长期毒性试验
药物长期毒性试验中不同给药周期试验浅析
审评二部黄芳华
长期毒性试验是药物非临床安全性评价的核心内容，通过重复给药的动物试验表征受试物的毒性作用，预测其可能对人体产生的不良反应，降低临床受试者和药品上市后使用人群的用药风险。针对长期毒性试验，《中药、天然药物长期毒性试验技术指导原则》和《化学药物长期毒性试验技术指导原则》均在国内首次提出了“可以用不同给药期限的长期毒性试验来分别支持Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期临床试验”，即对于一些临床疗程较长的药物，药品注册申请人可以根据药物开发的实际情况，选择在Ⅰ期临床前、Ⅱ期临床前或Ⅲ期临床前分别报送支持不同阶段临床研究的长期毒性试验资料。在该指导原则发布后，有些注册申请人已开始接受该种方式，并进行了分阶段提交长期毒性试验资料。但是有些申请者未能全面理解甚至是误解了该不同给药周期长期毒性试验的具体涵义，导致虽采用了此种方式而未能充分体现出此种方式的优越性，尤其是在中药新药的申请过程中。现根据国际上对长期毒性试验的要求，对分阶段要求及不同给药周期长期毒性试验进行浅析。
以下仅属个人观点，有不同意见欢迎交流。
一、长期毒性试验的名称和所包含内容
首先，需明确一下“长期毒性试验”这一名称，通常所指长期毒性试验，包含了不同给药周期的试验，事实上“长期毒性试验”该名称仅限于国内使用，在撰写指导原则的过程中，因为考虑到目前国内的实际使用情况和习惯，而沿用了该名词。国际上将此类试验统称为重复给药毒性试验（Repeat dose toxicity studies），区别于急性毒性试验（Acute toxicity study），是观察动物重复给药后的影响，来预测受试物对人体是否有潜在的影响。重复给药毒性试验包含了不同给药周期的试验，1-4周为短期毒性试验
中药新药申报资料中长期毒性试验存在的问题
2.剂量的设计： 剂量的设计是长毒试验的关键。常
见问题是：剂量设计不合理，如低剂量 等于或低于药效学的有效剂量，未找出 安全剂量；高剂量设计过低而未找到毒 性剂量；剂量组仅设2个等等。主要原 因可能是：药效学与毒理学试验分离， 试验人员互不交流；不考虑有效剂量与 毒性剂量之间的关系，认为高剂量做了 相当于人临床剂量的50倍就可以了；未
中药新药申报资料中 长期毒性试验的 常见问题Hale Waihona Puke Baidu
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一．长期毒性试验的目 的和意义
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长期毒性试验是安全性评价重要内 容之一，其目的是：观察反复给药情况 下，实验动物对受试物出现的毒性反应， 剂量毒性效应的关系，主要靶器官，毒 性反应的性质和损害程度及可逆性等； 实验动物能耐受的剂量范围，无毒反应 的剂量、毒性反应剂量及安全剂量范围， 还可了解毒性产生时间、持续时间、可 能反复产生毒性反应的时间、有否迟发 性毒性反应、有否蓄积毒性或耐受性等。
4.恢复期观察及动物数等 有些试验者认为在给药结束时
未发现明显毒性，而不进行恢复期 观察，这种试验设计明显不规范。 恢复期观察的目的是为了观察毒性 反应的可逆程度和可能出现的迟发 性毒性反应，故应重视恢复期的观 察。恢复期观察时间一般应为2—4 周。
测指标。
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二、常见问题讨论
常见问题主要集中在试验设计 （包括试验周期、剂量设计、指标选 择等）、结果分析和资料整理上。
急性毒性及长期毒性标准操作技术
急性毒性试验
佚名
试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。
一、啮齿类动物单次给药的毒性试验
（一）试验条件
1．动物品系：常用健康的小鼠、大鼠。选用其他动物应说明原因。年龄一般为7-9周龄。同批试验中，小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%。实验前至少驯养观察1周，记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。
