2012.10.15(终版)第十四章 长期毒性作用及其试验方法剖析
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长期毒性作用及其试验方法
可供参考的具体方法
（1）半数致死量法（LD50法） （2）短期蓄积试验过渡法 （3）药代动力学法（MBS法） （4）最大耐受量法（MTD法）
根据大鼠急性毒性试验的最大耐受量(MTD)
大鼠长期毒性试验的三个剂量分别为1、1/3及1/10MTD； 狗和猴可采用大鼠一半左右的剂量。
可供参考的具体方法
2 判断受试物反复给药的毒性靶器官或组织
3 推测临床试验的起始剂量和重复用药的安全剂量范围
4 提示临床试验中需重点监测的指标
5 为临床试验中的解毒或解救措施提供参考
2019/11/22
11
长期毒性试验的意义
了解实验动物能耐受的最大剂量，找出完
全无毒的安全界量，这个界量是判断一个待选 新药是否有进一步开发研究的价值以及能否过 渡到临床试用的重要依据，同时，也可为其它 毒性实验和临床初始剂量的选择提供依据。因 此长期毒性试验是临床前安全性评价的主要内 容，它与急性毒性试验、生殖毒性以及致癌性 等毒理学研究有着密切的联系，是新药报批临 床时重点审评项目之一，是药物从药学研究进 入临床试验的重要环节。
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40
我国药政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的规定
临床拟用 给药时间
﹤5天 ﹤2周
毒性试验期限
啮齿类动物
非啮齿类动物
2周
2周
1月
1月
2-4周
3月
3月
1-3月
6月
6月
﹥3月
6月
9月
每天给药最好固定时间。
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41
四、剂量水平的选择
三个剂量组是必不可少的：
一个是足以引起明显的毒性反应的高剂量，但死 亡率应控制在 20% 以内；
第15章长期毒性作用及其试验方法课件
七、观察及测定指标
药物的长期毒性试验基本上可通过对实验动物的体 格检查，日常观察，食耗及饮水量，体重和器官重 量，血液学指标，心电图描记，尿液分析，临床生 化检验及病理组织学研究加以确认。
2024/4/9
3
基本概念和目的
长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：
1. 给药的期限不同。
急性毒性试验为一次性给药或 24 小时内多 次给药；
长期毒性试验为连续多日接触一定剂量给药， 给药期限为临床用药的 3-4 倍时间。 对长期毒性试验各国之间无统一的时间规定。
2024/4/9
4
基本概念和目的
2
4
12 70
注：有些资料记载的动物体型系数（R）为此表中R 值的1000 倍，如小鼠R 为59，大鼠R 为 90，这不影响药物剂量的折算。
2024/4/9
28
对于标准体重的动物：
每只用量（mg/只）DB＝ DA· KB KA
千克体重剂量（mg/kg）dB＝ dB· KB KA
KA，KB，RA，RB 值由上表查找。
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32
试验设计原则及方法
五、限度试验
经济合作与开发组织（OECD）提出如果一种 化合物以1000mg/kg的剂量，按规定期限连续 给药，不产生任何可观察到的毒性反应，而且根 据结构相关药物的已有资料，估计不会产生毒性 的话，就不需要再用三个剂量来进行试验，除非 预期临床需要更高的剂量。
剂量水平选择的方法
➢（1）半数致死量（LD50）法 ➢（2）短期蓄积试验过渡法 ➢（3）药代动力学（MBS）法 ➢（4）最大耐受量法（MTD法） ➢（5）临床拟用剂量法（ACD法） ➢（6）等效剂量法
2024/4/9
27
长期毒性作用及其试验方法
5 ~6周龄。
狗的起始月龄为 6 月龄，一般不超过 12 月 龄； 如选用杂种狗，起始年龄可稍大些，但也不能超 过 5 年。
2020/7/23
.
30
二、实验动物
2. 起始月(周)龄
起始体重应在体重均值± 20% 的范围内。
2020/7/23
2020/7/23
.
7
蓄积作用的表现形式
作用量积蓄 功能性蓄积
2020/7/23
.
8
长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别
1
给药的期限不同
2
给药的剂量范围不同
3
观察的毒效应不同
290/20/7/23
.
9
二、目的与意义
2020/7/23
.
