苯酚法提取酵母RNA
实验8 酵母RNA的提取----苯酚法-20090301
三、实验材料与试剂 1、实验材料 市售干酵母粉 2、实验试剂 ⑴ 90%苯酚水溶液 (含0.1% 8-羟喹啉)
⑵ 95%乙醇 四、实验器材与仪器 1、 离心机、离心管（7ml） 2、 制冰机 3、 分析天平 4、 托盘天平（平衡离心管） 5、 摇床 6、 具塞锥形瓶 (150ml) 7、 量筒(10ml)、烧杯、滴管和小玻棒
五、实验操作方法和步骤 1、酵母细胞破碎、提取RNA ： 酵母细胞破碎、提取RNA 称取干酵母粉1.0g , 入150 ml具塞锥形瓶中，加蒸馏水5ml , 再小心加 入90%苯酚5ml（苯酚有毒！并具腐蚀性），盖好锥形瓶的塞子，在摇床上振 摇反应 40 mi00rpm离心10min。用吸管小心吸取上清液（含RNA)转移到另一 支干净离心管中。见图1。 图
六、注意事项 1、离心前样品离心管一定要先平衡，并对称放入离心机中。 2、吸取上清液时，不能搅动界面，更不能吸入界面物质。 3、苯酚不要弄到手上、皮肤上或桌上，以免损伤皮肤和衣物。
20090228
实验八 酵母RNA的提取——苯酚法 酵母RNA的提取——苯酚法 RNA的提取——
一、实验目的和要求 1、 了解核酸的组成及RNA提取技术。 2、 掌握用苯酚法制备RNA的原理和方法 二、实验基本原理 苯酚法适用于tRNA的提取。从细菌或酵母细胞中提取tRNA，可在不经细胞 破碎，直接用被水饱和的中性苯酚抽提，苯酚可以改变细胞壁的通透性，使 tRNA (分子量在25000左右)从细胞中释入出来，而大分子核酸仍留在细胞内。 通过离心，将含有酚水和细胞碎片的乳浊液分成两相， 上层水相为水溶性RNA、 多糖及小分子极性物质，下层酚相为被水饱和的酚、变性蛋白质和DNA（大多与 变性蛋白质缠连）菌体残渣等。在酚相和水相界面有一层凝集的变性蛋白质。 用乙醇沉淀水相中的大分子物质，tRNA即呈白色絮状沉淀析出，同时除去可溶 性的酯类等杂质。再离心，弃上清液，得到tRNA沉淀样品。苯酚法是提取具有 生物活性的，不降解RNA的简便而有效的方法。 酵母RNA的提取→乙醇沉淀 →得到粗品RNA
生化实验 酵母RNA的提取及组分鉴定
酶的特异性及影响酶活性的因素
滴瓶、滴管与细口瓶 生 物 化 学 实 验
1、提出滴头，排出空气。 2、伸入液面下，吸取液体。 3、按量排出液体。 4、将剩余液体排出，放松手指，将滴 头自然放入滴瓶内
Exit
生命科学学院
蛋白质的提取、分离纯化及定量
离心机
生 物 化 学 实 验
⑴将字心机置于平坦结实的地面或实验台上。 ⑵检查离心机调速旋钮是否处在0置 ⑶装入待离心液体后，把离心机转头对称位 置上的离心管（包括外套管）放在天平上平 衡，装入液体量以距管口1--2cm为宜
反应，产生显色复合物。
⑶ 嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤银化合物沉淀。
Exit
生命科学学院
酵母RNA的提取及组分鉴定
实验步骤
生 物 化 学 实 验
一、RNA的粗提取：
二、水解RNA
三、RNA组分鉴定
生命科学学院
酵母RNA的提取及组分鉴定
实验步骤
生 物 化 学 实 验
一、RNA的提取 1.7g酵母悬浮于0.2％ 氢氧化钠溶液70ml中。
生命科学学院
Exit
酵母RNA的提取及组分鉴定
实验原理
⑵ 核糖：RNA与浓盐酸共热时，发生降解，形成的核
生 物 化 学 实 验
糖继而转变成糠醛，后者与地衣酚反应，在Fe3+或Cu2+催化
下生成鲜绿色复合物。脱氧核糖与二苯胺试剂反应成蓝色
化合物，而核糖无此反应。 地衣酚鉴定戊糖时特异性较差， 凡属戊糖均有此反应。微量DNA无影响，较多DNA存在时有 干扰作用，在试剂中加入适量CuCl2· 2H2O可减少DNA的干扰， 甚至某些戊糖持续加热后生成的羟甲基糠醛也能与地衣酚
实验6酵母RNA的分离及组分鉴定
结果讨论与结论
01
根据分光光度计的读数分析，实验组的RNA浓度较高且纯度良 好，而对照组的RNA浓度较低，可能受到了其他物质的干扰。
02
通过电泳结果观察，实验组的RNA完整性较好，而对照组 的RNA可能受到了降解。
03
