临床输血学检验4
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过氧化酶最强阳性的嗜酸性粒细胞;过氧 化酶强阳性的嗜中性分叶核粒细胞;体积 较大、过氧化酶弱阳性的单核细胞 ;体 积较小、过氧化物酶阴性的淋巴细胞 ; 体积大于淋巴细胞且过氧化物酶阴性的未 染色大细胞,此类细胞增加提示幼稚或原 始的各类细胞可能出现。
33
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4、多角度偏振光散射
• 细胞化学染色:淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞和 嗜酸性粒细胞对染色剂的着色程度不同、每种细胞特 定的细胞核形态和颗粒的结构造成光散射的强度不同, 产生了特定的吸光率。
• 第一鞘流液:电阻抗(体积) • 第二鞘流:光吸收率分析(细胞内容物)
WBC/BASO 通道
37
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异质性的参数,即反映红细胞大小不均的客观 指标。RDW多采用RDW-CV和RDW-SD表示。
45
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RDW-SD
• RDW-SD是以红细胞分布的峰值相当于 100%时的20%界限的分布宽度,以fl表 示[正常RDW-SD=(42±5)fl]。
46
南京医科大学第一临床医学院检验系
溶血剂(E-lyse): 溶解红细胞 终止剂(S-lyse): 令溶解作用 停止,并使白细胞恢复到
“接近原态”
22
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体积(V)
用低频电流准确分析 细胞体积,体积是区 分白细胞亚群一个很 重要的参数,它能有 效区分淋巴细胞和单 核细胞。
23
南京医科大学第一临床医学院检验系
五分类
3
南京医科大学第一临床医学院检验系
自动化程度越来越高 通过条形码识别、自动运输装 置、自动混匀、自动进样、自 动检测、自动报告、自动清洗、 自动涂片,形成了模块式自动 化血液分析流水线 提供参数越来越多 精度越来越高 速度越来越快 强大的质控功能 智能化程度越来越高
4
南京医科大学第一临床医学院检验系
再生障碍性贫血、真性红细胞增多症、骨髓增生异 常综合症 略增高
估计移植后造血恢复的早期指标
53
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MCV和Hct
MCV:直接由分析仪测量得到
Hct RBC
17
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细胞悬液(稀释、染色、 球形化)注入鞘液流中 央,单个细胞随悬液和 鞘液两股液流通过石英 毛细管,受激光束照射, 因本身特性(体积、染 色、细胞核、细胞成分) 不同,阻挡激光或改变 其方向,产生各角度散 射光。
如:细胞荧光染色,染色后 细胞经激光照射,产生不同 波长荧光散射。
15
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三 光散射法
流式细胞术(Flow CytoMeter,FCM) 五分类主要检测原理
16
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鞘流技术
使血细胞单个成排的通过检测孔接受激光检测
鞘液的作用是将样品流环包。鞘液流稳定流动,样品 流在鞘流的环包下形成流体动力学聚焦,使样品流不 会脱离液流的轴线方向,并且保证每个细胞通过激光 照射区的时间相等,从而得到准确的细胞光学信息。
√
血液分析仪检验
张丽霞
1
南京医科大学第一临床医学院检验系
• 是临床检验最常用的筛检仪器之一 。
• 传统的显微镜血细胞计数或分类方法: 速度慢、误差大、影响因素多,且难以满足临 床大量标本检测需求。
2
南京医科大学第一临床医学院检验系
Coulter
三分类
WBC数:>35fL 35~90fL 小细胞区: 淋巴细胞 90~160fL中间细胞: 单核细胞、嗜酸、 嗜碱 、异常细胞 >160fL 大细胞区: 中性粒细胞
荧光信号 侧向散射光
前向散射光
细胞大小、细胞分类
18
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用于血液分析仪检测的染料分为荧光染料和非荧 光染料。
• 荧光染料有:碱性槐黄、噻唑橙、噁嗪、聚亚 甲基蓝和碘化丙啶等,主要用于核酸染色,网 织红细胞计数
• 非荧光染料有:亚甲基蓝(用于核酸染色),
氯唑黑E(用于单核细胞、嗜酸性粒细胞、中
了解血液分析仪类型原理 掌握常用的参数 熟悉正常及异常变化细胞直方图
6
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第一节 检测原理
1
电阻抗法
Coulter principle
导电性 大小,数量
2
3
射频电导法
激光散射法
