重组腺病毒AdCD40Ig联合供体静息B淋巴细胞预处理诱导小鼠皮肤移植耐受的探究

合集下载

建立嵌合体诱导器官移植免疫耐受的研究进展

建立嵌合体诱导器官移植免疫耐受的研究进展国外医学泌尿系统分册２００５年１１月第２５卷第６期ｕｒｏｌｏ盯ａｎｄ洲。

留ＦＭｓ，Ｎｏｖ２００５，Ｖ０１．２５Ｎ０．６７３９建立嵌合体诱导器官移植免疫耐受的研究进展刘忠国＋综述温端改审校【摘要】建立器官移植免疫耐受是维持移植器官长期存活的理想境界。

其中建立嵌合体是诱导器官免疫耐受的重要途径。

本文就建立嵌合体的种类、方法、途径及其诱导免疫耐受的机理的研究进展作一综述。

【关键词】器官移植；免疫耐受；嵌合体［中图分类号］Ｒ６１７［文献标识码］Ａ［文章编号］１００１—４５９４（２００５）０６．Ｃｒ７３９—０４１概述诱导对供体特异性移植免疫耐受可避免这些并应用足够的免疫抑制剂减少急性移植物排斥反发症。

最近实验和临床证据表明移植免疫耐受将在应显著改善了器官移植状况。

然而，慢性排斥仍是近年成为可获得的目标［１｜。

一个最可喜的成就是发值得考虑的问题。

目前免疫抑制剂治疗缺乏特异现了“造血嵌合体”，在这里因造血系统指征接受常性，可导致机会性感染和移植受体易患恶性肿瘤。

规骨髓移植的病人可随后接受相同供体来源的器官（８）：７６５—７２．一ｔｅ皿ｉｓｌｅｔ８ｌｌ昭＿８ｆＩｓ１１］而ｖａｌ．ＡｍＪｎｍ８ｐ１∞ｔ，２００４，４（４）：５２６—３６．８陆ｌｈ啦ｒｅｎＫ，Ｉｊｅ蚴ｆｅｌｄＯ，Ｓｔａｄ诎ｅｒ砌，ｅｔ８１．Ｉｃ０Ｓ＋１ｈｃｅｌｌ８删ｕｃｅ１５ＨａｒａｄａＨ，ＳａｌｍｍＡＤ，ＳｈｏＭ，ｅｔａ１．１１ｌｅｒｏｌｅ０ｆｍｅＩＣ０ｓ一町ｈＴｃｅｎｄｉ出ｎｃｔｃｙｔｏｌ【ｉｎｅｓｉｎｄｉｌ王豳ｔ删ｃｏｓａｌｉ删珊ｍ陀叩疆ｌｓｅｓ．Ｅ１１Ｉ。

ｌ瑚ｎＪｏｕｒ—ｃ∞ｄ唧Ｉｌｌａｔｏｒｙ耻止ｈｗａｙｉｎ协ｍ吕ｐｂ栅∞ｉｍＩ删ｌＩｌｉｔｙ．Ｊ０ｕＩＩｌａｌｏｆａｊ血ｃａｌＩｎ—ｎａｌ０ｆＩ眦瑚ｏｌｏ留，２００３，３３（２）：３９２—４０１．ｖｅ出ｇａ￡ｉ∞，２００３，１１２（２）：２３４—４３．９Ｈ缸ａｄａＹ，（）｝ｌｇａｉＤ，Ｗ缸砒ＩａｂｅＲ，ｅｔａ１．Ａｓｉｎｄｅｍ试ｎｏａｃｉｄ８ｌｔｅ瑚ｄｏｌｌｉｔｌ１６ａ１．ｈｔ黜ｄｍｂ咖黜ＩＣ０ｓ—Ｂ７ＲＰｌｃｙｔ叩ｌ蚴试ｃｄ刹ｎｄ枷ｎ髑几一２掣叫瞄即ａｃｔｉ训∞ｂｙＳａｌ姗ＡＤ，Ｙ哪Ｘ，Ｎａｙ盯Ａ，ｅｔｌｉｇ出∞。

CD40LIg基因修饰骨髓间充质干细胞对异种胰岛移植排斥反应的抑制作用

ＥｅｔｏＤ４ＬｇＭｏｉｅｏｅＭａｒｗＭｅｅｃｙｌｔｍｌｎＲｅｅｔｎｏｔｆｃｓｆＣ０ＩｄｆｄＢｎｒｏｓｎｈｍａｅＣｅｓｊｃｉｆｉＳｌｏｏＲａ
ＩｌｔＸｅｇａｔｓｅｎｏｒｆｓ
Ｃ４Ｌｇ因修饰骨髓间充质干细胞对异种胰岛移植排斥Ｄ０Ｉ基反应的抑制作用
张剑，张琪，张英才，朱焕兵，汪国营，杨扬
（中山大学附属第三医院器官移植中心，广东广州５０３）１６０
摘
要：目的】【探讨白细胞分化抗原４配体免疫球蛋白（Ｄ０Ｉ）０Ｃ４Ｌｇ基因修饰骨髓间充质干细胞（Ｓ）ＭＣ对异种胰岛移
ｗｉｓｔｃｌｆＷｉｔｒｒｔｔａｓｌｎｎｅｈｅｉｎｙｃｐｕｅｏｉｂｔＤａ．ＭＳｒｎｅｔｄｗｉｈｅｏｉａｔｔｉｌｅｌｏｓａａｒｎｐａｔｕｄｒｔｅｌｆｋｄｅａｓｌｆｄａｅｉＳｒｔｈｅｓｔｃＣｗｅｅｉｆｃｅｔｔｅｒｃｍｂｎｎｈａｅｏｉｓｓｃｎａｎｎＤ４ＬｇｇｎｓｉｔｒｅｔｎｔａｍｅｔＦｒｙｆｅｍｏｅｅｉｂｔａｓｗｒａｄｍｌｉｉｅｎｏｔｒｅｄｎｖｒｅｏｔｉｉｇＣ０Ｉｅｅａｎｅｖｎｉｒｔｎ．ｏ【— ｖｄｌｄｄａｅｉｒｔｅｅｒｎｏｙｄｖｄｄｉｔｈｅｕｏｅｉｃ
植排斥反应的抑制作用。【方法】建立ＷｉａＳｓｒＤ大鼠异种胰岛移植模型，ｔ．用携带分泌型Ｃ４Ｌｇ因的重组腺病毒感染的Ｄ０Ｉ基

