免疫组织化学实验手册
免疫组织化学实验流程
免疫组织化学实验流程免疫组织化学实验是一种利用抗原-抗体特异性结合的原理，通过标记的抗体来定位抗原的生物学技术。
以下是免疫组织化学实验的基本流程：一、实验准备组织样本处理：获取的组织样本需要经过固定、脱水、透明和浸蜡等处理步骤，以便于切片和后续的免疫组织化学实验。
抗体选择：根据实验目的选择相应的抗体，确保抗体的特异性高、亲和力强，并且与抗原的结合效果好。
实验试剂准备：准备好免疫组织化学实验所需的抗体、二抗、底物、DAB染色剂等试剂，确保试剂的质量和有效性。
二、切片制作将经过处理的组织样本切成薄片，厚度一般为3-5微米。
将切片放置在载玻片上，用滤纸吸去多余的蜡滴。
在切片上滴加适量的抗体，使其与抗原充分结合。
三、免疫组织化学染色在切片上加入适量的二抗，与一抗结合，形成抗原-抗体复合物。
加入底物溶液，使其与抗原-抗体复合物反应，生成有色产物。
用DAB染色剂对有色产物进行染色，使其呈现明显的颜色。
四、观察与记录在显微镜下观察染色结果，根据抗原的分布和染色强度进行记录。
可以使用图像分析系统对染色结果进行定量分析，进一步了解抗原的表达情况。
五、结果分析根据染色结果，分析抗原在组织中的分布和表达情况，与正常组织进行比较，判断其与疾病的关系。
将结果与其他实验室指标相结合，进行综合分析，为临床诊断和治疗提供依据。
需要注意的是，免疫组织化学实验的结果受到多种因素的影响，如抗体的质量、抗原的特异性、组织处理的方法等。
因此，在进行实验时需要严格控制实验条件，确保实验结果的准确性和可靠性。
同时，对于结果的解读需要结合临床背景和实验室其他指标进行综合分析，避免出现误判或漏诊的情况。
MUM1抗体试剂(免疫组织化学)说明书
MUM1抗体试剂（免疫组织化学）说明书【产品名称】通用名称：MUM1抗体试剂（免疫组织化学）英文名称：FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human MUM1 Protein, Clone MUM1p, Ready-to-Use(Link)【包装规格】40-60测试/盒【预期用途】体外诊断用途。
在常规染色（如：HE染色）基础上进行免疫组织化学染色，为医师提供诊断的辅助信息。
MUM1抗体试剂（免疫组织化学），预期与Autostainer Link免疫组化染色设备配合使用，进行免疫组化（IHC）分析。
该抗体可标记MUM1蛋白，MUM1蛋白表达于生发中心明区的B细胞亚群（代表B细胞分化晚期）、浆细胞和活化T细胞。
其染色结果可辅助血液淋巴肿瘤的分类以及淋巴系统恶性肿瘤的亚型分类（1，2）。
该抗体与其他相关抗体联合使用有助于疾病的鉴别诊断。
临床上解释任何染色或其缺失都应辅以使用适当对照的形态学研究，并应由有资质的病理医师结合患者临床病史和其他诊断检测进行评价。
该抗体预期在使用非免疫组化法的常规病理学染色对肿瘤进行初步诊断的基础上使用。
【检验原理】抗原别名：IRF4（干扰素调节因子4）、ICSAT（活化T细胞的干扰素保守序列结合蛋白）和PIP（PU.1相关元件）（3）。
MUM1蛋白（多发性骨髓瘤癌基因-1）是一种由MUM1基因编码的50 kDa蛋白，在多发性骨髓瘤（MM）中观察到其参与的罕见t（6；14）（p25；q32）易位，导致MUM1基因与Ig重链基因座并置，由此被发现（4，5）。
MUM1-蛋白缺陷小鼠无法形成生发中心，脾和固有层缺乏浆细胞，从而血清免疫球蛋白水平显著降低，无法产生可检测的抗体应答、T淋巴细胞毒性或抗肿瘤应答（1）。
MUM1蛋白的表达不依赖于t （6；14）（p25；q32）易位，可在多发性骨髓瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤（LPL）、弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）和激活T细胞中检测到。
免疫组织化学原理
免疫组织化学原理
免疫组织化学原理旨在研究和理解免疫系统中涉及的化学成分和相互作用。
这项学科利用细胞和分子生物学的技术手段，通过化学染色和分析方法来观察和揭示免疫反应的发生与发展过程。
在免疫组织化学中，最常用的方法是免疫组织化学染色。
该技术利用染色剂与免疫体系中的特定抗原结合，从而使抗原能够在细胞或组织切片中可视化。
常用染色方法包括免疫组织化学染色、免疫荧光染色和免疫酶染色等。
免疫组织化学中的染色方法旨在观察和定位特定细胞类型、细胞膜分子、胞器或细胞内分子，并进一步了解它们在免疫反应中的作用。
通过染色，我们可以获得有关细胞和分子的空间分布、表达水平以及相互作用的信息。
另外，免疫组织化学也用于研究免疫组织的组成和结构。
免疫系统由多种不同类型的细胞和分子组成，这些组分的相互作用在免疫反应中起着重要的作用。
通过使用特定的抗体标记和染色技术，我们可以对免疫组织中的细胞类型和分子进行鉴定和定位，进而揭示它们在免疫反应中的功能和相互关系。
总的来说，免疫组织化学原理是一门综合了细胞生物学、分子生物学和化学技术的学科，通过对细胞和分子的可视化和定位，揭示免疫反应的机制和过程。
这项技术在疾病诊断、治疗和基础研究中都发挥着重要的作用。
Dako 免疫组化操作手册
原位杂交RICHARD HARVEY简介⏹核酸作为探针用于生物材料的检测大约开始于三十年前。
目前，主要有两类核酸探针检测：固相杂交和液相杂交。
固相杂交技术分为两个类型：原位杂交（ISH)和合成支持物（synthetic support ）。
在此只详细介绍固相杂交。
最古老而应用最广泛的核酸检测方法就是固体的支持物上的杂交。
上世纪70年代出现的Southern 和Northern杂交可能是最广为人知的核酸杂交方法1,2。
其基本原理是将核酸固定于人造支持物上而保持杂交的状态。
这些核酸可以是靶核酸也可以是探针。
有趣的是，一些最近才发展起来的新技术，如基因芯片（microarrays），其实也是基于基本杂交原理上的改进。
在Southern和Northern杂交中，核酸是通过电泳分离后转移到膜上，而基因芯片则是将核酸直接点样到支持物表面的特殊区域。
