何选择合适的细胞培养基？
谈谈在选择、配制和使用培养基时应注意哪些方面的内容。你们在试验中是如何做的有何体会？
试结合微生物学实验课的内容，谈谈在选择、配制和使用培养基时应注意哪些方面的内容。
你们在试验中是如何做的?有何体会？答：一、选择、配制和使用培养基时应注意以下几个方面的内容。
①明确目的，明确微生物的营养类型。
了解我们是用来培养什么样的微生物，是为了得到菌体还是得到发酵产物。
总体，所有微生物生长繁殖都需要培养基含有碳源，氮源，无机盐，生长因子和水。
就微生物的营养类型而言，有自养型（化能自养与光能自养）和异养型（化能异养与光能异养）。
这样才能更好的培养细胞。
②营养协调，营养物质浓度与配比要合适，有时候还要加入抗生素或者微量元素，或者血清。
③条件适宜：微生物的生长除了取决于营养因素，还受pH值、渗透压、氧气和氧化还原电位等理化因素。
④经济节约任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理，主要的灭菌方法：整体常规高压蒸汽灭菌，相关成分分开灭菌，有些成分或整个培养基过滤灭菌，分开灭菌的成分在临用前混合。
在使用过程中必须保持无菌环境。
二、实验中的做法上网查找需要培养的细菌的特点选择合适的培养基，按照相应配方准确称量所需物质。
需要制备固体培养基记得加入琼脂粉。
同时注意适宜该菌生长的pH值，用pH缓冲液对培养基pH进行调试，定容至所需体积。
加塞包扎好后加入高压灭菌锅灭菌。
灭完菌后放入无菌操作台。
在使用培养基或者是倒平板的过程中，时刻保持无菌的环境，不要碰触到三角瓶颈部，不要碰到棉塞内部。
培养基如果是使用完之后多余的不用处理时记得不能倒在水池里，要倒在垃圾桶内。
体会：在选择，配制培养基和使用时要小心仔细把握每一个环节，不懂的可以问老师或者自己上网百度，尽量照顾到所培养的细胞的喜好。
同时，全程都需要处于无菌的环境，尽量避免染菌。
培养基：人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。
任何培养基在配置时都应该考虑微生物生长所需要六大营养要素：碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水。
如何选择好的培养基
如何选择好的培养基培养基选择方法选择培养基没有一定标准，有几点建议可供参考：(1)建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基;(2)可以查阅文献或在购买细胞株时咨询;(3)平常惯用的培养基;(4)许多培养基可以适合多种细胞，根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基;(5)用多种培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标判断;(6)根据实验结果选择最佳培养基，这是最客观的方法，但比较繁琐。
培养基注意事项培养基在使用前通过高压或过滤灭菌。
防止污染应该注意以下事项：从污染的源头开始确认工作细胞库是否被污染：用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。
同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。
确认毒种工作种子批是否被污染：用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。
同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。
确认所用培养基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染：用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。
同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。
实际生产中，可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养，48小时即可观察有无污染。
一些单位在使用血清时候往往不经过过滤除菌处理便直接加入到培养液中，可能带来污染。
其它：高压灭菌设备、过滤除菌设备均应进行验证，确保灭菌和除菌效果;前者应在投产前及其后的每6个月进行验证，后者应在每次除菌前、后进行验证工作(至少应在除菌后进行一次)。
另外，应将有毒区与无毒区严格分开，并有各自独立的空气净化系统及孵室，有毒区对无毒区应保持相对负压，防止病毒对培养细胞(尤其是细胞库)的污染。
从GMP管理、SOP操作方面加强管理力度每二周或每周对无菌操作室及洁净区域按GMP要求进行检测人员的GMP管理和无菌操作强化培训一些特殊情况细菌的大小从0.1-700μm，为防止细小细菌的污染，过滤除菌应尽量采用0.1μm的滤膜或滤芯。
大面积污染时，应对所有设施、用具及操作环境进行彻底消毒。
如何选择合适的培养基和培养条件
如何选择合适的培养基和培养条件在生物科学研究中，细胞培养是非常重要的实验手段之一。
通过培养细胞，我们可以对其生长、分化和生物活性等进行深入的研究。
而要成功地培养细胞，选择合适的培养基和培养条件是至关重要的。
首先，我们需要了解细胞的类型和特性。
不同种类的细胞在生理和生化特性上存在差异，因此需要针对不同的细胞类型选择相应的培养基。
通常情况下，培养基可以分为无血清培养基和含血清培养基两类。
无血清培养基是指不含动物血清成分的培养基，主要适用于原代细胞的培养以及特殊要求的细胞系。
而含血清培养基则包含动物血清中的多种因子和营养物质，适用于细胞系的连续传代和大规模培养。
其次，在选择培养基时，需要考虑到细胞的营养需求和生长要求。
