雄性大鼠生殖毒性评价服务
生殖毒性试验(食品安全国家标准)
床而导致不孕外，尚可影响胚胎的发生及发育，如胚胎死亡导致自然流产、胎仔发育迟缓以及胎仔畸形。 如果对母体造成不良影响会出现妊娠、分娩和乳汁分泌的异常，也可出现胎仔出生后发育异常。
４ 试验方法 ４．１ 受试物
受试物应使用原始样品，若不能使用原始样品，应按照受试物处理原则对受试物进行适当处理。将 受试物掺入饲料、饮用水或灌胃给予。 ４．２ 实验动物
个体在出生前暴露于受试物、发育成为成体之前（包括胚期、胎期以及出生后）出现的有害作用，表 现为发育生物体的结构异常、生长改变、功能缺陷和死亡。 ２．３ 母体毒性
受试物引起亲代雌性妊娠动物直接或间接的健康损害效应，表现为增重减少、功能异常、中毒体征， 甚至死亡。
３ 试验目的和原理 凡受试物能引起生殖机能障碍，干扰配子的形成或使生殖细胞受损，其结果除可影响受精卵及其着
将每窝仔鼠于出生后第４天调整至相同数量（每窝８只～１０只），尽量做到每窝内雌、雄数量相等， 也可以窝内雌、雄数量不等，但各窝之间两性别的鼠数应分别相同。原窝中多余的鼠应随机取出，而不 应按体重选择。 ４．４．４ 观察代数
在受试物理化和生物特性允许的条件下，最高剂量应使Ｆ０ 代动物出现明显的毒性反应，但不引起 动物死亡；中间剂量可引起轻微的毒性反应；低剂量应不引起亲代及其子代动物的任何毒性反应（可按 最大未观察到有害作用剂量的１／３０，或人体推荐摄入量的１０倍）。 ４．４ 实验动物处理 ４．４．１ 受试物的给予 ４．４．１．１ 试验期间，所有动物应采用相同的方式给予受试物；每日在同一时间段给予受试物，每周７ｄ。 受试物应在交配前连续给予两种性别的各代大鼠至少１０周，并继续给予受试物至试验结束，其中子代 的 雌 鼠 和 雄 鼠 在 断 乳 后 每 日 给 予 。 各 代 大 鼠 给 予 的 受 试 物 剂 量 （按 动 物 体 重 给 予 ，ｍｇ／ｋｇ 体 重 或 ｇ／ｋｇ 体重）、饲料和饮水相同。 ４．４．１．２ 根据受试物的特性或试验目的，选择合适的给予方式。首选掺入饲料，若受试物加入饲料或饮 水中影响动物的适口性，则应选择灌胃给予受试物。 ４．４．１．３ 受试物灌胃给予，要将受试物溶解或悬浮于合适的溶媒中，首选溶媒为水，不溶于水的受试物 可使用植物油（如橄榄油、玉米油等），不溶于水或油的受试物可使用羧甲基纤维素、淀粉等配成混悬液 或糊状物等。受试物应新鲜配制，有资料表明其溶液或混悬液储存稳定者除外。应每日在同一时间灌 胃 １ 次 ，每 周 称 体 重 ２ 次 ，根 据 体 重 调 整 灌 胃 体 积 。 灌 胃 体 积 一 般 不 超 过 １０ ｍＬ／ｋｇ 体 重 ，如 为 水 溶 液 时 ，最 大 灌 胃 体 积 可 达 ２０ ｍＬ／ｋｇ体 重 ；如 为 油 性 液 体 ，灌 胃 体 积 应 不 超 过 ４ ｍＬ／ｋｇ 体 重 ；各 组 灌 胃 体 积一致。 ４．４．１．４ 受试物掺入饲料或饮水给予，要将受试物与饲料（或饮水）充分混匀并保证该受试物配制的稳 定性和均一性，以不影响动物摄食、营养平衡和饮水量为原则，受试物掺入饲料比例一般小于质量分数 的５％，若超过５％时（最大不应超过１０％），可调整对照组饲料营养素水平（若受试物无热量或营养成 分，且添加比例大于５％时，对照组饲料应填充甲基纤维素等，掺入量等同高剂量），使其与剂量组饲料 营养素水平保持一致，同时增设未处理对照组；也可视受试物热量或营养成分的状况调整剂量组饲料营 养素水平，使其与对照组饲料营养素水平保持一致。受试物剂量单位是每千克体重所摄入受试物的毫 克（或克）数，即 ｍｇ／ｋｇ体重（或 ｇ／ｋｇ体重），当受试物掺入饲料其剂量单位也可表示为 ｍｇ／ｋｇ（或 ｇ／ｋｇ）饲料，掺入饮水则表示为 ｍｇ／ｍＬ水。受试物掺入饲料时，需将受试物剂量（ｍｇ／ｋｇ体重）按动物 每１００ｇ体重的摄食量折算为受试物饲料浓度（ｍｇ／ｋｇ饲料）。 ４．４．２ 交配
生殖发育毒性试验(食品安全国家标准)
食品安全国家标准生殖发育毒性试验１范围本标准规定了生殖发育毒性试验的试验方法和技术要求。
本标准适用于评价受试物的生殖发育毒性作用。
2术语和定义2.1生殖毒性生殖毒性指对雄性和雌性生殖功能或能力的损害和对后代的有害影响。
生殖毒性既可发生于妊娠期，也可发生于妊前期和哺乳期。
表现为外源化学物对生殖过程的影响，例如生殖器官及内分泌系统的变化，对性周期和性行为的影响，以及对生育力和妊娠结局的影响等。