其他常用的固相核酸技术还包括威力杂交和微球杂交等。
原位杂交（ISH）与固相杂交的关系密切。
其原理是核酸被固定在细胞内而不是被抽提出。
ISH 最显著的优点是可以定位杂交物在组织中的位置。
而最大缺点是由于保持了细胞的形态和结构，可以引入多种潜在的抑制成份。
历来绝大多数ISH检测都是使用福尔马林固定石蜡包埋的组织。
为了保证在这些组织片中的核酸易于杂交，常用蛋白酶进行预处理。
有报道称微波和高压灭菌器也可作为蛋白酶处理的辅助方法或替代方法使用。
标本的复杂性⏹选择探针和检测系统的关键因素之一是标本的复杂性。
标本越复杂，其非特异性杂交就也可能发生。
即使交叉杂交的程度很低，但如果非特异性的靶点有足够的数量，也会发生假阳性信号。
标本的复杂性主要在两个实验步骤中处理：组织处理和探针设计。
当进行Northern 和Southern杂交时，会去除污染的DNA和RNA，这样制备样品会很明显地降低其标本复杂性。
在Northern杂交中，去除核糖体RNA会使对靶mRNA的识别能力提高20-50倍。
免疫组织化学及HE染色实验步骤
免疫组织化学及HE染色实验步骤免疫组织化学（immunohistochemistry，简称IHC）是一种用于检测组织切片中特定蛋白质的方法，其原理是通过特异性抗体识别目标蛋白质并将其可视化。
本文将介绍IHC实验的基本步骤和HE染色实验的步骤。
IHC实验步骤：1.组织切片制备：从取材到固定、包埋和切片，保证组织样本的质量和完整性。
2.抗原修复：将组织切片放入含有钠胼胝土缓冲液或其它抗原修复液中进行抗原修复。
可以选择使用高温或酶解等方法。
3.阻断非特异性结合：将组织切片浸泡在阻断液中，如BSA、牛血清蛋白等，以防止抗体与非特异性的蛋白质结合。
4.一抗孵育：将含有一抗的抗体溶液滴在组织切片上，孵育一段时间，使一抗与目标蛋白质发生特异性结合。
5.二抗孵育：选择与一抗宿主不同的二抗标记物，如荧光素、过氧化物酶等，将含有二抗的溶液滴在组织切片上进行孵育。
6.吸附剂清洗：将组织切片用洗涤缓冲液洗去未与标记物结合的二抗。
7.标记物检测：根据所选择的标记物，可以进行荧光显微镜观察、酶反应等，将目标蛋白质可视化。
8.盖片封装：将组织切片用适当的缓冲液封装至玻璃盖片上。
HE染色实验步骤：1.组织切片制备：从取材到固定、包埋和切片，保证组织样本的质量和完整性。
2.脱蜡：将组织切片放入甲醇中脱去石蜡包埋。
3. 染剂处理：将组织切片依次浸泡在嗜铬酸钾溶液中，漂洗后浸泡在碱性染剂中，如伊红（Eosin）染料。
4. 酸性染剂处理：将组织切片浸泡在酸性染剂中，如苏木红（Hematoxylin）染料。
5.脱染：将组织切片用酒精和醋酸溶液进行脱染。
6.脱水：将组织切片依次浸泡在酒精梯度中，脱去水分。
7.透明化：将组织切片逐渐浸泡在透明剂中，如苯酚乙醇、二甲苯等，使组织切片透明。
8.盖片封装：将组织切片用适当的透明剂封装至玻璃盖片上。
以上是免疫组织化学和HE染色实验的基本步骤。
通过这些步骤，可以标记和可视化组织切片中的特定蛋白质，进而获得研究和诊断所需的信息。
免疫组织化学技术名词解释
免疫组织化学技术名词解释免疫组织化学技术是一种应用于组织学研究和病理诊断中的实验技术，用于检测和定位特定抗原在组织中的表达和分布。
免疫组织化学技术结合了免疫学和组织学的原理和方法，使得我们能够在组织切片中检测到特定抗原，并通过染色的方式将其可视化。
1. 免疫染色：免疫组织化学技术的核心是免疫染色。
免疫染色是通过将特异性的抗体与待检测物质结合，并标记上染色物质，从而实现对抗原的检测和定位。
常用的染色物质包括标记着色剂如酶、荧光物质和金颗粒等。
2. 抗原：抗原是一类能够诱导机体产生抗体的物质。
在免疫组织化学技术中，抗原可以是蛋白质、多肽或者是其他小分子化合物。
通过特异性的抗体和抗原的结合来实现对抗原的检测和定位。
3. 抗体：抗体是机体特异性免疫应答产生的一类蛋白质分子。
抗体能够与特定抗原结合，并通过诱导免疫反应来清除抗原。
在免疫组织化学技术中，通过标记抗体对待检测抗原进行检测和定位。
4. 免疫组织化学染色法：免疫组织化学染色法是一种检测并定位抗原的方法。
根据标记抗体的不同，可以分为酶标法、免疫荧光染色法和免疫金染色法等。
其中，酶标法是最常用的方法之一，通过将酶标记的抗体与待检测抗原结合，然后通过酶的催化作用使染色物质可视化。
5. 免疫组织化学实验步骤：免疫组织化学技术包括多个实验步骤，一般包括组织固定、切片、抗原恢复、阻断、一抗和二抗结合、洗涤、染色和显微镜观察等。
每个步骤都需要严格的操作和控制条件，以保证实验的可靠性和准确性。
6. 免疫组织化学应用：免疫组织化学技术广泛应用于医学研究和病理诊断中。
在医学研究领域，免疫组织化学技术可以用于研究疾病的发生和发展机制、寻找新的生物标志物以及评估药物的疗效等。
在病理诊断中，免疫组织化学技术可以用于帮助确定肿瘤类型、检测特定蛋白的异常表达以及判断预后等。
7. 免疫组织化学技术的优点和局限性：免疫组织化学技术具有高度的特异性和灵敏度，可以实现对细胞和组织水平上抗原的定量和定位。
免疫显色试剂说明书
免疫显色试剂说明书免疫显色试剂说明书提供了一些关于免疫显色试剂的基本信息和使用说明。
具体内容可能因不同产品而有所不同，以下是一份免疫显色试剂说明书的示例：一、产品名称通用名称：免疫显色试剂英文名称：EnVision™ FLEX Mini Kit, High pH(Dako Omnis)二、包装规格150测试/盒三、预期用途免疫显色试剂在免疫组化反应中与首要抗原抗体结合，通过染色，将靶点进行标记。
四、使用方法1. 抗原修复完毕后自然冷却的切片，用自来水清洗。
2. 除去切片上组织周围的液体，用免疫组化笔圈定玻片上的待测组织区域并放入PBST 缓冲液中。
3. 取出切片，除去PBST缓冲液，滴加内源性过氧化物酶阻断剂（试剂A）（视切片大小以完全覆盖切片组织为宜），于组织上孵育10分钟，用PBST清洗切片。
