Trizol_法提取细菌RNA的实验步骤

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Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)

Trizoｌ法使用步骤一、分离纯化得基本原理研究基因得表达与调控时常常要从组织与细胞中分离与纯化ＲＮA。

ＲNA质量得高低常常影响cＤNA库,ＲT-PCＲ与Ｎorthern Ｂloｔ等分子生物学实验得成败。

Ｔrizol就是一种新型总ＲNＡ抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出得核酸酶。

二、用户需自备得试剂与材料无水乙醇、氯仿、Ｇlycｏgen(可能需要)、 1、５ｍｌ Eppeｎｄｏrf管(ＲNase-frｅe)、 Tips(ＲNase－free)三、准备工作RNａse酶非常稳定,就是导致ＲNＡ降解最主要得物质。

它在一些极端得条件可以暂时失活,但限制因素去除后有迅速复性。

用常规得高温高压蒸气灭菌方法与蛋白抑制剂都不能就是ＲＮase完全失活。

它广泛存在于人得皮肤上,因此,在与RＮA制备有关得分子生物学实验时,必须戴手套。

RNase得又一污染源就是取液器,根据取液器制造商得要求对取液器进行处理。

一般情况下采用用ＤEPC（焦炭酸二磷脂,一种ＲＮａse抑制剂)配制得7０％乙醇擦洗取液器得内部与外部,基本达到要求。

取ＲＮａｓｅ－free得物品时必须戴手套。

1、料制品得处理尽可能使用无菌,一次性塑料制品，已标明RNasｅ-Fｒee 得塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。

对于国产塑料制品,原则上都必须处理方可使用。

处理步骤如下:1)在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEＰＣ使DEＰC得终浓度为０、1%。

注意:DEP Ｃ为剧毒物,活性很强，小心在通风柜中使用。

2)处理得塑料制品放入一个可以高温灭菌得容器中,注入ＤEPC水溶液,使塑料制品得所有部分都浸泡到溶液中。

3)在通风柜中室温处理过夜。

4)将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中,用铝箔封住含已ＤEＰＣ水处理过得塑料制品得烧杯,高温高压蒸气灭菌至少30分钟。