Radio requency,RF 流式细胞术(Flow
高频电流,电导性
CytoMeter,FCM)
一般均以检验报告单的形式显示,并向临床发出 或传送结果。当检测结果超出参考区间时,仪器 会给予符号标记(↑表示增高,↓表示降低),或 用特定颜色(如红色表示增高,蓝色表示降低) 加以提示。
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44
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红细胞体积分布宽度
red blood cell volume distribution width RDW • 红细胞体积分布宽度(RDW)是红细胞体积
•
三分群血液分析仪的核心技术
• 与光学原理联合—五分类血液分析仪
WBC、RBC、PLT
12
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三分群
溶血素处理: RBC破坏/WBC胞质溢出 大小
WBC数:>35fL 第一群:35~90fL 第二群:90~160fL
第三群:>160fL
核、颗粒
小细胞区:淋巴细胞 中间细胞:单核细胞、嗜酸、嗜碱 原始细胞、幼稚细胞 大细胞区:中性粒细胞
血液分析仪能够提供的数据:
• ①全血细胞计数及其相关参数的计算。 • ②白细胞分类。 • ③血细胞计数和分类的扩展功能,包括:有核
红细胞计数、网织红细胞计数及其相关参数检 测;幼稚粒细胞、未成熟粒细胞、造血干细胞 计数;未成熟血小板比率;淋巴细胞亚型计数; 细胞免疫表型检测等。
5
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24
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光散射(S)
运用一个氦氖激光源发 出的单色激光扫描细胞, 收集细胞在100~700的散 射光提供关于细胞结构、 形态信息,可以很好地 区分颗粒特性不同的细 胞。
25
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26
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• 与嗜酸性颗粒特异性结合的能力,可根据侧向散射光 信号强度,将嗜酸性粒细胞从中性粒细胞中分离出来
30
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(2)WBC/BASO 通道
嗜碱性粒细胞 将红细胞和血小板处 理后呈淡影化,将除 嗜碱性粒细胞以外的 白细胞处理成裸核形 态,在这个通道中可 以获得白细胞总数和 嗜碱性粒细胞的数量。
31
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3、钨光源散射与细胞化学方法
利用过氧化物酶作为WBC分类的试剂。利用 热力固定白细胞、令红细胞破裂、 将过氧化物 酶粒体染色,检测经过激光照射所产生的过氧 化酶散射光吸收率
过氧化酶通道和WBC/BASO 通道
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过氧化物酶活性: E>N>M L阴性
13
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二 射频电导法Radio requency,RF 高频电流
细胞内部化学成分 细胞核和胞质(比例) 颗粒(大小、密度)
14
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区分电阻抗法所不能区分的体积一样的细胞 如:淋巴细胞和嗜碱性粒细胞
• 大小一样 ➢核质比不同 ➢颗粒不同
WBC分类
RDW-CV
• 是红细胞在体积分布曲线上1SD的分布 宽度与MCV的比值(正常RDW-CV= 11.5%~14.5%)。RDW-CV易受MCV 大小的影响,小红细胞增多时因为MCV 减小,极易放大RDW-CV的改变。相反, 大红细胞增多时会平衡掉曲线宽度的变 化,从而减小RDW-CV。
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细胞内部化学成分
激光束照射
细胞核和胞质(比例)
颗粒(大小、密度)
4
分光光度法 血红蛋白
7
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一 电阻抗法(库尔特)检测原理
根据血细胞非传导的性质,以电解质溶 液悬浮颗粒在通过计数小孔时引起的 电阻变化进行放大,阈值调节,甄别、 整形,最后送入计数系统计数和体积 测定
8
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电导(C)
运用高频电磁探针检测细胞核及核质比的特性。细胞膜对 高频电流具传导性,当电流通过细胞时,细胞核的化学组 份令电流的传导产生变化,其变化量(RF)可以用来反映细 胞内含物的信息。 该参数可用来进一步区别体积差不多的细胞,如:淋巴细 胞和嗜碱细胞,由于它们的 细胞核特性不同而在传导性参 数上有所区别。
