龙葵的质量分析研究_李志辉

margine）及 khasianine 等，其苷元均为澳洲茄胺。目 前在对 龙葵药材有 效成分定量 分析的研 究中 [6- 9]，UPLC 法同时测定该药材中 3 种有效成分的文献尚未见 报道。为了更好的控制龙葵药材的质量，本研究试 图建立快速测定其 3 种甾体类生物碱的 UPLC 方法， 以期为龙葵药材的质量检测提供快速简便的方法， 为龙葵饮片的质量控制提供方法学参考。
中药新药与临床药理 2012 年 11 月第 23 卷第 6 期
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良好。 2.7 稳定性试验 准确吸取同一供试品溶液 1.0 μL， 分别在 0，2，4，8，12，24，36，48 h 进行测定， 澳洲茄碱、澳洲茄边碱及 khasianine 峰面积的 RSD 分 别为 0.94 %、0.77 %、0.93 %，表明样品在 48 h 内 稳定。 2.8 加样回收率试验 取已知澳洲茄碱、澳洲茄边碱 及 khasianine 含量的龙葵药材粉末 1.0 g，精密称定 6 份，分别加入高、中、低 3 个浓度（分别为已知含量 的 80 %、100 %、120 %） 的澳洲茄碱、澳洲茄边碱 及 khasianine 对照品混合液，按“供试品溶液制备” 项下方法操作，进样测定，结果见表 2。
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b. 样品 1. 澳洲茄碱；2. 澳洲茄边碱；3. khasianine
图 1 龙葵对照品及样品 UPLC 色谱图
Figure 1 UPLC results of Solanum Nigrum L．
3
4.5 5.0 3
4.5 5.0
AU
图 1。 2.4 标准曲线的制备 精密吸取混合对照品储备液适 量，10 %醋酸溶液稀释，稀释倍数分别为 1，2，4， 8 和 20 倍 ， 得 到 一 系 列 浓 度 的 混 合 对 照 品 溶 液 ， 0.22 μm 微孔滤膜过滤后，依前述色谱条件，进样 1.0 μL，以各对照品的进样量（μg）为横坐标，峰面积 为纵坐标，绘制标准曲线，得到 3 个成分的线性回 归方程及线性范围，见表 1。
收稿日期：2012- 07- 16 作者简介：李志辉，男，副主任药师，研究方向：医院药学。Email：275502915@。通讯作者：孟军华，女，主管药师，主要从事医院药学 研究。Email：mengih315@。
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Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2012 November，Vol． 23 No． 6
0.9999 0.865～17.300
澳洲茄边碱 Y=800960X- 134.80
0.9999 0.730～14.600
Khasianine
Y=1140025X- 338.69 0.9999 0.700～14.000
2.5 精密度试验 准确吸取同一供试品溶液 1.0 μL， 连续进样 6 次，求得澳洲茄碱，澳洲茄边碱及 khasianine 峰 面 积 的 RSD 分 别 为 0.62 % 、 0.87 % 、 0.39 %。 2.6 重复性试验 取同一样品 6 份，精密称定，按 “供试品溶液制备”项下操作，在上述色谱条件下进 行进样 测定，澳洲茄 碱，澳洲茄边碱及 khasianine 含 量 的 平 均 值 为 0.75， 1.13， 0.73 mg·g-1， RSD 分别为 0.73 %、0.54 %、0.83 %，表明试验重复性
龙葵是茄科 Solanaceace 植物龙葵 Solanum Ni－ grum L.的干燥地上部分，曾收载于《中国药典》（1977 年 版）， 味 苦 ， 微 甘 ， 性 寒 ， 能 清 热 解 毒 、 消 肿 散 结、消炎利尿，是我国传统草药，民间用于抗炎、
抗病毒。近年来发现龙葵具有抗肿瘤作用，引起了 医药工作者的关注。有研究显示，龙葵中含有的生 物 碱 是 甾 体 类 生 物 碱 ， 具 有 较 好 的 抗 肿 瘤 活 性 [1- 5]， 主要 包 括 澳 洲 茄 碱（solasonine）、澳洲茄边碱（sola-
表 2 加样回收率试验结果
Table 2 Recovery results of solasonine， solamargine and
Quality Analysis of Solanum nigrum by Ultra-performance Liquid Chromatography LI Zhihui，MENG Junhua，XIAO Hu（i The Third Hospital of Wuhan，Wuhan 430061，China） Abstract：Objective To establish a simultaneous detection method for solasonine，solamargine and khasianine in the medicinal material of Solanum nigrum by ultra- performance liquid chromatography（UPLC），and to analyze the quality of the medicinal material. Methods UPLC was used to determine the contents of three components in Solanum nigrum. The samples were separated on ACQUITY UPLC BEH C18 column（250 mm×2.1 mm，1.7 μm） with methano（l A）0.5 % acetic acid（B） as the mobile phase and by the gradient elution process. The flow rate was 0.5mL·min-1，the column temperature was set at 35 ℃，and the detection wavelength was 205 nm. Results The linear ranges of solasonine， solamargine and khasianine in Solanum nigrum were 0.865 ～17.300， 0.730 ～14.600， 0.700 ～14.000 μg （r=0.9999），and their average recoveries （n=9） were 98.86 %，98.91 %，98.27 %，respectively. All of their RSD values were less than1.50 %. The results showed that there had certain difference of quality of the medicinal material from 8 habitats of Guangdong province. Conclusion The method is rapid，convenient，stable，accurate，reliable and sensitive，which can be used for the quality control of Solanum nigrum. Keywords：Solanum nigrum；UPLC；Content determination，Quality analysis
澳洲茄碱，澳洲茄边碱及 khasianine 对照品，四川 成都曼思特生物科技有限公司，批号依次为：MUST11052010， MUST- 11052011， MUST- 11052012， 纯 度≥99 %；甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂 为分析纯。龙葵药材分别采购于广东各区田间及药 材批发市场，经湖北中医药大学药学院吴金虎副教 授鉴定为茄科 Solanaceace 植物龙葵 Solanum Nigrum L. 的干燥地上部分。
表 1 3 种成分的线性回归方程及线性范围
Table 1 The linear regression equation and range of solasonine，
solamargine and khasianine
化合物Biblioteka 线性回归方程r线性范围 / μg
澳洲茄碱
Y=904838X- 133.96
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备 取澳洲茄碱、澳洲茄边碱及 khasianine 对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 1 mL 各含 0.1730，0.1460， 0.1400 mg 的混合对照品 储备液。 2.2 供试品溶液的制备 取龙葵药材粉末 2.0 g，精 密称定，置 100 mL 具塞锥形瓶中，加乙酸 - 甲醇液 （5∶95） 50 mL，密塞，称定质量，超声处理 30 min （功率 250 W，频率 40 kHz），取出，放冷，称定质 量，用提取液补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤 液 25 mL，减压蒸干，残渣加 10 %乙酸水溶液使溶 解，并定容至 5 mL 量瓶中，用 0.22 μm 微孔滤膜滤 过，取续滤液，即得。 2.3 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键 合硅胶为填充剂；以乙腈为 A 相，以 0.5 %乙酸水溶 液为 B 相，梯度洗脱 0 ~ 6.0 min，A：10 %~50 %， 流速：0.5 mL/min，柱温：35 ℃；检测波长：205 nm。 理论塔板数按澳洲茄碱色谱峰计算不低于 50000，见
AU
0.50
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0.00 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0
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a. 对照品
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