5）烘箱用合适得温度烘拷至干燥。

置于干净处备用。

2、璃玻与金属物品250°C烘烤3小时以上。

trizol组织提取rna步骤

trizol组织提取rna步骤Trizol组织提取RNA步骤引言：RNA是一种重要的生物大分子，它在生物体内起着基因表达和调控的重要作用。

为了研究RNA的结构和功能，科学家们经过不断的探索和研究，发展出了一系列有效的RNA提取方法。

其中，Trizol 组织提取RNA方法是目前应用较广泛的一种方法，本文将详细介绍Trizol组织提取RNA的步骤。

步骤一：样品准备需要准备好待提取RNA的组织样品。

样品可以是动植物组织，也可以是细胞。

样品应该新鲜、完整，并且需要在提取RNA前保存在液氮中，以保持RNA的完整性。

步骤二：组织破碎将样品从液氮中取出，放入细胞破碎液中。

细胞破碎液可以是Trizol试剂，也可以是其他适用的细胞破碎液。

然后，使用离心机将样品离心，以破碎组织细胞，并释放RNA。

步骤三：加入氯仿将破碎的组织样品转移到离心管中，加入适量的氯仿。

氯仿可以与Trizol试剂中的异丙醇和酚形成两相体系，用于分离RNA。

步骤四：离心分离将离心管盖紧，并放入离心机中进行高速离心。

离心的目的是将样品中的RNA分离到上清液中，底物中会残留DNA和蛋白质。

步骤五：收集上清液将离心管从离心机中取出，小心地将上清液转移到一个新的离心管中。

上清液中含有RNA，可以继续进行后续的提取。

步骤六：沉淀RNA向上清液中加入等体积的异丙醇，使其浓度达到70%。

然后，轻轻地摇晃离心管，使RNA与异丙醇充分混合。

接下来，将混合液放置在-20°C的冰箱中，使RNA沉淀。

步骤七：离心沉淀将离心管放入高速离心机中，进行高速离心。

离心的目的是使RNA 沉淀到离心管底部。

步骤八：去除上清液小心地将上清液倒出，注意不要损坏沉淀的RNA。

可以使用70%乙醇进行洗涤，以去除残留的盐和污染物。

步骤九：干燥RNA将离心管中的RNA沉淀放置在室温下，使其自然干燥。

注意不要过度干燥，以免影响RNA的质量。

步骤十：溶解RNA在干燥的RNA沉淀中加入适量的去离子水或RNase-free水，轻轻摇晃或振荡离心管，使RNA溶解。

RNA提取步骤trizol法

Trizol-RNA提取步骤
1；取1.5ml去核酸酶EP管，分别加入250ul样品和750Trizol裂解液剧烈震荡30S，室温静置10min。

；
2；直接往EP管中再加入200ul三氯甲烷（氯仿），剧烈震荡混匀30S 直至无分相出现，室温静置5min。

3；把样品放入事先预冷的离心机中，12000rpm,4℃离心15Min。

小心将样品取出。

4；另取干净的去核酸酶EP管，分别往EP管中加入600ul异丙醇。

将离心完后的样品管中的上清液（约600ul左右）小心转移到装有异丙醇的管子中并轻轻上下颠倒混匀，4℃静置10min.（注意：吸取上清液时严禁吸到中间蛋白层或下层液。

）
5；将样品放入预冷的离心机中12000rpm,4℃离心10Min.小心把样品管取出并轻轻倒掉上清液。

6；往样品管中加入1ml 75%乙醇溶液（DEPC水配制）。

轻轻上下颠倒几次，12000rpm,4℃离心5Min。

小心把样品管取出并轻轻倒掉上清液。

7；把样品放入抽干机中60℃抽干5-7分钟。

（或者尽量把乙醇去除干净后室温晾干10-15min直至乙醇挥发干净）。

此步骤勿关闭管盖。

8；将抽干好的样品取出，并根据需要加入20-50ul DEPC水（或Elution Buffer）溶解沉淀物。

此溶液即为总RNA溶液。

Trizol法提取RNA步骤

1、细胞或组织加Trizol后，室温放置5min，使其充分裂解。

注：此时可放入-70℃长期保持。

2、按200ul氯仿ml Trizol加入氯仿，振荡混匀后冰上放置15min。

注：禁用漩涡振荡器，以免基因组DNA断裂。

3、4℃16,000g离心15min。

4、吸取上层水相，至另一离心管中。

注：千万不要吸取中间界面；若同时提取DNA和蛋白质，则保留下层酚相存于4℃冰箱,若只提RNA，则弃下
层酚相。

5、按0.5ml异丙醇ml Trizol 加入异丙醇混匀，冰上放置5-10min。

6、4℃12,000g离心10min，弃上清，RNA沉于管底。

7、按1ml 75%乙醇ml Trizol加入75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。

8、4℃75000g离心5min，尽量弃上清。

重复洗一次。

9、室温晾干或真空干燥5-10min。

注：RNA样品不要过于干燥，否则很难溶解。

10、可用30ul H2O，TE buffer溶解RNA样品。

Trizol法提取细菌总RNA

实验三Trizol法提取细菌总RNA一、实验原理Trizol要紧物质是异硫氰酸胍，它能够破坏细胞使RNA释放出来的同时，爱惜RNA的完整性。

加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。

RNA存在于水样层中。

搜集上面的的水样层后，RNA 能够通过异丙醇沉淀来还原。

不管是人、动物、植物仍是细菌组织，Trizol法对少量的组织(50-100 mg)和细胞(5×106)和大量的组织(≧1 g)和细胞(>107)均有较好的分离成效。

Trizol试剂操作上的简单性许诺同时处置多个的样品。

所有的操作能够在一小时内完成。

Trizol抽提的总RNA 能够幸免DNA和蛋白的污染。

二、要紧试剂和器材Trizol 溶液氯仿异丙醇 75%乙醇 0.1% DEPC水超净工作台 2.0 mL离心管（无Rnase）移液枪紫外分光光度计石英比色皿泳槽和模具电泳仪凝胶成像系统大肠杆菌三、实验步骤（一）. 采纳 Trizol 溶液提取细菌的总 RNA1. 挑取大肠杆菌菌单菌落，培育至稳按期，取菌液2.0 mL 于2.0 mL离心管离心得菌体；二、每管加入 1 mL Trizol 溶液，盖紧管盖，猛烈振荡15 s，室温静置5 min 4℃，12000 g，离心 10 min；取上清转入(约 1 mL)新的 2.0 m L离心管中；3、每管加入 0.2 mL 的氯仿(0.2 体积 Trizol)，盖紧盖，猛烈振荡 15 s；室温静置 3 min；4℃, 12000 g, 离心 10 min；警惕吸取上层水相，转入另一新的 2.0mL 离心管，测量其体积；（加氯仿时应充分震荡使其充分乳化。