10
长期毒性试验的目的
1 预测受试物可能引起的临床不良反应
2 判断受试物反复给药的毒性靶器官或组织
3 推测临床试验的起始剂量和重复用药的安全剂量范围
4 提示临床试验中需重点监测的指标
5 为临床试验中的解毒或解救措施提供参考
2020/7/23
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11
长期毒性试验的意义
了解实验动物能耐受的最大剂量，找出完 全无毒的安全界量，这个界量是判断一个待选 新药是否有进一步开发研究的价值以及能否过 渡到临床试用的重要依据，同时，也可为其它 毒性实验和临床初始剂量的选择提供依据。因 此长期毒性试验是临床前安全性评价的主要内 容，它与急性毒性试验、生殖毒性以及致癌性 等毒理学研究有着密切的联系，是新药报批临 床时重点审评项目之一，是药物从药学研究进 入临床试验的重要环节。
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21
二、实验动物
1.种类及品系
☆我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一 种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类， 首选狗。
狗的起始月龄为 6 月龄，一般不超过 12 月 龄； 如选用杂种狗，起始年龄可稍大些，但也不能超 过 5 年。
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二、实验动物
2. 起始月(周)龄
起始体重应在体重均值± 20% 的范围内。
2020/7/23
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7
蓄积作用的表现形式
作用量积蓄 功能性蓄积
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长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别
1
给药的期限不同
2
给药的剂量范围不同
3
观察的毒效应不同
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二、目的与意义
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长期毒性试验的目的
1 预测受试物可能引起的临床不良反应
2 判断受试物反复给药的毒性靶器官或组织
3 推测临床试验的起始剂量和重复用药的安全剂量范围
4 提示临床试验中需重点监测的指标
5 为临床试验中的解毒或解救措施提供参考
2020/7/23
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11
长期毒性试验的意义
了解实验动物能耐受的最大剂量，找出完 全无毒的安全界量，这个界量是判断一个待选 新药是否有进一步开发研究的价值以及能否过 渡到临床试用的重要依据，同时，也可为其它 毒性实验和临床初始剂量的选择提供依据。因 此长期毒性试验是临床前安全性评价的主要内 容，它与急性毒性试验、生殖毒性以及致癌性 等毒理学研究有着密切的联系，是新药报批临 床时重点审评项目之一，是药物从药学研究进 入临床试验的重要环节。
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二、实验动物
1.种类及品系
☆我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一 种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类， 首选狗。
长期毒性作用及其试验方法演示文稿
☆在吸入给药时，猴是首先推荐的动物，因为它在 呼吸系统的解剖学和生理学方面比其它动物更接 近人类。
☆如研究计划生育用药，应选择猴或其他大动物。
Beagle犬：原产英国，纯种小猎兔犬 Beagle犬的特点：体型小,毛短,性情温和,亲人,抗病力强
缺点：价格昂贵
二、实验动物
2. 起始月(周)龄 一般选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物。
长期毒性作用及其试验方 法演示文稿
第一节 基本概念和目的 第二节 试验设计原则及方法
第一节
基本概念和目的
一、定义
长期毒性试验是指试验动物连续多日接触较大 剂量的药物所引起的中毒效应，为观察这种中毒效 应而设计的毒理学试验称之为长期(慢性)毒性试验。
急性毒性试验
是为观察和评价急性毒性的有害作用或中毒反应 而设计的一种毒理学试验。研究药物一次或24小 时内多次给予受试药物后，一定时间内所产生的 毒性反应。
一、一般原则和要求
总体原则 选用两种实验动物 三个剂量 给药途径应与临床拟用途径相同
一、一般原则和要求
总体原则 选用两种实验动物
至少在两种动物体上进行，兼顾雌雄性别。
一、一般原则和要求
总体原则
三个剂量
剂量至少分为高、中、低三个档次。 高剂量组应能充分反映药物的毒性， 低剂量组不出现毒性反应。 同时设一溶剂 ( 或赋形剂 ) 对照组或 已知药物毒性对照组。
第二节
试验设计原则及方法
一、一般原则和要求
基本原则 全面、严谨、合理 整体性 随机、对照、重复
一、一般原则和要求
基本原则 整体性
长期毒性试验不能与药效学、药代动 力性和其他毒理学研究割裂，试验设 计应充分考虑其他药理毒理研究的试 验设计和研究结果。长期毒性试验的 结果应该力求与其他药理毒理试验结 果互为印证、说明和补充。
☆如研究计划生育用药，应选择猴或其他大动物。