综合以上结果，可以得出实验组分离得到的酵母RNA质量较高 ，适合用于后续的分子生物学实验。而对照组的RNA质量较差
条带。
RNA的组分鉴定
01
02
03
将提取的RNA进行反转 录，合成cDNA。
利用PCR仪对cDNA进行 扩增，并进行电泳检测
。
根据电泳结果判断RNA 的完整性，并分析其组
分。
04
结果分析
分光光度计的读数分析
实验组
在260nm和280nm处的吸光度分别 为0.85和0.78，表明RNA浓度较高， 纯度良好。
实验中遇到的问题和解决方案
问题1
解决方案
问题2
酵母细胞破碎不完全， 导致提取的RNA不纯。
采用更剧烈的破碎方法， 如超声破碎，以提高细
胞破碎率。
电泳过程中出现条带模 糊。
解决方案
优化电泳条件，如调整 缓冲液浓度和电泳温度
等。
对实验的改进建议和展望
01
改进建议1
在细胞破碎步骤中，尝试使用不同的破碎方法以提高破碎效率和RNA提
了解RNA的组成成分
了解RNA的基本组成
RNA由核糖核苷酸组成，包括腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶和尿 嘧啶四种碱基，以及磷酸和核糖。
学习通过电泳分离RNA组分
通过电泳技术可以将RNA分离成不同大小的组分，如rRNA 、mRNA和tRNA等。
学习并掌握分光光度计的使用方法
实验四酵母RNA的提取
实验四酵母RNA的提取一、原理酵母含有丰富的核酸，其中DNA较少，而RNA较多(约占干重的3-10%)，加之菌体收集容易，所以多用酵母作为提取RNA的材料。
本实验用浓盐法提取RNA，基本过程和原理是：用10%氯化钠使核糖核蛋白中的RNA解聚并溶于盐溶液中，离心除去菌体残渣及变性蛋白质后，调节溶液的pH值至RNA的等电点，RNA即可沉淀析出。
本法提取的RNA已变性并有部分降解，工业上常将其进一步水解，以制备核苷酸、核苷和碱基等。
如要避免RNA降解，可用苯酚法提取。
通过鉴定RNA的组成成分可对RNA定性。
磷酸：磷酸可与钼酸铵作用生成磷钼酸，后者在还原剂的作用下被还原为蓝色的钼蓝。
嘌呤碱：它们能与硝酸银作用产生白色的嘌呤银化物沉淀。
核糖：核糖与酸共热生成糠醛，后者与苔黑酚反应生成绿色化合物。
二、试剂与仪器(一)试剂：1．干酵母2．10%氯化钠溶液3．6摩尔/升盐酸溶液4．乙醚5．10%硫酸溶液6．钼酸铵试剂：2克钼酸铵溶于100毫升10%硫酸7．10%维生素C溶液8．0.1摩尔/升硝酸银溶液9．1摩尔/升氨水。
10．Fe3+-HCL试剂：0.99克硫酸高铁铵〔NH4Fe(S04)2·12H20〕溶1000毫升浓盐酸中。
11.5%苔黑酚乙醇溶液。
(二)仪器：1．沸水浴2．离心机三、操作：1.酵母RNA的提取①干酵母约0.3克置于离心管内，加入10%氯化钠5毫升，搅匀后置沸水浴加热10分钟。
②取出离心管，流水猝冷后，3000rpm离心10分钟，上层即为RNA提取液，下层为菌体残渣及变性蛋白质沉淀。
③将上层清液小心倾入另一离心管中，逐滴加6摩尔/升盐酸，边加边搅拌，随着pH下降，RNA逐渐沉淀析出，当调节pH至2.O-2.5(接近RNA等电点)时，沉淀最多，此时，静置几分钟，然后在3000rpm离心10分钟。
收集RNA沉淀。
用少量乙醚洗涤以除去脂类和色素等杂质。
2.RNA的水解在上述RNA沉淀中，加入10%硫酸5毫升，搅匀，沸水浴加热5分钟，使RNA水解。
酵母中RNA的提取与含量测定
酵母中RNA的提取与含量测定酵母是一类广泛应用于工业生产中的微生物，具有高温抗性、高碱性和高盐度等特殊环境适应能力，可生产出酵母菌辅酶、乳酸、醋酸、酒精、面包等产品。
酵母的研究也成为生物学、生物技术等领域的重要课题之一。
RNA（核糖核酸）是生命体中发挥重要生物学功能的分子之一，能够参与DNA复制、转录和翻译等生命过程，是研究生物学、分子生物学和基础医学等领域的重要手段之一。
因此，酵母中RNA的提取与含量测定是酵母研究的重要内容之一。
酵母中RNA的提取方法主要包括以下几个步骤：1.预处理样品：将培养的酵母细胞通过离心和去除培养基中的各种杂质，得到净化后的酵母细胞。
2.细胞破碎：通过化学方法或物理方法对细胞膜进行破坏，将细胞内的RNA暴露出来。
3.溶解RNA：加入适量的含有RNA保护剂（如二硫苏糖）的缓冲液，使RNA得到保护，不会受到核酸酶的影响，可以得到RNA溶液。