2．饲养管理：动物饲料应符合动物的营养标准。若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。
3．受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。
（二）试验方法：
由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异，毒性也不同，有的很难观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点，由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试验。
1．伴随测定半数致死量（LD50）的急性毒性试验方法。
2．最大耐受剂量（MTD）试验方法：最大耐受剂量，是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。
3．最大受试药物量试验方法：在合理的浓度及合理的容量条件下，用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。
4．单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。选择5、50、500
中药长期毒性试验研究问题探讨
中药长期毒性试验研究问题探讨
摘要近年来中药注射剂临床应用中不良反应的增加，引起人们对中药注射剂安全性的重视，中药新药研究技术要求对中药注射剂毒理学研究提出了严格的要求。本文提出中药注射剂长期毒性试验研究中常见问题——溶血性、刺激性、过敏反应等制剂安全性问题对毒理学试验研究的影响，长期毒性试验剂量与用药周期的设计、给药方法及对实验结果分析方面的问题。总结了上述问题，并提出一些看法与解决办法。
关键词中药注射剂长期毒性制剂安全性
随着中药现代化的进程、中药新剂型的研究逐年增加，特别是近年来新药研究热潮的出现，提出中药注射剂的注册申请数目逐年增加，1998-2000年8个，而2001-2003年上升到60个。由于《中药新药研究技术要求》和新的《药品注册管理办法》的实施，对中药注射剂提出了新的毒理学要求；外加研究单位与委托单位的目的不完全一致或沟通不够等种种原因，致使中药注射剂，特别是静脉给药注射剂的毒理学研究常常出现各种各样的问题。笔者就五年来所进行的实验和审阅过的近百个毒理学资料中出现的问题提出来与同行们共同探讨，以期今后在毒理学研究特别是中药注射剂长期毒性试验研究中避免出现不该出现的问题，减少投入和研究工作的反复。一、中药注射剂制剂安全性的问题
中药注射剂不同于一般口服制剂，首先是要满足注射剂安全性的要求，对新药临床研究用药样品都要求进行全面的制剂安全性试验，但对用于毒理学研究样品往往没有进行相应的研究，或仅对溶血、热原关注较多。中药制剂毒性相对较小，长期毒性试验剂量往往可达临床用药剂量的几十倍，甚至百倍以上。而如此高的剂量，因限于给药体积，增加药物浓度成了提高剂量的常用方法。药物浓度的增加，可引起注射剂性质的改变，如渗透压、pH值、刺激性、溶血性等改变，对于溶解性不好需采用助溶剂的药物更为明显。这些改变导致毒理学样品本身已不完全符合注射液的要求，如就此样品进行长期毒性研究往往出现各种问题。
动物长期毒性试验的给药期限
药物临床疗程
长期毒性试验给药期限
可以支持的临床研究阶段啮齿类动物非啮齿类动物
单次给药2周2周Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期≤2周1个月1个月Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期＞2周* 1个月1个月Ⅰ期
≤1个月1个月1个月Ⅱ期3个月3个月Ⅲ期
≤3个月3个月3个月Ⅱ期6个月6个月Ⅲ期
≤6个月6个月6个月Ⅱ期6个月6个月Ⅲ期
＞6个月6个月6个月Ⅱ期6个月6个月Ⅲ期
注：表中长期毒性试验给药期限不包括恢复期。应根据具体情况设计不同的恢复期。*此处是指临床疗程超过2周到药物，可用一个月的长期毒性试验来支持Ⅰ期临床试验。
