第八章 对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类
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8第八章对氨基苯甲酸和酰苯胺类局麻药的分析
三、UV
注射用盐酸丁卡因的含量
【含量测定】 取本品10瓶，分别加水溶解，并分别定量转移至 250ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取 盐酸丁卡因对照品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1mL 中约含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。精密量取供试品溶液与 对照品溶液各3mL，分别置于100mL量瓶中，加盐酸溶液（1200）5mL与磷酸盐缓冲液（pH 6.0）10mL，用水稀释至刻度， 摇匀，照紫外-可见分光光度法，在310nm的波长处分别测定吸 光度，计算每瓶的含量，求出平均含量，即得。
Fe + 3HCl
CO NCH2CH2N(C2H5)2 3 O
酯键的水解，可以区 分下述两种药物
五、吸收光谱特征 1、UV：结构中均含有苯环
盐酸布比卡因的鉴别：在263nm与271nm的波长处有最大 吸收；其吸光度分别为0.53~0.58与0.43~0.48. 盐酸普鲁卡因胺片的鉴别：在280nm的波长处有最大吸收。
盐酸利多卡因与对氨基苯 甲酸酯类药物的区别
二、与重金属离子反应
2、盐酸普鲁卡因胺
2
NH2
+ H 2O 2
+ H 2O
在过氧化氢的存在 下能被氧化成羟肟 酸，再与铁配位
CO NHCH2CH2N(C2H5)2 NH2
3
+ FeCl3
CO NCH2CH2N(C2H5)2 OH
CO NCH2CH2N(C2H5)2 OH NH2
CH3
CH3
高氯酸非水滴定
2
NHCOCH2N(C2H5)2· HCl+Hg(Ac)2 2
NHCOCH2N(C2H5)2· HAc+HgCl2
CH3 CH3
注射用盐酸丁卡因的含量
【含量测定】 取本品10瓶，分别加水溶解，并分别定量转移至 250ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取 盐酸丁卡因对照品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1mL 中约含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。精密量取供试品溶液与 对照品溶液各3mL，分别置于100mL量瓶中，加盐酸溶液（1200）5mL与磷酸盐缓冲液（pH 6.0）10mL，用水稀释至刻度， 摇匀，照紫外-可见分光光度法，在310nm的波长处分别测定吸 光度，计算每瓶的含量，求出平均含量，即得。
Fe + 3HCl
CO NCH2CH2N(C2H5)2 3 O
酯键的水解，可以区 分下述两种药物
五、吸收光谱特征 1、UV：结构中均含有苯环
盐酸布比卡因的鉴别：在263nm与271nm的波长处有最大 吸收；其吸光度分别为0.53~0.58与0.43~0.48. 盐酸普鲁卡因胺片的鉴别：在280nm的波长处有最大吸收。
盐酸利多卡因与对氨基苯 甲酸酯类药物的区别
二、与重金属离子反应
2、盐酸普鲁卡因胺
2
NH2
+ H 2O 2
+ H 2O
在过氧化氢的存在 下能被氧化成羟肟 酸，再与铁配位
CO NHCH2CH2N(C2H5)2 NH2
3
+ FeCl3
CO NCH2CH2N(C2H5)2 OH
CO NCH2CH2N(C2H5)2 OH NH2
CH3
CH3
高氯酸非水滴定
2
NHCOCH2N(C2H5)2· HCl+Hg(Ac)2 2
NHCOCH2N(C2H5)2· HAc+HgCl2
CH3 CH3
第八章对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析汇编