4.精制RNA：通过酚/氯仿提取及异丙醇沉淀的方法分离出纯化的RNA。
5.分析RNA：通过吸光度测定、电泳或荧光分析等方法检测RNA的纯度和含量。
酵母中RNA的含量测定可通过紫外吸收光度法进行。
该方法利用RNA在260nm处的吸收峰和RNA在280nm处的吸收峰的比值，来计算RNA的浓度。
其计算公式为：RNA浓度 = OD260值× 40 ug/ml × 稀释倍数其中，OD260值为RNA样品的吸光度值；40ug/ml为RNA样品在260nm处的吸收系数；稀释倍数为样品的稀释倍数。
除紫外吸收光度法外，也可以采用其他方法如电泳或荧光分析来测定RNA的含量。
总之，酵母中RNA的提取和含量测定可为酵母研究提供重要的实验基础和理论支持，为探索酵母生物学和基因工程等应用领域提供更为广阔的前景和新的研究突破。
实验六 酵母RNA的提取及组份鉴定
2.5g鉬酸铵溶于100mL水中；
10％抗坏血酸溶液：10g抗坏血酸溶于100mL水，棕色并保存溶液；
临用时将三种溶液和水按下列比例混合：
17％硫酸：
2.5％鉬酸铵：10％抗坏血酸：
水＝1：1：1：2（V/V）。
二、材料
干酵母粉。
三、器材
移液管
2.0mL（×1）,1mL（×4）；移液枪；量筒10mL（×1）,50mL（×1）；滴管；水浴锅；低速离心机；研钵；天平。操作方法
二、RNA组份鉴定
将所提取的核酸转移到试管中，加入
1.5M硫酸5mL,沸水浴加热10分钟制成水解液，然后进行组份鉴定。
1．嘌呤碱：
取水解液1mL加入过量浓氨水。然后加入1mL
0.1M硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱银化合物沉淀。
2．核糖：
取水解液1mL，三氯化铁浓盐酸溶液2mL和苔黑酚乙醇溶液
0.2mL。放沸水浴中10min。注意观察核糖是否变成绿色。
一、酵母RNA提取
称5g干酵母粉悬浮于30mL
0.04M NaOH溶液中并在研钵中研磨均匀。悬浮液转入大试管，沸水浴加热30min，冷却，转入离心管。3000r/min，离心10分钟后，将上清慢慢倾入10mL酸性乙醇，边加边搅动。加毕，静置，待RNA沉淀完全后，3000r/min离心5min。弃去上清液。用95％乙醇洗涤沉淀两次，第一次洗涤后3000r/min离心5min，第二次洗涤后过滤，将沉淀转移到滤纸上，沉淀在空气中干燥。称量所得RNA粗品的重量，计算：
实验六酵母
目的要求
（1）了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法。
（2）了解核酸的组分并掌握其鉴定方法。
实验原理
由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也很各异。一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验是最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。上述方法提取的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后,上清液用乙醇沉淀RNA。稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH
实验三酵母核糖核酸的提取及组分鉴定一目的了解并掌握稀碱
实验五酵母核糖核酸的提取及组分鉴定一、实验目的1、了解并掌握稀碱法提取核糖核酸（RNA）的原理和方法；2、掌握苔黑酚显色法鉴定RNA组分的基本原理和操作方法。
二、实验原理酵母中含有丰富的RNA，含量达2.67%~10.0%，而DNA含量很少，仅为0.03%~0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。
提取制备RNA的方法较多，一般有苯酚法，去污剂法、浓盐法和稀碱法等。
其中苯酚法是实验中最常见的方法。
工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。
本实验用稀碱法提取RNA。
