【最新】高三生物总复习课件：第十一单元 生物技术实践11-40

(3)配制培养基的操作步骤：________(用字母顺序回答)。 a．倒平板 b．计算 c．溶化 d．称量 e．灭菌 (4)在制备固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应 将平板倒置，目的是____________________。 (5)要确定培养液中某种微生物的含量，常用________法 和________法进行计数。某同学涂布了四个平板，统计的菌 落数是21、212、231和256，则应该取值为________。
第一次操作
每次划线之前
划线结束
杀死接种环上 目的
原有的微生物
杀死上次划线后接种 环上残留的菌种，使 杀死接种环上残 下次划线的菌种直接 存的菌种，避免 来源于上次划线的末 细菌污染环境和 端，使每次划线菌种 感染操作者 数目减少
2.灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高 杀死菌种。
3．第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开 始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终 得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
(1)获得图A效果和图B效果的接种方法分别是什么？ 【提示】 获得效果A的接种方法为稀释涂布平板法， 获得效果B的接种方法为平板划线法。
(2)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌 落连成了一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可 避免此种现象？
【提示】 最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划 下一区域前未将接种环灼烧灭菌；采取的措施是增大稀释 倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌。
(1)根据以上分析已知，图中①表示用巴士消毒法对牛奶 进行消毒；富含纤维素的土壤中的分解纤维素的微生物数 目较多，在进行计数前要进行梯度稀释，因此需要进行② 过程。
(2)步骤③表示利用稀释涂布平板法对牛奶中细菌进行培 养计数，由于细菌的菌落会重叠，所以该统计结果一般情 况下低于实际值。
(3)将过程③接种后的培养基放入37 ℃恒温培养箱中， 一段时间后取出，统计4个平板上的菌落数分别是16、82 、126和167，由于16数值偏差太大，不予计算，又因为图 中稀释倍数为103，因此，经过消毒后的牛奶中，细菌数大 约是(82＋126＋167)÷3×103＝1.25×105×104个/mL。
(1)在接种前，培养灭菌后的空白平板的目的是检测培养 基是否感染杂菌或是否彻底灭菌。
(2)为了对豆浆中细菌进行计数，常采用稀释涂布平板法 。对接种工具——涂布器灭菌常采用灼烧灭菌。
(3)若用上述方法培养设置4个培养皿，其中一个平板的 菌落数只有25个，没有达到计数菌落数要求的范围(30～ 300个)，应舍去；其余三个平板菌落数分别为31个、33个 、35个用于求平均值计数。根据题干信息，豆浆被稀释了 104倍，因此可以推测豆浆中每毫升含细菌数＝(31＋33＋ 35)÷3÷0.1×104＝3.3×106个。由于个别菌落可能是由2个 或多个细菌形成，因此运用这种方法统计的结果往往较实 际值偏小。
(3)用上述方法接种、培养后统计4个培养皿，菌落数分 别为25个、31个、33个、35个，则可以推测每毫升自制豆 浆中含细菌数为________个。该结果往往较实际值偏小， 原因是______________________________。
【解析】 分析图示操作过程可知，10 mL豆浆中加90 mL无菌水，表示对豆浆稀释了10倍，之后每取出1 mL稀 释后的豆浆液加9 mL无菌水，再稀释3个10倍，累计可得 10 mL豆浆最后被稀释了104倍，再取最后的稀释豆浆进行 涂布平板培养，观察、统计菌落数。
【答案】 (1)平板划线 稀释涂布平板 (2)灭菌 (3)bdcea (4)防止培养皿内壁上出现的冷凝水污染培养基 (5)稀释涂布平板 显微镜直接计数/血球计数板计数 233
【总结归纳】 1.培养基的配制原则 (1)目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的 等确定配制的培养基种类。 (2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。 (3)pH要适宜：细菌为6.5～7.5，放线菌为7.5～8.5，真 菌为5.0～6.0，培养不同微生物所需的pH不同。
1 000
2 g 0.4 g
适量
g位
mL
A.能在此培养基上生长的大肠杆菌，拟核上有抗青霉素 的基因
B．此培养基是天然鉴别培养基 C．此培养基可以用来检测自来水中细菌含量是否符合 饮用水标准 D．此培养基可以用于选育转基因大肠杆菌菌种的基因 工程的操作过程中
【解析】 本题考查培养基的类型和作用，要求考生能根 据培养基的配方，确定其中的青霉素、伊红和美蓝的应用 ，进而分析、判断各选项。分析培养基的配方可知，培养 基中含有牛肉膏和葡萄糖，能为微生物提供碳源、氮源和 能源，培养基中还含有青霉素(是一种抗生素)和伊红、美 蓝，由于大肠杆菌对青霉素敏感，因此自然环境中的大肠 杆菌无法在该培养基中生活，故不能在此培养基上培养大 肠杆菌，且大肠杆菌的拟核上不含有抗青霉素的基因，A 错误；
4．划线时最后一区不要与第一区相连。 5．划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。
②稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的__梯__度__稀__释__， 然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表 面，进行培养。
(3)菌种的保存方法 ①对于频繁使用的菌种，可以采用___临__时__保__藏___的方法。 ②对于需要长期保存的菌种，可以采用_甘__油__管__藏__的方法。 【判断与思考】 1．判断下列说法的正误。 (1)培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，有时还需 要加入一些特殊的物质。(√) (2)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到 皿盖上。(×)
此培养基中的青霉素对细菌有选择作用，故该培养基是 选择培养基，B错误；细菌对抗生素敏感，此培养基中含 有青霉素，细菌不可以在此培养基上生长繁殖，C错误； 由于转基因(运载体中含有青霉素抗性基因)的大肠杆菌菌 种可以在含有青霉素的培养基中生长繁殖，且大肠杆菌在 含有伊红美蓝的培养基中形成的菌落呈黑色，因此该培养 基可以用于选育转基因大肠杆菌菌种的基因工程的操作过 程中，D正确。
【答案】 D
2．(2018·广东省肇庆市高中毕业班第一次统一检测)绝 大多数微生物对人类、动物及植物都是有益的，而且都是 必需的，在医学工业方面和日常生活中，我们都是利用微 生物的发酵法制造出来相应的制品。自然界中的各种微生 物是混合生存在一起的，因此在进行某项具体生产时首先 要纯化微生物。
(1)分离提纯微生物常用________法和________法。 (2)用接种环进行微生物接种时，操作的第一步及每次 划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环________。
2．微生物对主要营养物质的需求特点 (1)自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可 来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。 (2)异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源 必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部 分异养型微生物也可以利用无机氮源。
考法2 无菌技术的操作 3．(2018·华大新高考联盟高三教学质量测评)我国乳制 品国家标准中，原奶细菌数允许最大值为每毫升200万个 。下图是某高中生物兴趣小组进行的牛奶消毒及细菌检测 实验的过程图。请回答下列相关问题：
(3)配制培养基的操作步骤是：计算→称量→溶化→灭菌 →倒平板。
(4)要确定培养液中某种微生物的含量，常用稀释涂布平 板法和血球计数板计数法(显微镜直接计数法)进行计数。 该同学涂布了四个平板，但其中一个平板的计数结果与另 两个相差太远，说明操作过程出现错误，实验数据缺乏正 确性。应该去除统计的菌落数21，得到菌落数为(212＋231 ＋235)/3＝233。
(3)不同对象的无菌操作方法：
3．大肠杆菌的纯化培养 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
(2)纯化大肠杆菌的方法 ①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表 面____连__续_划__线____的操作，将聚集的菌种逐步稀释分 散到培养基的表面。 【特别提醒】 1.操作第一步即取菌种之前及每次 划线之前都需要进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时 ，仍需灼烧接种环，每次微生物培养与计数 等知识，要求考生掌握微生物培养与计数的方法，能熟练 进行相关的操作，并能对实验结果数据进行正确的处理和 分析。
(1)分离提纯微生物的常用方法有稀释涂布平板法和平板 划线法。
(2)平板划线操作的第一步之前要灼烧接种环，是为了避 免接种环上可能存在的微生物污染培养基；以后的每次划 线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环灭菌，保证后一 次划线的菌种仅来自于前一次划线的末端。
(3)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？ 【提示】 火焰附近存在着无菌区域。
考法1 培养基及其制备方法分析 1．(2018·云南民族大学附属中学高三月考)下表为某培 养基的配方，有关叙述正确的是( )
牛肉 成分
葡萄
K2HP 伊红 美蓝
青霉
蒸馏
琼脂
膏
糖
O4
素
水
含量 10 g 10 g
0.065 1万单
(3)种类 ①按照物理性质可分为__液__体____培养基、固体培养基、半 固体培养基。 ②按照成分的来源可分为天然培养基和_合__成__培养基。 ③按照功能用途可分为选择培养基、__鉴__别__培养基等。 2．无菌技术 (1)含义：指在培养微生物的操作中，所有防止__杂__菌__污__染__ 的方法。 (2)关键：防止___外__来__杂__菌___的入侵。
(1)在接种前，常常随机取若干灭菌后的空白平板进行 培养一段时间，这样做的目的是________。
(2)为了对自制豆浆中细菌进行计数，应采用的接种方 法是________。采用这种方法接种培养时，取最终的豆浆 稀释液0.1 mL滴在平板培养基上，操作前一般用________ 法对接种工具进行灭菌。
(3)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消 毒剂对细胞的伤害。(√)
(4)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑 取菌落。(×)