血小板分布宽度PDW
反映血小板体积大小变异性参数 PDW减小表明血小板的均一性高,增高表明血小板大小悬殊。 参考范围:14.8~17.2%
血小板比积(plateletcrit,PCT)
血小板容积在血液容积的比值
50
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增高提示活性强的新生血小板
51
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网织红细胞
网织红细胞成熟指数RMI RMI=(MFR+HFR)/LFR 100%
RMI值越高
幼稚网织红细胞比率越高
参考范围(%) 男性 9.1~32.2 女性 12.8~33.7
52
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临床意义
较网织红细胞总数变化更具意义 高RMI: 溶血性贫血、特发性血小板减少性紫 癜、慢性淋巴细胞性白血病、急性白血病患者 低RMI:骨髓衰竭、无效造血
Baidu Nhomakorabea南京医科大学第一临床医学院检验系
RDW与MCV结合,对贫血分类和鉴别诊断有临床意义。 Bessman(1983年)提出了贫血的MCV/RDW分类法(表3-21)
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血小板平均体积mean platelet volume,MPV
增高提示活性强的新生血小板 参考范围:7.6~13.2 fL
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多角度偏振光散射法模式图
0°前向散射光,7°侧向散射
光
35
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90°垂直角度散射光(偏振光)
90°垂直角度消偏振散射光(去偏振 光),90°垂直角度散射光(偏振光)
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5、双鞘流技术和细胞化学染色法
非导电,电阻大
9
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脉冲的大小 脉冲的数量
细胞体积的大小 细胞的数量
10
南京医科大学第一临床医学院检验系
电阻抗法正常红细胞直方图
电阻抗法正常血小板计数 和拟合曲线直方图
电阻抗法红细胞计数和血小 板计数是在相应通道内进行 计数
11
南京医科大学第一临床医学院检验系
应用
VCS细胞检测立体散点图
VCS异常细胞检测 平面散点图位置
28
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2、 电阻抗、射频、流式细胞 术和核酸荧光染色方法
29
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(1)4DIFF通道
• 溶解红细胞和血小板,在白细胞膜上打出小孔,荧光 染料通过这个小孔进入白细胞中,与细胞核的核酸和 细胞器结合,激光照射后产生的荧光强度与细胞的核 酸含量成正比。
临床意义
值大表明红细胞大小不均匀,值小表明红细胞 大小均匀; 小细胞
低色素 ❖ 用于缺铁性贫血和轻型珠蛋白生成障碍性贫血的鉴别诊断,前
者早增期高诊,断后(者灵正敏常度;高,特异性较高): ❖ 缺铁贫的筛选诊隐断性和缺疗铁效期观察; ❖ 进行贫血形态学的新分类(与MCV结合)。
疗效观察:恢复最晚
48
第二节 检验参数和图形
血液分析仪检测参数包括 临床报告参数、异常报警或研究参数、仪
器内部监测参数3类。
38
南京医科大学第一临床医学院检验系
39
南京医科大学第一临床医学院检验系
40
南京医科大学第一临床医学院检验系
41
南京医科大学第一临床医学院检验系
42
南京医科大学第一临床医学院检验系
(一)数据
性粒细胞颗粒和白细胞的膜结构染色), 过氧
化物酶试剂。
19
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四 分光光度法
血红蛋白
稀释液和溶血剂使血红蛋白溢出,后者与溶血 剂某些成分结合,形成稳定的血红蛋白衍生物, 530-550nm下比色,吸光度与血红蛋白浓度成 正比。
含氰化物:改良HiCN-540nm
不含氰化物:SLS-Hb-555nm
月桂酰硫酸钠
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(SLS) 南京医科大学第一临床医学院检验系
血液分析仪检测原理综合运用
电学、光学、细胞化学等
21
南京医科大学第一临床医学院检验系
1、 VCS (Volume,conductivity,scatter)
先溶解红细胞,再使白细胞恢复到原态, 细胞与体内状态完全相同 鞘流技术单个通过,同时接受VCS三种 方式检测