对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析（一）基本结构局麻药的化学结构通常包括三部分：1. 亲脂性芳香环2. 中间连接功能基3.亲水性胺基 NH 2中间连接功能基 药物类别 典型药物 酯键 对氨基苯甲酸酯 盐酸普鲁卡因 酰胺键酰苯胺盐酸利多卡因药物类别 基本结构 典型药物及结构 对氨基苯甲酸酯盐酸普鲁卡因酰苯胺类盐酸利多卡因（二）性质+ 中间连接功能基+ NH 21. 吸收光谱特性+脂肪胺侧链（UV+IR ）2. 弱碱性 NH 2（成盐，与生物碱沉淀剂发生沉淀）3. 芳伯胺基特性 NH 2（重氮化-偶合反应，与芳醛缩合成Schiff 碱反应，易氧化变形）4. 水解特性 酯键及酰胺键5. 与重金属离子反应特性 酰胺键 （与铜离子或钴离子络合，生成有色的配合物沉淀，该沉淀可溶于有机溶剂而呈色。
（三）鉴别试验1. 化学鉴别法① 重氮化-偶合反应原理：分子结构中具有芳伯胺基或潜在芳伯胺基的药物，均可发生重氮化反应，生成的重氮盐可与碱性β-萘酚偶合生成有色的偶氮染料。
直接： 苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸氯普鲁卡因、 盐酸普鲁卡因胺（在酸性溶液中与亚硝酸钠作用，生成重氮盐；再与碱性β-萘酚偶合，产生红色偶氮化合物。
）间接： 盐酸丁卡因（分子中的芳仲胺基，在酸性溶液中可与亚硝酸钠作用，生成乳白色的N-亚硝基化合物沉淀。
） ② 水解反应盐酸普鲁卡因 Ch.P （2010）【鉴别】取本品约0.1g ，加水2ml 溶解后，加10％氢氧化钠溶液1ml ，即生成白色沉淀；加热，变为油状物；继续加热，产生的蒸气，能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀。
苯佐卡因 ChP （2010）【鉴别】取本品约0.1g ，加氢氧化钠试液5m1，煮沸，即有乙醇生成； 加碘试液，加热，即生成黄色沉淀，并发生碘仿的臭气。
③ 与重金属反应a. 盐酸利多卡因 1）与铜离子反应 盐酸利多卡因+硫酸铜 →→→蓝紫色→→→黄色2）与钴离子反应在酸性溶液中与氯化钴试液反应，生成亮绿色细小钴盐沉淀。
第八章对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析
药物分析 第八章对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析
四、含量测定
（一）亚硝酸钠滴定法 (2) 加过量HCl加速反应：
①重氮化速度加快； ②重氮盐在酸性介质中稳定； ③防止生成氨基偶氮化合物。
Ar-N2+Cl- + H2N-Ar
Ar-N=N-NH-Ar + HCl
一般摩尔比为Ar-NH2 : HCl = 1 : 2.5~6 。
Ch.P2010中的苯佐卡因、盐酸普鲁卡因和盐酸 普鲁卡因胺及其制剂可直接采用本法；醋氨苯砜 及注射液水解后用本法。
药物分析 第八章对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析
NHCOR + H2O
H+ △
还原
NO2 + 6[H]
NH2 + RCOOH
NH2 + 2H2O
药物分析 第八章对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析
药物分析
第八章
对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析
游奎一
湘潭大学化工学院
药物分析 第八章对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析
本章主要内容
第一节 结构与性质 第二节 鉴别试验 第三节 特殊杂质与检查 第四节 含量测定
药物分析 第八章对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析
学习要求
一、掌握对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药 物的结构和性质，代表性药物的鉴别、检查和 含量测定的基本原理与方法。
Ar-NH2
HCl NaNO2
重氮盐 OH-
-萘酚
橙黄~猩红色
生成偶氮染料
药物分析 第八章对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析
（一）重氮化-偶合反应 直接反应：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、 盐酸普鲁卡因胺、
第八章对氨基苯甲
鉴别试验
（一）重氮化-偶合反应
分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基 的药物，均可发生此反应。
Ar-NH2 HCl NaNO2
重氮盐
OH-
-萘酚
橙黄~猩红色