2.2发育毒性个体在出生前暴露于受试物、发育成为成体之前（包括胚期、胎期以及出生后）出现的有害作用，表现为发育生物体的结构异常、生长改变、功能缺陷和死亡。
2.3母体毒性受试物引起亲代雌性妊娠动物直接或间接的健康损害效应，表现为增重减少、功能异常、中毒体征，甚至死亡。
2.4功能发育毒性经母体给予受试物后，其子代从出生后直到性成熟期间出现的机体或器官功能运用能力的改变或延迟，包括器官系统、生化、免疫等功能的变化。
其中功能的改变或延迟往往要在出生后经过相当时间才能判断，如听力或视力异常、行为发育迟缓等。
3 试验目的和原理本实验包括三代（F0、F1和F2代）。
F0和F1代给予受试物，观察生殖毒性，F2代观察功能发育毒性。
提供关于受试物对雌性和雄性动物生殖发育功能影响：如性腺功能、交配行为、受孕、分娩、哺乳、断乳以及子代的生长发育和神经行为情况等。
毒性作用主要包括子代出生后死亡的增加，生长与发育的改变，子代的功能缺陷（包括神经行为、生理发育）和生殖异常等。
4 试验方法4.1受试物受试物应首先使用原始样品，若不能使用原始样品，应按照受试物处理原则对受试物进行适当处理。
将受试物掺入饲料、饮用水或灌胃给予。
4.2实验动物4.2.1动物选择实验动物的选择应符合国家标准和有关规定。
选择已有资料证明对受试物敏感的动物物种和品系，一般啮齿类动物首选大鼠，避免选用生殖率低或发育缺陷发生率高的品系。
为了正确地评价受试物对动物生殖和发育能力的影响，两种性别的动物都应使用。
药物生殖毒性研究技术指导原则
附件三药物生殖毒性研究技术指导原则药物生殖毒性研究技术指导原则一、概述生殖毒性研究（Reproductive toxicity study）是药物非临床安全性评价的重要内容，它与急性毒性、长期毒性、遗传毒性等毒理学研究有着密切的联系，是药物进入临床研究及上市的重要环节。
拟用于人体的药物，应根据受试物拟用适应症和作用特点等因素考虑进行生殖毒性试验。
在药物开发的过程中，生殖毒性研究的目的是通过动物试验反映受试物对哺乳动物生殖功能和发育过程的影响，预测其可能产生的对生殖细胞、受孕、妊娠、分娩、哺乳等亲代生殖机能的不良影响，以及对子代胚胎-胎儿发育、出生后发育的不良影响。
生殖毒性研究在限定临床研究受试者范围、降低临床研究受试者和药品上市后使用人群的用药风险方面发挥重要作用。
本指导原则适用于中药、天然药物和化学药物的生殖毒性研究。
本指导原则重点阐述动物生殖毒性试验中动物、给药剂量、给药方法、试验方案选择的基本原则，并介绍一些常用的试验方案；对所获得数据进行分析及评价要求；以及所涉及的科学原理与背景。
二、基本原则（一）实验管理药物的生殖毒性试验属于非临床安全性评价研究，根据《中华人民共和国药品管理法》的规定，必须执行《药物非临床研究质量管理规范》。
（二）具体问题具体分析生殖毒性试验的设计，应在对受试物认知的基础上，遵循“具体问题具体分析”的原则。
应根据受试物的结构特点、理化性质、已有的药理毒理研究信息、适应症和适用人群特点、临床用药方案等选择合理的试验方法，设计适宜的试验方案，并综合上述信息对试验结果进行全面分析评价。
（三）随机、对照、重复生殖毒性试验应符合一般动物试验的基本原则，即随机、对照和重复。
三、基本内容（一）总体考虑1、受试物1.1 中药及天然药物生殖毒性试验的受试物应能充分代表临床研究受试物或上市药品，因此受试物应采用制备工艺稳定、符合临床研究质量标准规定的样品，一般用中试样品，并注明受试物的名称、来源、批号、含量（或规格）、保存条件及配制方法等。
药物毒理学生殖毒性试验
药物毒理学生殖毒性试验
药物毒理学的研究范围包含了药物对生殖系统的影响，其中生殖毒性是一项重要的研究内容。
生殖毒性试验主要通过实验动物模型，评估药物对生殖系统的对两性生殖器官和功能的影响。
生殖毒性试验通常包括以下内容：
1.生殖毒性评估：评估药物对生殖器官的影响，包括生殖细胞的发育、数量、性功能的影响。
2.生殖发育毒性评估：评估药物对胚胎和胎儿的影响，包括睾丸、卵巢、外生殖器和乳腺等生殖发育的影响。
3.遗传毒性评估：评估药物对基因突变、染色体畸变和细胞遗传毒性等的影响。
药物毒理学生殖毒性试验是一项重要的药物安全性评估内容，能够为药物的开发和上市提供重要数据支持，保障人类健康和安全。
大鼠三段生殖毒出生存活率评价标准
大鼠三段生殖毒出生存活率评价标准
大鼠三段生殖毒性测试是一种常用的实验方法，用于评价化学物质对生殖系统的毒性。
该测试包括三个阶段：配对、妊娠和哺乳。
在这个测试中，生存率是一个重要的评价指标。
以下是评价大鼠三段生殖毒性测试中生存率的常见标准：