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4、多角度偏振光散射
• 细胞化学染色:淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞和 嗜酸性粒细胞对染色剂的着色程度不同、每种细胞特 定的细胞核形态和颗粒的结构造成光散射的强度不同, 产生了特定的吸光率。
• 第一鞘流液:电阻抗(体积) • 第二鞘流:光吸收率分析(细胞内容物)
WBC/BASO 通道
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异质性的参数,即反映红细胞大小不均的客观 指标。RDW多采用RDW-CV和RDW-SD表示。
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RDW-SD
• RDW-SD是以红细胞分布的峰值相当于 100%时的20%界限的分布宽度,以fl表 示[正常RDW-SD=(42±5)fl]。
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溶血剂(E-lyse): 溶解红细胞 终止剂(S-lyse): 令溶解作用 停止,并使白细胞恢复到
“接近原态”
22
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体积(V)
用低频电流准确分析 细胞体积,体积是区 分白细胞亚群一个很 重要的参数,它能有 效区分淋巴细胞和单 核细胞。
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五分类
3
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自动化程度越来越高 通过条形码识别、自动运输装 置、自动混匀、自动进样、自 动检测、自动报告、自动清洗、 自动涂片,形成了模块式自动 化血液分析流水线 提供参数越来越多 精度越来越高 速度越来越快 强大的质控功能 智能化程度越来越高
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南京医科大学第一临床医学院检验系
再生障碍性贫血、真性红细胞增多症、骨髓增生异 常综合症 略增高
估计移植后造血恢复的早期指标
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MCV和Hct
MCV:直接由分析仪测量得到
Hct RBC
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南京医科大学第一临床医学院检验系
细胞悬液(稀释、染色、 球形化)注入鞘液流中 央,单个细胞随悬液和 鞘液两股液流通过石英 毛细管,受激光束照射, 因本身特性(体积、染 色、细胞核、细胞成分) 不同,阻挡激光或改变 其方向,产生各角度散 射光。
如:细胞荧光染色,染色后 细胞经激光照射,产生不同 波长荧光散射。
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三 光散射法
流式细胞术(Flow CytoMeter,FCM) 五分类主要检测原理
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鞘流技术
使血细胞单个成排的通过检测孔接受激光检测
鞘液的作用是将样品流环包。鞘液流稳定流动,样品 流在鞘流的环包下形成流体动力学聚焦,使样品流不 会脱离液流的轴线方向,并且保证每个细胞通过激光 照射区的时间相等,从而得到准确的细胞光学信息。
√
血液分析仪检验
张丽霞
1
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• 是临床检验最常用的筛检仪器之一 。
• 传统的显微镜血细胞计数或分类方法: 速度慢、误差大、影响因素多,且难以满足临 床大量标本检测需求。
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南京医科大学第一临床医学院检验系
Coulter
三分类
WBC数:>35fL 35~90fL 小细胞区: 淋巴细胞 90~160fL中间细胞: 单核细胞、嗜酸、 嗜碱 、异常细胞 >160fL 大细胞区: 中性粒细胞
荧光信号 侧向散射光
前向散射光
细胞大小、细胞分类
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用于血液分析仪检测的染料分为荧光染料和非荧 光染料。
• 荧光染料有:碱性槐黄、噻唑橙、噁嗪、聚亚 甲基蓝和碘化丙啶等,主要用于核酸染色,网 织红细胞计数
• 非荧光染料有:亚甲基蓝(用于核酸染色),
氯唑黑E(用于单核细胞、嗜酸性粒细胞、中
了解血液分析仪类型原理 掌握常用的参数 熟悉正常及异常变化细胞直方图
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第一节 检测原理
1
电阻抗法
Coulter principle