药物毒理学长期毒性试验
这对于制定临床试验的剂量方案具有重
要意义
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预测药物的生殖和发育毒性
某些药物可能对生殖和发育造成不良影
响，长期毒性试验可预测这些潜在毒性
4
方法
进行药物毒理学长期毒性试验时，需要考虑以下因素 实验动物：选择适合的实验动物，如小鼠、大鼠、狗、灵长类等 给药方案：根据药物的性质和实验目的，确定给药的剂量、频率和持续时间 观察指标：在试验期间，定期观察动物的生理指标(如体重、呼吸、体温等)、血液学 指标(如红细胞计数、白细胞计数等)、生化指标(如肝功能、肾功能等)以及其他可能 的毒性反应 病理学检查：在试验结束后，对动物进行病理学检查，以评估药物的毒性作用 数据处理与分析：对试验数据进行整理和分析，评估药物的长期安全性和毒性反应
5
结果评估
根据长期毒性试验的结果，可以进行如下评估 毒性反应类型与程度：确定药物引起的毒性反应类 型和程度，如轻度、中度或重度 安全剂量范围：根据不同剂量下的毒性反应，确定 药物的安全剂量范围 致癌性评估：根据药物的致癌性检查结果，评估药 物的致癌风险 生殖和发育毒性评估：根据药物的生殖和发育毒性 检查结果，评估药物对生殖和发育的影响
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目的
确定药物的慢性毒性反应
s
长期给药可能导致一些慢性毒性反应， 如肝肾损伤、骨髓抑制、致癌等。长期
毒性试验可发现这些潜在的毒性反应，
GLP实验室《长期毒性试验SOP》的制定 - 副本
GLP实验室《长期毒性试验SOP》的制定
GLP(Good Laboratory Practice for Nonclinical Safety Studies Practice)即药品非临床研究质量管理规范(亦称优良实验室的质量管理规范）。应用于药品的非临床安全性评价研究的实验室，其目的作用是为了提高药品非临床安全性评价研究（即毒理学研究）的质量，确保实验资料的真实性、完整性和可靠性，最大程度排除由于偶然的误差带来的影响，尽早发现和改正这类错误，并在事后纠正和追究其原因。GLP的基本精神在于怎样减少人为误差，以得到可信性高的实验数据，以保障人民用药安全[1]。
我国药品非临床研究质量管理规范分九章37条，主要内容有：组织机构和人员、实验设施、仪器设备和实验材料、标准操作规程、研究工作的实施、资料档案和监督检查 [2]。非临床研究，系指在实验室条件下，用实验系统进行的各种毒性试验，包括单次给药的毒性试验、反复给药的毒性试验、生殖毒性试验、遗传毒性试验、致癌试验、局部毒性试验、免疫原性试验、依赖性试验、毒代动力学试验及与评价药物安全性有关的其它试验。非临床安全性评价研究机构，系指从事药物非临床研究的实验室。
一、标准操作规程(SOP)
SOP是GLP实验室质量体系中重要的部份，是建立质量体系的体现，对质量体系的运行起着至关重要的作用。GLP实验室的日常工作几乎无一例外地建立在以SOP为核心的基础之上。因此，必须对SOP进行有效的控制和管理，这是GLP实验室工作顺利实施的重要保证。SOP的控制和管理是指对SOP的制订、分类、审批、发布、登记、分发、修订／废弃、回收／销毁的整个过程实施控制和管理，其目的是确保SOP在其所适用的备个有关场所始终保持现时的有效性[3]。
长期毒性作用及其试验方法
药物应适当减少其剂量，否则在长期毒性试验结束
时各剂量均有可能出现毒性作用；
②药物是否有可能被特殊的酶所“解毒”或
“活化增毒”，而这些酶又是否易被药物本身所诱
导或抑制。
③药物在消化道中的稳定性。与胃肠道内容
物有亲和性的药物，则应酌情增加剂量。
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可供参考的具体方法
（1）半数致死量法（LD50法）
急性毒性试验
是为观察和评价急性毒性的有害作用或中毒反应 而设计的一种毒理学试验。研究药物一次或24小 时内多次给予受试药物后，一定时间内所产生的 毒性反应。
