生物制药十五章-第一节151028

生物制品与生物技术药物制造工艺
生物制品与生物技术药物制造工艺
第一节：概述
第二节：疫苗和菌苗
第三节：主要菌苗和疫苗的制造方法
第四节：重组治疗蛋白类药物
第五节：基因治疗与基因药物
第一节：生物制品概述
1 、概念和发展历史
2 、分类
3、生物制品质量要求
1 概念和发展历史
Def: 以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为
增强免疫原性：筛选完整的颗粒性结构；加入有免疫佐剂
② 基因工程载体疫苗(gene engineering vector vaccine) 利用微生物做载体，在微生物中表达保护性抗原基因，把 微生物制成疫苗。
优点：1、活疫苗，抗原不需纯化;2、不需多次免疫，载体本
身可发挥免疫佐剂效果。 缺点：载体为特定的微生物载体，曾感染过腺病毒或者接种卡 介苗的人，对载体微生物已具有免疫力，再次接种后不易 繁殖，会影响免疫效果。
类别 制剂性状 接种量、次数 保存、有效期 免疫效果 安全性 死疫苗 杀死的病原微生物 量大、次数多（2-3） 易保存，较稳定 较差、不持久 会出现发热、全身或局 部反应 活疫苗 弱毒或无毒的病原微生物 量小、1次 不易保存，4 ℃数周失效 较好，维持1-5年或更长 有时会感染致病
3、亚单位疫苗（subunit vaccine）
流 程 图
动物或胚胎
毒 株
培育 鉴定 种 毒 扩增 鉴定 种 子 原 料 配制 保护剂
组 织
剪碎 消化 原代悬液 生长细胞 培养 收获 灭活
原 料 配制
3—— 病 毒 性 细 胞 疫 苗 制 造 工 艺 流 程
细胞培养液
传代细胞 原 料 配制 灭菌 佐剂
原 苗
配 苗
灭活病毒
配 苗
（乳化、混匀）
冻干、分装 检验 活疫苗
验室的标准品或参考制品
国际参考标准
国际生物参考试剂：生物学诊断试剂、生物材料
或用于鉴定微生物或诊断疾病的高度特异血清。
（3）国际标准的检定程序（P470）
第二节：疫苗和菌苗
（一 ）传统疫苗
（二）新一代疫苗
一、疫苗分类 （一 ）传统病毒疫苗
1、死疫苗（dead Vaccine）
2、活疫苗（attenuated vaccine）
三、疫苗的制造
一、灭活菌苗制造
灭活菌苗通用制造程序
菌种的选择 菌液培养 灭活
配苗
浓缩
灭活菌苗，种类、苗型甚多，但制造的基本程序差别不大。 菌种的选择 菌液培养 灭活 浓缩 配苗
基本流程 菌液
灭 活
灭活菌液
+
化
佐剂
配置
原料
乳
分装和保存
一、灭活菌苗制造
菌种的选择 菌液培养
灭活
浓缩
配苗
灭活菌苗通常根据细菌的特性加入最有效的灭活剂，采取 最适当的灭活条件进行。
5、菌种在培养过程中无毒性复原现象（活菌苗）
6、在培养过程中，能产生大量典型毒素（类毒素）
3、病毒疫苗制造
1、病毒性禽胚培养疫苗制造
2、 细胞培养制造疫苗 3、病毒性动物组织疫苗制造
二、病毒性细胞培养疫苗制造
种毒与毒种继代 细胞制备 接毒与收获 配苗
细胞类型：原代细胞和传代细胞两类 根据病毒种类、制备疫苗工艺流程选择不同的细胞。（ 脊髓灰质炎活疫苗选择vero细胞；狂犬病弱毒细胞疫苗采取 BHK21细胞增殖病毒等）。
3、亚单位疫苗（subunit vaccine）
1、死疫苗（dead Vaccine）
利用物理或化学方法杀死或灭活培养增殖的标准微生物
制成的预防制剂。
2、活疫苗（attenuated vaccine） 用人工定向变异或从自然界筛选出毒力高度减弱或基本 无毒的微生物制成的预防制剂。
两种类型疫苗特征比较
2、遗传重组疫苗 （genetic recombinant vaccine）：用遗传重组方法获得重组微生物制成 的疫苗。
3、合成肽疫苗(Synthetic peptide vaccine)：
用化学方法合成能够诱发机体产生免疫保护的多 肽制成的疫苗。 优点： 纯度和安全性高；副作用小；可长期在常温
力有关的基因获得的缺失突变毒株制成的疫苗。（缺失毒素A 单位的或其他毒力相关基因的霍乱活菌苗已上市） 优点： 突变性状明确、稳定； 不易返祖、毒力恢复； 是研究安全有效的新型疫苗的重要途径。
⑤ 蛋白工程疫苗（protein engineering vaccine ）： 抗原基因加以改造，使之发生点突变、缺失、甚至进 行不同基因或结构域的人工组合，达到增强其免疫原 性，去除有害作用或副反应的一类疫苗
利用病原体中有效的免疫原成分制成的疫苗，称为亚单位
疫苗
。
（二）新一代疫苗 1、基因工程疫苗
2、遗传重组疫苗