导电性 大小,数量
2
3
射频电导法
激光散射法
Radio requency,RF 流式细胞术(Flow
高频电流,电导性
CytoMeter,FCM)
一般均以检验报告单的形式显示,并向临床发出 或传送结果。当检测结果超出参考区间时,仪器 会给予符号标记(↑表示增高,↓表示降低),或 用特定颜色(如红色表示增高,蓝色表示降低) 加以提示。
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红细胞体积分布宽度
red blood cell volume distribution width RDW • 红细胞体积分布宽度(RDW)是红细胞体积
•
三分群血液分析仪的核心技术
• 与光学原理联合—五分类血液分析仪
WBC、RBC、PLT
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三分群
溶血素处理: RBC破坏/WBC胞质溢出 大小
WBC数:>35fL 第一群:35~90fL 第二群:90~160fL
第三群:>160fL
核、颗粒
小细胞区:淋巴细胞 中间细胞:单核细胞、嗜酸、嗜碱 原始细胞、幼稚细胞 大细胞区:中性粒细胞
血液分析仪能够提供的数据:
• ①全血细胞计数及其相关参数的计算。 • ②白细胞分类。 • ③血细胞计数和分类的扩展功能,包括:有核
红细胞计数、网织红细胞计数及其相关参数检 测;幼稚粒细胞、未成熟粒细胞、造血干细胞 计数;未成熟血小板比率;淋巴细胞亚型计数; 细胞免疫表型检测等。
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光散射(S)
运用一个氦氖激光源发 出的单色激光扫描细胞, 收集细胞在100~700的散 射光提供关于细胞结构、 形态信息,可以很好地 区分颗粒特性不同的细 胞。
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• 与嗜酸性颗粒特异性结合的能力,可根据侧向散射光 信号强度,将嗜酸性粒细胞从中性粒细胞中分离出来
30
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(2)WBC/BASO 通道
嗜碱性粒细胞 将红细胞和血小板处 理后呈淡影化,将除 嗜碱性粒细胞以外的 白细胞处理成裸核形 态,在这个通道中可 以获得白细胞总数和 嗜碱性粒细胞的数量。
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3、钨光源散射与细胞化学方法
利用过氧化物酶作为WBC分类的试剂。利用 热力固定白细胞、令红细胞破裂、 将过氧化物 酶粒体染色,检测经过激光照射所产生的过氧 化酶散射光吸收率
过氧化酶通道和WBC/BASO 通道
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过氧化物酶活性: E>N>M L阴性
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二 射频电导法Radio requency,RF 高频电流
细胞内部化学成分 细胞核和胞质(比例) 颗粒(大小、密度)
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区分电阻抗法所不能区分的体积一样的细胞 如:淋巴细胞和嗜碱性粒细胞
• 大小一样 ➢核质比不同 ➢颗粒不同
WBC分类
RDW-CV
• 是红细胞在体积分布曲线上1SD的分布 宽度与MCV的比值(正常RDW-CV= 11.5%~14.5%)。RDW-CV易受MCV 大小的影响,小红细胞增多时因为MCV 减小,极易放大RDW-CV的改变。相反, 大红细胞增多时会平衡掉曲线宽度的变 化,从而减小RDW-CV。
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细胞内部化学成分
激光束照射
细胞核和胞质(比例)
颗粒(大小、密度)
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分光光度法 血红蛋白
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一 电阻抗法(库尔特)检测原理
根据血细胞非传导的性质,以电解质溶 液悬浮颗粒在通过计数小孔时引起的 电阻变化进行放大,阈值调节,甄别、 整形,最后送入计数系统计数和体积 测定
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电导(C)
运用高频电磁探针检测细胞核及核质比的特性。细胞膜对 高频电流具传导性,当电流通过细胞时,细胞核的化学组 份令电流的传导产生变化,其变化量(RF)可以用来反映细 胞内含物的信息。 该参数可用来进一步区别体积差不多的细胞,如:淋巴细 胞和嗜碱细胞,由于它们的 细胞核特性不同而在传导性参 数上有所区别。
血小板分布宽度PDW
反映血小板体积大小变异性参数 PDW减小表明血小板的均一性高,增高表明血小板大小悬殊。 参考范围:14.8~17.2%