细胞需要获得充足的营养物质来维持其生长和增殖。
常见的培养基成分有运输生理盐水、糖类、氨基酸、维生素、抗生素等。
此外，还需要注意培养基的pH值和渗透压等因素，以保持培养环境的稳定性。
在细胞培养的过程中，我们还需要为细胞提供适当的温度、湿度和气体环境。
一般来说，细胞的适宜生长温度为37摄氏度，而湿度应保持在90%左右。
另外，细胞还需要充足的氧气和二氧化碳供应，以维持其正常代谢活动。
此外，细胞培养中还需要注意细胞的纯度和无菌性。
为了确保细胞的纯度，可以通过细胞的形态特征、生长速度和表面标记物等进行鉴定。
而为了保持培养环境的无菌性，我们需要严格遵守无菌操作的要求，并使用高质量的培养器具和培养基。
在选择培养基和培养条件时，还需要考虑到实验的目的和需求。
有些实验可能要求细胞的生长周期加快，可以选择富含生长因子和促进细胞增殖的培养基。
而有些实验则需要细胞的分化或特定功能的表达，需要通过添加不同的因子和调节培养条件来实现。
综上所述，选择合适的培养基和培养条件是成功进行细胞培养的关键。
针对不同的细胞类型和实验需求，我们需要根据细胞的特性和要求来选择合适的培养基，并提供适当的培养条件。
只有在确保细胞获得足够的营养和生长环境的情况下，我们才能获得可靠的实验结果，并推动细胞生物学研究的进一步发展。
选用和设计培养基的原则
选用和设计培养基的原则培养基是微生物学中常用的实验材料，用于培养和繁殖微生物。
良好的培养基选择和设计可以提供理想的生长环境，促进微生物的生长和繁殖。
以下是选用和设计培养基的一些原则：1.培养基必须提供所需的营养物质：微生物生长必须有所需的碳源、氮源、微量元素和水分等，培养基中应该满足这些需求，以提供足够的营养供给微生物生长。
2.培养基必须具有适宜的pH值：微生物对于pH值的敏感性不同，选用和设计培养基时需要根据微生物的要求调整pH值。
3.培养基必须提供适宜的温度：微生物对于温度的要求也不同，选用和设计培养基时需要根据微生物的要求调整培养基的温度。
4.培养基必须具有适宜的氧气条件：微生物对于氧气需求有明显的差异，一些微生物需要较高的氧气浓度，而另一些微生物则需要无氧条件。
设计培养基前需要确定微生物的需氧性，以提供适宜的氧气条件。
5.培养基必须具有选择性和差异性：一些实验需要有特定的微生物生长，因此需要选用有选择性的培养基。
例如，选择性培养基可以抑制一些微生物的生长，从而使目标微生物能够生长繁殖。
另外，差异培养基可以通过改变培养基组成或添加一些试剂，使不同微生物的形态或特性在培养基上产生差异，从而方便鉴定和分离微生物。
6.培养基必须符合实验的要求：不同实验对培养基的要求也不同，选用和设计培养基时需要根据实验的目的和要求进行调整和优化。
例如，在一些实验中可能需要特定的检测指标，例如其中一种特定的营养物质或其中一种特定的抑制剂，这时候需要根据实验需要调整培养基的组成。
除了以上的原则，还有一些其他的因素也需要考虑，例如经济性、易获取性等。
选用和设计培养基是一个复杂的过程，需要充分理解微生物的生理和生态特性，根据实验的需求进行优化和调整。
正确选用和设计培养基可以提供优良的生长环境，有助于微生物的研究和应用。
选择培养基
选择培养基引言：在生物科学研究和实验室工作中，选择正确的培养基是非常重要的。
培养基是供养细胞、微生物或其他生物体进行生长和繁殖的培养环境。
不同的生物体需要不同的培养基来提供所需的营养物质和环境条件。
本文将探讨选择培养基的重要性以及如何根据特定需求选择合适的培养基。
选择培养基的重要性：选择适当的培养基对于生物体的健康生长和研究结果的准确性至关重要。
不合适的培养基可能会导致细胞死亡、微生物感染、菌落不清晰等问题。
培养基的选择取决于多个因素，包括生物体的类型、目标实验的目的和特定的研究要求。
如何选择培养基：1.了解生物体类型：首先要了解要培养的生物体类型，例如细胞、微生物还是其他生物体，这将有助于确定选择培养基的范围。
不同类型的生物体具有不同的生长需求和生态环境。
2.了解生物体的特性：了解生物体的特性对于选择培养基至关重要。
例如，细胞培养通常需要富含营养物质的培养基，而微生物培养可能需要更适合其生理特性的培养基。
3.考虑营养物质和环境条件：根据所需的营养物质和环境条件来选择培养基。
一般来说，培养基中包含的主要成分包括碳源、氮源、维生素和矿物质等。
不同的生物体对这些成分的需求不同，因此需要根据特定需求来选择合适的培养基。
4.考虑生长因子和添加物：一些生物体在生长过程中需要特殊的生长因子或添加物来促进其生长和繁殖。
这些因子可以是激素、生长因子、抗生素等。
根据所研究的生物体类型和特性，选择含有适当生长因子和添加物的培养基。
5.考虑杂质和污染的风险：一些培养基可能带有杂质或受到污染，这可能会影响实验结果的准确性。
因此，选择质量良好、纯度高的培养基非常重要。
避免使用已过期的培养基，以及对培养基进行适当的质量控制和消毒处理，以减少污染的风险。
常用的培养基类型：根据生物体的类型和特性，人们开发了许多常用的培养基。
下面列举了几种常见的培养基类型：1.液体培养基：液体培养基是一种水溶性培养基，适用于细胞培养和微生物培养。
细胞培养基本条件
细胞培养基本条件1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。
2、优质血清目前，大多数合成培养基都需要添加血清。
血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。
3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。
在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。
因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。