生成偶氮染料
（一）重氮化-偶合反应 直接反应：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸氯
普鲁卡因 、盐酸普鲁卡因胺等
间接反应：对乙酰氨基酚、非那西丁、醋氨苯砜、
+
NHCOR + H2O
H △
NH2 + RCOOH
NO2 + 6[H]
NH2 + 2H2O
一、亚硝酸钠滴定法 1. 原理：
Ar-NHCOR + H2O
Ar-NH2 + NaNO2 + 2HCl
H+
Ar-NH2 + RCOOH
Ar-N2+Cl- + NaCl + 2H2O
一、亚硝酸钠滴定法 2、测定主要条件： ∵ KHBr 比KHCl大300倍
H R1N O C OR2
H2 N COOC2H5
苯佐卡因
H2N
COOCH 2CH2N C2H5
2
. HCl
盐酸普鲁卡因
CH3(CH2)3NH
COOCH2CH2N(C2H5)2 HCl
盐酸丁卡因
H2N
CONHCH2CH2N(C2H5)2
HCl
盐酸普鲁卡因胺
二、酰苯胺类药物的基本结构与典型药物
（一）基本结构与典型药物
贝诺酯 但盐酸利多卡因、盐酸布比卡因由于它们的空 间位阻效应，很难发生重氮化-偶合反应。
（一）重氮化-偶合反应
1.苯佐卡因和盐酸普鲁卡因
医学课件第八章对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析
1、盐酸利多卡因 三硝基苯酚 盐酸布比卡因
三硝基苯酚利多卡因 （mp. 228~232℃） 三硝基苯酚布比卡因
（mp. 194℃）
25％硫氰酸铵溶液
2、盐酸丁卡
丁卡因硫氰酸盐
因
5％醋酸钠溶液 （ mp. 131℃ ）
(六)UV
药物 对乙酰氨基酚
苯佐卡因 盐酸丁卡因
溶剂
浓度 (μg/ml)
稀HCl-甲醇(1:99) 10
在盐酸存在下，重氮化反应的机理为：
NaNO2+HCl→HNO2+NaCl
HNO2+HCl→NOCl（亚硝酰氯）+H2O
Ar NH2 NO Ar NH NO Ar N N OH Ar N2Cl
慢
快
快
加入KBr，可增大被测溶液中NO+的浓度，所以能加快重 氮化反应速度。
（2）酸的种类及其浓度
4. 弱碱性：叔胺氮原子＋生物沉淀剂→沉淀
5. 酰胺氮原子与金属离子络合显色
第二节 鉴别试验
(一)重氮化-偶合反应
分子中存在芳伯胺基或存在潜在芳伯胺基的药物，均可 与亚硝酸钠发生重氮化反应，生成的重氮盐可与碱性β-萘酚 偶合生成有色的偶氮染料。
NH2
+ NaNO2
R
N2+Cl-
+
R
H+
N2+Cl-
1.原理
Ar NH2 + NaNO2+ 2 HCl
+ Ar CNl- N+ NaCl+ 2 H2O
具游离芳伯氨基的药物可用本法直接测定。具潜在芳伯
氨基的药物，如具酰胺基药物（对乙酰氨基酚等）经水解，
芳香族硝基化合物（如无味氯霉素）经还原，也可用本法
第八章对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析
相关练习题
95：75．中国药典所收载的亚硝酸钠滴定法中指示终点 的方法为（ ）
A. 电位法 B. 永停法 C. 外指示剂法 D. 内指示剂法 E. 自身指示剂法
相关练习题
96：127．亚硝酸钠滴定法中，可用于指示终点的方法有 （）
A. 自身指示剂法 B. 内指示剂法 C. 永停法 D. 外指示剂法 E. 电位法
CH3 O
NH C
C3H7 N
. HCl 盐酸罗哌卡因
CH3
NH2 NH
O
. HCl
盐酸妥卡尼
三、主要理化性质
1.芳伯氨基特性：重氮化－偶合反应；芳醛缩合成Schiff碱；易 氧化变色等。盐酸丁卡因无此特性。
2. 水解特性：分子结构中的酯键或酰胺键易水解，除盐酸 丁卡因外水产物为对丁基苯甲酸外，上述均 为对氨基苯甲酸。
H N NO
快
N N OH
快
N N+Cl-
重氮化的反应历程为：
KBr + HCl
HBr + KCl
HNO2 + HBr
NOBr + H2O
∵ KHBr 比KHCl大300倍
∴生成NOBr量大得多
∴加快反应速度
(2) 加过量HCl加速反应： ①重氮化速度加快； ②重氮盐在酸性介质中稳定； ③防止生成氨基偶氮化合物。
Ar-NH2 + NaNO2 + 2HCl
Ar-N2+Cl- + NaCl + 2H2O
2. 测定主要条件：
(1) 加KBr增加反应速度
重氮化的反应历程为：
NaNO2 + HCl
HNO2 + NaCl
HNO2 + HCl