血小板比积(plateletcrit,PCT)
血小板容积在血液容积的比值
50
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增高提示活性强的新生血小板
51
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网织红细胞
网织红细胞成熟指数RMI RMI=(MFR+HFR)/LFR 100%
RMI值越高
幼稚网织红细胞比率越高
参考范围(%) 男性 9.1~32.2 女性 12.8~33.7
52
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临床意义
较网织红细胞总数变化更具意义 高RMI: 溶血性贫血、特发性血小板减少性紫 癜、慢性淋巴细胞性白血病、急性白血病患者 低RMI:骨髓衰竭、无效造血
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RDW与MCV结合,对贫血分类和鉴别诊断有临床意义。 Bessman(1983年)提出了贫血的MCV/RDW分类法(表3-21)
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血小板平均体积mean platelet volume,MPV
增高提示活性强的新生血小板 参考范围:7.6~13.2 fL
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多角度偏振光散射法模式图
0°前向散射光,7°侧向散射
光
35
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90°垂直角度散射光(偏振光)
90°垂直角度消偏振散射光(去偏振 光),90°垂直角度散射光(偏振光)
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5、双鞘流技术和细胞化学染色法
非导电,电阻大
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脉冲的大小 脉冲的数量
细胞体积的大小 细胞的数量
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电阻抗法正常红细胞直方图
电阻抗法正常血小板计数 和拟合曲线直方图
电阻抗法红细胞计数和血小 板计数是在相应通道内进行 计数
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应用
VCS细胞检测立体散点图
VCS异常细胞检测 平面散点图位置
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2、 电阻抗、射频、流式细胞 术和核酸荧光染色方法
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(1)4DIFF通道
• 溶解红细胞和血小板,在白细胞膜上打出小孔,荧光 染料通过这个小孔进入白细胞中,与细胞核的核酸和 细胞器结合,激光照射后产生的荧光强度与细胞的核 酸含量成正比。
临床意义
值大表明红细胞大小不均匀,值小表明红细胞 大小均匀; 小细胞
低色素 ❖ 用于缺铁性贫血和轻型珠蛋白生成障碍性贫血的鉴别诊断,前
者早增期高诊,断后(者灵正敏常度;高,特异性较高): ❖ 缺铁贫的筛选诊隐断性和缺疗铁效期观察; ❖ 进行贫血形态学的新分类(与MCV结合)。
疗效观察:恢复最晚
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第二节 检验参数和图形
血液分析仪检测参数包括 临床报告参数、异常报警或研究参数、仪
器内部监测参数3类。
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(一)数据
性粒细胞颗粒和白细胞的膜结构染色), 过氧
化物酶试剂。
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四 分光光度法
血红蛋白
稀释液和溶血剂使血红蛋白溢出,后者与溶血 剂某些成分结合,形成稳定的血红蛋白衍生物, 530-550nm下比色,吸光度与血红蛋白浓度成 正比。
含氰化物:改良HiCN-540nm
不含氰化物:SLS-Hb-555nm
月桂酰硫酸钠
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(SLS) 南京医科大学第一临床医学院检验系
血液分析仪检测原理综合运用
电学、光学、细胞化学等
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南京医科大学第一临床医学院检验系
1、 VCS (Volume,conductivity,scatter)
先溶解红细胞,再使白细胞恢复到原态, 细胞与体内状态完全相同 鞘流技术单个通过,同时接受VCS三种 方式检测