4、恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。
5、合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。
细胞培养基种类与基本成分细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基和天然培养基（目前使用的培养基绝大部分是合成培养基），按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类。
干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌，液体培养基由专业商家提供，用户可直接使用，非常方便。
1、合成培养基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质：氨基酸氨基酸是组成蛋白质的基本单位。
不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。
其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。
因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。
但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。
已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2 周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺。
碳水化合物碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。
主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。
各种细胞培养基的区别及应用
各种细胞培养基的区别及应用细胞培养基是用于体外培养细胞的一种重要介质，它可以为细胞提供生长所需的营养物质、生长因子、激素等。
根据不同的需求和应用领域，细胞培养基有很多种类和特点。
本文将对细胞培养基的区别及应用进行详细介绍，以帮助大家更好地了解和选择合适的细胞培养基。
一、细胞培养基的概述细胞培养基的发展历程可以追溯到上世纪50年代，随着生物科学研究的不断深入，细胞培养技术得到了广泛应用。
细胞培养基的研究和应用不仅为生物学基础研究提供了有力支持，还为医学、农业、工业等领域创造了巨大价值。
二、细胞培养基的区别1.基础培养基与专用培养基基础培养基：含有细胞生长所需的基本营养物质，如糖、氨基酸、维生素等，适用于大多数细胞的培养。
常见的基础培养基有DMEM、RPMI-1640、MEM等。
专用培养基：针对特定类型的细胞设计，具有较高的特定成分和较窄的营养成分范围，可以满足某些细胞对特定营养物质的需求。
如HEK293细胞培养基、MCF-7细胞培养基等。
2.天然培养基与合成培养基天然培养基：来源于动物血清、血浆等天然物质，含有丰富多样的生长因子、激素等，具有较高的生物活性。
常见的天然培养基有FBS（胎牛血清）、ABC（人血清）等。
合成培养基：通过化学合成或重组技术制备，成分明确、可定制。
可以根据细胞需求添加不同的生长因子、激素等，具有较高的可控性。
如MED64培养基、Synthemax培养基等。
3.液体培养基与固体培养基液体培养基：含水量较高，细胞在其中可以自由悬浮和生长。
常见的液体培养基有DMEM/F12、RPMI-1640等。
固体培养基：在液体培养基中添加固体成分，如琼脂、纤维素等，使细胞可以在固体表面附着生长。
常见的固体培养基有agarose、matrigel等。
4.不同种类的细胞对培养基的需求不同种类的细胞对培养基的需求不同，例如：- 淋巴细胞培养：需要较高浓度的氨基酸、维生素和血清；- 神经细胞培养：需要添加神经营养因子、生长因子等；- 肿瘤细胞培养：需要较高浓度的糖和血清。
h22细胞培养方法
h22细胞培养方法H22细胞是一种来源于小鼠肝癌的细胞系，广泛应用于肿瘤生物学研究中。
本文将介绍H22细胞的培养方法。
一、细胞培养基的配制1.1 选择适合的培养基：常用的培养基有DMEM、RPMI-1640等，可以根据实验需要选择合适的培养基。
1.2 加入适宜浓度的胎牛血清(FBS)：通常在培养基中加入10%的FBS，以提供细胞所需的营养物质和生长因子。
1.3 加入适量的抗生素：为防止细菌和真菌污染，可加入适量的抗生素，如青霉素和链霉素。
二、细胞的传代与分裂2.1 细胞传代：当细胞达到80%～90%的密度时，可进行细胞传代。
首先用PBS缓冲液洗涤细胞，然后加入胰酶等消化酶，将细胞从培养瓶中剥离下来。
2.2 细胞计数与分裂：将细胞悬浮液放入细胞计数板中进行计数，根据需要的细胞数目，将细胞平均分配到新的培养瓶中。
三、细胞的培养条件3.1 温度：将培养瓶放入37℃的恒温培养箱中，维持细胞的正常生长温度。
3.2 湿度：保持培养箱内的湿度在90%以上，可通过在培养箱内放置一盘含水的容器来增加湿度。
3.3 CO2浓度：大部分细胞需要在含有5% CO2的环境中培养，可通过调节CO2气体的流速来达到合适的浓度。
3.4 传代时间：根据细胞的生长速度和实验需求，一般每2-3天进行一次传代。
四、细胞的检测与鉴定4.1 细胞形态观察：通过显微镜观察细胞的形态，判断细胞的生长状态和纯度。
4.2 细胞活力检测：常用的细胞活力检测方法有MTT法、CCK-8法等，可以评估细胞的活力和增殖能力。
4.3 细胞鉴定：通过免疫组化、流式细胞术等方法对细胞进行鉴定，确保细胞的来源和特性。
五、细胞冻存与解冻5.1 细胞冻存液的配制：将培养基中加入适量的冻存液，如DMSO，将细胞悬浮液与冻存液按一定比例混合均匀。