）4、加入1倍体积的氯仿，盖紧盖，猛烈振荡 15 s；室温静置 3 min；4℃，12000 g，离心 10 min；警惕吸取上层水相，转入另一已编号新的 2.0mL 离心管；五、加入 0.5 mL 的异丙醇(0.5 体积 Trizol)，轻轻倒置混匀；室温，静置 10 min；4℃，12000 g，离心 10 min，RNA 沉于管底；警惕吸去上清；六、加1 mL75%的乙醇(预冷)，并轻柔倒置，洗涤沉淀；4℃，7500 g，离心 5 min；警惕弃上清，微离，吸去剩余乙醇，室温干躁 10 min；7、各管用 30μL DEPC 处置过的双蒸去离子水溶解，55-60℃温育5 min，分装，-80℃贮存(可贮存5周)；（二）. RNA 浓度的测定取10 µL RNA 样品以双蒸水稀释至 2 mL，转入预先以无水乙醇隔夜浸泡后晾干的石英比色皿中，警惕排除气泡，以等体积的双蒸水作为空白对照，在紫外分光光度计中别离测定 260 nm、280 nm 的光吸收值，依照公式计算 RNA 的浓度。

RNA提取方法

RNA提取方法（TRIzol法）一、试剂准备1、TROzlo试剂、氯仿、75%乙醇（0.1% DEPC配制）。

2、塑料器皿需用0.1% DEPC水浸泡。

3、0.1%DEPC水：100ml dd水中加入DEPC0.1ml，充分振荡，37℃孵育12h以上，121℃高压灭菌20min，于4℃保存。

二、操作步骤1、样品处理（1）组织：50-100mg组织中加入1ml TROzlo试剂。

（2）单层细胞：加入TROzlo试剂1ml/cm2平板。

（3）悬浮细胞：处理前洗涤细胞，以防止RNA降解。

每5-10×105动物、植物或酵母细胞，或1×107细菌加入1 ml TROzlo试剂。

2、将上述样品于15-30℃静置5min，使核蛋白充分解离。

3、加入0.2ml（1 ml TROzlo试剂）氯仿，盖紧盖子，充分剧烈振荡15s并于15-30℃静置2-3min。

4、于2-8℃12000g离心15min。

离心后样品分层，上层水相中含RNA，下层有机相中含蛋白和DNA。

5、取上清，加入0.5ml异丙醇，轻轻混匀，于15-30℃静置10min后，在管底会出现胶状沉淀，即为RNA。

6、于2-8℃12000g离心10min后弃去上清。

7、向沉淀中加入1ml 75%乙醇，轻轻混匀。

8、于2-8℃7500g离心5min后弃上清9、将RNA样品凉干（不要彻底干燥），加入适量DEPC水溶解（可于55-60℃促溶10min）。

三、注意问题1、在加入氯仿之前（第1步），样品能于-60—-70℃保存至少一个月。

2、RNA沉淀（第6步）在75%乙醇中于2-8℃能保存至少一周，于-5—-20℃能保存至少一年。

四、RNA定量RNA（mg/mL）=40×OD260×稀释倍数（n）/1000RNA纯品OD260/OD280=2.0五、RNA电泳（1）用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。

Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)

Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)一、实验步骤1. 涂布区域准备- 确保实验室台面干净整洁，并消毒工作区域。