Beagle犬：原产英国，纯种小猎兔犬 Beagle犬的特点：体型小,毛短,性情温和,亲人,抗病力强
缺点：价格昂贵
二、实验动物
2. 起始月(周)龄 一般选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物。
长期毒性作用及其试验方 法演示文稿
第一节 基本概念和目的 第二节 试验设计原则及方法
第一节
基本概念和目的
一、定义
长期毒性试验是指试验动物连续多日接触较大 剂量的药物所引起的中毒效应，为观察这种中毒效 应而设计的毒理学试验称之为长期(慢性)毒性试验。
急性毒性试验
是为观察和评价急性毒性的有害作用或中毒反应 而设计的一种毒理学试验。研究药物一次或24小 时内多次给予受试药物后，一定时间内所产生的 毒性反应。
一、一般原则和要求
总体原则 选用两种实验动物 三个剂量 给药途径应与临床拟用途径相同
一、一般原则和要求
总体原则 选用两种实验动物
至少在两种动物体上进行，兼顾雌雄性别。
一、一般原则和要求
总体原则
三个剂量
剂量至少分为高、中、低三个档次。 高剂量组应能充分反映药物的毒性， 低剂量组不出现毒性反应。 同时设一溶剂 ( 或赋形剂 ) 对照组或 已知药物毒性对照组。
第二节
试验设计原则及方法
一、一般原则和要求
基本原则 全面、严谨、合理 整体性 随机、对照、重复
一、一般原则和要求
基本原则 整体性
长期毒性试验不能与药效学、药代动 力性和其他毒理学研究割裂，试验设 计应充分考虑其他药理毒理研究的试 验设计和研究结果。长期毒性试验的 结果应该力求与其他药理毒理试验结 果互为印证、说明和补充。
药物毒理学长期毒性试验
这对于制定临床试验的剂量方案具有重
要意义
t
预测药物的生殖和发育毒性
某些药物可能对生殖和发育造成不良影
响，长期毒性试验可预测这些潜在毒性
4
方法
进行药物毒理学长期毒性试验时，需要考虑以下因素 实验动物：选择适合的实验动物，如小鼠、大鼠、狗、灵长类等 给药方案：根据药物的性质和实验目的，确定给药的剂量、频率和持续时间 观察指标：在试验期间，定期观察动物的生理指标(如体重、呼吸、体温等)、血液学 指标(如红细胞计数、白细胞计数等)、生化指标(如肝功能、肾功能等)以及其他可能 的毒性反应 病理学检查：在试验结束后，对动物进行病理学检查，以评估药物的毒性作用 数据处理与分析：对试验数据进行整理和分析，评估药物的长期安全性和毒性反应
结果评估
根据上述评估结果，药物开发商可以制定相应的临床 试验方案，确保药物在临床试验中的安全性
x
同时，这些结果也为药物的上市许可提供了重要的参 考依据
-
请各位老师批评指正!
THESIS DEFENSE POWERPOINT
XXXXXXXXXX
指导老师：XXX
答 辩 人 ：XXX
2
概念
1
药物毒理学长期毒性试验是 指通过给予实验动物一定剂 量的药物，观察和分析药物
对动物的长期毒性作用
2
长期毒性试验通常采用啮齿类动 物或非啮齿类动物作为研究对象， 连续给药一段时间(如3个月至1 年)，以评估药物的长期安全性
3
目的
药物毒理学长期 毒性试验的主要 目的是评估药物 的长期使用对动 物的毒性作用， 包括
5
结果评估
根据长期毒性试验的结果，可以进行如下评估 毒性反应类型与程度：确定药物引起的毒性反应类 型和程度，如轻度、中度或重度 安全剂量范围：根据不同剂量下的毒性反应，确定 药物的安全剂量范围 致癌性评估：根据药物的致癌性检查结果，评估药 物的致癌风险 生殖和发育毒性评估：根据药物的生殖和发育毒性 检查结果，评估药物对生殖和发育的影响2Βιβλιοθήκη XX药物毒理学长 期毒性试验
优选长期毒性作用及其试验方法
2
给药的剂量范围不同
3
260/20/10/6
6
蓄积作用 (accumulation action)
当较长时间连续、反复给药时，如果给药的时 间间隔和剂量超过机体消除药物的能力，就会出 现药物进入机体的速度 (或总量) 超过排除的速度 (或总量) 的现象，此时药物就有可能在体内逐渐 增加并贮存起来，即蓄积作用。
优选长期毒性作用及其试验方法
第一节 基本概念和目的 第二节 试验设计原则及方法
2020/10/6
2
第一节
基本概念和目的
2020/10/6
3
一、定义
长期毒性试验是指试验动物连续多日接触较大 剂量的药物所引起的中毒效应，为观察这种中毒效 应而设计的毒理学试验称之为长期(慢性)毒性试验。
急性毒性试验
一类新药：Beagle犬 二类新药：杂种狗
2020/10/6
23
二、实验动物
1.种类及品系
☆我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一 种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类， 首选狗。
☆在吸入给药时，猴是首先推荐的动物，因为它在 呼吸系统的解剖学和生理学方面比其它动物更接 近人类。
☆如研究计划生育用药，应选择猴或其他大动物。
3 推测临床试验的起始剂量和重复用药的安全剂量范围
4 提示临床试验中需重点监测的指标
5 为临床试验中的解毒或解救措施提供参考
2020/10/6
11
长期毒性试验的意义
了解实验动物能耐受的最大剂量，找出完
全无毒的安全界量，这个界量是判断一个待选 新药是否有进一步开发研究的价值以及能否过 渡到临床试用的重要依据，同时，也可为其它 毒性实验和临床初始剂量的选择提供依据。因 此长期毒性试验是临床前安全性评价的主要内 容，它与急性毒性试验、生殖毒性以及致癌性 等毒理学研究有着密切的联系，是新药报批临 床时重点审评项目之一，是药物从药学研究进 入临床试验的重要环节。
【学习课件】第十四章-长期毒性作用及其试验方法
第十四章 长期毒性作用及其试验方法
long-term toxicity impact and test method
18.11.2020
.