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长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别
1
给药的期限不同
2
3
250/1290/9/9
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长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别
急性毒性试验
蓄积毒性试验 和/或
7天短期重复给药试验
90天重复给药试验 180天或更长期重复给药试验
可供参考的具体方法
（1）半数致死量法（LD50法） （2）短期蓄积试验过渡法 （3）药代动力学法
根据药代动力学最大有效安全浓度（MCD）
大鼠3个月长期毒性试验时，低、中、高三个剂量可分别 采用大鼠的1.0 、3.3~6.6 和10~20 MCD; 狗一般可采用大鼠一半左右的剂量。
5 ~6周龄。
长期毒性试验
大鼠的长期毒性试验
1. 目的：观察连续给予受试动物后由于积蓄而对机体产生的毒性反应及其严重程度，提供毒性反应的靶器官及其损害的可逆性，确定无毒性反应剂量，为人用安全剂量提供参考。试验条件：
2动物：应写明动物的品系，生产单位及生产合格证号，等级，周龄，性别，体重，一般选用动物品系有Wistar、SD、或其他品系的远交系动物。应根据试验期的长短选用不同周龄的大鼠，试验期在3个月内宜用6～8周龄大鼠，超过三个月者宜用5～6周龄大鼠。
试验开始时，体重差异应不超过平均体重的20%。
实验动物应雌雄分笼饲养，每笼不宜超过5只动物，所有动物试验前至少观察一周，并记录食量和体重等基础数字。试验报告中应写明饲料供应单位及生产合格证，若用自己配置的饲料，应提供配方及成分含量的检测报告；应写明饲养动物实验室的合格证(未获得合格证者也应注明)及等级。
受试物：应写明受试物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配置方法。受试物可以是临床试验制剂。如受试物制剂的体积较大，以不含赋形剂的制剂，如中药浸膏为宜。固态制剂灌胃给药，可选择适当的溶媒溶解，或研磨成细粉后用1%左右羧甲基纤维素钠(或10%阿拉伯明胶)制成混悬液，但应注意临用前需要摇匀。避免混悬不匀引起计量误差。长期毒性试验给药周期较长，固体制剂在配成溶液或混悬液后，冰箱放置，短期内用完，一面受试药物活性降低。
3试验方法：
①受试物剂量：一般设三个剂量组和一个对照组。给受试物剂量单位一般用mg/kg、
或g/kg表示。
高剂量组：应使动物产生明显的或严重的毒性反应，或个别动物死亡。
中药新药申报资料中长期毒性试验存在的问题
低剂量组设置过高也偏离长毒试 验的原则，长毒是为了考察长期给药 对动物造成的影响，预测临床用药的 安全性，故要求低剂量应略高于主要 药效学研究的有效剂量，该剂量长期 给药的毒性反应情况可基本反映其在 有效剂量时的安全性，此剂量下一般 应不出现毒性反应。
有些试验仅设两个剂量组也不尽 合理，按规范的要求应设三个剂量组。 在一些情况下，高剂量组出现毒性， 低剂量组虽未发现明显毒性，但因其 与药效学剂量相距较近（治疗指数较 小），故难以判断本品临床试验的安 全性，如设一中剂量组，且未出现明 显毒性反应，则有利于判断其可能的 安全范围。
按照法规和相关技术要求， 长毒试验一般应设3个剂量组。原 则上，低剂量应略高于主要药效 学研究的有效剂量，此剂量下应 不出现毒性反应，高剂量力求动 物出现明显毒性反应或个别动物 死亡。在高、低剂量间应再设一 中剂量组。
中药有效成分、有效部位制成的新药及 中药注射剂多数来自于科研，无足够的临床 应用基础，安全性显得尤为重要，这时剂量 更应合理设计。故这类药物长毒试验剂量设 计时主要是参考药效学试验有效剂量和急毒 试验结果来确定。
3.体重与摄食量的变化：对实验 动物的一般状况的观察是最基本、最 重要的内容，有些试验中却忽视了这 一点。体重是反映机体整个情况的最 灵敏指标，而摄食量的变化在大多数 情况下与体重的变化是相关的，且它 反应更灵敏，所以必须认真计算体重 和摄食量。
化学药物长期毒性试验技术指导原则