先用稀碱（本实验用0.04mol/L的NaOH溶液）使酵母细胞裂解，RNA可溶于稀碱溶液，在碱性提取液中加入酸性乙醇可使核糖核酸沉淀出来，由此即可得到RNA的粗制品。
RNA含有核糖、嘌呤碱，嘧啶碱和磷酸各组分，加入硫酸煮沸可使RNA水解，从水解液中可用定糖、定磷和加银沉淀等方法测出上述组分的存在。
三、仪器、试剂和材料1、仪器（1）100mL烧杯1个；（2）移液管：2.0mL1个，5.0mL1个，1.0mL4个；（3）量筒：10mL1个，50mL1个；（4）试管：15mL4个；（5）恒温水浴锅（6）离心机；(7）布氏漏斗；（8）抽滤瓶；（9）研钵；（10）滴管；（11）洗耳球；（12）电子天平。
2、试剂（1）0.04mol/L的NaOH溶液；（2）95%乙醇；（3）乙醚；（4）1.5mol/L的硫酸；（5）浓氨水；（6）0.1mol/L的硝酸银；（7）酸性乙醇溶液：0.3mL浓盐酸加入30mL乙醇中；（8）三氯化铁浓盐酸溶液：2mL10%的三氯化铁溶液加到400mL浓盐酸中。
（9）苔黑酚乙醇溶液：称取6g苔黑酚溶于100mL 95%乙醇中（可在冰箱中保存1个月）；（10）2.5%钼酸铵溶液3、材料干酵母粉四、操作步骤1、酵母RNA 提取称2g干酵母粉置于研钵中，加少许石英砂和2mL0.04mol/LNaOH溶液，在研钵中充分研磨，然后将匀浆液转移到100mL的烧杯中，再用8mL0.04mol/LNaOH溶液分两次洗涤研钵，洗涤液并入匀浆液中，沸水浴上加热30min，经常搅拌。
酵母RNA提取
酵母RNA的提取一、目的：学习稀碱法提RNA的原理与技术。
二、原理：由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也各异，一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。
其中苯酚法又是实验室最常用的。
组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中，向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好地除去DNA和蛋白质。
上述方法提取的RNA具有生物活性。
工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这2种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。
浓盐法是用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3―4h，迅速冷却，提取液经离心后，上清液用乙醇沉淀RNA。
稀碱法使用稀碱（本实验用0.2%NaOH溶液）使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA（本实验）或调pH2.5利用等电点沉淀。
提取的RNA 有不同程度的降解。
酵母含RNA达2.67―10.0%，而DNA含量仅为0.03―0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。
三、器材与试剂：1．器材：[1]干酵母粉（市售）。
[2]鲜酵母（市售）。
[3]pH试纸（pH1―10）。
[4]台天平（100g）。
[5]烧杯100ml（×1）。
[6]量筒50ml（×1）、10ml（×1）。
[7]抽滤瓶500ml（×1）、布氏漏斗φ10cm（×1）。
[8]吸管0.5ml（×1）、1ml（×2）、2ml（×2）、5ml（×1）。
[9]离心机5000r・min-1。
2．试剂：[1]0.2%氢氧化钠溶液：2gNaOH溶于蒸馏水并稀释至1000ml。
[2]乙酸（A・R）。
[3]95%乙醇。
[4]无水乙醚（C・P）。
[5]氨水（C・P）。
[6]10%硫酸溶液：浓硫酸（比重1.84）10ml，缓缓倾于水中，稀释至100ml。
实验六酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
四、实验步骤
1、酵母RNA的提取 （1）称8g干酵母粉悬浮于40mL 0.2%NaOH 溶液的100mL烧杯中 沸水浴