1
第一节 基本概念和目的 第二节 试验设计原则及方法
18.11.2020
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2
第一节
基本概念和目的
18.11.2020
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3
一、定义
长期毒性作用是指药物以一定的等级剂量连续 多日给予受试动物所产生的有害作用。为观察这种 有害作用而设计的毒理学试验称之为长期毒性试验。
一类新药：Beagle犬 二类新药：杂种狗
18.11.2020
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24
二、实验动物
1.种类及品系
☆我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一种为啮 齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。
☆在吸入给药时，猴是首先推荐的动物，因为它在呼吸系统 的解剖学和生理学方面比其它动物更接近人类。
☆如研究计划生育用药，应选择猴或其他大动物。
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22
二、实验动物
1.种类及品系
☆我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一种为啮 齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。
Wistar大鼠 SD大鼠
18.11.2020
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23
二、实验动物
1.种类及品系
☆我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一种为啮 齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。
.
9
长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别
1
给药的期限不同
2
给药的剂量范围不同
3
18.11.2020
观察的毒效应不同
.
10
急性毒性试验是以死亡为观察终点的质反应过程
long-term toxicity impact and test method
18.11.2020
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1
第一节 基本概念和目的 第二节 试验设计原则及方法
18.11.2020
.
2
第一节
基本概念和目的
18.11.2020
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3
一、定义
长期毒性作用是指药物以一定的等级剂量连续 多日给予受试动物所产生的有害作用。为观察这种 有害作用而设计的毒理学试验称之为长期毒性试验。
一类新药：Beagle犬 二类新药：杂种狗
18.11.2020
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24
二、实验动物
1.种类及品系
☆我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一种为啮 齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。
☆在吸入给药时，猴是首先推荐的动物，因为它在呼吸系统 的解剖学和生理学方面比其它动物更接近人类。
☆如研究计划生育用药，应选择猴或其他大动物。
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22
二、实验动物
1.种类及品系
☆我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一种为啮 齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。
Wistar大鼠 SD大鼠
18.11.2020
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23
二、实验动物
1.种类及品系
☆我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一种为啮 齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。
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9
长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别
1
给药的期限不同
2
给药的剂量范围不同
3
18.11.2020
观察的毒效应不同
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10
急性毒性试验是以死亡为观察终点的质反应过程
长期毒性作用及其试验方法演示文稿
原因： 1 长期毒性试验的给药期限较长；
处于生长发育阶段的动物对药物 2 的毒性反应较敏感； 3 年龄较大的动物反应性降低, 存 3 在许多发性疾病干扰试验结果。
2020/11/26
30
二、实验动物
2. 起始月(周)龄
啮齿类动物最好在断奶后不久即开始给药
大鼠起始周龄要求在 6 ~8周龄； 如果试验周期超过3个月以上，则将起始周龄降至
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一、一般原则和要求
总体原则
给药途径应与临床拟用途径相同
口服给药大鼠一般常用灌胃，灌胃的容量为 每天1~2ml/100g，也可将受试药物混在饲料或水 中给予，但要保证每只动物按规定剂量在一定时 间内服入，静脉注射大鼠时可采用腹腔代替，各 剂量组采用等容量不等浓16
一、一般原则和要求
总体原则 选用两种实验动物 三个剂量 给药途径应与临床拟用途径相同