1. 高生存率：如果在整个试验期间，大鼠的生存率高于90%，可以认为化学物质对大鼠的生存没有明显的影响。
2. 适中生存率：如果在整个试验期间，大鼠的生存率在80%
至90%之间，可以认为化学物质对大鼠的生存有一定的影响，但尚处于可接受范围内。
3. 低生存率：如果在整个试验期间，大鼠的生存率低于80%，可以认为化学物质对大鼠的生存有明显的影响，可能存在较高的毒性风险。
需要注意的是，以上标准只是一般性的指导，具体的实验设计和标准应根据具体的实验要求和毒性评价指南来确定。
此外，其他因素如试验条件、大鼠品系、化学物质的剂量等也会对生存率产生影响，因此在评价生存率时要综合考虑这些因素。
生殖毒性试验与评定
生殖毒性试验的目的在于了解外源化学物及其代 谢产物对机体成年哺乳动物的生殖功能和生育力 的影响。
多代繁殖试验在整个生命期内接触受试化学物， 更符合人类实际生活中长期低剂量接触食品添加 剂、微量重金属、农药及环境污染物的情况。
（1）试验方法原则
生殖毒性试验多用性成熟大鼠，也可用小鼠或家 兔。大鼠自然受孕率较小鼠为高，较为理想。 一般设三个剂量组，另设对照组。
一、 生殖毒性试验与评定 二、发育毒性试验与评定
一、生殖毒性试验与评定
外来化合物对生殖过程的损害作用，即生殖毒性。 生殖毒性可发生于妊娠期，也可发生于妊娠前期和 哺乳期。 生殖毒性试验主要研究外来化合物对生殖细胞发生、 卵细胞受精、胚胎形成、妊娠、分娩和哺乳过程的 损害及其评定。过去也称为繁殖试验。
幼仔出生存活率= ———————————×100%
分娩时出生幼仔数
4．幼仔哺乳成活率反映雌性动物授乳哺育幼 仔的能力。
21天断奶幼仔存活数
幼仔哺乳成活率= —————————×100%
出生后4天幼仔存活数
（四）结果判定
将试验组动物各项观察指标统计结果与对照组动 物进行比较，如试验动物在交配、妊娠、幼仔存 活、幼仔发育（哺育）等方面受到影响，则说明 受试物对动物繁殖功能有损害作用。
发育毒性研究的目的是通过计数胚胎或胎仔 吸收或死亡数，测量胎仔的重量和性别比， 检查外观、内脏和骨骼的形态，来识别受试 物有无对胚胎或胎仔的致死、致畸或其他毒 性作用。
变异：是由遗传和遗传外因素控制的外观变化，或 由于分化改变而引起的中途歧异。
2. 发育毒性的表现
① 生长迟缓 即胚胎与胎仔的发育过程在外来化合物影响下，较正常的 发育过程缓慢。 ② 致畸作用 由于外来化合物干扰，活产胎仔胎儿出生时，某种器官表 现形态结构异常。致畸作用所表现的形态结构异常，在出 生后立即可被发现。
药物生殖毒性指导原则
药物生殖毒性研究技术指导原则二○○六年十一月一、概述生殖毒性研究（Reproductive toxicity study）是药物非临床安全性评价的重要内容，它与急性毒性、长期毒性、遗传毒性等毒理学研究有着密切的联系，是药物进入临床研究及上市的重要环节。
拟用于人体的药物，应根据受试物拟用适应症和作用特点等因素考虑进行生殖毒性试验。
在药物开发的过程中，生殖毒性研究的目的是通过动物试验反映受试物对哺乳动物生殖功能和发育过程的影响，预测其可能产生的对生殖细胞、受孕、妊娠、分娩、哺乳等亲代生殖机能的不良影响，以及对子代胚胎-胎儿发育、出生后发育的不良影响。
生殖毒性研究在限定临床研究受试者范围、降低临床研究受试者和药品上市后使用人群的用药风险方面发挥重要作用。
本指导原则适用于中药、天然药物和化学药物的生殖毒性研究。
本指导原则重点阐述动物生殖毒性试验中动物、给药剂量、给药方法、试验方案选择的基本原则，并介绍一些常用的试验方案；对所获得数据进行分析及评价要求；以及所涉及的科学原理与背景。
二、基本原则（一）实验管理药物的生殖毒性试验属于非临床安全性评价研究，根据《中华人民共和国药品管理法》的规定，必须执行《药物非临床研究质量管理规范》。
（二）具体问题具体分析生殖毒性试验的设计，应在对受试物认知的基础上，遵循“具体问题具体分析”的原则。
应根据受试物的结构特点、理化性质、已有的药理毒理研究信息、适应症和适用人群特点、临床用药方案等选择合理的试验方法，设计适宜的试验方案，并综合上述信息对试验结果进行全面分析评价。
（三）随机、对照、重复生殖毒性试验应符合一般动物试验的基本原则，即随机、对照和重复。
三、基本内容（一）总体考虑1、受试物1.1 中药及天然药物生殖毒性试验的受试物应能充分代表临床研究受试物或上市药品，因此受试物应采用制备工艺稳定、符合临床研究质量标准规定的样品，一般用中试样品，并注明受试物的名称、来源、批号、含量（或规格）、保存条件及配制方法等。