4. 除去PBST缓冲液，滴加100μL左右一抗工作液（视切片大小以完全覆盖切片组织为宜），于组织上进行孵育（按照各自一抗说明书操作）。
五、注意事项1. 请按照本说明书使用免疫显色试剂，如有疑问请咨询专业人士。
2. 本试剂仅用于免疫组化反应或原位杂交反应中，不得用于其他用途。
3. 使用前请确认试剂的有效期和包装完整性，过期或破损的试剂不得使用。
4. 请将试剂存放在干燥、阴凉、避光的地方，避免阳光直射和高温。
5. 避免试剂直接接触皮肤和眼睛，如不慎接触，请立即用清水冲洗。
6. 使用过的试剂和废弃物应按照相关规定处理。
六、售后服务与支持如有任何关于本产品的疑问或需要技术支持，请联系我们的客户服务部门。
我们将竭诚为您服务。
以上仅为免疫显色试剂说明书的一个示例，具体内容可能因产品不同而有所差异。
在使用任何免疫显色试剂之前，请务必仔细阅读说明书并按照说明书进行操作。
如有疑问，请咨询专业人士。
免疫组织化学步骤
免疫组织化学步骤免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC）是一种常用的组织学技术，用于检测和定位组织中的特定蛋白质。
它可以用于研究疾病发生机制、诊断和治疗疾病、研究分子靶向治疗的疗效等领域。
下面将详细介绍免疫组织化学的步骤。
第一步：取材和固定免疫组织化学的第一步是从病理标本中取材。
常见的标本类型包括组织切片、细胞涂片等。
取材时要保证样本质量和完整性，以免影响后续的实验结果。
取材完成后，将标本进行固定，常用的固定剂包括10%中性缓冲福尔马林（neutral buffered formalin）等。
第二步：脱水和清蜡固定后的标本一般需要去除水分，并使标本透明度变佳，便于后续工作。
这一步骤主要通过脱水和清蜡来实现。
脱水是指逐渐将标本中的水分转化为有机溶剂，如乙醇。
清蜡是指将脱水后的标本置于熔化的蜡中，使蜡渗透到标本中，完成固定。
第三步：切片和贴片清蜡后的标本需要进行切片，一般使用切片机将标本切成5-10微米厚的切片。
切片完成后，将切片剥离并贴到载玻片上，以供后续染色使用。
第四步：抗原修复抗原修复是免疫组织化学中的一个重要步骤，用于恢复由于固定和清蜡处理导致的抗原结构的变性和损伤。
抗原修复方法包括热诱导抗原修复、酶诱导抗原修复和化学诱导抗原修复等。
热诱导抗原修复是最常用的方法，通过高压蒸汽或微波加热来实现抗原修复。
第五步：特异性抗体标记在免疫组织化学中，我们需要使用特异性抗体来检测目标蛋白质的表达情况。
在这个步骤中，将特异性抗体加入到切片上，并在一定的温度和时间下进行孵育，使特异性抗体与标本中的目标蛋白质结合。
特异性抗体可以通过多种方法标记，如荧光素标记和酶标记等。
第六步：反应检测特异性抗体与目标蛋白质结合后，需要进行反应检测来可视化标记物。
这一步骤可以通过荧光显微镜观察标本中的荧光信号，也可以通过酶和底物的反应生成染色产物来观察标本中的颜色变化。
常用的反应检测方法包括酶标检测、光学显微镜观察等。
MMP-1、MMP-3、MMP-9与TIMP-1在肝包虫囊壁及周围肝组织的表达及意义
石河子大学硕士学位论文MMP-1、MMP-3、MMP-9与TIMP-1在肝包虫囊壁及周围肝组织的表达及意义姓名：***申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：张示杰;彭心宇20070501材料与方法（Ｍａｔｅｒｉａｌｓ＆Ｍｅｔｈｏｄｓ）１材料１．１病例收集收集本院２００４年１１月一２００６年３月石河子大学医学院第一附属医院肝包虫新鲜手术标本３０例，其中男１５例，女１５例，年龄２ｌ～５７岁，平均年龄３４．６７０±９．３３４岁。
大部分病例无特殊临床表现，所有病例均经石河子大学医学院第一附属医院病理专家确诊，３０例中单发囊肿１４例，多发囊肿ｌｌ例，子囊型５例，合并钙化７例，实验标本取材均包括肝包虫周围纤维囊壁及其邻近肝实质组织。
新鲜标本离体后用１０％福尔马林固定２４小时，石蜡包埋，制成厚３Ｈｍ连续切片。
图１取材部位ＭＭＰ－Ｉ、ＭＭＰ－３，ＭＭＰ－９与ＴＩＭＰ－ｌ在肝包虫囊壁及周围肝组织的表达及意义近肝细胞胞浆疏松，包虫囊肿周围肝组织内纤维组织增生，形成纤维条索分割包绕肝实质形成大小不等的假小叶，纤维条索常与外膜纤维延续。
小叶间胆管扩张，淋巴、浆细胞浸润。
外囊与外膜间常出现裂隙，外层与邻近肝汇管区无明确界限，并与Ｇｌｉｓｓｏｎ鞘相延续。
（图１）图ｌ肝包虫周围纤维囊壁、外囊、外膜和肝实质层次清晰，外膜层可见中性粒细胞、嗜酸性细胞及浆细胞浸润呈肝纤维化病理改变，并可见被挤压变形的管道系统及小血管玻璃样变。
ＨＥＸ１００２．３肝包虫囊周组织免疫组织化学染色结果ＭＭＰ一１、ＭＭＰ－３、ＭＭＰ－９与ＴＩＭＰ．Ｉ均着色于胞浆和包膜，呈棕色或棕褐色颗粒。
表达主要定位于肝包虫的外膜层内纤维细胞、成纤维细胞、炎性细胞、胆管上皮细胞及血管内皮细胞，外囊偶有表达，见图２、３、４、５。
ＭＭＰ－Ｉ、ＭＭＰ－３、ＭＭＰ－９与ＴＩＭＰ．１在外膜阳性细胞率均高于外囊，差异有显著性。
（表２．２）－堕！堡－ｌ、』！苎伊·３、ＭＭ旷·９与ＴＩＩⅦＰ－Ｉ在肝包虫囊壁及周围肝组织的表达及意义图２免疫组织化学检测ＭＭＰ．Ｉ在肝包虫囊肿周围纤维囊擘中的表达主要定位于单核，巨噬细胞、中性粒细胞、成纤维细胞和纤维细胞，肝包虫囊肿周围纤维囊壁分两层。
免疫组化 样本制备
免疫组化样本制备
免疫组化（immunohistochemistry，IHC）是一种用来检测组织或细胞中特定蛋白质表达的技术。
样本制备是免疫组化中非常重要
的一步，下面我将从多个角度来介绍免疫组化样本制备的相关内容。
首先，样本的固定是样本制备的第一步。
通常使用的固定剂包
括乙醇、乙醛和甲醛等。
固定的目的是保持样本的形态结构，防止
蛋白质降解，并使得细胞膜通透性增加以利于抗体的渗透。
其次，样本需要进行脱水和包埋。
脱水是将样本中的水分逐渐
替换为透明剂，最常用的透明剂是己烷和乙醇。
脱水后，样本需要
被包埋在蜡块中，以保持其形态并便于切片。
接着，样本需要进行切片。
使用微波或酶解等方法使得蜡包埋
的组织变软，然后用切片机将其切成较薄的切片，通常厚度在3-5