2020/11/26
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一、一般原则和要求
总体原则 选用两种实验动物
至少在两种动物体上进行，兼顾雌雄性别。
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一、一般原则和要求
总体原则
三个剂量
剂量至少分为高、中、低三个档次。 高剂量组应能充分反映药物的毒性， 低剂量组不出现毒性反应。 同时设一溶剂 ( 或赋形剂 ) 对照组或 已知药物毒性对照组。
长期毒性作用及其试验方法演示 文稿
优选长期毒性作用及其试验方法
第一节 基本概念和目的 第二节 试验设计原则及方法
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3
第一节
基本概念和目的
2020/11/26
4
一、定义
长期毒性试验是指试验动物连续多日接触较大 剂量的药物所引起的中毒效应，为观察这种中毒效 应而设计的毒理学试验称之为长期(慢性)毒性试验。
毒理学 长期毒性试验
急性毒性试验；以死亡为效应的质反应过程； 长期毒性试验：一般毒性的量反应指标，如体重、摄食量、血液学、血液生化指标等
四、长期毒性试验的试验目的 1、发现在急性毒性试验中未发现的毒作用，为受试物的毒作用研究提供新的信息； 2、描述毒反应的性质和程度； 3、研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官； 4、研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量—反应(效应)关系，确定其观察到有害作用的最
出现毒性反应。同时应设溶剂或者已知药物的毒性对照组。
2.动物：应是年轻健康、来源清楚，对药物敏感、与人类代谢相类似的动物。
3.给药途径：与临床拟用途径一致。
4.观察指标：应能反映实验动物功能及结构的完整性是否受到损害。
一般是以药政部门的技术要求规范为核心，同时兼顾给药时限和给药剂量这两个重要因
素，对整个长期毒性试验做一个较为合理的安排和设计，力争高效率、全面地了解药物长期
行染毒,试验期间观察记录每组动物死亡数。当试验组累积发生一半动物死亡即可终止试验。 此时，计算累积总接触剂量[LD50(n)]，根据公式计算 K 值，进行评价。但若接触剂量已累积 达到 5 个 LD50 剂量，也可终止试验。 2.剂量递增法：
在试验期间，当化学毒物引起动物累积死亡一半时即可终止试验，计算 K 值进行评价。 一般来说，在试验第 2l 天也可结束试验，因为这之前如果动物没有死亡或死亡数不足一半， 说明其累积剂量已达 5.26LD50，即 K＞5。
•光照： 持续 12 小时明亮，12 小时黑暗，有利于刺激动物甲状腺激素、促肾上腺皮质 激素和生长激素的分泌；
•通风条件： •饮水质量：
•饲料配方：所用饲料应符合动物的营养标准，若用自已配制的饲料，应提供配方及营养 成分含量的检测报告，若是购买的饲料，应注明生产单位。
四、长期毒性试验的试验目的 1、发现在急性毒性试验中未发现的毒作用，为受试物的毒作用研究提供新的信息； 2、描述毒反应的性质和程度； 3、研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官； 4、研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量—反应(效应)关系，确定其观察到有害作用的最
出现毒性反应。同时应设溶剂或者已知药物的毒性对照组。
2.动物：应是年轻健康、来源清楚，对药物敏感、与人类代谢相类似的动物。
3.给药途径：与临床拟用途径一致。
4.观察指标：应能反映实验动物功能及结构的完整性是否受到损害。
一般是以药政部门的技术要求规范为核心，同时兼顾给药时限和给药剂量这两个重要因
素，对整个长期毒性试验做一个较为合理的安排和设计，力争高效率、全面地了解药物长期
行染毒,试验期间观察记录每组动物死亡数。当试验组累积发生一半动物死亡即可终止试验。 此时，计算累积总接触剂量[LD50(n)]，根据公式计算 K 值，进行评价。但若接触剂量已累积 达到 5 个 LD50 剂量，也可终止试验。 2.剂量递增法：
在试验期间，当化学毒物引起动物累积死亡一半时即可终止试验，计算 K 值进行评价。 一般来说，在试验第 2l 天也可结束试验，因为这之前如果动物没有死亡或死亡数不足一半， 说明其累积剂量已达 5.26LD50，即 K＞5。
•光照： 持续 12 小时明亮，12 小时黑暗，有利于刺激动物甲状腺激素、促肾上腺皮质 激素和生长激素的分泌；
•通风条件： •饮水质量：
•饲料配方：所用饲料应符合动物的营养标准，若用自已配制的饲料，应提供配方及营养 成分含量的检测报告，若是购买的饲料，应注明生产单位。
长期毒性作用及其试验方法
2020/7/10
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二、实验动物
4. 饲养管理
环境因素
犬
单笼饲养室，内定温量度喂食。 Beagle 狗湿实验前至度少驯养 1~2 周;
杂种狗应先检疫，驱虫。
光照 通风条件
酮症酸中毒
饮水质量 饲料或饲料配方
2020/期毒性试 验的给药期限一般为临床疗程的3~4倍时间。 创新药品试验周期应不少于90天， 超过180天 的新药可以在试验开始90天后，同时进行I期临 床试验。
1
给药的期限不同
2
给药的剂量范围不同
3
260/20/7/10
6
蓄积作用 (accumulation action)
当较长时间连续、反复给药时，如果给药的时 间间隔和剂量超过机体消除药物的能力，就会出 现药物进入机体的速度 (或总量) 超过排除的速度 (或总量) 的现象，此时药物就有可能在体内逐渐 增加并贮存起来，即蓄积作用。
90天重复给药试验 180天或更长期重复给药试验
可供参考的具体方法
➢（1）半数致死量法（LD50法） ➢（2）短期蓄积试验过渡法 ➢（3）药代动力学法
根据药代动力学最大有效安全浓度（MCD）
大鼠3个月长期毒性试验时，低、中、高三个剂量可分别 采用大鼠的1.0 、3.3~6.6 和10~20 MCD; 狗一般可采用大鼠一半左右的剂量。
二、实验动物
1.种类及品系