3、合成肽疫苗 4、独特型抗体疫苗
问题
1、基因工程疫苗的种类有哪些？ 2、每一种疫苗优、缺点是什么？
1、基因工程疫苗 （gene engineered vaccine)
利用DNA重组技术克隆并表达保护性抗原基因，用
收获 收获时间和方法依疫苗性质而定。。
二、通过细胞培养制造疫苗
种毒与毒种继代 （五）配 苗 细胞制备 接毒与收获 配苗
1．灭活疫苗
不同灭活剂对不同病毒的作用也不同。向细胞毒液内按规定 加入灭活剂，在一定的温度下作用一定的时间，有的灭活剂 还需加入阻断剂中止灭活。灭活疫苗配置通常都需加入佐剂， 充分混合、分装，制成灭活疫苗。 2．冻干苗 细胞毒液内按比例加入保护剂或稳定剂，充分混合、分装， 进行冷冻真空干燥制成冻于疫苗。
二、通过细胞培养制造疫苗
种毒与毒种继代 细胞制备 接毒与收获 病毒接种培养有同步与异步。 同步：在细胞分装同时或不久接种毒种。 异步：在细胞形成单层后接种毒种， 如乙型脑炎疫苗，细胞形成单层后倾去培养液，按1%2%量接种毒种，经吸附后加入维持液继续进行培养，待 配苗
70%-85%以上细胞病变时收获。
检查的生物标准品或参考品。有世界卫生组织或国家检定
机构批准分发；有世界卫生组织审定分发的，为国际标准；
有国家检定机构批准分发的，则称为国家标准。
（2）生物制品标准品的要求
准确：单位数准确 冻干：效价稳定
溶封：
瓶签、说明书和实验数据
⑵ 标准品的分级
国际生物标准：有世界卫生组织根据国际协作研 究的结果标明其国际单位。用于标定国家的或实
三、效力试验
1、免疫力实验
2、活菌数和活病毒滴度测定
3、类毒素和抗毒素单位测定
4、血清学试验
5、其他有关效力的检定和评价
1980年 世界卫生组织宣布全球消灭了天花。
问题
1、生物制品的种类有哪些？每一个种类包含哪些 生物制品？ 2、生物制品的质量要求是什么？ 3、生物制品标准品的要求有哪些？ 4、标准品的分类？
2 生物制品的分类
1. 预防类：
细菌类疫苗(菌苗）、 病毒类疫苗、 类毒素和联合疫苗。
2.治疗类： 抗毒素及免疫血清
1.2 从疫苗生产看生物制品的发展
1798年，医学界正式承认“接种疫苗确实是一种行之有效 的免疫方法”。 1870年，法国科学家巴斯德发明了第一个细菌减毒活疫 苗——鸡霍乱疫苗。巴斯德将此归纳为对动物接种什么细 菌就可以使其不受该病菌感染的免疫接种原理，从而奠定
了疫苗的理论基础。因此人们把巴斯德称为疫苗之父。
表达的抗原产物或重组体本身制成的疫苗。
包括
① 基因工程亚单位疫苗、
② 基因工程载体疫苗、 ③ 核酸疫苗、 ④ 基因缺失活疫苗蛋白工程疫苗等。
① 基因工程亚单位疫苗
Def:基因工程表达的蛋白抗原纯化后制成的疫苗。
优点：
产量高、纯度高、安全性高； 用于病原体难培养或有潜在致癌性，或有免疫病理作用 的疫苗研究。 缺点： 与传统亚单位疫苗相比，免疫效果较差。
安全性： 毒性试验，防腐性试验，热原质试验，安全性试验；有关安全性的特 殊试验； 效力：
浓度测定、活菌率或病毒滴定测定、动物保护率试验、免疫抗体滴度测
定，稳定性试验 （2）生物制品的质量控制： 安全性、有效性和可控性 （P469)
4、生物制品的检定标准
(1)生物制品的标准品或参考品
Def: 用于生物制品效价、活性或含量测定的或其特性鉴别、
原料，利用传统技术或用现代生物技术制成，用于
人类疾病的预防、治疗和诊断。
包括: 各种疫苗、抗血清、抗毒素、类毒素、免疫
调节剂、诊断试剂等。
1.2 从疫苗生产看生物制品的发展
12世纪，开始使用人痘接种法预防天花
。
1796年，琴纳从患牛痘挤奶女工的痘疱中，分离疱浆，接种于8岁男
孩的手臂上，获得对天花免疫力。
细胞因子 重组DNA产品 血液制品
：
3. 诊断类：
体外诊断制品：由特定抗原、抗体或有关生物物质制成的免疫诊
断试剂或试剂盒，用于体外免疫诊断。 体内诊断制品：由变态反应原或有关抗原制成的免疫诊断试剂， 用于皮内接种，诊断个体对病原的易感性或免疫状态。
4、其他制品
3、生物制品质量要求 ⑴ 生物制品检定内容：
下保存；
缺点：
抗原性单一；免疫原性弱。
合成肽抗原联合使用提高免疫原性。
4、抗独特型抗体疫苗 （antiidiotype vaccine）：
用与特定抗原的免疫原性相近的抗体（ab2）做抗原
制成的疫苗。 目前此疫苗尚处于理论性研究阶段。
疫 苗 制 造 的 方 法
一、灭活菌苗制造
二、活菌苗制造
③ 核酸疫苗（nucleic acid vaccine）：或称基因疫苗
用能够表达抗原的基因制成疫苗。
优点：