5.2 细胞的冻存：将混合液加入冻存管中，放入-80℃的冰箱快速冷冻保存。
5.3 细胞的解冻：将冻存管放入37℃水浴中迅速解冻，然后将细胞转移到预先准备好的培养瓶中进行培养。
细胞培养基的选择和质量判断
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第二部分 如何理解和有效实施
细胞培养基国家化工行业标准
2008-9-24
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1. 制定统一的标准规范细胞培养基的质量
国家化工行业标准： 《哺乳类动物细胞培养基》（HG/T3935-2007）。
2. 细胞培养基的生产实施GMP管理
建立统一的《细胞培养基生产质量管理规范》， 严格执行细胞培养基的工艺规程和操作规程，
实现每批次细胞培养基的可追溯管理，已成为 培养基行业发展的大势所趋。
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1、根据细胞特点、蛋白表达及病毒特点和培养方式选择 细胞培养基
培养方式
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选择合适 的细胞培养基
细胞特点
蛋白表达或 病毒特点
2008-9-24
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——Wurm博士，瑞士联邦科技学会生物工艺 学教授
——2005，《 Genetic Engineering News》
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无血清全悬浮培养的个性化培养基—无酚红培养基
¾酚红的作用： 作为pH值的指示剂，中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时
细胞合适的培养基
细胞合适的培养基培养细胞的重要环节有很多，其中很重要的一步就是为细胞选择适合的生长环境，为其选择成分适合又营养丰富的细胞培养基。
细胞培养基是供给细胞营养、维持细胞生长和增殖的多种营养物质的混合物，种类一般包括经典/基础培养基、无血清培养基以及化学成分确定的培养基等。
这其中又以经典/基础培养基最为常用。
经典/基础培养基属于合成培养基，是根据天然培养基的成分，用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基，其主要成分有氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其他辅助成分，比如DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12，这些都是应用非常广泛的经典/基础细胞培养基。
接下来为你详细介绍一下这些培养基以及适用的细胞类型：1.RPMI-1640 Medium：RPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。
主要用于悬浮细胞培养。
其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。
2.Minimum Essential Medium（MEM）：也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。
成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。
MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。
3.DMEM-高糖（标准型）：是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。
适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。
4.DMEM-低糖（标准型）：是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。
低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。
培养基选择与制备
培养基选择与制备培养基选择与制备是微生物学实验中非常重要的一部分。
合理选择适宜的培养基，并正确制备和保存培养基，对于微生物的繁殖和实验结果的准确性具有关键作用。
本文将介绍培养基的选择原则、不同类型培养基的制备步骤以及培养基的保存方法。
首先，选择培养基时需要考虑微生物的生长要求。
不同微生物对培养基的营养物质和环境条件有不同的要求，因此需要了解微生物的生长特性。
一般来说，培养基中必须包含碳源、氮源、无机盐和水等基本成分，以满足微生物的生长需求。
除此之外，一些微生物还需要额外的辅助因子，如维生素、氨基酸和生长因子等。
因此，在选择培养基时，需要根据微生物的生长特点，合理选择适宜的培养基。
其次，培养基的制备过程需要严格控制。
制备培养基的步骤一般包括称量和溶解培养基成分、调节pH值、加热灭菌和装瓶保存等。
在称量和溶解培养基成分时，要使用精确的称量器具，并保证混合均匀，避免成分沉积在底部。
调节pH值时，可以使用酸碱溶液进行调节，并使用pH计进行监测，确保调节到合适的范围。
在加热灭菌时，应使用高压高温的压力锅或高压灭菌器，确保培养基的无菌性。
最后，在装瓶保存时，要使用干净无菌的试管或烧杯，并密封保存，避免细菌和霉菌的污染。
不同类型的培养基有不同的制备方法。
以下是几种常见的培养基制备步骤：1. 肉汤培养基的制备：a. 称取适量的肉浸膏加入大量蒸馏水中，混合均匀。
b. 调节pH值到7.2-7.4，并使用pH计进行监测。