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化学药物长期毒性试验技术指导原则
一、概述
长期毒性试验（重复给药毒性试验）是药物非临床安全性评价的核心内容，它与急性毒性、生殖毒性以及致癌性等毒理学研究有着密切的联系，是药物从药学研究进入临床试验的重要环节。
在药物开发的过程中，长期毒性试验的目的是通过重复给药的动物试验表征受试物的毒性作用，预测其可能对人体产生的不良反应，降低临床试验受试者和药品上市后使用人群的用药风险。具体包括以下五个方面：①预测受试物可能引起的临床不良反应，包括不良反应的性质、程度、剂量－反应关系和时间－反应关系、可逆性等；②判断受试物反复给药的毒性靶器官或靶组织；③推测临床试验的起始剂量和重复用药的安全剂量范围；④提示临床试验中需重点监测的指标；⑤还可以为临床试验中的解毒或解救措施提供参考。必须强调的是，长期毒性试验的最终目的是为临床试验和临床用药服务。
本指导原则旨在为长期毒性试验提供技术参考，同时也希望能够对药品的技术审评工作提供帮助，促进药品审评机构与药品注册申请人之间就长期毒性试验达成更为广泛的共识。
本指导原则为化学药物长期毒性试验的一般性原则，仅代表目前对于长期毒性试验的基本认识，其中的内容不完全是进行药物长期毒性试验时必须完成的内容。具体药物的长期毒性试验应在本指导原则的基础上，根据药物的自身特点制订试验方案。
二、立题原则
药物开发的背景和基础研究资料各不相同，在进行长期毒性试验之前应对药物的已有资料进行综合分析，判断是否可以通过已有资料达到长期毒性试验的目的，为临床试验和临床用药提供支持。原则上，如果已有资料尚不能达到长期毒性试验的目的，从保证临床用药安全的角度就应该进行长期毒性试验；反之，则可以不必进行长期毒性试验。
3、毒理学第三讲 长期毒性试验
原体和极少数的实验动物烈性传染病的病原体。用于教学。
二级 清洁动物（CL），要求排除人兽共患病及动物主要传染病的病原体。用于一般动物
实验。
三级 无特殊病原体动物（Specific Pathogen free, SPF)，要求到二级外，还要排除一些规定
的病原体。
四级 无菌动物（Germ free, GF），要求不带有任何用现有方法可检出的微生物。此类动
出现毒性反应。同时应设溶剂或者已知药物的毒性对照组。
2.动物：应是年轻健康、来源清楚，对药物敏感、与人类代谢相类似的动物。
3.给药途径：与临床拟用途径一致。
4.观察指标：应能反映实验动物功能及结构的完整性是否受到损害。
一般是以药政部门的技术要求规范为核心，同时兼顾给药时限和给药剂量这两个重要因
素，对整个长期毒性试验做一个较为合理的安排和设计，力争高效率、全面地了解药物长期
物系在无菌条件下剖宫产出，又饲养在无菌、恒温、恒湿的隔离屏障内。
五级 悉生动物（Gnorobiotic animal,GN），在无菌动物体上植入一种或数种已知的微生物。
2、起始月（周）龄
多选择较年轻或正处于生长发育阶段的动物，原因：
1) 长期试验的给药期限较长；
2) 处于生长发育阶段的动物对药物的毒性反应较敏感；
给药所造成的有害反应及量效关系。
二、实验动物选择
药物长期毒性实验设计原则
Biological Response
高剂量组 中剂量组：LOAEL 低剂量组：NOAEL
Log[Dose]
7.观察指标
1.一般状况观察
在试验期间，应观察动物外观体征、行为活动、 腺体分泌、呼吸、粪便、摄食量、体重、给药局 部反应。
2.血液学指标
至少应观察红细胞计数、血红蛋白、白细胞 计数及其分类、血小板、网织红细胞计数、凝血 酶原时间等。当受试物可能对造血系统有影响时， 应进一步进行骨髓的检查。见表1
通常实验记录的项目和内容为： （1）实验名称、实验日期、实验者； （2）受试对象：动物种类、品系、编号、体重、 性别、健康状况、饲料、离体器官名称等； （3）实验药物或试剂：名称、来源（生产厂）、 剂型、批号、规格、含量、浓度、给药体积、给 药剂量、给药时间、给药间隔、疗程等； （4）实验仪器：主要仪器名称、生产厂、型号、 规格等；
●尿素氮
●肌酐
●总蛋白
●白蛋白
●血糖
●总胆红素
●总胆固醇
●甘油三酯
●钠离子浓度
●钾离子浓度