微米之间。
然后，切片的脱脂和再水化。
切片需要经过蜡的脱脂和逆脱水
处理，使得切片中的蜡被去除，然后再将其重新水化。
最后，进行抗原修复。
抗原修复是为了使得样本中的蛋白质抗原更容易被抗体识别，通常使用高温和高压的方法进行抗原修复处理。
在免疫组化的样本制备过程中，以上步骤是非常关键的。
每一步都需要严格控制，以确保最终的免疫组化结果准确可靠。
同时，不同类型的样本可能需要针对性的处理方法，以保证最佳的实验效果。
希望这些信息能够对你有所帮助。
免疫组化法实验操作步骤
免疫组化法实验操作步骤免疫组织化学(Immunohistochemistry, IHC)是一种利用抗体与组织中的抗原特异性结合的技术。
它是一种重要的研究方法，可以用于检测和定位组织中的特定蛋白质和其他生化分子。
以下是免疫组织化学实验的一般操作步骤：1.样本处理：a.固定：将待检测的组织样本进行固定处理，以保持其形态结构并保留组织内的抗原。
b.切片：将固定的组织样本切成非常薄的切片（通常为3-5微米厚），并将其放置在载玻片上。
2.抗原解蓝（抗原恢复）：a.对于不同类型的组织样本，选择适当的抗原解蓝方法。
b.抗原解蓝可以通过加热、酶解或其他方法来恢复组织样本中的抗原。
3.阻断非特异性结合：a. 使用一种非特异性的蛋白质来阻断载玻片上未特异性结合的位点，例如牛血清蛋白(Bovine Serum Albumin, BSA)或小鼠免疫球蛋白(Mouse IgG)。
b.加入适当浓度的阻断剂，并孵育片玻片上的切片，以阻断非特异性结合位点。
4.主抗体孵育：a.加入含有特定抗原的主抗体溶液，其可以与组织样本中特定的抗原结合。
b.孵育片玻片上的切片，使主抗体与待检测的抗原结合。
5.洗涤：a.用缓冲液或PBS等洗涤溶液洗涤载玻片上的切片，以去除未结合的主抗体。
6.二抗孵育：b.孵育片玻片上的切片，使辅助抗体与主抗体结合。
7.洗涤：a.再次用缓冲液或PBS洗涤载玻片上的切片，以去除未结合的辅助抗体。
8.信号放大：a.可根据需要，使用染色剂或底物来增强或显色识别待检测抗原的结合位置。
b.例如，使用荧光染料或酶底物，通过显微镜观察或光镜观察，可使抗原可视化。
9.洗涤：a.最后一次用缓冲液或PBS洗涤载玻片上的切片，以去除未结合的染色剂或底物。
10.封片：a.加入适当的封片剂，如富含丙酮的溶液，将载玻片上的切片封装起来，以保护切片和保存染色结果。
免疫组织化学是一种复杂的实验技术，需要仔细的操作和精确的控制条件才能得到准确的结果。
免疫组化实验设计
免疫组化实验设计主要包括以下几个步骤：
1. 实验目的：明确实验的目的和意义，确定要检测的蛋白类型、样本类型、实验参数等。
2. 样本准备：选取合适的样本类型，如组织切片、细胞涂片、细胞培养等，并进行预处理，包括固定、脱水、包埋等步骤。
3. 抗原修复：由于组织在固定过程中会发生蛋白之间交联及醛基的封闭作用，因此需要进行抗原修复，以便更好地暴露抗原。
4. 血清封闭：为了防止一抗与组织非特异性结合，需要进行血清封闭。
5. 一抗和二抗的选择：根据实验目的和样本类型，选择合适的一抗和二抗，并进行稀释比和孵育条件的优化。
6. 显色反应：通过化学反应使酶标记的抗体与显色剂进行显色反应，生成有色产物，以便后续观察和检测。
7. 观察和检测：采用显微镜观察样本，并记录实验结果。
根据需要，可以采用定量或半定量方法进行结果分析。
8. 实验结果的解释与结论：根据实验结果，解释实验结果的意义，并得出结论。
在免疫组化实验设计中，需要注意以下几点：
1. 保证实验的特异性：选择针对目标蛋白的一抗，并排除非特异性结合的干扰。
2. 控制实验条件的一致性：保证实验中各步骤的条件一致，以便准确比较不同样本的结果。
3. 注意实验的重复性：为了保证实验结果的可靠性和准确性，需要进行重复实验，并对结果进行统计分析和检验。
abcam中文实验手册
目录
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关于 Abcam .......................................................................... 1 Abcam 帐户的好处 ............................................................... 2
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技术资料பைடு நூலகம்
第一章：抗体和抗体的结构 .................................................. 3 第二章：抗体纯化 ................................................................ 6 第三章：抗体选择和稀释 ..................................................... 7 第四章：荧光 ....................................................................... 9 4.1 荧光染色-工作原理 ........................................................ 9 4.2 荧光染料表 ................................................................... 11 第五章：蛋白质免疫印迹技术 ............................................ 13
化学实验室手册
第四章：实验室安全这一章重点介绍了实验室中存在的各种安全风险和如何防范。它涵盖了实验 室建筑、电气设施、危险品管理、紧急处理等方面，为实验室工作人员提供了安全防范的基本原 则和措施。