生殖毒性试验流程及意义
啮齿类动物生殖毒性I、II、III段实验流程及意义1.概述生殖毒性试验（Reproductive toxicity study）是通过动物试验反映受试物对哺乳动物生殖功能和发育过程的影响，预测其可能产生的对生殖细胞、受孕、妊娠、分娩、哺乳等亲代生殖机能的不良影响，以及对子代胚胎-胎儿发育、出生后发育的不良影响。
包括：生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）、胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）、围产期毒性试验（III段）。
生殖毒性试验中，为方便实验一般可将一个完整生命周期过程分成以下几个阶段如下图所示：图1. 动物生命周期划分A. 从交配前到受孕（成年雄性和雌性生殖功能、配子的发育和成熟、交配行为、受精）。
B. 从受孕到着床（成年雌性生殖功能、着床前发育、着床）。
C. 从着床到硬腭闭合（成年雌性生殖功能、胚胎发育、主要器官形成）。
D. 从硬腭闭合到妊娠终止（成年雌性生殖功能、胎仔发育和生长、器官发育和生长）。
E. 从出生到离乳（成年雌性生殖功能、幼仔对宫外生活的适应性、离乳前发育和生长）。
F. 从离乳到性成熟（离乳后发育和生长、独立生活的适应能力、达到性成熟的情况）。
各段试验研究阶段如下：生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）：A-B胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）：C-D围产期毒性试验（III段）：C-F1一般试验设计简介1.1受试物生殖毒性试验的受试物应能充分代表临床研究受试物或上市药品。
1.2实验动物首选啮齿类动物为大鼠。
在胚胎-胎仔发育毒性研究中，一般还需要采用第二种哺乳动物，家兔为优先选用的非啮齿类动物。
1.3给药1. 3.1计量选择：至少应设三个剂量组，必要时可增加剂量组。
高剂量：应出现一些轻微的母体毒性反应，或为最大给药量/最大耐受量。
低剂量：应为生殖毒性方面的“未观察到不良反应的剂量（NOAEL）”。
1.3.2给药途径：给药途径应与临床拟用途径一致（不用腹腔注射途径，因腹腔注射会对胎儿及子宫产生直接影响）。
生殖毒性及其评定
第二节生殖毒性及其评定一、生殖毒性表现外来化合物对生殖过程的损害作用可以表现为性淡漠、性无能或各种形式的性功能减退。
雌性可出现排卵规律改变、月经失调或闭经、卵巢萎缩、受孕减少、胚胎死亡、生殖力降低、不孕或不育等。
雄性可表现为睾丸萎缩或坏死、精子数目减少等。
二、生殖毒性作用的评定外来化合物对生殖过程作用的评定主要通过生殖毒性试验来进行，过去也称为繁殖试验。
生殖毒性试验可以全面反映外来化合物对性腺功能、发情周期、交配行为、受孕、妊娠过程、分娩、授乳以及幼仔断奶后生长发育可能发生的影响。
评定的主要依据是交配后母体受孕情况（受孕率）、妊娠过程情况（正常妊娠率）、子代动物分娩出生情况（出生存活率）、授乳哺育情况（哺育成活率）以及断奶后发育情况等。
此外还可同时观察出生幼仔是否有畸形出现，但畸形观察主要在发育毒性评定中进行。
（一）试验方法原则生殖毒性试验多用性成熟大鼠，也可用小鼠或家兔。
大鼠自然受孕率较小鼠为高，较为理想。
一般设三个剂量组，另设对照组。
最高剂量组剂量应该超过预期人类实际接触水平，希望能使亲代动物出现轻度中毒，但不出现死亡或死亡率不超过10%，也不能完全丧失生育能力。
低剂量组的亲代动物不应观察到任何中毒症状。
另设中间剂量组应仅能出现极为轻微的中毒症状。
中间剂量与高剂量和低剂量应呈等比级数。
最高剂量组轻度中毒的概念是进食量显著减少，体重明显下降。
要求最高剂量组出现轻度中毒的目的是表明在已能引起中毒剂量下，如仍不致影响正常生殖过程，则表示该受试物确实不具有生殖毒性作用。
反之，如剂量过低，则难于确定受试物是否确实不具有生殖毒性，有可能因剂量不足，未达到最小有作用剂量。
剂量的确定可用少数动物进行预试，如已进行过亚慢性和急性毒性试验，则最高剂量也可略高于亚慢性毒性试验中最大无作用剂量，或相当于LD50的1/10左右。
最低剂量可相当于最高剂量的1/30。
如经多次试验确实证实1 000mg／kg体重剂量对生育力无损害作用，或最高剂量可引起亲代动物表现一般毒性作用，但对生育力无不利影响，则可不进行其它剂量试验。