☆我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一 种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类， 首选狗。
Wistar大鼠 SD大鼠
近亲繁殖鼠？
杂交鼠？
2020/7/10
22
二、实验动物
1.种类及品系
☆我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一 种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类， 首选狗。
毒理学中的长期慢性毒性检测方法
毒理学中的长期慢性毒性检测方法毒理学中长期慢性毒性检测方法与探究毒理学是一门旨在研究生命体系中各种化学物质对人类、动物和环境的毒性影响的科学。
在现代人类社会中，人们对各种化学物质的使用越来越频繁，因此对于化学物质的毒性和安全性评估也越来越重要。
而长期慢性毒性检测方法是毒理学研究中不可或缺的一部分。
长期慢性毒性检测方法是对于某一化学物质在动物体内慢性毒性的影响进行评估的方法。
它通过持续给予试验动物某一特定剂量的化学物质来探究其潜在的负面影响。
这种评估需要持续数周至数年的时间，因此其费用和时间成本相对较高。
然而，长期慢性毒性检测方法仍然是毒理学研究中重要的一环。
对于长期慢性毒性检测方法的评估，常用的试验动物有老鼠、大鼠、兔子、狗等。
在一项长期慢性毒性检测实验中，动物要长期接受被测化学物质的暴露，并且要定期采集血样、尿样、组织样本等进行分析。
基于这些分析的结果，可以对被测化学物质在动物体内的影响进行详细的评估和分析。
在长期慢性毒性检测方法的实施中，建立合适的试验方案和得出合适的结论非常重要。
试验方案需要考虑到被测化学物质在动物体内的生物学运作规律，动物对被测化学物质的吸收、代谢和排泄规律等，同时还需要考虑到不同个体之间的生理差异。
得出的结论需要综合考虑所有的实验结果，包括毒性效应、剂量效应、时间效应等多方面信息。
此外，当进行长期慢性毒性检测方法时，还需要注意对于动物的福利问题。
这不仅是出于道德敏感性的考虑，同时也要考虑到动物的健康状况对于实验结果的影响。
因此，在长期慢性毒性检测方法的实施中，需要对于试验动物进行定期的健康检查和妥善的饮食安排。
在现代毒理学研究中，长期慢性毒性检测方法被广泛应用于评估各种化学物质的毒性和安全性。
与其他较短时间的毒性实验相比，长期慢性毒性检测方法可以更加全面地评估某种化学物质的短期和长期效应。
同时，该方法可以探究某种化学物质在不同种类和不同组织中可能发挥不同的毒性效应。
总之，长期慢性毒性检测方法在现代毒理学研究中发挥着重要的作用。
长期毒性作用及其试验方法
5 ~6周龄。
狗的起始月龄为 6 月龄，一般不超过 12 月 龄； 如选用杂种狗，起始年龄可稍大些，但也不能 超过 5 年。
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30
二、实验动物
2. 起始月(周)龄
起始体重应在体重均值± 20% 的范围内。
2019/12/3
31
二、实验动物
3. 性别及数量 （1）性别
☆ 一般来讲是兼用两种性别的动物，每个剂量组中 雌雄性别的动物数必须一致。
急性毒性试验
是为观察和评价急性毒性的有害作用或中毒反应 而设计的一种毒理学试验。研究药物一次或24小 时内多次给予受试药物后，一定时间内所产生的 毒性反应。
2019/12/3
4
长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别
1
给药的期限不同
2
3
250/1290/12/3
5
长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别
超过 90 天的试验 啮齿类动物每组至少 40 只（雌雄各 20 只）； 非啮齿类每组 8~10 只（雌雄各 4~5 只）。
2019/12/3
34
二、实验动物
3. 性别及数量
（2）数量
90 天以内的试验 啮齿类动物每组至少20只（雌雄各 10 只）；
《非啮指齿导类原每组则4》~6 ：只（一雌般雄大各鼠2~为3只雌）、；雄各30只，
第十五章 长期毒性作用及其试验方法
long-term toxicity impact and test method
2019/12/3
1
第一节 基本概念和目的 第二节 试验设计原则及方法
2019/12/3
2
第一节
基本概念和目的
2019/12/3
狗的起始月龄为 6 月龄，一般不超过 12 月 龄； 如选用杂种狗，起始年龄可稍大些，但也不能 超过 5 年。
2019/12/3
30
二、实验动物
2. 起始月(周)龄
起始体重应在体重均值± 20% 的范围内。
2019/12/3
31
二、实验动物
3. 性别及数量 （1）性别
☆ 一般来讲是兼用两种性别的动物，每个剂量组中 雌雄性别的动物数必须一致。
急性毒性试验
是为观察和评价急性毒性的有害作用或中毒反应 而设计的一种毒理学试验。研究药物一次或24小 时内多次给予受试药物后，一定时间内所产生的 毒性反应。
2019/12/3
4
长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别
1
给药的期限不同
2
3
250/1290/12/3
5
长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别
超过 90 天的试验 啮齿类动物每组至少 40 只（雌雄各 20 只）； 非啮齿类每组 8~10 只（雌雄各 4~5 只）。
2019/12/3
34
二、实验动物
3. 性别及数量
（2）数量
90 天以内的试验 啮齿类动物每组至少20只（雌雄各 10 只）；
《非啮指齿导类原每组则4》~6 ：只（一雌般雄大各鼠2~为3只雌）、；雄各30只，
第十五章 长期毒性作用及其试验方法
long-term toxicity impact and test method
2019/12/3
1
第一节 基本概念和目的 第二节 试验设计原则及方法
2019/12/3
2
第一节
基本概念和目的
2019/12/3
优选长期毒性作用及其试验方法
原因： 1 长期毒性试验的给药期限较长；