第五章至第七章分别介绍了无机化学、有机化学和生物化学实验的原理和实验方法。这些章节包 含了丰富的实验技术和最新的研究进展，有助于读者深入理解这些领域的实验方法。
第八章至第十章则介绍了化学实验中常用的技术和分析方法，包括光谱分析、色谱分析、电化学 分析和计算化学等。这些章节不仅介绍了这些技术的原理，还为读者提供了大量的应用实例，帮 助读者更好地应用这些技术。
谢谢观看
个人观点
我认为，《化学实验室手册》是一本极具价值的参考书籍。无论是在实验设计、实验操作，还是 在数据分析方面，它都能为实验人员提供实质性的帮助。同时，它的全面覆盖各个行业的实验知 识，使得它成为了一本真正的“实验室百科全书”。我相信，这本书的实用性和高效性将会使其 成为每一个化学实验室的必备工具书。
目录分析
《化学实验室手册》是一本为化学实验室工作人员提供基础和实用信息的书籍。这本书的目录包 含以下内容：
第一章：实验室基础知识这一章介绍了化学实验室的基本设备、安全和卫生措施，以及实验材料 的选取和使用。这一章还介绍了实验室中常见的实验类型，以及实验数据的记录和分析方法。
第二章：实验操作规程这一章详细介绍了化学实验中的基本操作，例如混合、分离、过滤、结晶 等等。还详细介绍了实验操作的注意事项和常见错误，以及如何通过实验操作获得准确的实验结 果。
免疫组化实验步骤及配方
免疫组化实验步骤及配方免疫组化实验是一种用于检测和定位特定蛋白质在细胞、组织或器官中表达的技术。
免疫组化实验包括一系列步骤，如抗原修复、非特异性结合抑制、免疫原和次级抗体处理、显色/荧光染色等。
下面将详细介绍免疫组化实验的步骤及配方。
1.抗原修复：抗原修复是为了恢复因组织固定而引起的抗原性损失。
一般使用高温或酶解方法进行抗原修复。
-高温方法：将组织切片置于高温缓冲液中加热，一般在95°C下加热15-20分钟。
-酶解方法：如胰酶消化、蛋白酶消化等。
例如，可以使用0.1%胰酶在37°C下进行酶解。
2.非特异性结合抑制：非特异性结合抑制是为了防止免疫试剂（如次级抗体）与非特异性蛋白结合，从而降低假阳性结果。
一般使用正常动物血清或胶体等进行非特异性结合抑制。
-正常动物血清：根据动物源种类（如小鼠、兔子等）选择相应的正常动物血清。
-胶体：如牛血清蛋白、牛血清白蛋白等。
可以在最终稀释液中加入1-2%的胶体。
3.免疫原处理：免疫原处理是为了增强目标抗原与抗体的结合效率，一般通过与次级抗体或酵素结合。
根据具体实验需求，可以选择荧光标记、酶标记或金标记等不同的方式进行免疫原处理。
-荧光标记：如荧光素等。
-酶标记：如辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）等。
-金标记：如胶体金、纳米金等。
4.次级抗体处理：次级抗体处理是为了增强免疫原与目标抗原之间的结合效应。
一般使用来自其他物种的抗体作为次级抗体。
根据不同实验需求，可以选择与荧光标记、酶标记或金标记结合的次级抗体。
-荧光标记：如青蒿素标记的抗兔荧光标记抗体等。
-酶标记：如HRP标记抗体、AP标记抗体等。
-金标记：如碳标记抗体、金标记抗体等。
5.显色/荧光染色：显色/荧光染色是为了可视化目标抗原的分布和定位。
根据不同的免疫标记试剂，可以选择适当的染色方法。
-显色：如DAB（3,3'-二氨基联苯）染色。
-荧光染色：根据使用的荧光标记试剂选择相应的染色方法，如DAPI 染色、FITC染色等。
Dako 免疫组化操作手册
原位杂交RICHARD HARVEY简介⏹核酸作为探针用于生物材料的检测大约开始于三十年前。
目前，主要有两类核酸探针检测：固相杂交和液相杂交。
固相杂交技术分为两个类型：原位杂交（ISH)和合成支持物（synthetic support ）。
在此只详细介绍固相杂交。
最古老而应用最广泛的核酸检测方法就是固体的支持物上的杂交。
上世纪70年代出现的Southern 和Northern杂交可能是最广为人知的核酸杂交方法1,2。
其基本原理是将核酸固定于人造支持物上而保持杂交的状态。
这些核酸可以是靶核酸也可以是探针。
有趣的是，一些最近才发展起来的新技术，如基因芯片（microarrays），其实也是基于基本杂交原理上的改进。
在Southern和Northern杂交中，核酸是通过电泳分离后转移到膜上，而基因芯片则是将核酸直接点样到支持物表面的特殊区域。
其他常用的固相核酸技术还包括威力杂交和微球杂交等。
原位杂交（ISH）与固相杂交的关系密切。
其原理是核酸被固定在细胞内而不是被抽提出。
ISH 最显著的优点是可以定位杂交物在组织中的位置。
而最大缺点是由于保持了细胞的形态和结构，可以引入多种潜在的抑制成份。
历来绝大多数ISH检测都是使用福尔马林固定石蜡包埋的组织。
为了保证在这些组织片中的核酸易于杂交，常用蛋白酶进行预处理。
有报道称微波和高压灭菌器也可作为蛋白酶处理的辅助方法或替代方法使用。
标本的复杂性⏹选择探针和检测系统的关键因素之一是标本的复杂性。
标本越复杂，其非特异性杂交就也可能发生。
即使交叉杂交的程度很低，但如果非特异性的靶点有足够的数量，也会发生假阳性信号。
标本的复杂性主要在两个实验步骤中处理：组织处理和探针设计。
当进行Northern 和Southern杂交时，会去除污染的DNA和RNA，这样制备样品会很明显地降低其标本复杂性。
在Northern杂交中，去除核糖体RNA会使对靶mRNA的识别能力提高20-50倍。
免疫组化的实验步骤
1. 取出常规石蜡切片，烘干后进行脱蜡和水化处理，以获取未变性的蛋白质分子。
2. 进行抗原修复，即在高温高压条件下，打破样本蛋白的交联修复，以使蛋白分子能够更好的与特异性抗体结合。
3. 加去离子水或1% Triton X-100（具有破坏细胞膜的作用）进行细胞膜穿透或细胞膜破裂，以方便抗体进入细胞内。
4. 加适当浓度的特异性抗体，第一抗体，一般是一支针对特定抗原（蛋白质、组织细胞等）的多克隆或单克隆抗体。
5. 洗脱，去除未结合的第一抗体，保留与抗原特异性结合的抗体和抗原复合物。
6. 加入第二抗体，与第一抗体结合的二抗，如亲和力较强的羊抗人IgG的HRP 标记二抗，并进行标记。
