0922粪便核酸提取试剂盒说明书

磁珠法粪便核酸提取试剂盒（常规版）

Faeces DNA Extraction Kit (Regular Version)

【目录号】FDE-5005、FDE-5030

【运输条件】2~25℃；

【保存条件】磁珠分散液、裂解液②2~8℃，其它组分室温；

【试剂盒组成】

【注意事项】

1. 在使用本试剂盒钱，请用户自备80%乙醇；

2. 使用前请检查裂解液①、②是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将裂解液置

于378℃水浴重新溶解；

3. 本操作指南经本公司反复验证，使用前请仔细阅读，并且按照操作指南的建议操作。

磁珠法·自动化：为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案

【产品简介】

本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统，从各种固态或液态粪便样品中分离纯化高质量基因组DNA。特殊技术包埋的磁珠在特定条件下对核酸具有极强的

亲和力，而当条件改变时，磁珠会释放吸附的核酸，从而达到快速分离纯化核酸的目的。

提取的基因组DNA片段打，纯度高，质量稳定可靠，尤其适合高通量工作站的自动化提取，特别是本公司各型号的自动化核酸提取仪。

本试剂盒纯化的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、荧光定量PCR、文库构建、Sputhem杂交、芯片检测和高通量测序等实验。

【试剂盒说明】

1. 磁珠分散液严禁反复冻融和离心，磁珠使用前务必充分混匀，可涡旋振荡10秒左右；

2. 实验中使用我先混合仪的目的是为使磁珠能够充分吸附核酸、将磁珠表面的杂质充分去

除或核酸从磁珠表面充分洗脱；

3. 使用前检查裂解液①、②是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将裂解①、②

于37℃水浴重新溶解。

【自备仪器、耗材和试剂】

仪器自动版

涡旋混合仪、高速离心机、水浴锅或金属浴、96孔方孔圆底板、无水乙醇、异丙醇、英芮诚ETP-300核酸提取仪。

手动版

涡旋混合仪、高速离心机、金属浴或水浴锅；EP管、EP管用磁力架、无水乙醇、异丙醇。

【仪器自动版操作步骤】

以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，可同步完成32个样本的提取工作。

1．上样准备

参照下表用量向96孔板中分别加入相应试剂。

磁珠法粪便核酸提取试剂盒（常规版）

2．上机样品的获得

A.固体样品：称取200mg左右的粪便只EP管中，分别加入1mL的裂解液①、20μL

蛋白酶K，涡旋振荡1min（须将管底的粪便振荡起来）后，58℃温浴30min（每隔5min

颠倒混匀一次）。

B.液态样品：吸取200μL左右的粪便至EP管中，分别加入200μL裂解液①、20μL

蛋白酶K，涡旋振荡1min（须将管底的粪便振荡起来）后，58℃温浴15min（每隔5min

颠倒混匀一次）。

注：如需去除RNA，请额外加入RNase A（100mg/mL）5μL。

1）裂解完毕的样本，室温12000rpm，离心5min，转移400μL上清至新的EP管内。

2）向装有上清的EP管内加入250μL裂解液②，上下颠倒5次，混合均匀，12000rpm，

离心5min，保留上清，待用。

3．上机提取

1）从第2步裂解完毕的样本中吸取450μL上清至准备好的96孔板的第2/8列；

2）将96孔版样品板放入ETP-300型核酸提取仪中，并插入磁棒套；

3）打开仪器操作程序，调用“粪便核酸提取”程序，单击“运行”执行提取程序。

4．核酸转移

程序运行完毕，取下96孔板，将洗脱液转移至干净的EP管或者PCR板中，做好标记，

提取过程完成，此时可以弃去96孔板。

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【手动版操作步骤】

1．准备

真空干燥箱稳定到45℃；

2．样本的裂解

参考仪器操作步骤2进行。

3．结合

向装有上清的EP管内加入分别加入等体积的异丙醇和75μL磁珠悬浮液，颠倒混匀；

将EP管置于涡旋混合仪上高速振荡10min，使磁珠与溶液充分混匀，确保磁珠与核酸完全结合，之后静止2min。

4．磁性分离

将EP管置于磁力架上，静止1min，待磁珠吸附完毕后，弃净澄清液，下同。

5．清洗

将EP管从磁力架上取下，加入600μL清洗液1，置涡旋混合仪高速振荡1min，使磁珠分散均匀，取下EP管并置于磁力架上静止30s，弃净澄清液。

使用700μL80%乙醇，参照上述步骤操作2次。

6．除醇

将除尽上清液后的EP管置于磁力架上，连同磁力架一起放入45℃真空干燥箱中，干燥约8min至无明显乙醇味。

注：若无真空干燥箱，亦可在保持通风橱通风或电风扇的状态下静置约10min，具体时间根据气温变化可能需要适当调整，以磁珠干燥完全为原则。

7．洗脱

取出EP管，加入100μL洗脱液（或去离子水），移液枪吹打使磁珠与洗脱液充分混匀，将EP管于65℃加热洗脱5min，然后涡旋洗脱2min，确保磁珠与核酸洗脱完全。

注：洗脱液要求≥50μL，100~200μL较好，吸入也较少时会影响回收率。

8．核酸转移

将EP管置于磁力架上静置30s至磁珠吸附完全，用移液枪将洗脱液转移至另一干净EP 管中，操作过程完成，此时可以弃去磁珠。

（1702修订版）

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