- 准备所需的试剂和材料，包括Trizol试剂、异丙醇、70%乙醇、无菌乙酸纯水等。

2. 细胞样本处理- 从培养皿中收集所需的细胞样本，注意避免污染。

- 使用无菌PBS缓冲液洗涤细胞，以去除培养基和细胞碎片。

- 加入适量的Trizol试剂至细胞样本中，充分悬浮细胞。

- 注意：为了保护RNA的完整性，在细胞样本处理过程中尽量迅速操作，避免长时间接触Trizol试剂。

3. 提取RNA- 将含有细胞样本和Trizol试剂的混合物转移到无菌离心管中。

- 加入适量的氯仿，摇匀混合，并静置15分钟，使混合物体相分离。

- 低速离心10分钟，将上层的无色透明液体转移到新的无菌离心管中。

4. 分离RNA- 加入等体积的异丙醇，轻轻倾斜离心管，使RNA沉淀形成。

- 低速离心10分钟以沉淀RNA，上清液中通常含有DNA。

- 倒掉上清液，并加入70%乙醇洗涤RNA沉淀，轻轻颠倒离心管以洗涤RNA。

- 低速离心5分钟，倒掉乙醇。

5. 干燥RNA- 用洗涤过的无菌乙酸纯水溶解RNA沉淀，轻轻颠倒离心管以溶解RNA。

- 将溶解的RNA转移至无菌离心管中。

- 在室温或37摄氏度下迅速干燥RNA，避免长时间曝露。

6. 储存RNA- 使用RNase-free水溶解RNA沉淀，测定RNA的浓度和纯度。

- 分配等量的RNA至多个RNase-free离心管中，储存在-80摄氏度的冰箱中。

二、实验原理Trizol法是一种常用于提取RNA的方法，其原理如下：1. 细胞破裂- Trizol试剂能够迅速破坏细胞膜，使细胞释放出RNA。

- Trizol试剂中含有酚和氯仿，酚用于破坏脂质，氯仿用于改变混合物的密度，从而使RNA与其他细胞成分分离。

2. 分离RNA- 经过破裂后，细胞内的DNA、RNA和蛋白质等成分被混合在一起，形成上清液。

trizol法提取rna的原理

trizol法提取rna的原理
Trizol法是一种常用的RNA提取方法，其原理基于三种物质的作用：酚、异硫氰酸盐和氯仿。

这三种物质能够分别破坏细胞膜、蛋白质和DNA，从而将RNA释放出来。

具体步骤如下：
1. 细胞样品裂解
将细胞样品加入Trizol试剂中，通过离心等方式使细胞裂解，并释放出RNA。

2. 蛋白质沉淀
加入氯仿并离心，使细胞蛋白质沉淀到底部形成一个有机相。

3. RNA沉淀
将上层的水相转移至新管中，并加入异硫氰酸盐。

异硫氰酸盐能够溶解RNA，使其在水相中存在。

4. RNA纯化
通过离心等方式将RNA从水相中分离出来，并使用乙酸等试剂对其进行纯化和去除杂质。

最终得到的RNA可以用于后续实验，如逆转录PCR、Northern blotting等。

需要注意的是，在Trizol法提取RNA时要严格控制操作条件，避免污染和失去RNA。

同时也需要对不同类型的样品进行优化，以获得最佳的RNA提取效果。

Trizol法提取RNA实验步骤及原理

Trizol法使用步骤一、分离纯化的基本原理研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。

RNA质量的高低常常影响cDNA库，RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验的成败。

Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。

二、用户需自备的试剂和材料无水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要）、 Eppendorf管（RNase-free）、 Tips （RNase-free）三、准备工作RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。

它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。

用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase完全失活。

它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。

RNase的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。

一般情况下采用用DEPC(焦炭酸二磷脂，一种RNase抑制剂)配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。

取RNase-free的物品时必须戴手套。

1、料制品的处理尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。

对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。

处理步骤如下：1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使DEPC的终浓度为%。

注意：DEPC为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。

2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC水溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。

3）在通风柜中室温处理过夜。

4）将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已DEPC水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少30分钟。

5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。

置于干净处备用。

2、璃玻和金属物品250°C烘烤3小时以上。

四、从组织中提取总RNA1)液氮研磨：组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次，按50-100mg组织/ml Trizol加入Trizol，转入离心管进行第2步操作。

Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)

Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)RNA提取是一种常用的实验技术，它可以用于研究基因表达、蛋白质合成等方面。

而Trizol法是一种常用的RNA提取方法，下面我将详细介绍该方法的实验步骤及原理。

一、实验材料和设备1. 细胞样本：如洋葱、酵母等植物或动物细胞；2. Trizol试剂盒：包括Trizol reagent、DMEM/F12培养基、异丙醇、氯仿等试剂。

3. 离心机：用于分离细胞和RNA;4. 紫外分光光度计：用于测定RNA的浓度和纯度。

二、实验步骤1. 取适量的细胞样本，加入适量的DMEM/F12培养基中，用离心机离心去除细胞碎片和杂质。

2. 将上清液转移到新的管子中，加入2 mL异丙醇，轻轻摇匀，使其与细胞充分混合。

3. 加入1 mL Trizol reagent,混匀后室温下静置10 min;4. 离心管中液体分为4层，从上往下分别是黄色(含有RNA)、白色(含有蛋白质)、透明(上清液)和红色(含有DNA)。