生殖毒性试验流程及意义
啮齿类动物生殖毒性I、II、III段实验流程及意义1.概述生殖毒性试验（Reproductive toxicity study）是通过动物试验反映受试物对哺乳动物生殖功能和发育过程的影响，预测其可能产生的对生殖细胞、受孕、妊娠、分娩、哺乳等亲代生殖机能的不良影响，以及对子代胚胎-胎儿发育、出生后发育的不良影响。
包括：生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）、胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）、围产期毒性试验（III 段）。
生殖毒性试验中，为方便实验一般可将一个完整生命周期过程分成以下几个阶段如下图所示：图1. 动物生命周期划分A. 从交配前到受孕（成年雄性和雌性生殖功能、配子的发育和成熟、交配行为、受精）。
B. 从受孕到着床（成年雌性生殖功能、着床前发育、着床）。
C. 从着床到硬腭闭合（成年雌性生殖功能、胚胎发育、主要器官形成）。
D. 从硬腭闭合到妊娠终止（成年雌性生殖功能、胎仔发育和生长、器官发育和生长）。
E. 从出生到离乳（成年雌性生殖功能、幼仔对宫外生活的适应性、离乳前发育和生长）。
F. 从离乳到性成熟（离乳后发育和生长、独立生活的适应能力、达到性成熟的情况）。
各段试验研究阶段如下：生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）：A-B胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）：C-D围产期毒性试验（III段）：C-F1一般试验设计简介1.1受试物生殖毒性试验的受试物应能充分代表临床研究受试物或上市药品。
1.2实验动物首选啮齿类动物为大鼠。
在胚胎-胎仔发育毒性研究中，一般还需要采用第二种哺乳动物，家兔为优先选用的非啮齿类动物。
1.3给药1. 3.1计量选择：至少应设三个剂量组，必要时可增加剂量组。
高剂量：应出现一些轻微的母体毒性反应，或为最大给药量/最大耐受量。
低剂量：应为生殖毒性方面的“未观察到不良反应的剂量（NOAEL）”。
1.3.2给药途径：给药途径应与临床拟用途径一致（不用腹腔注射途径，因腹腔注射会对胎儿及子宫产生直接影响）。
肾炎灵片生殖毒性试验
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【 关键词 】 肾炎灵 ； 生殖毒性 ；肾炎 ； 雄性大 鼠；雌性大鼠
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国际生殖健康／ 计划生育杂志 ２０ 年 １ Ｏ９ 月第 ２ 卷第 １ Ｊ ｎ Ｒ ｐ ｄ ｅｌ，ａ ｌｌ ａ． ０ ９Ｖ １ ８ Ｎ ． ８ 期 ｔ ｅ ８ ｈ ｍ Ｐ ＩＪＩ２ ０， ０ ２， ０ １ Ｉ ｍ Ｈ ｔＦ ８， １ ．
生殖和发育毒性试验与评定
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（2）试验方法
①三代两窝生殖试验
大鼠断奶或出生8周后，开始喂受试物或以其 它方式与受试物接触，共进行8～12周，即直到 性发育成熟，相当出生后4个月左右。每周至少 称体重一次，记录进食量并观察有无中毒症状或 死亡。
亲代动物（F0）所生仔鼠为第一代（F1）。出生后应检查每窝幼仔数、死 亡数以及肉眼可见幼仔畸形。出生后第4天和第21天逐个称取重量，仔鼠 断奶后，母鼠休息10天，再与雄鼠交配一次，并生出第二窝仔鼠，亲代共 生出仔鼠两窝，分别为F1a和F1b。F1b出生后，将雄性亲鼠淘汰，雌性亲 鼠继续喂受试物，直至F1b出生后21天断奶为止。F1a断奶后观察其发育情 况，不再喂受试物。F1b断奶后，继续接触受试物8 ～12周，直到性发育 成熟，选出雌雄各16～20只，按前法进行交配。F1b所产第一窝幼仔为F2a， F2a断奶后，其母鼠F1b休息10天，再次交配，所生幼仔为F2b，F2b断奶后， 将F1b淘汰。F2b交配处理方法与F1b相同。但F2b也可只交配一次，所产仔 鼠为F3a，不再进行第二次交配，试验结束。
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生殖和发育毒性试验与评定
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一、 生殖毒性试验与评定 二、发育毒性试验与评定