c. 加热培养基溶液到沸腾，持续加热15分钟。
d. 冷却后，用滤纸过滤，分装到试管或瓶中，密封保存。
2. 琼脂培养基的制备：a. 称取适量的琼脂加入大量蒸馏水中，加热搅拌溶解。
b. 调节pH值到7.0-7.2，并使用pH计进行监测。
c. 加热培养基溶液到沸腾，持续加热15分钟。
d. 冷却后，装入培养皿中，静置固化。
e. 可以在琼脂表面划线，用于接种微生物。
3. 露脂培养基的制备：a. 称取适量的露脂加入大量蒸馏水中，加热搅拌溶解。
细胞培养如何选用培养基及培养细胞注意事
细胞培养如何选用培养基及培养细胞注意事细胞培养是一种重要的实验技术，广泛应用于生物医学研究、药物筛选和生物工程等领域。
在进行细胞培养之前，首先需要选用适合的培养基，并且在培养细胞的过程中需要注意一些细节和技巧。
一、如何选用培养基1.培养基的成分培养基的成分直接影响细胞的生长和扩增。
常用的培养基主要包括基础培养基和补充物。
基础培养基一般是含有必需的营养物质，如氨基酸、糖类和盐类等，可以提供细胞生长需要的基础条件。
而补充物则依据不同的细胞类型而定，如生长因子、胰岛素、转录因子等。
2.细胞类型不同的细胞类型对培养基要求也各不相同。
在选择培养基时，需要根据培养的细胞类型来确定合适的培养基。
细胞类型的不同可能表现为细胞形态、生长特性等的差异，因此需要选择相应的培养基来满足细胞的生长需求。
3.应用目的培养基的选择也要考虑到实验所需的目的。
如若要进行细胞增殖实验，需要选择能够促进细胞增殖的培养基；若要进行细胞分化实验，则需要选择能够促进细胞分化的培养基。
因此，在选择培养基时要根据实验的目的来确定合适的培养基。
二、培养细胞的注意事项1.无菌技术在细胞培养中，无菌技术是非常重要的。
无菌条件能够保证细胞的正常生长，防止细菌、真菌等的污染。
培养器皿、培养基、耗材等都要进行高温、酒精消毒或紫外线照射等处理，保证无菌环境。
2.细胞的传代细胞的传代是维持细胞状态和增加细胞数量的重要方法。
传代时要注意细胞的生长状态，在细胞接近100%的融合程度时进行传代。
传代时可采用胰酶消化细胞，使细胞迅速分散，并避免细胞过度消化而引起的细胞损伤。
3.细胞密度的控制细胞密度的控制在细胞培养中非常重要。
细胞密度过低会导致细胞生长缓慢，而细胞密度过高则会导致营养不足和细胞之间的竞争，影响细胞的正常生长。
因此，要根据细胞类型和实验要求来控制细胞密度。
4.培养温度和湿度细胞的生长和分化对培养温度和湿度有一定的要求。
通常情况下，细胞培养的温度为37摄氏度，湿度为95%。
干细胞培养过程中的培养基选择与调整技巧
干细胞培养过程中的培养基选择与调整技巧干细胞是一类具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞，具有重要的研究和应用前景。
在干细胞培养过程中，培养基的选择和调整是非常关键的，可以直接影响到干细胞的生长、增殖和分化能力。
本文将介绍干细胞培养过程中培养基的选择和调整技巧。
一、培养基的选择干细胞的培养基通常包括基础培养基和补充物。
基础培养基提供了细胞生长所需的基本营养物质，而补充物可以调整培养基的成分，满足干细胞的特定需求。
常用的基础培养基主要包括无血清培养基和血清培养基。
无血清培养基通常采用动物血清替代物（如胎牛血清替代物，FBS），优点是能够降低培养基中的细菌和病毒污染风险，减少样品间的批次差异。
但无血清培养基的复杂配方和高成本是制约其广泛应用的主要因素。
相比之下，血清培养基更容易获取和使用，但存在许多负面因素，如潜在的污染风险和困扰实验结果的变异性。
当选择基础培养基时，需要考虑以下几个因素：1. 细胞类型：不同类型的干细胞对培养基成分的需求是不同的，如胚胎干细胞和间充质干细胞等对细胞因子和生长因子的需求有所差异。
2. 应用需求：如果是进行分化研究，需要选择适合特定分化类型的培养基；如果是进行维持和增殖，需要选择适合细胞增殖的培养基。
3. 实验目的：如果是进行基础研究，可以选择商业化的基础培养基；如果是进行应用研究或临床转化，可以选择自定义培养基。
在选择补充物时，需要根据细胞类型和实验需求来确定。
常用的补充物包括细胞因子、生长因子、维持因子和激素等。
补充物的种类和浓度应根据实验的需要进行调整。
二、培养基的调整技巧1. pH值的调整：维持适宜的pH值对于培养基的稳定性和细胞的生长非常重要。
在常温下，培养基的pH值通常保持在7.2-7.4之间。
可以通过添加缓冲液来调整培养基的pH值。
2. 渗透压的调整：细胞在维持稳态的过程中对渗透压非常敏感。
如果渗透压过高或过低，都会影响细胞的正常生理功能。
调整培养基的渗透压可以通过添加渗透剂（如蔗糖或甘露醇）来实现。
培养基的选择技巧与效果判断
培养基的选择技巧与效果判断
培养基的选择技巧与效果判断
选择合适的培养基是植物组织培养成功的基础。
选择合适的培养基主要从以下两个方面考虑：一是基本培养基；二是各种激素的浓度及相对比例。
MS培养基适合于大多数双子叶植物，B5和N6培养基适合与许多单子叶植物，特别是N6培养基对禾本科植物小麦、水稻等很有效，White培养基适合于根的培养。
首先试用这些培养基进行初步实验，可以少走弯路，大大；减少时间、人力和物力的消耗。
当通过一系列初试之后，可再根据实际情况对其中的某些成分做小范围调整。
在进行调整时，以下情况可供参考。
一是当用一种化合物作为氮源时，硝酸盐的作用比铵盐好，但单独使用硝酸盐会使培养基的PH向碱性方向漂移，若同时加入硝酸盐和少量铵盐，会使这种漂移得到克服。
二是当某些元素供应不足时，培养的植物会表现出一些症状，可根据症状加以调整，如氮不足时，培养的组织常表现出花色苷的颜色（红、紫红色），愈伤组织内部很难看到导管分子的分化；当氮、钾或磷不足时，细胞会明显过度生长，形成一些十分蓬松，甚至呈透明状的愈伤组织；铁、硫缺少时组织会失绿，细胞分裂停滞，愈伤组织出现褐色衰老症状；缺硼时细胞分裂趋势缓慢，过度伸长；缺少锰或钼时细胞生长受到影响。