重组腺病毒Ad—Endo对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

妇女中的发病率约为１％。主要表现为痛经及不０孕，本病危害严重，目前各种疗法效果有限，易复极
发］要是因为Ｅ的病因和发病机制不明。，主Ｍｓ现有研究发现：Ｍｓ血管新生关系密切，抑制病灶Ｅ与血管生成可能达到治疗目的。内皮抑素（ｎｏｔｔ，ｅｄｓｉａｎＥｄ）特异性抑制血管内皮细胞增殖并诱导其凋ｎｏ可
脉内皮细胞ＥＶ３４Ｗｅｔｒ—ｌ检测Ｅｄ蛋白表达．流式细胞术及Ｈｃｅｔ３５Ｃ０。ｓｎｂｏｅｔｎｏｏｈｓ３２８染色检测ＥＶ３４细Ｃ０
胞凋亡情况，并绘制细胞生长曲线。结果：病毒感染４８ｈ后检测到Ｅｄ蛋白表达，Ｃ０ｎｏＥＶ３４细胞在Ａ —ｎｏｄＥｄ感染后细胞增殖受到抑制，流式细胞术及Ｈｃｅｔ３５ｏｈｓ３２８染色均检测到细胞凋亡增加。结论：重组腺病毒Ａ — ｄ
３４ａｏｔｓｎｅｉｒｔｎＭｅｈｄＴｅｒｃｍｂｎｎｄｎｖｒｓｗｓｃｎｔｃｅｔＥａｙ１ｓｓｅａｄ０ｐｐｏｉａｄｐｄｆａｉ．ｓｅｏｔｏｓｈｅｏｉａｔａｅｏｉａｏｓｒｔｄｗｉＡｄｓｙｔｍｎｕｕｈＡＡＶ９ｅｌ．Ｐｏｉｎｗａｅｅｔｄｂｅｔｒ — ｌｔｔｅａｏｔｓｓｗｅｅｄｔｃｅｙｆｗｃｔｍｅｅｎｃｅｔ２３ｃｌｓｒｔｓｄｔｃｅｙＷｓｎｂｏ．ｈｐｐｏｉｅｅｒｅｅｔｄｂｏｙｏｔｒａｄＨｏｈｓｌ３２８ＲｅｕｔＴｅＥｄｒｔｉａｏｎ８ｈａｅｆｃｉｎＡｐｐｏｉｆＥＶ一０ｅｌｎｕｅｙＡｄＥｄ３５．ｓｌｓｈｎｏｐｏｅｎｗｓｆｕｄ４ｆｒｉｅｔ．ｏｔｓｓｏＣ３４ｃｌｉｄｃｄｂ — ｎｏｔｉｒｏｓａｄｇｏｈｉｈｂｔｎｗａｂｅｖｄＣｏｃｕｉｎＡｐｐｏｉｆＶ一０ｅｌｃｎｉｄｃｄｂ — ｎｏ．ｉｈｍａｎｒｗｔｎｉｉｏｓｏｓｒｅ．ｉｎｌｓｏｏｔｓｓｏＥＣ３４ｃｌｓａｕｅｙＡｄＥｄｗｈｃｙｎｂｎｆｈｎｉｇｎｓｓｍｅｈｎｓｏｎｏｅｏｅｏｅａｇｏｅｅｉｔｃａｉｍｆＥｄ．

重组腺病毒鼠CD40L对小鼠淋巴瘤治疗和预防作用的体内研究

明确热化疗治疗肿瘤的机制。总之，ＥＬＥ联合ＨＴＭ对人Ｂｕｒｋｉｔｔ＇ｓ淋巴瘤ｒｔａｊｉ细胞增
［８］关云艳，欧希龙，郭庆明，等．Ｐ—ｇＰ，ＴＯＰＯＩＩ和ＧＳＴ— 在胃癌组织中的表达及与预后的关系［Ｊ］．世界华人消化杂志，２００６，
联合ＨＴＭ均能够下调ＴＯＰＯＩ、ＴＯＰＯＨｍＲＮＡ和蛋白的表
ｅｍｅｎｅ０ｎｈｕｍａｎｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｐｏｒｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｖｉｔｒｏ［Ｊ］．ＩｎｔＪ
织，尤其在Ｓ期肿瘤细胞中活性大幅度提高因此抑制ＴＯＰＯ
［４］陈伟，任峰，王英杰，等．榄香烯乳联合顺铂抑制胃癌ＡＧＳ细胞生长的实验研究［Ｊ］．现代肿瘤医学，２０１２，２０（２）：２２７ — ２３０．
Ｏｐｈｈａｔｌｍｏｌ，２０１１，４（３）：２５５— ２５８．
达，但是作用强度以ＥＬＥ联合ＨＴＭ最为显著，单纯ＥＬＥ次
之，而单纯ＨＴＭ相对最弱。
［６］康艳霞，张贺龙，冯英明，等．热疗增强诺维本对人肺癌细胞毒
（１９）：３ｏ４８—３０５５．
［１０］ＫｕｒｏｓｅＡ，Ｔｎ￣ａａＴ，ＨｕａｎｇＸ，ｅｔａ１．ＡｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆＡＴＭｐｈｏｓｐｈｏ —

小鼠IDO基因重组腺病毒载体的构建表达和鉴定

ｍｅｎｓＭｅｈｄＦｕｌｌｎｈｍｏｅｄｅｉｅＤＯＤＮＡｓｓｃｏｎｄｉｏｐＡｄｒｃ－ｔ．ｔｏｓｌ—ｅｇｔｕｓｒｖｄＩｅｗａｕｂｌｅｎｔｔａｋＣＭＶｈｕｔｅｐｌｓｉＴｈｅｐｏｄｕｔｗａｉｅｓｔｌａｍｄ．ｒｃｓｌｎ —
隆，切、酶测序鉴定正确后，质体法转染Ａ２３细胞进行包装，增，化铯密度梯度离心纯化病毒并检测其滴度。Ｒ —Ｃ脂Ｄ－９扩氯ＴＰＲ
和荧光显微镜鉴定和检测重组腺病毒转染ＡＤ２３细胞后ＩＯ的表达，时进行野生型腺病毒的检测。结果经酶切及测序证－９Ｄ同实ＩＯ基因重组腺病毒栽体构建成功，ＴＰＲ检测到转染后ＡＤ２３细胞内ＩＯ的表达，无野生型腺病毒的产生。结论ＤＲ —Ｃ－９Ｄ且功构建了含小鼠ＩＯ基因的重组腺病毒栽体，探讨ＩＯ的生物学功能奠定了基础。Ｄ为Ｄ
ｇｎｎｍｐｉｃｔｎｏＩｉｇａｄａｌｉａｉｆＡｄＤＯｉｕ．ＴｈｎｔｅｖｒｓｗａｕｉｅｙＣｓｅｓｔｒｄｅｔｃｎｒｕａｉｎｆｏｖｒｓｅｈｉｕｓｐｒｆｄｂＣ１ｎｉｙｇａｉｎｅｔｉｇｔ．ＴｈｘｒｓｉｎｏＤＯｉｄｆｏｅｅｐｅｓｏｆＩ
ａｉｅＯｈｍｏｎＢ５８ａｔｒａＴｈｏｉｉｅｃｏｅｗａｅｔｉｄｂｅｔｉｔｎｅｄ — ｒｄｔｏｌｇｕｅｏｉａｉｔＡｄｓ－ｅｔｒｉＪ３ｂｃｅｉ．ｅｐｓｔｌｎｓｉｎｉｅｙｒｓｒｃｉｎｏｚｏｈ１ｖｄｆｏ

sCD40LIg重组腺病毒载体的构建鉴定和体外表达

sCD40LIg重组腺病毒载体的构建鉴定和体外表达李钊伦;田普训;薛武军;吴军;贺伟峰;易绍萱;陈希炜;张小容【期刊名称】《第三军医大学学报》【年(卷),期】2005(27)21【摘要】目的构建含有分泌型人胞外区CD40L融合蛋白(sCD40LIg)基因的重组腺病毒载体,为下一步在动物模型体内表达和基因治疗提供基础。

方法分别以质粒pAdCTLA4Ig和pGEM-T-easy-sCD40L为模板,通过PCR扩增获得人源IgGFc和sCD40L基因全部序列。

分别回收用连接酶连接,以连接产物为模板PCR,获得sCD40LIg基因全部序列,插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV的启动子下游BglⅡ及XhoⅠ位点之间,获得重组质粒pAdTrack-sCD40LIg。