一、生殖毒性试验与评定
外来化合物对生殖过程的损害作用，即生殖毒性。 生殖毒性可发生于妊娠期，也可发生于妊娠前期和 哺乳期。 生殖毒性试验主要研究外来化合物对生殖细胞发生、 卵细胞受精、胚胎形成、妊娠、分娩和哺乳过程的 损害及其评定。过去也称为繁殖试验。
生殖发育毒性试验(食品安全国家标准)
食品安全国家标准生殖发育毒性试验１范围本标准规定了生殖发育毒性试验的试验方法和技术要求。
本标准适用于评价受试物的生殖发育毒性作用。
2术语和定义2.1生殖毒性生殖毒性指对雄性和雌性生殖功能或能力的损害和对后代的有害影响。
生殖毒性既可发生于妊娠期，也可发生于妊前期和哺乳期。
表现为外源化学物对生殖过程的影响，例如生殖器官及内分泌系统的变化，对性周期和性行为的影响，以及对生育力和妊娠结局的影响等。
2.2发育毒性个体在出生前暴露于受试物、发育成为成体之前（包括胚期、胎期以及出生后）出现的有害作用，表现为发育生物体的结构异常、生长改变、功能缺陷和死亡。
2.3母体毒性受试物引起亲代雌性妊娠动物直接或间接的健康损害效应，表现为增重减少、功能异常、中毒体征，甚至死亡。
2.4功能发育毒性经母体给予受试物后，其子代从出生后直到性成熟期间出现的机体或器官功能运用能力的改变或延迟，包括器官系统、生化、免疫等功能的变化。
其中功能的改变或延迟往往要在出生后经过相当时间才能判断，如听力或视力异常、行为发育迟缓等。
3 试验目的和原理本实验包括三代（F0、F1和F2代）。
F0和F1代给予受试物，观察生殖毒性，F2代观察功能发育毒性。
提供关于受试物对雌性和雄性动物生殖发育功能影响：如性腺功能、交配行为、受孕、分娩、哺乳、断乳以及子代的生长发育和神经行为情况等。
毒性作用主要包括子代出生后死亡的增加，生长与发育的改变，子代的功能缺陷（包括神经行为、生理发育）和生殖异常等。
4 试验方法4.1受试物受试物应首先使用原始样品，若不能使用原始样品，应按照受试物处理原则对受试物进行适当处理。
将受试物掺入饲料、饮用水或灌胃给予。
4.2实验动物4.2.1动物选择实验动物的选择应符合国家标准和有关规定。
选择已有资料证明对受试物敏感的动物物种和品系，一般啮齿类动物首选大鼠，避免选用生殖率低或发育缺陷发生率高的品系。
为了正确地评价受试物对动物生殖和发育能力的影响，两种性别的动物都应使用。
第八章 生殖发育毒性作用及其评价
例如，5-羟色胺使小鼠动、静脉狭窄，胎盘血流量减 少，胎盘转运功能障碍，引起死胎和先天畸形。甲基汞改 变人胎盘滋养层微绒毛对不能代谢的氨基酸的摄取，而致 功能致畸，即先天水俣病；患儿严重神经迟钝，共济失调， 步行困难，语言、咀嚼，下咽困难和大发作性癫痫。
❖ 自受精零日计算，大鼠器官发生期约为9～17天；小 鼠为7．5～16天；家兔为11～20天。
❖ 也有称大小鼠为6～15天，家兔 6～18天
其它阶段接触发育毒物可能带来的损害：
1）着床前期 又称分化前期，细胞迅速分裂而形成胚囊， 分化很少，受损的是相对未分化细胞。一般认为，此时 很少发生特异的致畸效应，通常是未分化细胞受化学毒 物损伤而致胚泡死亡，称为着床前丢失 （preimplantationloss）。 然而，也有着床前期接触毒物导致胎儿畸形的例子。如 环氧乙烷、甲基亚硝脲、乙基亚硝基脲、乙基磺酸甲烷 和三乙烯三聚氰胺等。小鼠妊娠前第2.5d、第3.5d和第 4.5d用甲基亚硝脲处理可造成子代神经管缺陷和腭裂。
二、发育毒性
1、发育毒性 发育毒性指在到达成体之前诱发的任何有害 影响，包括在胚期(embryonic period)和胎期(fetal period) 诱发或显示的影响，以及在出生后诱发和显示的影响。
2、发育毒性的表现 1）生长迟缓。 一般认为胎儿的生长发育指标比正常对 照的均值低2个标准差时，即可定为生长迟缓。胎鼠胸骨 及枕骨骨化迟缓及低出生体重等是生长迟缓的较敏感指 标。生长迟缓造成的局部发育不全可视为畸形，如脑小 畸形和眼小畸形等。
三、化学物质影响生殖发育毒性的途径及特点 1、亲性腺作用（性腺毒性）
药物毒理学之生殖毒性实验
生殖毒性试验：所用药物至少应有二至三种剂量并设对照组，高剂量可产生轻度毒性反应，低剂量应为拟议中的治疗量的某些倍量。
给药途径原则上与推荐临床应用的给药途径相同，口服制剂应用灌胃法。
（１）一般生殖毒性试验动物：一种或一种以上试验动物，如用小鼠或大鼠每组雌雄各２０只以上。
给药时期：选择性成熟的动物，交配前雄性动物连续给药６０天以上，雌性动物连续给药１４天。