加热30分钟，不断搅拌。 （2）冷却后，4000r/min离心8分钟，将上清液慢慢倾入20mL酸性乙醇
的烧杯中，边倒边搅。而后静置10分钟，待RNA完全沉淀， 4000r/min离心8min。 （3）弃去上清，沉淀为RNA粗制品。 2、水解
酵母细胞富含核酸，且核酸主要是RNA，含量为干菌体的2.67%-10.0%， 而DNA含量较少，仅为0.03%-0.516%。为此提取RNA多以酵母为原料。工 业上制备RNA多选用低成本、适于大规模操作的稀碱法或浓盐法。这两种 方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备单核苷酸的原料，其工 艺比较简单。
100mgFeCl3·6H2O或等量的CuO； （7）定P试剂：
a.17%硫酸：17ml浓硫酸（比重1.84）缓缓加入83ml水中 b.2.5%钼酸铵溶液：2.5g钼酸铵溶于100ml水中 c.10%Vc（抗坏血酸）溶液：10g抗坏血酸溶于100ml水中。棕色瓶储 存。溶液程淡黄色尚可使用。呈深黄色甚至棕色即失效。 临用时将上述三种溶液与水按如下比例混合，a：b：c：水=1：1：1：2
生物化学实验
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
5’ 3’ 5’ 3’
一、实验目的
1. 掌握RNA的提取方法 2. 学会使用地衣酚法测定RNA的含量 3. 熟悉和掌握离心机的使用方法
二、实验原理
由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也各异，一般有苯酚法、 去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验室最常用的。组织匀浆用苯 酚处理并离心后，RNA即溶于上层被苯酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则 留在苯酚层中，向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出。此法能 较好地除去DNA和蛋白质，提取的RNA具有生物活性。
生化实验 酵母RNA的提取及组分鉴定
验
迅速冷却，提取液离心后，上清液用乙醇沉淀RNA。稀
碱法是用稀碱溶液使细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋
白质和菌体后
,的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。
Exit 生命科学学院
酵母RNA的提取及组分鉴定
实验原理
生
酵母含RNA,2.62---10％,DNA含量仅为0.03-0.516%，所 以提取RNA多以酵母为原料。
甚至某些戊糖持续加热后生成的羟甲基糠醛也能与地衣酚 反应，产生显色复合物。 ⑶ 嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤银化合物沉淀。
Exit 生命科学学院
酵母RNA的提取及组分鉴定
实验步骤
生 物
一、RNA的粗提取：
化
二、水解RNA
学
三、RNA组分鉴定
实
验
生命科学学院
实验步骤
酵母RNA的提取及组分鉴定
生 一、RNA的提取 物 1.7g酵母悬浮于0.2％ 化 氢氧化钠溶液70ml中。 学 2.将悬浮液转移至 实 150ml锥形瓶中，在沸 验 水浴上加热30分钟，冷
开吸耳球，立即用右手的食指按住管口，大拇指和中指拿住管刻度线
上方，再使管离开液面，管末端仍靠在盛溶液器皿的内壁上。略松食
指，使液面平稳下降，直到溶液的弯月面与刻度标线相切。
Exit
生命科学学院
酶的特异性及影响酶活性的因素
移
液
生 物 化 学 实 验
生 入水解液1ml ，加入三氯
物
化铁的浓盐酸溶液2ml和
化
苔黑酚的乙醇溶液3滴，
学
实
在沸水浴中加热，观察试
验
管内颜色变化。解释原因。
生命科学学院
酵母RNA的提取及组分鉴定
酿酒酵母发酵制备rna的研究
酿酒酵母发酵制备rna的研究随着人们对酿酒酵母发酵作用的深入研究，其RNA的制备也成为了一个热点的研究领域。
RNA是一个十分重要的分子，在生命体系的生长发育和新陈代谢等方面发挥了关键性的作用。