将正确重组体pAdTrack-sCD40LIg转化含腺病毒骨架质粒的pAdEasy-1-BJ5183细菌行同源重组。

提取重组成功质粒,用脂质体介导转染293细胞,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及PCR扩增目的基因,Western blot分析蛋白表达等方法鉴定重组的腺病毒。

结果成功构建了含有sCD40LIg基因的重组腺病毒并在体外表达。

结论该重组腺病毒的构建为下一步研究其在哺乳动物细胞内表达及在移植排斥的基因治疗中的作用提供了一定的基础。

【总页数】4页(P2107-2110)【关键词】sCD40L融合蛋白;重组腺病毒;基因表达;免疫耐受【作者】李钊伦;田普训;薛武军;吴军;贺伟峰;易绍萱;陈希炜;张小容【作者单位】西安交通大学医学院第一附属医院肾移植科;第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,重庆器官移植基础研究室【正文语种】中文【中图分类】Q782;R392.11【相关文献】1.hTERT启动子调控的SEA-CD80基因共表达重组腺病毒载体的构建及在不同肿瘤细胞中的表达鉴定 [J], 司少艳;刘俊丽;王晓菲;谭小青;宋淑军2.重组腺病毒载体AdOX40Ig的构建、表达及相关体外实验 [J], 陈志红;赵媛媛;张守亮;林建扬;魏法星;朱伟3.体外重组酶法快速构建表达增强型绿色荧光蛋白的复制型人14型腺病毒载体[J], 陈咏; 田新贵; 周荣4.P1/Fas-CCL19双表达重组腺病毒载体的构建及表达鉴定 [J], 姜兆静;李纪强;张积仁5.肝癌靶向性SEA基因重组腺病毒载体的构建及体外生物学活性鉴定 [J], 司少艳;隋延仿;张秀敏;李侠;冯凯;韩瑞刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

腺病毒介导外源基因转染大鼠胰岛移植物的实验研究术

腺病毒介导外源基因转染大鼠胰岛移植物的实验研究术陈晓波;李永翔;董维平;焦洋;谭建明【期刊名称】《中国医学工程》【年(卷),期】2007(015)001【摘要】目的探讨携带外源基因的腺病毒在体外有效感染大鼠胰岛及外源基因在胰岛中的表达.方法用携带人血红素氧合酶-1基因(hHO-1)及绿色荧光蛋白基因(GFP)的腺病毒在体外以不同MOI感染大鼠胰岛,荧光显微镜观察GFP的表达及Western检测hHO-1蛋白来确定转染结果,并观察外源基因表达持续的时间.结果腺病毒载体在体外能将外源基因有效转入到大鼠胰岛细胞,转染的基因能稳定表达.结论腺病毒载体在体外可以有效感染大鼠胰岛,为基因修饰胰岛移植物以提高胰岛移植效果奠定了实验基础.【总页数】3页(P22-24)【作者】陈晓波;李永翔;董维平;焦洋;谭建明【作者单位】上海交通大学附属第一人民医院(上海器官移植临床医学中心),肾移植泌尿科,上海,200080;上海交通大学附属第一人民医院(上海器官移植临床医学中心),肾移植泌尿科,上海,200080;上海交通大学附属第一人民医院(上海器官移植临床医学中心),糖尿病研究室,上海,200080;上海交通大学附属第一人民医院(上海器官移植临床医学中心),肾移植泌尿科,上海,200080;上海交通大学附属第一人民医院(上海器官移植临床医学中心),肾移植泌尿科,上海,200080【正文语种】中文【中图分类】R392.1;R332【相关文献】1.腺病毒介导CD40Ig基因转染联合骨髓细胞输注诱导大鼠心脏移植物耐受的研究[J], 徐衍盛;肖序仁;李峰永2.腺病毒介导外源基因经动脉转染大鼠腹壁浅动脉岛状皮瓣的研究 [J], 李丹;乔群;王晓军;曾昂3.重组腺病毒介导的绿色荧光蛋白基因转染大鼠间充质干细胞的实验研究 [J], 付霞霏;何援利4.重组腺病毒介导肝细胞生长因子转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究 [J], 范慧慧;孙琰玮;李宝平5.鼠重组腺病毒介导的骨形成蛋白-9转染大鼠牙囊干细胞的实验研究 [J], 杨霞;李丛华;叶国;邓锋;罗进勇;周兰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

供肝转染含CD40Ig基因的腺病毒抑制大鼠肝移植急性排斥反应的研究

供肝转染含Ｃ４Ｉ基因的腺病毒抑制大鼠Ｄ０ｇ肝移植急性排斥反应的研究
方益锋张启瑜李传光吕和平沈志坚
摘要目的：通过腺病毒介导的Ｃ４Ｉ基因治疗，ＤＯｇ阻断Ｃ４／Ｄ０Ｄ０Ｃ４Ｌ共刺激途径诱导免疫耐受，讨Ｃ４Ｉ探Ｄ０ｇ
（）４１４７３：８－９．
『０Ｖｎｅ —ｏａｓｎＪＰｓｏｄｔｎｎ：ａｍｃａｉａｍａｅｖｒｔａ１］ｉｔｎＪｈｎｅ．ｏｔｎｉｏｉｇｃｉｅｈｎｃｎｕｅｔｌｈ
ｔｇｅｓｉｌｇｃａｄｉｒｇｒｂｏｏｉａｌｎｍｏｅｕａｃｒｉｐｏｅｔｖｒｓｏｓｓｔｌｃｌｒａｄｏｒｔｃｉｅｅｐｎｅｏ
［］ＶｎｎＪｈｎｅ，Ｊｎ，ＲｅｅＪ，ｅａＩａｍｔｎ８ｉｅ— ａｓＪｉｇＲｔｏｎａｅｖｓＣｔ１ｎｍａｏ，．ｆｌｉ
ｐｏｎａｒｉｆｍｍａｏｙｍｅｉｔｒａｄｍｙｃｒｉｌｉｃｅａｒｐｒｕｉｎｌｔｒｄａｏｓｎｏａｄａｓｈｍｉ—ｅｅｆｓｏ
ｖ／Ｌ；ｐｍ）Ｃ组１０只为实验组，肝脏冷保存前门静脉注射含有Ｃ４Ｉ基因病毒液ｌＬ７０ｐｍ）Ｄ０ｇ（ ×１ｖ／Ｌ。分别于术ｍ
后４７１、、０ｄ每组各处死２只受体取血标本及肝组织，病理学检查肝组织及免疫组织化学检测Ｃ４Ｄ０抗原的表达，

记忆性T细胞对移植耐受的影响

谢露等记忆性T细胞对移植耐受的影响第23期-2943-doi：10.3969/j.issn.l000484X.2020.23.025记忆性T细胞对移植耐受的影响①谢露②刘艳君盂余玉明(广东省人民医院，广东省医学科学院泌尿外科，广州510080)中图分类号R392.4文献标志码A文章编号1000-484X(2020)23-2943-04[摘要]记忆性T细胞(Tm)是获得性免疫反应的产物,是抵御病原体入侵的重要效应成分，能为机体提供长期免疫保护。