雌性动物在确定已经交配后继续给药至多数胚胎器官发生期。
检查：给药的雌性动物与给药的雄性动物同笼交配过夜后，以适当方法检查其交配成功与否（阴栓或精子的有无）。
同笼饲养期限最多两周。
必要时给药动物可以和非给药动物分别交配，已交配的雌性动物，推定其妊娠末期及时解剖，观察妊娠的确立、胎儿的吸收和死亡及子宫内活胎的发展情况，并进行形态学检查（性别、外表及内部器官的形态学观察及骨骼透明染色标本的检查），必要时进行组织学和组织化学的详细检查。
给药的雄性动物及未交配上的雌鼠均作剖检，必要时进行病理组织学检查。
（２）致畸胎试验动物：至少一种动物，一般采用小鼠或大鼠，每组１５—２０只孕鼠，家兔每组８—１２只孕兔。
剂量：至少有二至三种剂量，并另设对照组，高剂量可有轻度毒性反应，低剂量应为拟议中的治疗量的某些倍量。
给药途径：原则上与推荐临床应用的给药途径相同，口服制剂应用灌胃法。
给药时期：胚胎的器官形成期。
检查：全部动物在妊娠末期剖检，观察妊娠的确立，有无死胎和吸收胎及子宫内活胎的发育情况，并进行形态学检查（性别、外表及内部器官的形态学观察及骨骼透明染色标本的检查），必要时进行组织学和／或组织化学的详细检查。
某些新药需要观察其对子代的影响。
动物数应相应增加孕鼠１０只，使其自然分娩，观察其下一代直至成年。
检查新生动物的存活、生长及发育情况，包括行为、生殖功能及其他异常症状。
必要时还可对给药的雌性动物长期观察其生殖、受孕、分娩及次子代的情况。
结果处理：将数据汇总成表，尽量将全部观察的结果采用恰当的统计学方法分析及评价。
两代生殖发育毒性试验方法
推荐采用经口方式（包括饲料、饮水和灌胃），除非其它暴露途径（经皮或吸入）更为合适。
8剂量和分组
常规剂量设计
通常情况下,设置3个剂量组和1个溶媒对照组。剂量水平的选择应参考已有毒理资料，如非妊娠动物的TK数据 ，受试物的血乳屏障透过率，人体暴露估计等。在有TK数据的情况下，相关资料表明受试物具有剂量依赖饱和特征 ，且人体暴露量远低于饱和剂量，设置受试物高剂量时选择动力学曲线向非线性转变的拐点比较适合，可避免出现 饱和。在缺乏TK数据支持的情况下，剂量水平的选择应基于受试物的毒性，如高剂量应产生一定程度的全身毒性， 但不致死或造成动物严重的痛苦。
解剖与病理
F。在解剖当日早上完成体重测量后，制作雌鼠阴道涂片以确定动情周期，便于结合卵巢的组织病理结果分析。 解剖时大体观察所有组织脏器，尤其应重点关注生殖系统，并记录所有大体观察异常情况和子宫着床痕数量。以下 脏器在完成肉眼观察后应称重，成对的脏器需单独称重。
子宫、卵巢；
睾丸、附睾（整体和尾部）；
动物的准备和饲养
动物抵达实验设施后，应有不少于5天的环境适应期。实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。选用标准配 合饲料，饮水不限制。但应注意饮食和垫料中植物雌激素的含量，避免影响某些生殖终点。所用批次饲料留样并适 当保存至报告完成，以便在某些情况下进行回溯分析。
动物交配前可以多只动物饲养于一笼，雌性动物交配成功后（检查到阴栓或阴道涂片阳性）应单笼饲养于含垫 料的笼具内，其所产Fl代同笼饲养至离乳。离乳后的Fl代应按组别、性别分笼饲养，如有合理理由亦可单笼饲养。
在出生后第4天，通过随机选择调整窝的大小，尽可能达到每窝每性别5只，若难以达到，做部分调整也可接受 （例如：4只雌性和6只雄性）。窝的标准化不宜以体重及肛殖距（AGD）为依据。
DEHP对雄性生殖系统毒性的研究进展
Research Progress on Male Reproductive Toxicity Induced by Di(2-ethylhexyl)phthalate
DONG Rui-na, DAI Hong*
（Inner Mongolia Medical University, Hohhot）
ABSTRACT: Phthalate (2-ethylhexyl) ester [di (2-ethylhexyl) phthalate, DEHP]is an important component of two phthalate esters
