r 20051.1.2主要试剂高盐溶液:5m o l/LN a C l;1%β-巯基乙醇;1.5%P V P(聚乙烯基吡咯烷酮)40000。
提取缓冲液A:200m m o l/L T r i s-H C l p H值8.0;250m m o l/LN a C l;50m m o l/LE D T A(乙二胺四乙酸);1.5%P V P40000;1%β-巯基乙醇。
提取缓冲液B:100m m o l/LT r i s-H C l p H值8.0;20m m o l/LE D T A;1.4m o l/LN a C l;2%C T A B(十六烷基三甲基溴化胺)。
提取缓冲液C:100m m o l/L T r i s-H C l p H值8.0;25m m o l/L E D T A;1.5m o l/L N a C l;3%C T A B。
0.1×T E:10m m o l/L T r i s-H C l p H值8.0;1m m o l/LE D T A。
高盐T E:1m o l/L N a C l;10m m o l/L T r i s-H C l p H值8.0;1m m o l/LE D T A。
1.2D N A提取方法1.2.1方法一(1)取40m g干叶,加入少量石英砂,研磨成粉末后,加入1m l冰上预冷的提取缓冲液A,冰浴10m i n,7000r p m离心10m i n,弃上清液。
若上清液粘稠,用提取缓冲液A再抽提1次。
(2)加入600µl提取缓冲液C,置于65℃下温浴1 h,不时摇晃。
(3)加入等体积的C l(氯仿:异戊醇=24:1),缓慢摇动10m i n,10000r p m4℃离心10m i n,转移上清液。
若上清液浑浊,重复此步。
(4)往上清液中加入1/2体积(300µl)5m o l/LN a C l,轻轻混匀,加入2/3体积(600µl)冰冷的异丙醇,于-20℃下放置1h,缓慢颠倒析出沉淀,10000r p m离心10m i n,弃液体。
(5)加入1m l70%的酒精清洗沉淀,风干后溶于100µl的高盐T E中。
(6)加入2倍体积(200µl)冰冷的无水酒精, -20℃下放置30m i n,10000r p m离心10m i n,用70%的酒精清洗沉淀,风干后溶于100～200µl0.1×T E中。
1.2.2方法二(1)取40m g干叶片,加入少量石英砂,研磨成粉末后,加入1m l冰上预冷的高盐溶液,65℃温浴30m i n,10000r p m10m i n,弃上清液。
(2)加入100µl N a C l(5m o l/L)和600µl提取缓冲液B,65℃下温浴30m i n,加入600µl C l抽提2次。
(3)往上清液中加入2/3体积(400µl)冰冷的异丙醇,-20℃下放置1h,缓慢颠倒析出沉淀,10000r p m10m i n,弃液体。