7. 洗脱，去除未结合的第二抗体。
8. 加入特定的底物，如DAB素，检测相应的表达信号。
免疫组化实验方法
免疫组化实验方法免疫组化（Immunohistochemistry，简称IHC）是一种利用特异性抗体与组织或细胞特定抗原结合的方法，以此可以检测细胞或组织中蛋白质的表达和分布情况。
IHC技术已广泛应用于病理学、癌症诊断、生物医学研究等领域。
以下是免疫组化实验的常用方法：1.样本处理：通常以石蜡包埋切片作为实验样本。
首先，从固定的组织或细胞中取得标本，然后进行脱水、透明化和浸蜡等处理。
接下来，使用切片机将组织或细胞切割成厚度为3-5μm的切片。
2.抗原恢复：由于样本的固定和包埋可能导致抗原的损伤，因此需要对切片进行抗原恢复处理。
常见的抗原恢复方法包括热处理、酶解法和酸性水解法。
热处理是将切片置于缓冲液中，在高温下进行退火。
酶解法是使用胰蛋白酶等酶对切片进行消化。
酸性水解法则使用盐酸或酶进行酸性处理。
3.抗体结合：选择特异性的一抗体与目标抗原结合。
一抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体，可以经商业采购或自家制备。
将一抗体加入待检测切片上，让其与目标抗原结合。
4. 第二抗体结合：待检测切片上结合了一抗体的抗原后，需要添加第二抗体与一抗体结合。
第二抗体通常是反相应物免疫球蛋白（Secondary Antibody），如反人IgG，反兔IgG等。
第二抗体上常会标记有发光物质、酶标记物或荧光染料，用于可视化结果。
5.可视化和显色：根据选择的第二抗体，可以选择显色方法。
例如，辣根过氧化物酶（HRP）结合的第二抗体可以使用3,3'-二氨基联苯思（DAB）作为底物，呈棕色或棕黄色；荧光标记的第二抗体可以用荧光显微镜进行观察。
6.伪染色：为了辅助观察和识别目标组织或细胞，可以进行伪染色。
常见的伪染色方法有对比染色、核染色和细胞质染色等。
7.阴性对照和阳性对照：为了确保实验结果的准确性和可靠性，同时进行阴性对照和阳性对照实验。
阴性对照是在实验中将第一抗体替换为非特异性抗体或缺少抗体的处理组织或细胞组织；阳性对照是在实验中使用已知表达目标蛋白的组织或细胞进行处理。
化学基本素养必备资料
化学基本素养必备资料
化学基本素养需要建立在对化学基础知识的理解和应用上，同时包括实验技能、安全意识等方面的培养。
以下是一些可能有助于建立化学基本素养的必备资料：
1.化学基础知识书籍：
•化学教科书，如《化学原理》等，用于建立对化学基本概念的理解。
•化学参考书，如《有机化学》、《物理化学》等，用于深入学习特定领域的知识。
2.化学实验手册：
•包括基础实验和进阶实验，帮助建立实验操作技能和观察数据的能力。
3.科学期刊和文章：
•阅读相关领域的科学期刊和研究文章，了解最新的研究成果和发展趋势。
4.化学安全手册：
•了解化学实验和操作的安全规范，掌握常见化学品的危险性和正确处理方法。
5.在线学习平台：
•利用在线学习平台，如Coursera、edX等，参加化学相关课程，拓展知识面。
6.科学实验设备手册：
•对于从事实验工作的人员，掌握科学实验设备的使用方法和维护规范。
7.科普读物：
•化学科普读物，如《化学的奇迹》等，用通俗的语言介绍化学知识，培养兴趣。
8.化学数据手册：
•包括常见元素的性质、化合物的数据等，有助于在实验和计算中准确使用数据。
9.化学模型和实物教具：
•利用分子模型、实验箱等教具，帮助直观理解分子结构和化学反应机制。
10.学术组织会刊：
•参加或关注化学领域的学术组织，如化学学会，获取行业动态和学术研究成果。
以上资料涵盖了理论知识、实验技能、安全意识和实践经验等多个方面，有助于建立化学基本素养。
同时，实际学习和实践也是培养化学素养不可或缺的一部分。
免疫组化实验报告
免疫组化实验报告一、实验目的本实验的主要目的是了解免疫组化技术的基本原理、方法和应用。
并在实验中掌握标本制备、抗体与抗原的反应、染色等技术。
通过本次实验，还可以深入了解体内各种细胞和组织中存在的不同蛋白质的分布、表达和定位情况，对于发现疾病发生机制、诊断疾病以及分子生物学和细胞生物学研究方向的选定等都有着重要的启示和指导意义。
二、实验原理免疫组化是一种基于抗原抗体反应的化学染色技术，该技术主要通过标记特定的抗体，标记可以是荧光、放射性或酶等，再与被检测的抗原结合，形成物质团，以便对其在组织切片或细胞中的分布、表达和定位情况进行观察和研究。
其原理如下：1.抗原抗体反应抗体是一种高度特异性的蛋白质，它通过与与其特异性结合的抗原组成免疫复合物来介导免疫反应，具有非常高的结合亲和力。
2.荧光标记技术荧光标记技术是免疫组织化学中常用的标记技术之一，其主要特点是具有快速、高度敏感和高特异性等优点，目前广泛应用于免疫荧光显微镜的检测中。
三、实验材料与方法1.材料（1）黏片刀（2）盛装杯（3）离心机（4）玻璃切片（5）氯仿（6）牛血清白蛋白（7）丙酮（8）PBS（9）荧光标记的二抗（10）DAPI（11）溶解铁（12）抗体2.方法（1）标本制备将含有细胞和组织的标本制成薄片，经过常规组织学和细胞学处理，制成玻璃切片。
然后，将其离心获取细胞和组织，摆放在混合溶液中振荡。
将抗体稀释至适宜浓度，与标本混合，进行PFA定制，随后进行冷却缓存，制备成样品。
将标本与荧光二抗混合，适当搅拌，使其充分反应。
然后，在暗室中进行荧光显微镜检测，观察标本发出的光强。
DAPI可添加至样品中，使得核糖体更容易用眼观察。
四、实验结果通过本次实验得到的结果如下。
制作标本时，需要仔细阅读操作手册，遵循严格的操作步骤，操作清洁、细致、稳定。
制作好的标本应该是样品清晰、明亮、无噪点的。
提取到的抗原抗体在能够有效反应的基础上，需要尽可能的达到最佳的配比，以充分发挥其效果。
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武汉博士德生物工程有限公司简介：