●氯离子浓度
●肌酸磷酸激酶
4、体温、眼科检查、尿液检查、心电图检查
非啮齿类动物还应进行体温、眼科检查、尿液 检查、心电图检查等。见表3
表3 非啮齿类动物尿液分析指标 非啮齿类动物尿液分析指标
●尿液外观
●比重
制剂长期毒性研究技术指导原则
北京市医疗机构制剂长期毒性研究
技术指导原则
一、概述
长期毒性研究可为医疗机构制剂（以下简称“制剂”）的研发提供重要的安全性参考信息，是非临床安全性评价的重要内容。通过长期毒性研究，可预测受试物可能引起的临床不良反应，包括不良反应的性质、程度、量毒关系和时毒关系、可逆性等；判断受试物长期给药的毒性靶器官或靶组织；推测临床试验的起始剂量和重复用药的安全剂量范围；提示临床试验中需重点监测的指标；提供临床试验中解毒或解救措施的参考。
本指导原则适用于中药制剂、化学制剂的长期毒性试验研究。
二、一般要求
长期毒性研究应遵守《药物非临床研究质量管理规范》，遵循毒理学研究中随机、对照、重复的基本原则进行试验设计和开展研究工作。
研究机构必须具有法人资格，具备从事药物安全性评价的相关设备、设施及资质，必须取得相应实验动物使用许可证，具有与所使用的实验动物级别相符的实验环境。
试验项目负责人必须获得相关专业领域副高级以上职称（含副高），所有参加研究的人员必须经过相关专业的业务培训。
三、基本内容
制剂的开发背景和研究基础各不相同，在长期毒性研究立题
之前应进行文献查阅，根据申报品种的立题依据、临床意义、处方来源、使用历史、有效性与安全性等背景资料进行综合考虑。
（一）试验项目的选择
1.制剂注册申请
（1）中药制剂若满足以下全部条件，可免于进行长期毒性试验：
①根据中医药理论组方；
②处方中的药味用量不超过法定药品标准规定；
③处方组成中不含有法定标准中标识有毒性及现代毒理学证明有毒性的药材（毒性药材是指历版中国药典，部颁标准，进口药材标准，省、自治区、直辖市的中药材标准中标注为大毒/剧毒和有毒的药材，如制附子、制川乌、制草乌等）；
药物的安全性评价试验方法
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长期毒性试验
• 试验目的：观察动物直肠或阴道反复多 次接触受试药物后产生的毒性反应或死 亡情况。
• 试验材料 • 试验方法
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局部刺激试验
• 试验目的：观察动物直肠一次或多次接 触受试药物后产生的刺激反应情况。
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皮肤覆盖全身。
表皮较薄，厚为0.1-0.2mm。
角质层
表皮 颗粒层
生发层
真皮依附于皮下组织，厚约2mm。
胶原
真皮 弹性硬蛋白
纤维母细胞
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二、化学物质对皮肤毒性作用的类型 （一）皮肤原发性刺激 指药物直接作用于皮肤引起的病理学反应。
原发性刺激的表现：红斑、水肿、水疱 疹、溃疡、荨麻疹等 作用机理：1、直接刺激作用
作出恰当的评价 3、通过实验结果确定毒性靶器官和毒性表
现 4、可结合其他试验同时观察
第三节 制剂的全身毒性试验
一、静脉注射制剂的全身毒性试验 1、血管刺激性试验 目的：观察受试静脉注射制剂经多次给药后对血
管刺激反应情况。 试验方法： 动物：家兔 分组：试验组、空白对照组 给药方法：多次静脉注射 观察指标：肉眼观察
2
二、试验内容
（一）半数致死量（LD50）
试验目的：观察一次给予受试药物后动物产生的 毒性反应和死亡情况，计算LD50。
试验方法： 1、动物：小鼠或大鼠 2、动物分组：随机原则 3、剂量设计：5~6个剂量组（LD0~LD100）
长期毒性试验
Procedures 7---- Observations
Recovery
Observation : 1/3～1/2 animal, 2～4w Late toxic reaction and reversibility Items : same as treatment period Not reversible?