取出黄色层进行下一步处理。

5. 用吸头将黄色层的RNA吸取到一个新的试管中，加入适量的氯仿，轻轻摇匀。

6. 离心试管，将RNA和氯仿分离。

7. 用吸头将上层的白色RNA溶液吸出一部分，加入等量的异丙醇，混匀后离心。

8. 将上清液倒掉，留下含RNA的沉淀物。

9. 用紫外分光光度计测定RNA的浓度和纯度。

三、实验原理Trizol法提取RNA的原理是利用Trizol reagent中的Trizol和氯仿对细胞进行裂解，使RNA释放出来。

具体来说，Trizol reagent中的Trizol是一种有机溶剂，它能够破坏细胞膜并将细胞内的RNA溶解在水中。

而氯仿则是一种脂溶性溶剂，它能够与RNA结合形成复合物，使得RNA更容易被提取出来。

在实验过程中，首先加入异丙醇的作用是破坏细胞膜，使RNA更容易释放出来。

然后加入Trizol reagent,使其与细胞充分混合并裂解细胞。

Trizol法提取RNA-电子版

Trizol法提取RNA步骤
1．胰酶消化六孔板细胞（每孔相当于3.5cm皿），每孔细胞收于EP管中，PBS洗一遍（或弃旧培养基，1ml PBSA洗2遍，直接向孔中加入600ul Trizol，吹打细胞，并吸入EP 管中即可，无需胰酶消化）；
2．向细胞沉淀中加入600ul Trizol裂解细胞5min；
3．加入三氯甲烷（氯仿）120ul（V三氯甲烷：V Trizol=1:5）提取核酸；
4．振荡10s至粉红色出现时停止，室温静置2~3min后分层；
5．4℃，12000×g，离心15min，离心后，底部为细胞碎片，中间为DNA，上层为RNA产物；
6．吸取上层液相RNA提取液，置另一个EP管中（小心勿吸到沉淀，约为250~300ul）；7．每管加入异丙醇300ul（V异丙醇：V TRIZOL=1:2）（异丙醇为有机溶剂，根据相似相溶原理，RNA不溶于其中，其他杂质溶于其中）；
8．上下颠倒，轻轻混匀，室温下静置10分钟；
9．4℃，12000×g，离心10分钟，弃上清；
10．用800ul 75%乙醇（用1‰DEPC处理水配制）洗沉淀，振荡器振荡15秒钟；11．4℃，12000×g，离心5分钟，弃上清（挥发乙醇2分钟）；
12．每管加入20~60ul DEPC处理水（示沉淀量而定），金属浴60℃溶解5分钟；13．4℃，12000×g，离心5分钟，吸取上清置于新的EP管中，-80℃冻存；
注意：EP管、移液器头用1‰DEPC水（不能高压灭菌）浸泡过夜，甩干后高压灭菌。

DEPC 处理水配制：999ul+1ul DEPC，高压灭菌。

Trizol法提取RNA

Trizol 法提取RNA实验步骤一、需要的试剂：1.氯仿2.异丙醇3.75%乙醇（in DEPC-treated water)4.RNase free水或者0.5% SDS溶液[准备不含RNase的水，将其装入不含RNase的玻璃瓶中，加入diethylpyrocarbonate (DEPC) to 0.01% (v/v)。

静置过夜，然后高压灭菌。

0.5% SDS溶液必须用DEPC预处理、高压灭菌的水]1、组织匀浆(1) 取出高温高压消毒后研钵，切取50-100mg冰冻组织置于研钵内，倒入液氮，研碎。

(2) 每50-100mg均浆组织标本中加入1ml的TRIZOL，标本的量不能超过TRIZOL体积的10%，否则会出现DNA污染。

(3) 将以上匀浆标本转移到1.5ml的EP管中，在15- 30°C放置5分钟，以彻底分离核蛋白复合体。

2、相分离加入0.2 ml的氯仿，加盖好后用手剧烈摇晃15秒，在15- 30°C放置2-3分钟，然后离心12,000×g，15 minutes ，2 - 8°C。

离心后分成三层，下面的红色为酚-氯仿相，一个中间层，一面是无色的水相。

RNA只存在于水相中。

水相占总TRIZOL的60%。

3、RNA沉淀将上层水相转移到另一干净的EP管中，加入0.5ml异丙醇，静置10 minutes ，15 -30°C，然后离心12,000 ×g ，10 minutes，2 - 8°C。

离心前可以在管的侧壁和底部看到絮状胶样沉淀，这就是RNA沉淀。

4、RNA洗涤去上清，加入1ml 75%乙醇洗涤RNA沉淀，振荡器混匀，离心7,500 ×g ，5 minutes，2 -8°C。

5、RNA再溶解去上清，置真空或空气中5-10分钟，干燥RNA沉淀，（不能在真空中离心干燥）。

注意不能将RNA沉淀完全干燥，这样会极大地降低它的溶解度。

Trizol法提取RNA实验步骤及原理

Trizol法提取RNA实验步骤及原理实验原理：Trizol法是一种常用的RNA提取方法，其原理是利用三种有机物（TRIzol、氯仿和异丙醇）的混合物，使细胞或组织中的RNA在低温下与TRIzol发生相互作用，形成RNA-TRIzol复合物。