但对于移植患者来说，其存在可能对移植物存活产生负面影响。

最近有关Tm在产生机制、稳态调控、亚群异质性、细胞耗竭等方面的研究取得了重大进展，使以Tm为靶点的免疫治疗成为移植领域中一项具有挑战性的任务。

本文综述了Tm 的生物学特征及其对移植耐受的影响。

[关键词]记忆性T细胞;移植耐受;调节性T细胞Effects of memory T cells on transplant toleranceXIE Lu,LIU Yan-Jun,YU Yu-Ming.Department of Urology,Guangdong Provincial People r s Hospital,Guangdong Academy of Medical Sciences,Guangzhou510080,China[Abstract]Memory T cells(Tm)are product of acquired immune response but also are critical effect components against invading pathogens，providing long-term immune protection for body.But they can bring negative influence on transplant survival in transplant patients.Significant progress has been recently made on generation mechanisms，homeostasis regulation，heterogeneity，and cell exhaustion of Tm，making immunotherapy targeting of Tm a challenging task in transplantation.This article reviewed biological characteristics of Tm and explored their effects on transplant tolerance.[Key words]Memory T cell；Transplant tolerance；Regulatory T cell记忆性是适应性免疫应答的主要特点之一，指机体再次遇到初次致敏抗原后发生的再次免疫应答。

【浙江省自然科学基金】_免疫耐受_期刊发文热词逐年推荐_20140812

2014年序号 1 2 3 4
2014年科研热词类风湿关节炎 treg细胞 shla-g hla-g 推荐指数 1 1 1 1
2012年序号 1 2 3 4 5 6
科研热词脂肪肝肿瘤炎症枯否细胞免疫耐受 hla-g
推荐指数 1 1 1 1 1 1
2013年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9
科研热词腺苷a1 脑缺血缺血预处理穴位注射白血病电针受体 t细胞免疫 b7家族
推荐指数 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2008年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
科研热词质拉调节性t细胞表面抗原真核表达载体母胎免疫抑制信号基因多态性免疫应答乙型肝炎病毒 t淋巴细胞 cd40ig btla
推荐指数 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2009年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
科研热词重组腺病毒质粒构建调节性t细胞融合基因移植耐受父源性皮肤移植混合淋巴细胞反应母胎耐受树突状细胞抗原,cd40 小鼠存活时间妊娠乙肝e抗原乙型肝炎 pdc316质粒
推荐指数 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2010年序号 1 2 3 4
2011年科研热词细胞增殖细胞分化树突状细胞黑色素瘤细胞株非甾体类抗炎药霉酚酸酯调控机制自身免疫病自身免疫疾病自然流产肿瘤耐药综述文献研究进展生物制剂环孢素a 炎症细胞因子滋养层细胞治疗母胎界面核因子kappab 慢性关节炎性表达幼年特发性关节炎小鼠基因多态性吗替麦考酚酯化疗分子内毒素耐受免疫豁免免疫调控免疫耐受免疫传统药物人类白细胞抗原严重不良反应 t淋巴细胞,调节性 toll样受体 th 17细胞 irak1 hla-g foxp3 推荐指数 2 2 2 1 1 11 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

腺病毒介导CD40Ig基因在大鼠肝脏移植中的作用

腺病毒介导CD40Ig基因在大鼠肝脏移植中的作用孙运鹏;吴欢欢;廖毅;单云峰;杨文军;施红旗;张启瑜【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2012(41)11【摘要】目的探讨腺病毒介导CD40Ig基因(AdCD40Ig)在大鼠肝脏移植中的作用.方法随机将供受体大鼠分4组,A:同基因移植组,B:免疫排斥组,C:AdLacZ对照组,D:基因治疗组.观察大鼠存活时间,CD40Ig、细胞因子水平和移植肝病理情况.结果 D组存活时间长于B、C组(P ＜0.05);CD40Ig浓度于术后7天达高峰;D、A组IL-2、IFN-γ水平较B、C组明显降低(P＜0.05),D组IL-10较其他组明显增加(P＜0.05);B、C两组术后出现中、重度排斥反应,汇管区淋巴细胞浸润明显,D组汇管区轻度炎症,无明显血管损伤证据,病理评级较B、C组有统计学意义(P＜0.05).结论CD40Ig通过阻断CD40/CD40L通路,可延长移植肝存活时间,在受体内长期表达,减少汇管区淋巴细胞浸润,影响相关细胞因子的表达,对大鼠肝脏急性排斥反应有抑制作用.%Objective To investigate the role of CD40Ig mediated by adenovirus in rats liver transplantation. Methods The rats were divided into four groups at random. A was control group;B was Lewis-BN;C was AdLacZ control group; and D was AdCD40Igrngroup. The survival time, the level of CD40Ig, cytokines, stimulation index of the MLR and pathological changes were observed. Results The recipients in group D got a long - time survival (53. 25 -13. 38days, P <0. 05 vs. group B and group C). The level of CD40Ig was the highest on day 7 after transplantation. The IL - 2 and IFN - y in group A and D were lower than that in control groups ( P <0. 05) , but had the opposite result in IL - 10. The moderate to severe responses was observed in both group B and C,and the infiltrations of inflammatory cells in portal areas were also detected. In contrast, group D had a mild periportal inflammation and tissue injuries. Conclusion TheCD40Ig could be effectively transduced and expressed into the allograft for a longer time. It could not only reduce infiltrations of lymphocyte, intervene the expression of Th - associated cytokine, but also prolong the survival time of the liver allograft by blocking CD40/CD40L.【总页数】4页(P47-50)【作者】孙运鹏;吴欢欢;廖毅;单云峰;杨文军;施红旗;张启瑜【作者单位】325000 温州医学院附属第一医院肝胆外科;325000 温州医学院附属第一医院肝胆外科;325000 温州医学院附属第一医院肝胆外科;325000 温州医学院附属第一医院肝胆外科;325000 温州医学院附属第一医院肝胆外科;325000 温州医学院附属第一医院肝胆外科;325000 温州医学院附属第一医院肝胆外科【正文语种】中文【相关文献】1.腺病毒介导反义c-myc联合咖啡因在骨肉瘤化疗中增效作用的实验研究 [J], 解先宽;杨迪生;叶招明;陶惠民2.腺病毒介导的CD40Ig基因治疗诱导异基因大鼠心脏移植物的长期存活 [J], 金永柱;张庆殷;张海滨;谢蜀生3.腺病毒介导转铁蛋白受体报告基因在结直肠癌细胞MRI中的初步观察 [J], 续梦玲;王一帆;何花;郜发宝;郭玉林4.腺病毒介导CD40Ig基因转染联合骨髓细胞输注诱导大鼠心脏移植物耐受的研究[J], 徐衍盛;肖序仁;李峰永5.腺病毒介导神经生长因子和髓磷脂相关糖蛋白双基因在受损坐骨神经中的表达[J], 陈渝;邓忠良;陈诗谋;翁政;黄方因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