武汉博士德生物工程有限公司是一家专注于生命科学与生物技术的高新科技公司， 公司 主要致力于免疫和分子生物学试剂的研发，生产和销售。 公司成立于 1993 年，本着博士德人对待产品精益求精，追求完美的态度，我们在免疫 和分子生物学领域开发出近千种产品， 拥有十几项自主知识产权和几十种稳定高效的试剂盒 技术。 博士德人始终以只生产和销售一流产品作为最高准则， 质量不够完美的实验研究成果 都都不能进入我们的销售目录。博士德人不追求一般意义上的快速发展,追求稳健、持久的 进步。 通过十几年的努力拼搏， 博士德已成为抗体及免疫和分子生物学领域研发能力最为强 大的公司， 我们的目标就是用中国人的智慧研发出一流的试剂产品， 让中国人优质的产品走 向世界！ 博士德这十多年的历史，就是一部产品的开发史。经过 14 年发展，我们拥有了二十几
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表 1. 免疫球蛋白特性表 Tel：800-880-8748 027-67845391,2,3 E-mail：boster@
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IgG
IgG 是人和动物血清中主要免疫球蛋白，存在血清、淋巴液及体液中，以血清含 量最高，占血清中 Ig 总量 80% 左右，属于单体结构，分子量为 16 万，沉降系数 7S ， 含糖 2.5% ，在血中半衰期为 30 天。IgG 主要由脾、淋巴结及扁桃体的浆细胞产生抗 原免疫机体，在血液中出稍迟，但含量高，维持时间长，具有抗菌、抗病毒和中和毒 素的作用，并可协助 K 细胞，巨噬细胞杀伤靶细胞。IgG 在体外与相应抗原发生凝集、 沉淀、补体结合反应。
图 4. 抗体示意图
现已知 5 种免疫球蛋白中 IgG、IgA 和 IgD 的 H 链各有一个可变区（ VH ）和三个 恒定区 （ CH1 、 CH2 和 CH3 ） 共四个功能区。 IgM 和 IgE 的 H 链各有一个可变区 （ VH ） 和四个恒定区（ CHl 、 CH2 、 CH3 和 CH4 ）共五个功能区。 VL 和 VH 是与抗原结合 的部位，单体由一对 L 链和一对 H 链组成的基本结构，只有 2 个与抗原结合的位点， 如 IgG、IgD、IgE、血清型 IgA；双体由 J 链连接的两个单体，有 4 个与抗原结合的位 点，如分泌型 IgA（sIgA） ，所以 sIgA 结合抗原的亲合力要比血清型 IgA 高。五聚体由 J 链和二硫键连接五个单体，如 IgM。五聚体 IgM 理论上应为 10 个与抗原结合的位点， 但实际上由于立体构型的空间位阻， — 般只有 5 个结合点可结合。
Tel：8boster@
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项自主的知识产权， 生产三百多种 ELISA 试剂盒， 一千余种抗体， 两千种原位杂交试剂盒。 并且每周必有新产品问世，产品覆盖了一抗、二抗、原位杂交试剂盒、细胞凋亡试剂盒、 免疫学检测试剂盒（SABC） 、Western Blotting 检测试剂盒、ELISA 以及细胞和细胞培养相 关产品。种类繁多的各种试剂盒，全都由博士德独家生产，我们拥有完全的知识产权，在国 内同行中独一无二。 今天博士德生物工程有限公司继续一贯的致力于免疫和分子生物学的产品研发， 我们投 入巨资建立了博士德研发中心， 通过这个研发平台， 我们将开发出高效和稳定的单克隆抗体 和免疫产品，竭诚为您服务！ 我们的客户遍布全国著名大学、研究所、医院、检测检疫和生物技术等相关单位，以优 质的产品质量和服务获得客户一致的好评。 我们在全国各地设有代理商， 我们的产品已经出 口到美国、德国等国家和香港地区，我们的产品正逐步走向国际市场！我们拥有快速高效的 产品销售体系，让客户获得快速便捷的服务。 质量第一，服务至上是我们一贯的宗旨。在博士德，每一种产品在销售前都要经过苛刻 的检验，而且在销售的过程中也要定期检查产品的质量。在产品的销售过程中，训练有素的 专业人员能为客户提供技术指导； 在产品的使用中， 如果客户遇到技术问题或对产品质量存 在疑问，我们可以提供满意的售后服务。 感谢您关心博士德生物工程有限公司， 欢迎您使用我们的产品， 欢迎有识之士与博士德 合作，我们将与您共同发展和成功！
E-mail：boster@
免疫组织化学实验手册概述
免疫组织化学概述：
免疫组织化学（免疫组化）技术是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反 应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂， 如酶、 金属离子、 同位素等， 显示一定的颜色， 并借助显微镜、 荧光显微镜或电子显微镜观察其颜色变化， 从而在抗原抗体结合部位确定组 织、细胞结构的一门新兴组化技术。根据标记物的种类不同可分为免疫荧光法、免疫酶 法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。由于免疫组化具有特异性强、灵敏 度高、定位准确等特点，且能将形态研究与功能研究有机地结合在一起，所以这门技术已被 广泛地应用于生物学和医学研究的许多领域。 在病理学研究中， 免疫组化技术的作用和意义 更为重要。免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可，其在低 分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时，准确率可达 50%-75% 。其研究的深度甚至提高到了 生物化学水平、分子水平。
Tel：800-880-8748 027-67845391,2,3
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抗体的选择
抗体
Ig 分子的基本结构是由四肽链组成的， 即由二条相同的分子量较小的轻链 （ L 链） 和二条相同的分子量较大的重链（ H 链）组成的。L 链与 H 链是由二硫键连接形成一 个四肽链分子，称为 Ig 分子的单体，是构成免疫球蛋白分子的基本结构。