处于生长发育阶段的动物对药物 2 的毒性反应较敏感； 3 年龄较大的动物反应性降低, 存 3 在许多发性疾病干扰试验结果。
2020/9/27
29
二、实验动物
2. 起始月(周)龄
啮齿类动物最好在断奶后不久即开始给药
大鼠起始周龄要求在 6 ~8周龄； 如果试验周期超过3个月以上，则将起始周龄降至
2020/9/27
7
蓄积作用的表现形式
作用量积蓄 功能性蓄积
2020/9/27
8
长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别
1
给药的期限不同
2
给药的剂量范围不同
3
观察的毒效应不同
290/20/9/27
9
二、目的与意义
2020/9/27
10
长期毒性试验的目的
1 预测受试物可能引起的临床不良反应
2 判断受试物反复给药的毒性靶器官或组织
2020/9/27
4
长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别
1
给药的期限不同
2
3
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5
长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别
1
给药的期限不同
2
给药的剂量范围不同
3
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6
蓄积作用 (accumulation action)
当较长时间连续、反复给药时，如果给药的时 间间隔和剂量超过机体消除药物的能力，就会出 现药物进入机体的速度 (或总量) ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ过排除的速度 (或总量) 的现象，此时药物就有可能在体内逐渐 增加并贮存起来，即蓄积作用。
2020/9/27
24
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2018/10/15
任立群
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二、目的与意义
2018/10/15
任立群
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长期毒性试验的目的
1 2
预测受试物可能引起的临床不良反应 判断受试物反复给药的毒性靶器官或组织
3
4 5
2018/10/15
推测临床试验的起始剂量和重复用药的安全剂量范围
提示临床试验中需重点监测的指标 为临床试验中的解毒或解救措施提供参考
整体性
2018/10/15
任立群
16
一、一般原则和要求
基本要求
选用两种实验动物 三个剂量 给药途径应与临床拟用途径相同
2018/10/15
任立群
17
一、一般原则和要求
基本要求
选用两种实验动物 至少在两种动物体上进行，兼顾雌雄性别。
2018/10/15
任立群
18
一、一般原则和要求
基本要求
2018/10/15
任立群
43
雪貂作为实验动物的资料介绍，还在本世纪，虽 然它还未被广泛应用，但它对人类健康的贡献无疑是 很重要的（北美常用）。
2018/10/15
任立群
44
雪貂是食肉类动物，属于鼬科。经驯化供实验的 雪貂毛色呈野生色或白化的。它缺乏盲肠、汗腺，雄 貂缺乏前列腺。通常雪貂的实验和繁殖期为5至6年， 而整个寿命约14年。雄貂体重可为雌貂的两倍。 雪貂在早期用于传播病毒性疾病的研究，如犬瘟 和人类流感，对其它一些病毒性疫病，雪貂也提供了 独特的、合适的模型，如麻疹、疱疹性口炎，阿留申 病和牛鼻气管炎。雪貂已应用于病毒学、生殖生理、 药理学等研究，最近报导特殊适合毒理学试验。还可 作为小脑发育不全、流行性感冒等动物模型来研究人 类相应的疾病。
2018/10/15
任立群
20
二、实验动物
理想动物的标准：
对受试物的生物转化与人体相近； 对受试物敏感； 已有大量历史对照数据。
2018/10/15
任立群
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二、实验动物
1.种类及品系
☆我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一种为 啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。
2018/10/15
犬 4. 饲养管理
室内温度 湿 度
单笼饲养，定量喂食。 Beagle 犬实验前至少驯养 1~2 周; 杂种狗应先检疫，驱虫。
环境因素
酮症酸中毒 酮症酸中毒
光
照
通风条件 饮水质量
饲料或饲料配方
2018/10/15 任立群 42
试验前观察记录动物的行为活动、饮食、体重、精 神状况、心电图，检测心、肝、肾功能2次； 选择正常、健康、雌性无孕的动物作为受试动物。
2018/10/15
任立群
52
可供参考的具体方法
（1）半数致死量（LD50）法
一类新药：Beagle犬 二类新药：杂种狗
2018/10/15
任立群
24
二、实验动物
1.种类及品系
☆我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一种为 啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。 ☆在吸入给药时，猴是首先推荐的动物，因为它在呼吸系 统的解剖学和生理学方面比其它动物更接近人类。
☆如研究计划生育用药，应选择猴或其他大动物。
﹤ 5天 ﹤ 2周
2-4周 1-3月
2周 1月 3月 6月 6月
2周 1月 3月 6月 9月
﹥ 3月
每天给药最好固定时间。
2018/10/15 任立群 48
四、剂量水平的选择
三个剂量组是必不可少的：
一个是足以引起明显的毒性反应的高剂量，但死亡 率应控制在 10% 以内； 一个是不引起毒性作用的低剂量(一般为动物有效剂 量或临床治疗量的2~3倍)；
亚慢性毒性试验——给药期限不超过90天
或不超过试验动物平均寿命的10%；
慢性毒性试验——给药期限超过90天
或超过试验动物平均寿命的10%；
终生毒性试验 数代毒性试验
2018/10/15