重组腺病毒载体AdOX40Ig的构建、表达及相关体外实验

重组腺病毒载体AdOX40Ig的构建、表达及相关体外实验陈志红;赵媛媛;张守亮;林建扬;魏法星;朱伟【期刊名称】《江苏大学学报（医学版）》【年(卷),期】2013(023)001【摘要】Objective:To construct and identify recombinant adenovirus vector containing the human OX40-Ig1G1 fusion gene,then to infect the HL-7702 liver cells to filter out the best infective dose and detect expression of OX40Ig,which lay a foundation for the immune therapy inhibitory after organ transplantation.Methods:Specific OX40 and hIgG1 Fc primers were designed according to GenBank,and subcloned into the pAdTrack-CMV shuttle plasmid after PCR and identification.Retransformed into BJ5183 competent cells with pAdeasy-1 by calcium chloride method.The recombinant plasmid was detected by PCR and DNA sequence analysis and was transfected into 293A cells.The recombinant adenovirus infected HL-7702 liver cells and filtered out the best infective dose.OX4OIg gene expression was detected by indirect immunofluorescence assay.OX40Ig protein expression was detected by ELISA.Results:pTOX40Ig and pAdOX40Ig were constructed successfully according to restriction endonuclease analysis.293A cells were transfected,and then the purified recombinant adenovirus infected HL-7702 liver cells.10 MOI was the best infective dose.OX40Ig effective expression was detected in HL-7702 liver cells.Conclusion:The recombinantadenovirus vector AdOX40Ig carrying the human OX40-IgG1 fusion gene was successfully constructed,and OX40Ig effective expression was found in HL-7702 liver cells in vitro.%目的:构建并鉴定含人OX40-IgG1融合基因的重组腺病毒载体,并感染人肝HL-7702细胞,筛选出最佳感染剂量并检测OX40Ig的表达情况,为进一步用于器官移植后的抗排斥治疗奠定基础.方法:根据基因库公布的人OX40和hlgGl Fc片断序列设计特定引物,通过聚合酶链反应扩增并鉴定后,酶切插入穿梭质粒pAdTrack-CMV中.随后与pAdeasy-1腺病毒质粒以氯化钙法共转化BJ5183感受态细胞,重组质粒经鉴定正确后,大量扩增为腺病毒载体.再经293A细胞包装、扩增并纯化后感染HL-7702肝细胞,筛选出最佳感染剂量,并采用间接免疫荧光法检测其中外源性OX40lg基因的表达,采用ELISA法测定肝HL-7702细胞上清中OX40Ig蛋白的含量.结果:转移质粒pTOX40Ig经酶切及测序鉴定正确.重组腺病毒质粒经酶切鉴定正确,并成功转染了293A细胞.得到的病毒液经纯化扩增后进一步感染肝HL-7702细胞,经筛选,10 MOI为最佳感染剂量,并且可以检测到OX40Ig目的基因及其蛋白的表达.结论:成功构建了重组腺病毒载体AdOX40Ig,并且可在肝细胞HL-7702中表达相应的目的基因及蛋白.【总页数】5页(P12-16)【作者】陈志红;赵媛媛;张守亮;林建扬;魏法星;朱伟【作者单位】江苏大学附属人民医院普外科,江苏镇江212002;江苏大学基础医学与医学技术学院,江苏镇江212013;江苏大学附属人民医院普外科,江苏镇江212002;江苏大学附属人民医院普外科,江苏镇江212002;江苏大学附属人民医院普外科,江苏镇江212002;江苏大学基础医学与医学技术学院,江苏镇江212013【正文语种】中文【中图分类】R967【相关文献】1.重组Ad-Cp-CDglyTK双自杀基因腺病毒载体构建及体外抑制鼻咽癌细胞的实验研究 [J], 王国慧;何军芳;樊卫;吴沛宏2.大鼠UT-B重组腺病毒载体的构建及体外转染Caco-2细胞后基因表达 [J], 张征;刘怡晟;蒋更如;陈凉;潘曙明3.以AdMax载体系统构建和制备肾癌相关抗原G250基因重组腺病毒表达载体[J], 齐桓4.构建人基质金属蛋白酶1基因重组腺病毒载体及体外降解Ⅲ型胶原的检测 [J], 杜超;蒋明德;曾维政;郑淑梅;5.构建人基质金属蛋白酶1基因重组腺病毒载体及体外降解Ⅲ型胶原的检测 [J], 杜超;蒋明德;曾维政;郑淑梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

重组腺病毒IκBaM预处理诱导大鼠脑缺血耐受的实验研究

重组腺病毒IκBaM预处理诱导大鼠脑缺血耐受的实验研究王岩;陈立杰;王锐【期刊名称】《心血管康复医学杂志》【年(卷),期】2008(017)004【摘要】目的:通过观察重组腺病毒IκBaM(recombination adenovirus expression of IκBaM,AdIκBaM)预处理对核转录因子κB(nuclear factor kappaB, NF-κB)表达的影响,探讨其在脑缺血耐受中的作用.方法:预先皮质注射AdIκBαM,特异地抑制NF-κB的激活,分为皮质注射重组AdIkBαM组(A组)、单纯局部缺血组(B组)、假手术组(C组).采用大鼠大脑中动脉线栓法制备局部脑缺血模型.应用红四氯氮唑(TTC)染色测定各组脑梗塞体积,免疫组化法观测NF-κB的表达情况.结果:(1)A组脑皮质梗塞体积百分比明显小于B组,差异非常显著(P<0.01).(2)C组细胞核中NF-κB p65的表达率明显小于A组、B组(P<0.01),A组脑皮质的p65阳性细胞率明显小于B组(P<0.01).结论:局灶脑缺血能使NF-κB p65活化并参与脑缺血损伤.AdIκBaM能特异抑制NF-κB表达,缩小脑组织梗塞体积,对缺血脑组织具有保护作用.NF-κB表达下调可能是局灶性脑缺血耐受产生的分子机制之一.【总页数】3页(P351-353)【作者】王岩;陈立杰;王锐【作者单位】哈尔滨医科大学附属第四医院神经内科,黑龙江,哈尔滨,150001;哈尔滨医科大学附属第二医院神经内科;哈尔滨医科大学附属第二医院神经内科【正文语种】中文【中图分类】Q952【相关文献】1.针灸预处理诱导脑缺血耐受机制的实验研究进展 [J], 郑仕平;韩为;2.全脑缺血预处理诱导大鼠海马缺血耐受的实验研究 [J], 李文斌;周爱民;李清君;陈晓玲3.脑缺血预处理诱导大鼠脑缺血耐受的研究 [J], 程道宾;王进;罗杰峰;曾丽;秦超4.短暂性脑缺血预处理诱导脑缺血耐受大鼠VEGF和Ang-1的表达变化 [J], 孙顺昌;王国峰;刘伯芹;董滨;赵玉芳;赵仁亮5.GLT-1参与大鼠脑缺血预处理诱导的脑缺血耐受 [J], 耿进霞;潘培森;李领香因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

重组腺病毒介导脂联素基因对 ApoE －／－小鼠动脉粥样硬化的作用机制

重组腺病毒介导脂联素基因对 ApoE －／－小鼠动脉粥样硬化的作用机制王雪梅;魏琴;张春;姜涛;段明军;杨毅宁【摘要】目的：研究腺病毒介导的脂联素（ APN）过表达对ApoE－／－小鼠动脉粥样硬化（ AS）的抑制作用和对NF-κB信号通路的影响。

方法将12周龄雄性ApoE－／－小鼠120只分为空载腺病毒对照组和脂联素干预组，每组60只。

在3个不同时间点（0天、4周、8周）处死小鼠收集组织。

全自动生化仪检测血脂指标；ELISA法测定血清APN浓度；油红O染色法检测小鼠主动脉血管组织的病理学变化；Masson染色法检测进展性斑块区的胶原含量和纤维帽厚度变化；免疫荧光法测定小鼠主动脉血管APN和NF-κB p65蛋白的表达；免疫印迹法检测主动脉血管APN、NF-κB p65核蛋白和炎症因子的表达。

结果 APN过表达抑制了ApoE－／－小鼠动脉粥样硬化斑块形成。

与对照组相比，脂联素干预组的动脉粥样硬化病理损伤面积减少（P＜0.01），动脉粥样硬化损伤程度降低（P＜0.001），总体油红O染色测定血管表面损伤百分比，4周时为（27.78±8.64）vs（33.02±5.18）％；8周时为（31.58±5.87）vs（52.16±5.79）％。