duration ≥3m ad. 6 day weekly(mon. to sat. )
Procedures 7---- Observations
Clinical Examinations
rodent non-rodent
signs of ill health +pupil , T behavioral changes breath, sialosis reaction to treatment vomiting Dead or moribund animal: necropsy within 1h
基本内容和要求 ---- 资料整理
首页写明: 负责者的姓名、职称、实验开始及 结束日期、实验承担单位、研究室负责人和资 料保存单位
• 试验指导者、课题负责人、病理学检查、血液生化
指标测定、血液学指标测定及给药观察者
第二页书写试验摘要 第三页开始写正文、引言、材料与方法、结果
• 合理的统计图、表 • 有差异的指标应进行统计处理
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长期毒性试验
药物毒性是否产生，取决于：
a药物本身的理化特性b给药情况c如何被机体代谢
对一特定药物而言，最重要的影响毒性的因素：
a给药途径b体内停留时间c给药频率
（影响靶组织的药物浓度）
1.半数有效量（ED50）：能引起50%的动物或实验标本产生反应的浓度或剂量。
2.半数致死量（LD50 ）：能引起50%的动物死亡的浓度或剂量。
3.治疗指数：TI= LD50/ ED50
药物实验动物的LD50和ED50的比值称为治疗指数（TI），用以表示药物的安全性。
4.安全范围：ED99~LD1（或ED95~LD5）之间的距离。值越大越安全。
•有效量曲线和致死量曲线的斜率不一样时，以TI评价药物的安全性并不可靠。（原因？）六、药物毒性作用类别
药物不良反应（adverse reaction)：凡是不符合用药目的并为病人带来不适或痛苦的有害反应统称为药物不良反应。
包括：副反应、后遗效应、停药反应、毒性反应、变态反应、特异质反应、致癌性、致畸性、致突变性；
（三)药物毒性临床前评价程序（三水平）
第一水平，急性毒性试验：
第二水平，长期毒性试验（第一阶段）
第三水平，长期毒性试验（第二阶段）
（四）药物毒理学研究在新药临床试验各阶段的任务
第一期临床研究→探索安全的人用剂量
第二期临床研究→安全性{疗效（有效性）不良反应（安全性）
第三期临床研究→大范围的社会考察
不良反应监测→提高疗效，降低不良反应
多数毒物发挥其毒性作用至少经历四个过程：
a毒物吸收后经过多种屏障转运到一个或多个靶部位；
b进入靶部位的终毒物与内源靶分子发生交互作用；
c毒物引起机体分子、细胞和组织水平功能和结构紊乱；
d机体启动不同水平的修复机制。当此机制低下或功能和结构紊乱超过机体修复能力时，机体即出现组织坏死、癌症、纤维化等毒性损害。
长期毒性试验的意义
a判断受试药物能否进行临床试验；
b预测人类临床用药时可能毒性和安全范围；
c制定临床试验中的防治措施；
d确定应该着重评价的生理生化指标；
e选择I期临床试验时的初试剂量，等。
一、一般原则
1动物选择：
a.敏感动物，年轻动物，雌雄各半
b.2种（啮齿—大鼠6w、非啮齿—比格犬4-6m）
c.体重差异不大于平均体重的20%
d..单笼饲养、定量喂食
2分组：
a.一般四组：3个试验组、1个溶剂对照组
b.试验<90天，则每组雌雄各10只；
>90天，20只。
c.若用大型动物，每组雌雄各3-4只
3实验室条件：GLP
温湿度、采光、通风等；饲料、水，记录摄入量；观察记录，每周称体重
4剂量设计：
高剂量：能足以使新药的毒性作用充分表现出来，产生一定的毒性，如体重下降10%，器官毒性，个别动物死亡但<20%;
中剂量：引起轻微的毒性反应，为高剂量的几何平均值
低剂量：应为无毒剂量组，一般为动物有效剂量
5限度试验6给药途径7给药容量：8试验周期：
二、检测项目
一般观察血液学指标血液生化指标特殊检查系统尸体解剖
三、检测时间
检查间隔恢复性观察
四、资料收集整理
五、结果评价