图 1. H.E 和 IHC 染色准确率比较
免疫组织化学的在生物学和医学研究等领域里的重要性不言而喻， 尽管免疫组织化学实 验技术简单，然而实际上在很多实验室里获得稳定而准确的实验结果也并非一件容易的事 情。很多因素可能会影响免疫组化的最终结果（样品选择，包埋，抗原修复，抗体孵育，染 色等） ，为了帮助广大的科研工作者获得更好的免疫组化实验结果，我们结合本公司多年从 事免疫组化产品研发和检测的经验，特别推出了这本《免疫组织化学实验手册》 ，供科研工 作者和客户参考和交流学习，不足之处，我们也欢迎各位专家和同学批评指正。我们也会不 断完善我们的产品和服务，竭诚满足广大客户的需要。
免疫球蛋白特性 IgG
分子 量 重链 类型 血清 正常 浓度 占总 IgG 百 分比 结构
IgM 900kDa μ
IgA 160kDa
IgE 200kDa ε
IgD 180kDa δ
150kDa
10-16mg/ml 0.5-2mg/ml 1-4mg/ml
0.000010-0.4mg/ml 0.0004mg/ml 13 0.002 0.2
单克隆抗体和多克隆抗体
在设计免疫组化实验时，多克隆抗体和单克隆抗体的选择无疑是一个非常重要的因素， 两种抗体都广泛的应用于免疫组化，免疫沉淀，ELISA 和 Western Blot 等实验中，使用者应 该根据实验需要和两种抗体的特性和优点选择适合自己需要的抗体。 抗原上可以引起机体产生抗体的分子结构，称为抗原决定簇。一个抗原上可以有 好几个不同的抗原决定簇，因而使机体产生好几种不同的抗体，最终产生出抗体是浆 细胞。 只针对一个抗原决定簇起作用的浆细胞群就是一个纯系， 纯系的英文为 Clone ， 音 译 就 是 克 隆 。 由 一 种 克 隆 产 生 的 特 异 性 抗 体 叫 做 单 克 隆 抗 体 （ Monclone antibody）。单克隆抗体能够与单一的特异抗原决定簇结合。 通常抗原由多个抗原决定簇构成，而多种抗原决定簇刺激机体后即会产生多个克 隆，这些不同的克隆会产生各自抗原决定簇所对应地各种各样的单克隆抗体，这些单 克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体（ Polyclonal antibody）。目前，大部分的动 物（兔子，羊，猪，马和牛等）都可以用于多克隆抗体的生产，因为兔子温顺、生产 抗体的周期短，便于操作等原因，兔子成为生产多克隆抗体的首选动物。 多克隆抗体优点 单克隆抗体优点 1.过克隆抗体能够识别多个抗原表位，是变形蛋白 1.单克隆抗体的特异性很强，可以和单一的抗 检测的首选抗体。 原表位结合，可以降低背景染色。 2.多克隆抗体可以从多种种属中生产，包括兔子、 2.单克隆抗体的稳定性更好，同一单克隆抗体 山羊、大鼠、小鼠、鸡等，给客户更多的选择。 细胞株产生的抗体特性同一性更强 3.多克隆抗体也用于未知种属抗原蛋白的检测 3.面对复杂的检测样品，单克隆抗体对目的抗 原的蛋白的识别率更好 4.多克隆抗体和更多抗原表位结合，产生了更强的 检测效果 5.多克隆抗体价格更为便宜，更适合于科研研究
图 2. 武汉博士德生物工程有限公司大楼
图 3. 我们竭诚为您服务！
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目录
免疫组织化学实验手册概述.................................................................................1 目录.........................................................................................................................3 抗体的选择.............................................................................................................4 组织的处理.............................................................................................................7 抗原的消化和修复.................................................................................................9 免疫学检测系统-SABC 法简介..........................................................................11 免疫学检测系统-相关产品介绍.........................................................................14 免疫组化常见问题及对策...................................................................................23 抗体目录表...........................................................................................................26 武汉博士德生物工程有限公司代理名单...........................................................52 订货方法...............................................................................................................56