脂联素减缓了高脂饮食导致的小鼠血清中TC（P＜0.001）、TG（P＜0.001）、LDL-C（P＜0.001）的浓度增加，使血脂水平趋向正常化。

随着血清脂联素浓度增加，可以阻遏NF-κB通路的激活，抑制NF-κB p65核蛋白和炎症因子的表达。

结论脂联素通过抑制NF-κB通路激活来减轻AS的炎症反应。

%Objective Atherosclerosis ( AS) is a common pathological basis of cardiovascular diseases.Adiponec-tin ( APN) has been shown to have an anti-AS effect, and the underlying mechanisms, however, are largely unknown.Nu-clear transcription factorκB ( NF-κB) has also been regarded as a proatherogenic factor, mainlybecause of its regulation of a variety of the proinflammatory genes linked to AS.It is hypothesized that the inhibitory effects of APN on AS is through the inhibition of NF-κB signaling pathway.The aim of this study was to test the hypothesis via investigation and validation of the inhibitory effect of APN on AS in ApoE-/-mice, and to delineate the roles of NF-κB signaling pathway in modulating the APN effect on AS in vivo.Methods APN overexpression in ApoE-/-mice were mediated by transfecting adenovirus bearing a vector encoding for APN and enhanced green fluorescent protein ( Ad-APN-eGFP) .The AS in ApoE-/-mice was induced by feeding a high-fat diet.To validate the inhibitory effect of the adenovirus mediated APN overexpression on AS in the ApoE-/-mice.120 male ApoE-/-mice aged 12 weeks were randomly and evenly assigned into two groups (60 mice per group), and were fed with a high-fat diet to induce AS.At 0 day, 2, 4, and 6 weeks of high-fat diet feeding.The 2 groups of mice were injected intravenously in the tail with either 100 μL (3.0 ×108 p.f.u) of Ad-eGFP virus ( control group) or the same amount of Ad-APN-eGFP virus ( APN group) .Blood samples and aortic tissues were taken at 0 day, 4, and 8 weeks of high-fat diet feeding.For the blood samples, FABA was used to analyze the concentrations of blood lipids and ELIZA was used to test the concentrations of serum APN.For the aortic tissues, oil red O staining was used to detect the surface lesion percentage.Masson staining was used to evaluate the collagen content and fibrous cap thickness of the plaque area.Immunofluorescence method was used to detect APN and NF-κB p65 expression.Western blot was used to de-tect the expressions ofAPN,nuclear NF-κB p65 and the downstream factors of NF-κB pathway.Results APN inhibited the formation of atherosclerotic plaque in ApoE-/-mice.The lesion formation in aortic sinus was significantly inhibited ( P<0.01).Compared with the control group, the oil red O staining showed that the surface area ratio of atherosclerotic le-sions was decreased significantly in the Ad-APN group ( P<0.001 ): the percentage of surface lesions in the 4 weeks groups was 27.78 ±8.64 vs.33.02 ±5.18 (%);the 8 weeks groups was 31.58 ±5.87 vs.52.16 ±5.79 (%) .As the serum APN was increased,the concentration of TC, TG and LDL-C were significantly decreased( P<0.001 for all) , and the growth of body weight was slowed down(P<0.05).APN effectively inhibited the expression of NF-κB nuclear protein p65 and inflammatory factors.Conclusions Adiponectin reduces the inflammatory reactions in atherosclerosis through in-hibiting the NF-κB pathway.【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】2016(024)002【总页数】9页(P175-183)【关键词】脂联素;动脉粥样硬化;ApoE-/-小鼠;炎症;NF-κB信号通路【作者】王雪梅;魏琴;张春;姜涛;段明军;杨毅宁【作者单位】新疆医学动物模型研究重点实验室，新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院，乌鲁木齐830011;新疆医学动物模型研究重点实验室，新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院，乌鲁木齐830011;新疆医学动物模型研究重点实验室，新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院，乌鲁木齐830011;新疆医学动物模型研究重点实验室，新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院，乌鲁木齐830011;新疆医学动物模型研究重点实验室，新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院，乌鲁木齐830011;新疆医学动物模型研究重点实验室，新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院，乌鲁木齐830011【正文语种】中文【中图分类】Q95-33目前普遍认可的炎症学说，认为动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）的发生和发展是一个慢性炎症过程，而AS性疾病是一种全身系统性的血管病变，也是多种心血管疾病发生发展的病理生理基础［1］。

静脉注射T-bet重组腺病毒对小鼠过敏性气道炎症的抑制作用研究

静脉注射T-bet重组腺病毒对小鼠过敏性气道炎症的抑制作用研究陈吉泉;修清玉【期刊名称】《解放军医学杂志》【年(卷),期】2007(32)5【摘要】目的探讨静脉应用T-bet重组腺病毒(AdT-bet)对哮喘小鼠过敏性气道炎症的作用.方法 48只C57BL/6小鼠随机均分为AdT-bet处理组(A组)、AdLacZ处理组(B组)、PBS处理组(C组)和正常对照组(D组),每组12只.A、B、C 组采用卵蛋白(OVA)和氢氧化铝建立哮喘模型,于第19天激发前分别静脉注射50μl AdT-bet(108pfu)、AdLacZ、PBS.第26天测定肺泡灌洗液(BALF)中的细胞组分和IL-4、IL-5、IFNγ浓度,测定血浆IgE水平,观察肺组织病理学变化及GATA-3表达.结果 A组BALF中的嗜酸性细胞(EOS)、IL-4、IL-5分别为0.6%±0.2%、6.8±3.7pg/ml、12.5±4.8pg/ml,明显低于B组(分别为20.9%±6.8%、92.4±23.0pg/ml、56.5±11.8pg/ml)和C组(分别为20.8%±6.7%、90.4±22.8pg/ml、57.3±12.2pg/ml)(P＜0.01),而A组的IFNγ水平(720.0±50.0pg/ml)则明显高于B组(13.3±3.6pg/ml)和C组(12.3±5.0pg/ml).A组血浆中总IgE(38.8±9.5μg/ml)及OVA特异性IgE(19.2±4.8U/ml)水平显著低于B组(分别为66.9±10.2μg/ml、35.2±7.8U/ml)和C组(分别为68.6±9.6μg/ml、36.1±8.5U/ml)(P＜0.01).肺组织病理学观察提示B组和C组GATA-3表达明显增加,支气管平滑肌肥厚,黏膜充血、水肿,炎性细胞浸润,管腔内可见黏液栓,而A组GATA-3的表达明显减少,炎症性反应明显减轻.结论静脉应用AdT-bet可抑制哮喘鼠IL-4、IL-5的合成,增强IFNγ的表达,抑制EOS在气道内的炎性浸润及血浆中IgE水平,其机制可能与AdT-bet增强Th1型反应,抑制GATA-3表达,从而抑制Th2型免疫反应有关.【总页数】3页(P479-481)【作者】陈吉泉;修清玉【作者单位】200003,上海,第二军医大学长征医院呼吸内科;200003,上海,第二军医大学长征医院呼吸内科【正文语种】中文【中图分类】R562.25【相关文献】1.携带凋亡素基因的重组腺病毒载体对小鼠Hepa1-6肝细胞癌模型的生长抑制作用研究 [J], 刘清;罗永胜;赖卓胜;张振书;黄丽婷2.清肺止哮汤对哮喘小鼠气道炎症抑制作用的实验研究 [J], 张弘;蔡宛如;沈华浩3.重组Runx3腺病毒联合顺铂对小鼠肝癌移植瘤生长抑制作用研究 [J], 张静;任松森;许光华;张海元4.补肾平喘方对过敏性哮喘小鼠气道炎症改善效果的实验研究 [J], 袁江;程申;李岚5.重组屋尘螨2类变应原疫苗免疫治疗小鼠过敏性气道炎症的研究 [J], 喻海琼;刘志刚;于琨瑛;许卓谦;丘劲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