因此，研究酿酒酵母RNA的制备，可以进一步深入探究酿酒酵母发酵机理等问题。
下面将介绍酿酒酵母RNA的制备方法及其研究现状。
1. 酿酒酵母RNA的制备方法传统的RNA制备方法通常包括细胞裂解、RNA提取、RNA纯化等步骤。
对于酿酒酵母这类单细胞生物来说，常用的RNA提取方法有酚/氯仿法、离子交换法和磁珠法等。
其中酚/氯仿法具有操作简便、效率高、适用于各种样品类型等优点，因此在酿酒酵母RNA的制备中是首选方法之一。
具体步骤如下：1）细胞样品的采集：将酿酒酵母培养在合适的培养基中，采用适当的方法采集细胞样品，比如采用离心、吸取等方法将细胞沉淀下来；2）细胞裂解：将采集到的细胞样品彻底裂解，释放RNA。
常用方法有物理方法（如超声波法、玻璃珠法等）和化学方法（如三氯乙酸法、硫酸酚法等）。
3）RNA提取和纯化：将细胞裂解物加入酚/氯仿混合液，混匀后离心，将上清液中的RNA沉淀下来，并用DNase I 酶消化去除DNA。
然后将RNA两次洗涤清洗，最后用RNase-free水输运到下游反应。
在RNA分离纯化过程中，应当注意的是，一定要采取无酶处理RNA样品，使用无酶试剂及特制酶去除DNA。
酿酒酵母RNA在细胞生长和发育、代谢等多个方面发挥着十分重要的作用。
随着高通量测序技术的快速发展，人们对酿酒酵母RNA的研究和应用也得到了很大的提升。
目前，关于酿酒酵母RNA的研究主要有以下几个方面：1）酵母RNA的表达谱：通过RNA测序技术，深入研究酿酒酵母的RNA表达及其调控网络，揭示其在基因表达调控、代谢、胁迫响应等方面的作用；2）酵母RNA的亚细胞定位：通过荧光探针标记等技术，研究酿酒酵母RNA在细胞内的亚细胞定位，深入探究不同RNA分子的功能及其与细胞结构相互关系；3）酵母RNA的功能及重要性：研究酿酒酵母RNA在生命体系中的重要性，探究其在生长、代谢、感应响应等方面的作用机制，为进一步挖掘酵母菌的潜力提供理论基础。
酵母RNA的提取与鉴定
试剂的配制
地衣酚(苔黑酚) —三氯化铁试剂
将100mg苔黑酚溶于100ml浓盐酸中，再加 入100mgFeCl3·6H2O(或等量CuO)。此液需临 用时配制。
实验步骤
1、酵母RNA的提取
称5g干酵母粉于150 ml三角烧瓶中，加50ml 0.2％的 NaOH，沸水浴中搅拌提取30 min。冷 却后滴加乙酸使其略偏酸性(pH5~6)。
此法能较好地除去DNA和蛋白质，提取的RNA具
有生物活性。
实验原理
酵母细胞富含核酸，且核酸主要是RNA，含量为
干菌体的2.67%~10.0%，而DNA含量较少，仅为 0.03%~0.516%, 为此提取RNA多以酵母为原料。
工业上制备RNA多选用低成本、适于大规模操作
的稀碱法或浓盐法。这两种方法所提取的核酸均 为变性的RNA，主要用作制备单核苷酸的原料， 其工艺比较简单。
RNA在酸性条件下，即发生降解，形成的核糖继 而转变为糠醛，后者与地衣酚（3，5-二羟基甲苯） 反应呈鲜绿色，该反应需用三氯化铁或氧化铜作 催化剂。
本实验采用的稀碱，既可加速细胞的破裂，又可
增大 RNA的溶解度。当碱被中和后，可用乙醇将 RNA沉淀，此为 RNA的粗品。
样品中少量脱氧核糖核酸(DNA)存在对鉴定无干
离心(4000 r／min，15 min)，去除沉淀。 向上清液中加入30 ml 95％乙醇，稍搅拌后静置。 待完全沉淀后离心(4000 r／min，15 min) ，去 上清液。沉淀加10 ml 95％乙醇，搅拌后再次离 心。沉淀再依次用10 ml的无水乙醇、乙醚(×2) 洗涤, 得RN法是用氢氧化钠使酵母细胞壁变性、裂解，
然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用 乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。提取 的RNA有不同程度的降解。
酵母核糖核酸的提取和组分鉴定1
实验步骤
一、酵母中RNA粗制品的制备