(PAEs), and is one of the global organic pollutants.DEHP into the body can produce liver, kidney, lung, heart, reproductive and other multi system toxic effect, especially lead to the formation of the male reproductive system toxicity and development, such as decrease of reproductive organ damage and degeneration, germ cell vitality and proportion, even leads to apoptotic and caused a series of pathological changes, which greatly the harm to human health and development.In order to promote human health and control the pollution of DEHP,this paper is to review the role and mechanism of DEHP on male reproductive and developmental toxicity. KEY WORDS: Di(2-ethylhexyl)phthalate; Male; Reproductive toxicity; Mechanism of action
生殖毒性
操作步骤
• 动物选择及数量：最好大树，建议16-20窝 • 交配：交配比例最好为1：1，交配过程应 保证可同时确认各窝的父母代动物，交配 期一般为2-3周。 • 持续给药其间：一般推荐交配前雄鼠给药4 周，雌鼠2周。染毒应持续至雄性动物交配 结束后处死，并且至少到雌性动物的整个 着床期，评价对雄性的生殖和雌雄交配行 为的影响。
实验终末指标观察
• 所有成年动物称重后处死、尸解；对肉眼查见异 常的器官进行组织学检查，并保留对照组相应的 器官；保留所有动物的生殖系统（睾丸、子宫、 卵巢）供组织学检查。精子计数及精子活动能力。 • 着床位置计数、活胎、死胎（吸收胎、晚死胎） 计数。 • 对表面看来未孕的大、小鼠，用10%硫化铵进行 子宫染色15-20分钟以确定是否有受精卵着床痕迹。
动物的分组
交配前计算机分组 交配后计算机自动分组 • 保证较高的动物交配率和受孕率
人工分组
• 交配结束前的少量受精鼠
动物的临床观察
自备数据库包含实验动物绝大多数的异常行为体征 按发生部位、严重程度和持续时间描述 屏幕提示功能 提高临床观察的准确性和可靠性
仔鼠的解剖观察
三段生殖毒性试验
• 共同要求：
• 动物选择：大鼠是啮齿类首选动物；最常使用的 非啮齿类动物是兔。
• 应选择年轻、性成熟的雄鼠与未交配过的雌鼠。 雄性大鼠的最适交配日龄为90日，雌性大鼠为80 日，小鼠的最适交配日龄为65-80日。家兔小型品 种性成熟3-4月龄，中型品种4-5月，大型5-6个月， 最适交配日龄后推1个月。
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雄性大鼠生殖毒性评价服务
概述
对于男性科用药或某些药物有可能对男性生殖系统具有潜在毒性的药物需要进行雄性大鼠生殖毒性研究，雄性大鼠生殖毒性试验所获得的信息对长期毒性试验剂量的设计和某些药物Ⅰ期临床试验起始剂量的选择具有重要参考价值，并能提供一些与人类药物过量急性中毒相关的信息。
服务项目：
雄性SD 大鼠连续给药3-6个月，评价受试药物对雄性大鼠生殖系统有无毒性作用。
服务内容：
检测雄性大鼠长期给药后的体重增长及睾丸、附睾、心、肝、脾、肺、肾、胸腺脏器系数、精子畸形率；大鼠睾丸的每日精子生成量；病理组织学研究，使用睾丸的连续切片，并进行TUNEL 检测，观察到药物引起的生精细胞凋亡。
客户提供：受试样品
我们提交：详细实验报告
服务周期：6-8个月
服务收费：根据实验方案确定，请咨询 服务特点：
1.专门针对雄性大鼠生殖系统进行安全性评价，更具有针对性；
2.多指标检测受试药物对大鼠生殖毒性的影响，结果准确可靠。
正常对照组 睾丸（×100）
正常对照组 附睾（×100）
受试药物高剂量组 附睾（×100）
受试药物高剂量组 睾丸（×100）
大鼠生精细胞阴性对照，TUNEL 细胞凋亡原位检测（×400）
大鼠生精细胞阳性对照，TUNEL 细胞凋亡原位检测（×400）
正常对照组大鼠生精细胞，TUNEL 细胞凋亡原位检测（×400）
受试药物高剂量组大鼠生精细胞，TUNEL 细胞凋亡原位检测（×400）。