表达人CD40配体的重组腺病毒载体的构建

表达人CD40配体的重组腺病毒载体的构建吴红兵;田聆;文艳君;刘玉梅;阚兵;杜小波;徐健蓉;魏于全【期刊名称】《华西口腔医学杂志》【年(卷),期】2005(23)6【摘要】目的构建含有hCD40L基因的重组腺病毒载体,为其在动物模型体内表达和肿瘤基因治疗提供基础.方法用XhoⅠ、SwaⅠ双酶切质粒pORF-hCD40L,回收1 900bp基因片段并定向克隆插入穿梭质粒pShuttle中XhoⅠ、EcoRV双酶切位点,得到重组质粒pShuttle-hCD40L.经PmeI酶切与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化BJ5183细菌,同源重组后用选择培养基筛选阳性克隆,提取质粒PacI酶切线性化后用脂质体介导转染293细胞.酶切分析和PCR鉴定重组的腺病毒.结果酶切分析、KR验证表明,hCD40L基因成功克隆到腺病毒pAdEasy-1载体中.结论成功构建表达hCD40L基因的重组腺病毒载体,为进一步研究其在哺乳动物内表达及基因治疗提供了基础.【总页数】3页(P534-536)【作者】吴红兵;田聆;文艳君;刘玉梅;阚兵;杜小波;徐健蓉;魏于全【作者单位】四川大学华西口腔医院,放射科,四川,成都,610041;四川大学华西医院,生物治疗国家重点实验室与肿瘤中心,四川,成都,610041;四川大学华西医院,生物治疗国家重点实验室与肿瘤中心,四川,成都,610041;四川大学华西附二院,产科,四川,成都,610041;四川大学华西医院,生物治疗国家重点实验室与肿瘤中心,四川,成都,610041;四川大学华西医院,生物治疗国家重点实验室与肿瘤中心,四川,成都,610041;四川大学华西医院,生物治疗国家重点实验室与肿瘤中心,四川,成都,610041;四川大学华西医院,生物治疗国家重点实验室与肿瘤中心,四川,成都,610041【正文语种】中文【中图分类】R739.8【相关文献】1.重组人KNDC1腺病毒表达载体的构建及其促HUVEC衰老作用 [J], 李开济;郝晓方;章广玲;魏静波;魏洁;林雅军;甄永占2.人HSP75基因重组腺病毒载体构建及在C17.2神经干细胞的表达 [J], 王艳;陈庆状;蒋德旗;李明星;贾思远;朱宁;王勇3.人Nanog基因重组腺病毒载体的构建及其在人脐带间充质干细胞中的表达 [J], 孙靖;徐哲;钱茜;严家来;陈圆;张徐;高硕;钱晖;许文荣4.人LIM矿化蛋白1基因腺病毒重组表达载体构建及在犬骨髓间充质干细胞中的表达 [J], 蒲超;倪卫东;高仕长;邱宇5.重组人磷脂酶D1/腺病毒表达载体的构建与表达 [J], 韩黎;吴桂芝;朱世俊;陈运奇;陈世平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

腺病毒的几种冻干技术—李战

3. 冻干曲线
➢将疫苗液于-35～-40℃预冷冻3～4h ➢在搁板温度-32℃，真空度10Pa下，干燥9h ➢待制品完全成型后，使搁板温度逐渐升至32℃ ➢真空度10Pa下再干燥3h
4. 残余水分测定 5. 病毒滴度测定 6. 热稳定性试验 7. 冻干重组腺病毒疫苗的抗原性研究
➢感染293细胞，收毒 ➢样品经SDS-PAGE电泳，转膜
4. 冻干重组人三突变型HIF-1α腺病毒的DNA提取和鉴定
冻干复溶后，采用北京天为时代公司病毒基因组提取试剂盒提取病毒 DNA，通过PCR和基因测序鉴定病毒。
5. 病毒滴度测定 6. 热稳定性试验
以A组保护剂制备的冻干产品进行37℃加速热稳定性试验，定期检测病毒滴度。对照组为液体腺病毒。
结果及分析：
外观
样品
测共晶点
加赋形剂加稳定剂
冻干
样品
活性测定水分测定
确定工艺
留样观察稳定性考察加速试验
冻干样品
图1.冻干工艺确定流程图
处方修改重复试验
2.1 预冻 ➢产品必须全部冻结后才能在真空下进行升华，否则真空干燥时会造成收缩、变形以及冻干制品表面硬化现象。 ➢产品在升华开始时必须要冷到共晶点以下的温度，使冻干产品真正全部冻结。预冻成功的关键： ①共晶点测定准确 ②合适的保护剂配方 ③最佳预冻速度 ④适宜的冻结时间
➢低温下进行，避免药物受热分解，特别适用热敏性的物质 ➢低压下干燥，基本隔绝了空气，药品不易氧化变质，缺氧环境能抑制某些细菌的活性 ➢药品可形成“骨架”，能较好地保存其原料的组织结构和外观形态 ➢复水性好，冻干药品可迅速吸水还原成冻干前的状态 ➢脱水彻底，适合长途运输和长期保存
➢机械效应：温应力、冻结应力、干燥应力 ➢溶质效应 ➢电解质浓度增加，pH 值改变 ➢病毒结构改变或核酸受损

用限制性稀释法分析肾移植患者对供者细胞的免疫耐受状态

用限制性稀释法分析肾移植患者对供者细胞的免疫耐受状态翁玲;林丛【期刊名称】《中国医学科学院学报》【年(卷),期】2000(22)6【摘要】目的：分析肾移植患者ＣＤ４＾＋辅助性Ｔ细胞（Ｔｈ）对供者和对照者的ＨＬＡ抗原的应答状态。

方法：采集１６位长期（３￣１５年）携带功能良好移植肾的患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ），用限制性稀释法（ＬＤＡ）对ＰＢＭＣ中能够识别供者或对照者细胞的Ｔｈ细胞的比率（Ｔｈ－ｐ）进行分析。

结果：８例患者的ＰＢＭＣ对供者细胞处于明显的低反应状态，即已形成对供者ＨＬＡ特异的免疫耐受。

另８例患者则没有观察到同样的现象。

但是这８例患者ＰＢＭＣ中对供者细胞特异的Ｔｈ细胞对ＣＤ４抗体十分敏感。

结论：有些长期携带功能良好移植肾的患者已经获得对供者细胞特异的免疫耐受状态。

没有出现供者特异的低反应状态的患者，其Ｔ细胞受体对供者ＨＬＡ的亲合力偏低。

【总页数】1页(P505)【作者】翁玲;林丛【作者单位】北京大学基础医学院免疫学系,北京;北京大学基础医学院免疫学系,北京【正文语种】中文【中图分类】R699.2【相关文献】1.供者末成熟树突状细胞联合西罗莫司诱导大鼠皮肤移植物免疫耐受研究 [J], 张子茜;杨阳;夏炜;郭树忠2.熊果酸联合供者特异性淋巴细胞输注诱导小鼠免疫耐受 [J], 刘勇;李尧;黄霞;李超;薛承彪;胡昕鹏;杨涛;周平3.CTLA4Ig基因修饰骨髓基质细胞诱导HLA单倍型供者T细胞的免疫耐受 [J], 王吉刚;周凡;刘彦琴;白颖;刘景华;张海婷;李敏燕4.CTLA4Ig基因修饰骨髓基质细胞诱导HLA单倍型供者T细胞的免疫耐受 [J], 王吉刚;周凡;刘彦琴;白颖;刘景华;张海婷;李敏燕;5.重组人粒细胞集落刺激因子调节IL-27和IRF8表达诱导供受者免疫耐受机制的初步研究 [J], 卢德敏;邓家德;陈钊;余碧珍;李庆山;凌艳英;杜庆华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