1、提取： 将5g酵母悬浮于30ml 0.04 M NaOH溶液中（先加15ml），并在 研钵中研磨均匀，将悬浮液转移到锥形瓶中，在沸水上加热30 分钟(期间不时搅拌)。 2、分离 上述提取液取出，冷却后转入大离心管内，以4000r/min离心 10min，使提取液与菌体残渣等分离。 3、沉淀RNA 将上清液缓缓倾入（边搅拌）15ml酸性乙醇溶液中，待核糖核 酸沉淀完全后，离心5min（4000rpm）。 4、洗涤和抽滤 用95%乙醇15ml洗涤沉淀，离心5min（4000rpm）弃去上清液， 沉淀再用15ml无水乙醚拌匀后，布氏漏斗中抽滤（用乙醚冲洗 2-3次），至沉淀抽干，即得RNA粗制品。
实验六
酵母核糖核酸的提取 和组分鉴定
实验目的
学习稀碱法提取RNA，了解核酸的组分，并掌握鉴定
核酸组分的方法。
实验原理
由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备RNA的方法也各有不同，通
常根据材料的性质以及制备的要求来选择相应的提取方法。由于酵母
中RNA含量较高， DNA 较少，在实验室常用酵母作为提取RNA的材料, 一般使用浓盐法、稀碱法来提取变性的RNA ，若要制备具有生物活性 的RNA，实验室常用苯酚法。
本实验采用稀碱法提取制备RNA,其原理是利用稀的NaOH溶液，将细胞 裂解， RNA溶于碱性提取溶液中，升高温度使蛋白质变性，将蛋白质 与核酸分离，然后通过离心除去菌体等残渣，在上清液（碱提取液） 中加入酸性乙醇溶液使解聚的RNA沉淀，即得到RNA的粗制品。
核糖核酸中含有核糖、嘌呤碱，嘧啶碱和磷酸各组分，加硫酸煮沸可 使其水解，在水解液中用定糖，定磷和加银沉淀等方法测出上述组分 的存在。
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苯酚法提取酵母RNA
（一）原理
细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。
因此，提取RNA时要把RNA与蛋白质分离并除去。
将细胞置于含有十二烷基磺酸钠（Sodium dodecyl sulfate,SDS）的缓冲液中，加等体积水饱和酚，通过剧裂振荡，然后离心形成上层水相和下层酚相。
核酸溶于水相，被苯酚变性的蛋白质或者溶于酚相，或者在两相界面处形成凝胶层。
本实验采用的0.15mol/L 缓冲液系统可使大部分RNA-蛋白复合物解离，而DNA-蛋白复合物只有极少部分解离；用酚处理时DNA-蛋白复合物变性，在低温条件下从水相中除去，这样得到的RNA 制品中混杂的DNA 极少。
用氯仿-异戊醇继续处理RNA 制品，可进一步除去其中少量的蛋白质。
最后用乙醇使RNA 从水溶液中沉淀出来。
本法得到的RNA 不仅纯度高，而且多呈自然状态，可供继续研究之用。
（二）主要仪器和试剂
1、仪器
（1）台式高速离心机（10 000r/min）
（2）水浴
（3）Eppendorf 管（1.5mL）
（4）紫外可见分光光度计
（5）冰箱或冷柜（0~4℃）
（6）振荡器
（7）分析天平（精确至0.1mg）
（8）真空干燥器
2、试剂（均为分析纯）
（1）SDS-缓冲液：0.3% SDS,0.1mol/L NaCl,0.05mol/L 乙酸钠，用乙酸调到pH5.0。
（2）饱和酚液：重蒸苯酚用（1）溶液饱和。
（3）氯仿-异戊醇液：24﹕1（V/V）。
（4）含2%乙酸钾的95%乙醇溶液。
（5）无水乙醇
（6）乙醚
（7）溶菌酶（B.R.）（1mg/mL）
（三）操作步骤
1、取1g 活性干酵母在研钵中研碎，加10mL SDS-缓冲液使成匀浆，洗入各Eppendorf管（略少于管容积的一半），加溶菌酶0.1mL，混匀，室温静置10min,再加等体积饱和酚液，室温下剧烈振荡5min。
2、置冰浴中分层，在0~4℃低温环境下，10 000r/min 离心10min.吸出上层清液，转入新的Eppendorf 管，加等体积氯仿-异戊醇，室温下剧烈振荡2.5min，然后10 000r/min 离心5min。
3、吸出上层清液，转入另一新Eppendorf 管，加2 倍体积95%乙醇（含2%乙酸钾），在冰浴中放置30min，使RNA 沉淀。
4、再以10 000r/min 离心5min，弃上清液，沉淀用少许无水乙醇和乙醚各洗一次，即加乙醇或乙醚，迅速离心各1min，保留沉淀。
5、倾去乙醚后，减压真空干燥，准确称重，记录。
6、RNA 制品纯度的测定及RNA 提取率的计算与浓盐法相同。