任立群
6
长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别
1 2 3
2018/10/15
给 药 的 期 限 不 同
给 药 的 剂 量 范 围 不 同
任立群
7
蓄积作用 (accumulation action)
当较长时间连续、反复给药时，或者说给药的 时间间隔和剂量超过机体消除药物的能力，就会出 现药物进入机体的速度 (或总量) 超过排除的速度 (或总量) 的现象，此时药物就有可能在体内逐渐增 加并贮存起来，即蓄积作用。
2018/10/15
任立群
3. 性别及数量 （1）性别
在特殊情况下如药物对雄性（或雌性）生殖细胞 的毒效应已确知，或者急性试验已证明药物对雌雄两 性动物的毒性有明显差别时，就应主要选用敏感性别 的动物进行试验。
2018/10/15
任立群
34
二、实验动物
3. 性别及数量 （2）数量
90 天以内的试验
啮齿类动物每组至少20只（雌雄各 10 只）； 非啮齿类每组 6 只（雌雄各 3只）；
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蓄积作用的表现形式
作用量积蓄 功能性蓄积
2018/10/15
任立群
9
长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别
1 2 3
2018/10/15
给 药 的 期 限 不 同
给 药 的 剂 量 范 围 不 同
观 察 的 毒 效 应 不 同
任立群 10
急性毒性试验是以死亡为观察终点的质反应过程
长期毒性试验重点观察体重、血液生化等量反应 指标（量变→质变）
超过 90 天的试验
啮齿类动物每组至少 40 只（雌雄各 20 只）； 非啮齿类每组 8~10 只（雌雄各 4~5 只）。
2018/10/15 任立群 35
二、实验动物
3. 性别及数量
《指导原则》：一般大鼠为雌、雄各30只，
（2）数量
90 天以内的试验
Beagle犬或猴各3~6只。
啮齿类动物每组至少20只（雌雄各 10 只）； 非啮齿类每组 6 只（雌雄各 3只）；
2018/10/15 任立群 46
我国药政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的规定 临床拟用 给药时间 啮齿类动物 毒性试验期限 非啮齿类动物
﹤ 5天 ﹤ 2周
2-4周 1-3月
2周 1月 3月 6月 6月
2周 1月 3月 6月 9月
﹥ 3月
2018/10/15
任立群
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我国药政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的规定 临床拟用 给药时间 啮齿类动物 毒性试验期限 非啮齿类动物
三个剂量 剂量至少分为高、中、低三个档次。
高剂量组应能充分反映药物的毒性， 低剂量组不出现毒性反应。
同时设一溶剂 ( 或赋形剂 ) 对照组或 已知药物毒性对照组。
2018/10/15 任立群 19
一、一般原则和要求
基本要求
给药途径应与临床拟用途径相同
口服给药大鼠一般常用灌胃，灌胃的容量为每 天1~2ml/100g，也可将受试药物混在饲料或水中给 予，但要保证每只动物按规定剂量在一定时间内服 入。 静脉注射大鼠时可采用腹腔或皮下代替，各剂 量组采用等容量不等浓度给药。特殊情况另作说明。
超过 90 天的试验
啮齿类动物每组至少 40 只（雌雄各 20 只）； 非啮齿类每组 8~10 只（雌雄各 4~5 只）。
2018/10/15 任立群 36
注意
恢复期观察的动物数； 给药期的长短，过长，试验过程中的自然死亡动物数。
2018/10/15
任立群
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二、实验动物
4. 饲养管理
严格控制环境条件，避免不必要的干扰因素 是非常重要的。
2018/10/15 任立群 25
Beagle犬：原产英国，纯种小猎兔犬
Beagle犬的特点：体型小,毛短,性情温和,亲人,抗病力强
缺点：价格昂贵
2018/10/15
任立群
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二、实验动物
2. 起始月(周)龄
一般选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物。
2018/10/15
任立群
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二、实验动物
第十四章 长期毒性作用及其试验方法 long-term toxicity impact and test method
2018/10/15
任立群
1
第一节
第二节
基本概念和目的
试验设计原则及方法
2018/10/15
任立群
2
第一节
基 本 概 念 和 目 的
2018/10/15
任立群
3
一、定义
长期毒性作用是指药物以一定的等级剂量连续 多日给予受试动物所产生的有害作用。为观察这种 有害作用而设计的毒理学试验称之为长期毒性试验。
任立群 13
第二节
试 验 设 计 原 则 及 方 法
2018/10/15
任立群
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一、一般原则和要求
基本原则
全面、严谨、合理 整体性 随机、对照、重复
2018/10/15
任立群
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一、一般原则和要求
基本原则
长期毒性试验不能与药效学、药代动 力性和其他毒理学研究割裂，试验设 计应充分考虑其他药理毒理研究的试 验设计和研究结果。长期毒性试验的 结果应该力求与其他药理毒理试验结 果互为印证、说明和补充。
2018/10/15
任立群
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在选择合适的剂量时还应考虑到：
① 药物在体内的生物蓄积作用 。对于高蓄积性药
物应适当减少其剂量，否则在长期毒性试验结束时各剂