加入氯仿后，RNA-TRIzol复合物会转移到有机相中，而DNA和蛋白质则留在水相中。

通过离心分离有机相和水相，可将RNA从有机相中分离出来。

最后，加入丙醇沉淀RNA，即可得到纯度较高的RNA。

实验步骤：1. 细胞或组织样品的收集：将细胞或组织样品收集到离心管中。

2. 加入Trizol试剂：向离心管中加入适量的Trizol试剂，按比例加入的量为1mL Trizol/100mg组织或1×10^7个细胞。

3. 细胞或组织样品的破碎：使用超声波或均质器等方法将细胞或组织样品破碎。

4. 加入氯仿：向离心管中加入适量的氯仿，按比例加入的量为0.2mL氯仿/1mL Trizol。

5. 混合离心：将离心管中的混合物混合均匀后，离心分离有机相和水相。

6. 收集RNA：将有机相转移到新的离心管中，加入适量的异丙醇，沉淀RNA。

7. 洗涤RNA：用75%乙酸酒精洗涤RNA。

8. 溶解RNA：用RNase-free水或DEPC水溶解RNA。

9. 检测RNA：使用比色法或琼脂糖凝胶电泳等方法检测RNA的纯度和浓度。

注意事项：1. Trizol试剂应保存在4℃下，避免阳光直射和冰冻。

2. 操作过程中要注意RNA的保护，避免RNA的降解。

3. 操作过程中要使用无菌技术，避免污染。

4. 操作过程中要注意个人防护，避免接触到有害物质。

5. 实验前要准备好所有所需试剂和设备，确保实验顺利进行。

6. 实验后要及时清洗和消毒实验器材，避免交叉污染。

细菌RNA的提取

细菌总RNA的提取
一、总RNA的提取(TRIzol)
1．细菌培养和收集：培养100ml菌至对数生长期，然后于4℃ 6000rpm离心收集细菌，弃去上清，尽量用tip头吸出剩余的培养液。

2．加入1ml TRIzol，tip吹打使充分混匀进行均质化。

3．均质化的样品在室温放置5分钟，然后加入0.2倍体积的氯仿，盖子盖紧后剧烈振摇15秒使混匀，在室温放置2~3分钟，4℃ 7,000rpm离心15分钟，离心后形成下层红色的酚氯仿相，中间相和上层无色水相。

4．将上层水相转移至一个新的离心管（水相的体积大约为均质化时所用TRIzol体积的60%），加入0.8倍体积的异丙醇，剧烈振摇使混匀，4℃7,000rpm离心15分钟，弃上清。

5．加入70%酒精，颠倒离心管数次以洗去沉淀所含盐分。

如沉淀较大可用Tip头先将沉淀打散。

然后4℃ 7,000rpm离心10分钟，弃上清。

6．重复以上步骤1次。

7．室温晾干，然后加入适量的无RNase的水溶解。

8．用分光光度计分析RNA浓度，在260nm 1OD约等于40μg/ml的RNA。

a)需要在260和280nm测定吸光度来确定样品的浓度和纯度
b)A260/A280应接近2.0为较纯的RNA(比值在1.9-2.1也可)
9．1%琼脂糖电泳或Agilent BioAnalyzer。

trizol法提取rna步骤

trizol法提取rna步骤TRIzol法提取RNA步骤RNA是一种重要的生物大分子，具有多种功能。

在研究生物学、医学等领域中，需要从细胞或组织中提取RNA。

TRIzol法是一种常用的RNA提取方法，其原理是利用TRIzol试剂将细胞或组织中的RNA溶解，并与其他生物大分子分离。

本文将详细介绍TRIzol法提取RNA 的步骤。

材料准备- TRIzol试剂- 高纯度异丙醇- DEPC水- RNase-free微量离心管和移液器- 1.5 mL离心管- 无菌手套和口罩- 冰桶和冰块步骤一：样品采集首先需要采集样品，可以是细胞或组织。