培养基外源激素的作用也会使培养物出现上述一些类似的情况，所以应仔细分析，不可轻易下结论。
选用和设计培养基时应遵循的四原则四方法
选用和设计培养基时应遵循的四原则四方法
选用和设计培养基时应遵循的四原则：
1、目的明确：
培养不同的微生物必须采用不同的培养条件；培养目的不同，原料的选择和配比不同。
2、营养协调：
微生物细胞组成元素的调查或分析，是设计培养基时的重要参考依据。
3、理化适宜：
指培养基的pH值、渗透压、水活度和氧化还原电势等物理化学条件较为适宜。
4、经济节约：
配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分,特别是在发酵工业中,以降低生产成本。
选用和设计培养基时应遵循的四方法：
1、生态模拟。
2、参阅文献。
3、精心设计。
4、实验比较。
如何选择合适的细胞培养基
细胞培养是实验室里最常见和最基本的实验了，但却不是最简单的。
别小看细胞培养，这里可蕴含着大学问。
有时候细胞状态不好，转染、药筛这些实验根本就没办法做。
影响细胞培养的因素很多，让我们先从培养基和血清说起。
经典的培养基有很多种，Invitrogen(GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)、Sigma等公司都可以提供。
其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是应用最广泛的培养基。
其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。
◆ MEM是由Eagle’s基础培养基(BME)发展而来的，其中增加了组分的范围及浓度。
◆ Dulbecco改良的BEM(DMEM)培养基是为小鼠成纤维细胞设计的，现在常用于贴壁细胞的培养。
DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。
最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L，后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L，这就是大家常说的低糖和高糖了。
◆ aMEM含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸，它可广泛应用于各种细胞类型，包括对营养成分要求苛刻的细胞。
◆Ham’s F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的，现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。
F12还可以与DMEM等体积混合使用，得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物，这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。
◆ RPMI 1640培养基是专为淋巴细胞培养而设计的，现在已广泛应用于悬浮细胞的培养。
以前经常听到有人问，这种细胞该用哪一种培养基呢？其实这个问题的答案可以很简单，也可以好复杂。
此话怎讲？如果这种细胞是购自ATCC或其他的细胞库，那很简单，问供应商就行了。
或者找到相关的文献，作为参考。
Invitrogen网站上有一个Cell Line Database的工具，也很好用。
细胞培养基的技术要求
细胞培养基的技术要求细胞培养基是一种提供细胞生长和繁殖所需的营养物质和环境条件的培养液。
它在细胞培养和细胞实验中起着至关重要的作用。
为了保证细胞培养基的质量和有效性，有一些技术要求需要遵守。
细胞培养基的配制需要严格按照配方比例进行。
不同类型的细胞需要不同的培养基配方，因此需要根据细胞类型的要求来选择合适的培养基。
培养基的配制过程中应注意避免外源性污染，如细菌、真菌和病毒等。
同时，培养基的配制过程中应避免使用含有抗生素的培养基，以免影响细胞生长和实验结果。
细胞培养基的pH值需要控制在适宜范围内。
pH值的过高或过低都会对细胞的生长和繁殖产生不利影响。
一般来说，细胞培养基的pH 值应在7.2-7.4之间。
为了保持细胞培养基的稳定性，可以将培养基放置在含有二氧化碳的培养箱中，以维持适宜的pH值。
第三，细胞培养基的温度需要适当控制。
细胞的生长和繁殖对温度非常敏感，一般来说，细胞培养基的温度应保持在37摄氏度。
为了保持培养基的稳定温度，可以使用恒温箱或培养箱来控制温度。
此外，还可以在细胞培养过程中定期检测培养基的温度，确保温度的稳定性。
细胞培养基的贮存也是关键的一步。
细胞培养基应保存在低温下，一般在-20摄氏度或更低的温度下保存。
同时，细胞培养基的密封性也非常重要，以避免污染和营养物质的损失。
在使用细胞培养基前，需要先检查其外观和质地，确保没有异常情况发生。
细胞培养基的使用过程中需要注意无菌操作。
细胞培养基应在无菌条件下进行配制和使用，以避免细胞培养基被细菌、真菌等微生物污染。
在使用细胞培养基的过程中，操作人员应佩戴合适的防护设备，如实验手套、口罩和实验服等，以减少外源性污染的可能性。
细胞培养基的技术要求可以总结为以下几点：严格按照配方比例配制、控制pH值在适宜范围内、保持温度稳定、妥善贮存以及无菌操作。
遵守这些技术要求可以保证细胞培养基的质量和有效性，为细胞培养和细胞实验提供良好的条件。
在细胞培养研究中，细胞培养基的选择和使用是至关重要的，只有掌握了这些技术要求，才能更好地进行细胞培养和研究工作。
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细胞培养是实验室里最常见和最基本的实验了，但却不是最简单的。