可抑制I型胶原表达的siRNA重组腺病毒的构建

可抑制I型胶原表达的siRNA重组腺病毒的构建姚咏嫦;周嘉安;陈晓峰【期刊名称】《华南理工大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(000)012【摘要】As compared with the stem cells from other sources, synovium-derived mesenchymal stem cells (SMSCs)are of higher proliferative and chondrogenic ability.However,SMSCs express Collagen I inherently, which may impair the overall quality of the regenerated counterpart.In order to solve this problem,first,shRNA against Collagen I was designed and constructed in the adenoviral vector.Next,linear recombinant adenoviral vector was generated by the digestion with enzyme PacI and was used to transfect 293 cells for package.Then,the titration of recombinant adenovirus was determined,and the corresponding amplification and purification were performed to obtain recombinant adenovirus with high titration.Moreover,fibroblasts and osteoblasts were respectively infected by the recombinant adenovirus,and fluorescence microscopy was adopted to detect the transfection efficiency.Fi-nally,real-time quantitative PCR experiments were carried out to verify the targeting effect ofsiRNA.Experimental results show that the packaged recombinant adenoviruses are of high transfection efficiency and can successfully en-code siRNA against Collagen I.%滑膜间质干细胞（SMSCs）与其他来源的间质干细胞相比，具有更强的生长能力和更大的软骨分化潜力。

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

地表达ＣＤ４０ｌｇ融合分子。２．以ＡｄＣＤ４０Ｉｇ联合供体静息Ｂ细胞预处理策
略能在小鼠皮肤移植模型中成功诱导建立特异性移植免疫，显著延长后
续进入的供体来源皮肤移植物存活时间，提示这是一种具有临床应用前
景，值得深入研究的免疫耐受诱导策略。
【关键词】ＡｄＣＤ４０Ｉｚ静息Ｂ细胞ＹｌｉＦ｝ｖｉｆｆｒ－ｌ
Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｓｋｉｎａｌｌｏｇｒａｆｔｔｏｌｅｒａｎｃｅｉｎｍｉｃｅｂｙ
ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｄｅｎｏｖｉｒｕｓＡｄＣＤ４０Ｉｇｗｉｔｈｄｏｎｏｒｒｅｓｔｉｎｇ
组病毒，荧光计数测定重组病毒滴度，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳和ＥＬＩＳＡ法检测
鉴定培养细胞的上清中ＣＤ４０Ｉｇ蛋白表达。建立小鼠皮肤移植模型，设定空白对照（１组）和第三方空白对照（２组），以ＡｄＣＤ４０１ｇ（３组）、
Ｃ５７ＢＬ／６静息Ｂ细胞（４组）、ＡｄＣＤ４０ｌｇ联合供体静息Ｂ细胞（５组）
及第三方实验对照（６组）等不同组合在皮肤移植前１周预先处理受体
ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，观察皮肤移植物存活情况。双抗夹心法ＥＬＩＳＡ测定
ＡｄＣＤ４０１ｇ处理后小鼠血清ＣＤ４０Ｉｇ水平。
（Ｐ＜０．０１）；而第１组、第２组、第３组、第４组之间无显著性差异。
表明仅有ＡｄＣＤ４０Ｉｇ联合供体静息Ｂ细胞预处理可以观察到供体特异性
耐受现象，后续进入的供体来源皮肤移植物因之存活时间显著延长，而第三方来源的皮肤移植物却不能受到这种特异性耐受的保护。单独使用
植物存活时间的作用。
方法：自ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾脏提取总ＲＮＡ，以两对引物分别ＲＴＰＣＲ
克隆小鼠ＣＤ４０胞外区基因片段和小鼠ＩｇＧ２ａＦ。段基因片段，并通过两对引物之间特殊设计的１７ｂｐ重叠区域，以重叠延伸法ＰＣＲ扩增出
静息淋巴细胞或者ＡｄＣＤ４０Ｉｇ，均不能诱导建立耐受而延长皮肤移植物
存活时间。
结论：１．成功构建携带小鼠ＣＤ４０ｌｇ基因的重组腺病毒ＡｄＣＤ４０１ｇ，病毒滴度可达５Ｘ１０９ｅｆｕ／ｍｌ，体外、体内实验证实该载体能够稳定有效
培养上清经ＥＬＩＳＡ可以检测到ＣＤ４０ｌｇ融合蛋白表达。经小鼠尾静脉注
入ＡｄＣＤ４０Ｉｇ１Ｘ１０９ｅｆｕ后，于第７天血清ＣＤ４０Ｉｇ水平可达１３０．６１１１．２
ｕｇ／ｍｌ的峰值，第８周后血清ＣＤ４０ｌｇ内仍有一定水平。皮肤移植实验
结果：重叠延伸法ＰＣＲ扩增出的１２５７ｂｐ片段经过测序证实为小鼠
ＣＤ４０Ｉｇ融合基因。构建的重组腺病毒ＡｄＣＤ４０ｌｇ滴度达５Ｘ１０９ｅｆｕ／ｍ１，
其ＤＮＡ可经ＰＣＲ扩增出ＣＤ４０ｌｇ融合基因片段，病毒感染的２９３细胞
Ｂｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ
Ａｂｓｔｒａｃｔ
［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｉｃａｃｙｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｄｅｎｏｖｉｒｕｓＡｄＣＤ４０１ｇｗｉｔｈｄｏｎｏｒｒｅｓｔｉｎｇＢｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｉｎｐｒｏｌｏｎｇｉｎｇｔｈｅ
重组腺病毒ＡｄＣＤ４０ｌｇ联合供体静息Ｂ淋巴
细胞预处理诱导小鼠皮肤移植耐受的研究
中文摘要
目的：研究重组腺病毒ＡｄＣＤ４０１ｇ联合供体静息Ｂ淋巴细胞预处理
策略在小鼠诱导建立特异性移植耐受，延长后续进入的供体来源皮肤移
结果：各组ＭＳＴ（ｄ）分别为：１０．３３土０．４６，９．８３士０．５３，１０．８３士０．２５，１０．００士３．２４，６３．５０士１０．４５和１１．５０士３．３９。统计处理显示：第５组皮肤移植物ＭＳＴ明显延长，与第３组、第４组和第６组相比具有显著性差异
ＣＤ４０ｌｇ融合基因，后者克隆入ｐＭＤ１８－Ｔ进行测序。将测序证实的ＣＤ４０Ｉｇ基因克隆入腺病毒载体ＡｄＥａｓｙ系统的穿梭质粒ｐＡｄＴｒａｃｋ－ＣＭＶ，再与其
骨架质粒ｐＡｄＥａｓｙ－１在大肠杆菌ＢＪ５１８３中同源重组，经过２９３细胞包装生成携带小鼠ＣＤ４０ｌｇ基因的重组腺病毒载体ＡｄＣＤ４０ＩｇｅＰＣＲ鉴定重