对于细胞，可以使用离心机将其沉淀；对于组织，则需要切碎并加入适当量的PBS缓冲液。

步骤二：样品裂解将采集到的样品加入适量的TRIzol试剂，并使用移液器充分混合。

然后使用高速离心机将样品离心10分钟，使其裂解。

步骤三：RNA分离将上述裂解物转移至新的离心管中，并加入等体积的异丙醇。

充分混合后，使用高速离心机离心10分钟，使RNA沉淀到底部。

步骤四：RNA洗涤将上述沉淀物转移至新的离心管中，并加入75%的乙醇。

充分混合后，使用高速离心机离心5分钟，去除残留的TRIzol试剂和异丙醇。

步骤五：RNA溶解将上述沉淀物转移至新的离心管中，并加入适量的DEPC水。

充分混合后，在65℃下孵育10分钟，使RNA完全溶解。

步骤六：RNA保存将溶解后的RNA转移至RNase-free微量离心管中，并存放在-80℃冰箱中保存。

注意事项- 在操作过程中要穿戴无菌手套和口罩，以避免污染。

- TRIzol试剂具有强烈腐蚀性，需注意安全操作。

- 所有使用到的器材和试剂都要事先消毒处理。

- 操作过程中需保持低温环境，以避免RNA降解。

- RNA提取后需立即存放在-80℃冰箱中，以避免RNA降解。

trizol试剂法

Trizol试剂法是一种用于提取RNA的常用方法，其操作简单，可以同时处理多个样品，且提取的RNA无DNA 和蛋白质污染。

以下是其基本步骤：
1. 将细胞或组织样本磨碎，具体操作方法是将细胞或组织样本放入匀浆器中，加入Trizol试剂，通过反复
研磨来破碎细胞。

2. 加入氯仿，用力震荡后离心。

此步操作可使不同物质分相，将RNA留在水相中。

3. 将水相转移至新的EP管中，加入异丙醇后再次离心。

这一步可促进RNA沉淀。

4. 去除上清液，用75%乙醇洗涤RNA沉淀，最后让RNA在室温下自然干燥。

5. 用无RNA酶的水溶解RNA沉淀。

此外，Trizol试剂法提取RNA时，需注意以下几点：
1. 在收集到生物材料后应尽快进行RNA制备工作，以避免RNA降解。

2. 提取RNA时，每50~100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA时，先离心沉淀细
胞，每5~106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈震荡以裂解细胞。

3. 提取的总RNA没有DNA和蛋白质污染，可用于 Northern blot、RT-PCR、Dot blot、RNase 保护分
析等。

请注意，对于不同类型和状态的材料，可能需要调整Trizol试剂法的具体步骤和参数。

因此，在实验过程中应根据实际情况进行调整。

RNA 提取(Trizol法)

定位克隆实验室 2010-12-27 胡文波修订- 1 - Trizol 法提取 RNA操作步骤：1. 准备镊子剪刀等材料、试剂，注意取材环境的消毒。

2. 加300ul Trizol 溶液至装有材料的无RNase 的1.5ml 离心管中。

3. 研磨材料，另加700ul Trizol ，涡旋1min 。

4. 离心：15000g 4℃ 10min 。

5. 吸取上清液至新的离心管中，注意不要接触沉淀。

6. 加200ul （1/5 Trizol 体积）氯仿，用手剧烈振动离心管2-5min,然后涡旋15s,室温下孵育样品10min 。

7. 离心：15000g 4℃ 10min 。

8. 转移水相至新的离心管，加500ul （1/2 Trizol 体积）异丙醇，混匀，室温下孵育样品10min 。

9. 离心：15000g 4℃ 5min 。

10. 移除上清液，用1ml （1倍Trizol 体积）75%乙醇上下颠倒洗涤RNA 团块，涡旋混匀样品。

11. 离心：7500g 4℃ 5min 。

12. 移除上清液，泄放离心管，吸取剩余溶液，使RNA 干燥2-3min(RNA 不宜太干)。

13. 加100ul 20mM NaAc/0.5% SDS 溶液，完全溶解RNA 团块(RNA 可保存于此溶液中，-80℃)。

14. 取2ul RNA 进行琼脂糖凝胶（w/v = 2%）电泳，检测其完整性。

15. 取1ul RNA 测浓度，调节RNA 至终浓度为1ug/ul 。

RNA 纯化16. 取5ul 1ug/ul RNA 至新的离心管，加5ul （等体积） 3M NaAc 溶液和15ul （3倍体积） ddH2O ，混匀，17. 然后加50ul （2.5倍体积）无水乙醇，颠倒离心管，混匀，冰上放置30min 。

18. 离心：15000g 4℃ 5min 。

19. 移除上清液，用500ul 75%乙醇上下颠倒洗涤RNA 团块，涡旋混匀样品。

Trizol_法提取细菌RNA的实验步骤

Trizol_法提取细菌RNA的实验步骤Trizol 法提取RNA实验步骤需要的试剂：氯仿异丙醇75%⼄醇（in DEPC-treated water)RNase free⽔或者0.5% SDS溶液[准备不含RNase的⽔，将其装⼊不含RNase的玻璃瓶中，加⼊diethylpyrocarbonate (DEPC 是为了减少RNase 的降解) to 0.01% (v/v)。

静置过夜，然后⾼压灭菌。

0.5% SDS溶液必须⽤DEPC预处理、⾼压灭菌的⽔]1、组织匀浆(1) 取出⾼温⾼压消毒后研钵，切取50-100mg冰冻组织置于研钵内，倒⼊液氮，研碎。

(2) 每50-100mg均浆组织标本中加⼊1ml的TRIZOL，标本的量不能超过TRIZOL体积的10%，否则会出现DNA污染。

(3) 将以上匀浆标本转移到1.5ml的EP管中，在15- 30°C放置5分钟，以彻底分离核蛋⽩复合体。

2、相分离加⼊0.2 ml的氯仿，加盖好后⽤⼿剧烈摇晃15秒，在15- 30°C放置2-3分钟，然后离⼼12,000× g，15 minutes ，2 - 8°C。