别小看细胞培养，这里可蕴含着大学问。
有时候细胞状态不好，转染、药筛这些实验根本就没办法做。
影响细胞培养的因素很多，让我们先从培养基和血清说起。
经典的培养基有很多种，Invitrogen （GIBCO ）、Thermo Fisher （HyClone ）、Sigma 等公司都可以提供。
其中DMEM 、RPMI 1640、MEM 、DMEM/F12都是应用最广泛的培养基。
其他如M199、IMDM 、L15培养基等也用于某些细胞的培养。
◆ MEM 是由Eagle’s 基础培养基（BME ）发展而来的，其中增加了组分的范围及浓度。
◆ Dulbecco 改良的BEM （DMEM ）培养基是为小鼠成纤维细胞设计的，现在常用于贴壁细胞的培养。
DMEM 的氨基酸浓度是MEM 的两倍，维生素浓度是MEM 的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。
最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L ，后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L ，这就是大家常说的低糖和高糖了。
◆ aMEM 含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸，它可广泛应用于各种细胞类型，包括对营养成分要求苛刻的细胞。
◆ Ham’s F12是为在低血清浓度下克隆CHO 细胞而设计的，现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。
F12还可以与DMEM 等体积混合使用，得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物，这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。
◆ RPMI 1640培养基是专为淋巴细胞培养而设计的，现在已广泛应用于悬浮细胞的培养。
以前经常听到有人问，这种细胞该用哪一种培养基呢？其实这个问题的答案可以很简单，也可以好复杂。
此话怎讲？如果这种细胞是购自ATCC 或其他的细胞库，那很简单，问供应商就行了。
或者找到相关的文献，作为参考。
Invitrogen 网站上有一个Cell Line Database 的工具，也很好用。
选择你感兴趣的细胞类型，它就会弹出推荐的培养基、血清和转染试剂等，有时还有优化好的转染步骤，很方便。
Sigma 网站上也有一个Media Expert ，包括了培养基所有成分的功能描述、使用推介和参考文献等，它还是一个解决问题能手，对于细胞培养中的常见问题，如细胞贴壁不好、培养基变色等，它都会列出可能的原因，并提供补救办法。
这个Expert 果然不简单！但如果你是着手建立一种全新细胞的培养体系，根本找不到任何参考，那你就得花点时间自己试验了。
万事开头难嘛。
因为没有一个标准答案。
在MEM 中培养的细胞，很可能在DMEM 或M199中同样很容易生长。
总之，首选MEM 做贴壁细胞培养、RPMI 1640做悬浮细胞培养会是一个好的开始。
你也可以购买几种培养基来，然后花大约两周的时间做一 第 1 页，共 29 页下一页个简单的细胞生长实验，来选择其中最适合的。
有时候你会惊讶地发现你的最佳培养条件与文献报道的不同，就算是同一种培养条件，细胞的生长状态也时好时坏，这是很正常的。
因为试剂、水、不同批号的血清之间都存在着差异。
要提高培养基的稳定性，可以从培养基和血清两方面入手。
以前大部分实验室都是用干粉培养基，但配制过程就较为繁琐，要溶解、调pH值，过滤，过程中可能会产生一些浓度误差，而且有些实验室的水质并不理想，所以培养的效果会有差异。
如果使用液体培养基，这种人为的误差会减少，因为毕竟是大批量工业化生产的，批间差会很小。
大家是不是感觉液体培养基会贵很多，以前是这样，但现在非也。
HyClone 和Invitrogen都在国内建立了液体培养基的生产基地，生产和运输成本大幅降低，所以现在的价格也只是50-60元/500ml，比干粉培养基贵不了多少，而且还帮你省了过滤器和时间。
血清含有生长因子可促进细胞的繁殖，含有附着因子可促进细胞的贴壁，同时还具有抗胰酶活性。
血清同时也是矿物质、脂类及激素的来源。
最常用的血清有小牛血清、新生牛血清、胎牛血清和马血清等。
牛血清是按照采血时间的早晚来分类的。
采血时间越早，营养物质越丰富，所含抗体也越少，因而胎牛血清适合要求高的细胞系和克隆化培养。
由于疯牛病的原因，到目前为止，我国政府仍然禁止从北美洲、欧洲和日本等地区进口牛血清，因此市面上的牛血清大多来自澳洲、南美洲，或是国产的。
而血清批次间的差别就是不可避免的，这种差异来源于不同的制备方法和除菌方法、动物的年龄差别及血清的储存条件等，而且与取血动物的来源关系密切。
不同的牧场、不同的气候天气及其他环境因素都可能影响血清的质量。
因此选好了一种血清就要尽可能长期使用它。
在需要更换时，也要尽量保持与原有的一批血清相似。
现在很多公司都提供血清预留，你一旦选定了某个批次的血清，最好备足一年的量，这样可以避免很多麻烦。
血清固然是细胞培养中不可或缺的成分，但正如上文所说，血清的批间差异大，更换血清时需要做大量的测试以取保替换的血清与原来的相似。
而血清的供应也是必须要考虑的因素。
由于气候或疯牛病的影响，说不定哪天血清就突然没得卖了，那对实验的影响可非同小可。
另外，血清的价格也很昂贵，虽说现在也有便宜的国产血清，但是高品质的澳洲血清价格仍旧高企。
因此，也有一些实验室开始换用无血清培养基。
无血清培养基（Serum-Free Media），通常以SFM表示，顾名思义，就是在细胞培养中不需要添加血清，但是在某些应用中可能要添加生长因子或细胞因子。
无血清培养基中添加了血清的主要成分：粘附因子、生长因子、必需的营养物质和激素等，能减少上述血清带来的不利因素，使细胞培养的条件更稳定。
但它也不是完美的，从有血清培养过渡到无血清培养的条件并不像想象中那么直截了当。
处于发育的不同分化阶段的细胞（例如干细胞与定向前体细胞相比）需要不同的配方，对生长因子和细胞因子的选择尤为重要。
而且在去除血清的同时，也去除了一些血清蛋白具有的保护、解毒作用，因此对试剂、水的纯度和仪器清洁度的要求更高。
另外，它的价格也比普通的培养基贵很多。
现在有很多厂家生产无血清培养基。
GIBCO这个细胞培养的金字招牌当然少不2008年8月20日第三十七期第 2 页，共 29 页下一页 返 回了，它也是最早研制无血清培养基的。
目前已经开发了ES细胞、杂交瘤、CHO、293、昆虫细胞、神经细胞、淋巴细胞、角质细胞、内皮细胞等多种细胞的无血清培养基。
上个月还推出了首个间充质干细胞的无血清培养基，能使MSC维持未分化状态超过9代。
HyClone 公司也有CHO、293、杂交瘤细胞、昆虫细胞、病毒疫苗细胞的多种无血清培养基。
Sigma则刚刚收购了澳大利亚JRH公司，有了JRH的EX-CELL系列，无血清培养基的选择也更多了。
这么多种，要选择起来也是个头疼的事情。
除了部分培养基是公开配方的，如用于培养内皮细胞的MCDB 131（Sigma），大部分液体培养基都是专利配方的，也就是说其中的成分是保密的。
那么你只能是检索文献、让供应商推荐，然后用自己的细胞做几次传代培养来选出最合适的培养基。
毕竟实践出真知嘛。
P.S.附上一些细胞培养中的小Tip，可能会对您有所启发。
（部分摘自Invitrogen的中文Focus）• 切记，细胞培养基的储存条件是2-8摄氏度。
如果细胞培养基不小心被冻，您应该融化培养基并观察是否有沉淀产生。
如果没有沉淀产生，培养基可以正常使用，如果出现沉淀，只能丢弃这些培养基。
• 贮存在冰箱中的瓶口已开的培养基，可能在放置几天后颜色变紫。
这主要是由于在暴露到周围的CO2水平时，碳酸氢纳导致了pH 值的上升。
您可以在使用前松开瓶口，在CO2培养箱孵育培养基10-15分钟，来校正溶液的pH值（确定松开瓶口以保证气体交换）。
• 当在无血清培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。
血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。
在无血清培养条件下，抗生素不被灭活，可能对于细胞达到毒性水平。
• 一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。
因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。
• 总之，大部分添加物和试剂最多可以冻融3次，如果次数更多都会在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，将会影响它的性能。
• 血清的热灭活在免疫分析时可以灭活补体系统。
在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。
热灭活是以往公认的操作步骤，并没有确凿的证据说明这样做是有益的。
相反，对大部分细胞而言，GIBCO和HyClone都不推荐热灭活血清。
因为加热可能使血清中的沉淀增加，使您误以为污染。
• 如何避免血清中沉淀物的产生？1. 解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃)，实验显示非常容易产生沉淀物。
并随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。
2. 请勿将血清置于37℃太久。
若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。
3. 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。
4. 若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。
温度过第 3 页，共 29 页下一页 返 回1）下载细胞库目录：/pdf/tcl.pdf高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。
2）查询细胞株：/SearchCatalogs/CellBio logy.cfm• 在进行传代培养时，我们强烈推荐进行台盼兰活性记数。
研究者常常通过一个简单的稀释（1∶4或1∶2）进行传代，不进行活性检测，您可能接种比你认为的低的多的浓度的细胞，这常常可能导致生长缓慢或培养物根本不生长。
3）胚胎干细胞库：/products/cells.cfmECACC （European Collection of CellCultures ）• 贮存在4℃冰箱中的液体胰蛋白酶溶液只能使用一周。
胰蛋白酶在4℃就可能开始降解，如果在室温下放置超过30分钟，就会变得不稳定。
/中国科学院上海细胞库/干细胞库 • 在订购的细胞到达后，应立即复苏，如果培养基还没有准备好，可将其放入液氮中，尽快复苏。
千万不能放置在-20或-80℃的冰箱内。
/中国典型培养物保藏中心(也称武汉大学保藏中心)/cctcc/• 细胞复苏往往是比较容易出问题的步骤。
请在订购细胞时就向供应商索取详细的复苏步骤，并仔细阅读。
有些供应商就不推荐在复苏时离心，对此类细节，应特别留意。
中国医学科学院基础医学研究所细胞中心（协和细胞库）/xibaozhongxin/index.ht m国内外的主要细胞库：（生物通 余亮）ATCC （细胞株及胚胎干细胞库）2008年8月20日第三十七期第 4 页，共 29 页 返 回。