离⼼后分成三层，下⾯的红⾊为酚-氯仿相，⼀个中间层，⼀⾯是⽆⾊的⽔相。

RNA 只存在于⽔相中。

⽔相占总TRIZOL的60%。

3、RNA沉淀将上层⽔相转移到另⼀⼲净的EP管中，加⼊0.5ml异丙醇，静置10 minutes ，15 -30°C，然后离⼼12,000 rpm ，10 minutes，2 - 8°C。

离⼼前可以在管的侧壁和底部看到絮状胶样沉淀，这就是RNA沉淀。

4、RNA洗涤去上清，加⼊1ml 75%⼄醇洗涤RNA沉淀，振荡器混匀，离⼼7,500 × g ，5 minutes，2 -8°C。

5、RNA再溶解去上清，置真空或空⽓中5-10分钟，⼲燥RNA沉淀，（不能在真空中离⼼⼲燥）。

Trizol法提取RNA实验步骤

Trizol‎法使用步骤一、分离纯化的基‎本原理研究基因的表‎达和调控时常‎常要从组织和‎细胞中分离和‎纯化RNA。

RNA质量的‎高低常常影响‎c D NA库，RT-PCR和No‎r thern‎Blot等分‎子生物学实验‎的成败。

Trizol‎是一种新型总‎R N A抽提试‎剂，内含异硫氰酸‎胍等物质，能迅速破碎细‎胞，抑制细胞释放‎出的核酸酶。

二、用户需自备的‎试剂和材料无水乙醇、氯仿、Glycog‎e n（可能需要）、 1.5ml Eppend‎o rf管（RNase-free）、 Tips（RNase-free）三、准备工作RNase酶‎非常稳定，是导致RNA‎降解最主要的‎物质。

它在一些极端‎的条件可以暂‎时失活，但限制因素去‎除后有迅速复‎性。

用常规的高温‎高压蒸气灭菌‎方法和蛋白抑‎制剂都不能是‎R N ase完‎全失活。

它广泛存在于‎人的皮肤上，因此，在与RNA制‎备有关的分子‎生物学实验时‎，必须戴手套。

RNase的‎又一污染源是‎取液器，根据取液器制‎造商的要求对‎取液器进行处‎理。

一般情况下采‎用用DEPC‎配制的70%乙醇擦洗取液‎器的内部和外‎部，基本达到要求‎。

取RNase‎-free的物‎品时必须戴手‎套。

1、料制品的处理‎尽可能使用无‎菌，一次性塑料制‎品，已标明RNa‎s e-Free 的塑料制品，如没有开封使‎用过通常没有‎必要再次处理‎。

对于国产塑料‎制品，原则上都必须‎处理方可使用‎。

处理步骤如下‎：1）在玻璃烧杯中‎注入去离子水‎，加入DEPC‎使DEPC的‎终浓度为0.1%。

注意：DEPC为剧‎毒物，活性很强，小心在通风柜‎中使用。

2）处理的塑料制‎品放入一个可‎以高温灭菌的‎容器中，注入DEPC‎水溶液，使塑料制品的‎所有部分都浸‎泡到溶液中。

3）在通风柜中室‎温处理过夜。

4）将DEPC水‎溶液小心倒到‎废液瓶中，用铝箔封住含‎已D EPC水‎处理过的塑料‎制品的烧杯，高温高压蒸气‎灭菌至少30‎分钟。

Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)

Trizolxx使用步骤一、分离纯化的基本原理研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。

RNA质量的高低常常影响cDNA库，RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验的成败。

Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。

二、用户需自备的试剂和材料无水乙醇、氯仿、Glycoge（可能需要）、1.5ml Eppe ndof 管（RNase-free）> Tips（RNase-free）三、准备工作RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。

它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。

用常规的咼温咼压蒸气火菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase完全失活。

它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。

RNase的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。

一般情况下采用用DEPC焦炭酸二磷脂，一种RNase抑制剂）配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。

取RNase-free的物品时必须戴手套。

1、料制品的处理尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明RNase-Free的塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。

对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。

处理步骤如下：1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使DEPC的终浓度为0.1%。

注意: DEPC为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。

2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC水溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。

3）在通风柜中室温处理过夜。

4）将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已DEPC水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少30分钟。

5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。

置于干净处备用。

2、璃玻和金属物品烘烤3小时以上。

四、从组织中提取总RNA1）液氮研磨：组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次，按50-100mg组织/ml Trizol加入Trizol, 转入离心管进行第2步操作。