八章节对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物分析-资料
三硝基苯酚利多卡因 （mp. 228~232℃） 三硝基苯酚布比卡因
（mp. 194℃）
25％硫氰酸铵溶液
2、盐酸丁卡
丁卡因硫氰酸盐
因
5％醋酸钠溶液 （ mp. 131℃ ）
2020/5/13
(六)UV
药物 对乙酰氨基酚
苯佐卡因 盐酸丁卡因
溶剂
浓度 (μg/ml)
稀HCl-甲醇(1:99) 10
0.4%NaOH
2020/5/13
2020/5/13
2020/5/13
O
R1HN
C OR2
OCH2CH2N(C2H5)2
化学性质(Feature)
(
NHCH2CH2N(C2H5)2 )
1. 芳伯氨基：重氮化－偶合反应；与芳醛缩合成Schiff碱； 易氧化变色等
2. 水解：受光线、热、碱的影响；盐酸丁卡因→BABA， 其余药物→PABA
2020/5/13
一、亚硝酸钠滴定法(sodium nitrite method) 原理.1
+ A r N H 2+aN O 2N +2ClH r C N - lN A + aC +2 N l2 O H
醋氨苯砜
无水乙醇
5 256,284
ChP
(七)IR
2020/5/13
第三节 特殊杂质的检查
一、盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查
H 2N
水 解 C O O C H 2C H 2N (C 2H 5)2· H C l H 2N
-C O 2 C O O H H 2N
OБайду номын сангаас
O
O
杂质：对氨基苯甲酸
黄色
第八对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析
工作电压：20 KV
检测波长：220 nm
38
分析样品的处理：
血浆→碱化→（乙醚：二
氯甲烷）萃取→离心→挥
干有机溶剂→缓冲溶液溶 解残渣→进样分析
39
离子对的浓度：是控制反相离子对色谱溶质保留值的主要因 素，通常对离子的浓度为320mmol/L。 流动相pH的选择：调解流动相的pH值可在较大范围内，改变 弱酸或弱碱样品的保留值和分离选择性。通常测定酸性物质
时调至pH77.5；测定碱性药物时调至pH33.5。
二、盐酸普鲁卡因注射液中有关物质和光解产物的检查：LC-
标准溶液在液面下加入，可避免HNO2挥发。
到近终点时把滴定管提出液面，用水冲 洗后再继续滴定至终点。
33
3. 指示终点的方法
重氮化滴定法指示终点的方法有:
永停法
电位法
外指示剂法 内指示剂法
我国药典主要采用永停滴定法指示终点
34
+
R1 R2
(1) 永停滴定法 溶液 终点前： 无过量 HNO2 终点时：有过量 HNO2 (2) 外指示剂法 用KI-淀粉指示剂 指示终点的原理： 2NaNO2 + 2KI + 4HCl
11
盐酸普鲁卡因胺的鉴别反应-羟肟酸铁的反应
具有芳酰胺结构，被H2O2氧化成羟肟酸，羟肟酸与 FeCl3反应生成紫红色羟肟酸铁，随即变为暗棕色至棕 黑色。如盐酸普鲁卡因胺。
NH2 H2O2 NH2 FeCl3 NH2 Fe CONOCH2CH2N(C2H5)2
CONHCH2CH2N(C2H5)2
CON(OH)CH2CH2N(C2H5)2
NHCOCH2N(C2H5)2 CH3 O2N
OH
NO2 NO2
药物分析第(8)章
H2N
COO(C2H5)2 + NaOH
H2N
COONa + CH3CH2OH
CH3CH2OH+ 4I2 + 6NaOH
22
CHI3 + 5NaI + HCOONa + 5H2O
四、 制备衍生物测熔点 1. 三硝基苯酚衍生物的制备： 利多卡因和布比卡因
NHCOCH2N(C2H5)2 O N 2 CH3
醋氨苯砜
CH3 NHCO CH3 C4H9 N
.
HCl
盐酸布比卡因
5
三、主要理化性质
1. 芳伯氨基特性: 显重氮化-偶合反应; 与芳醛缩合 成Schiff碱的反应；易氧化变色 。(盐酸丁卡因， 无) 2. 水解性：因分子结构中有酯键。 3. 弱碱性：能与生物碱沉淀试剂发生沉淀反应；在 非水溶剂中能滴定。
28
注射用盐酸丁卡因
(2)
取含量测定项下的溶液，照紫外-可见分光 A)测定，在227nm与310nm
光度法(附录Ⅳ
的波长处有最大吸收。
29
盐酸普鲁卡因胺注射液
【鉴别】
(1)
取本品适量，加水制成每1ml
中含盐酸普鲁卡因胺5μg的溶液，照紫外-可见 分光光度法(附录Ⅳ 长处有最大吸收。 A)测定，在280nm的波
【鉴别】 (1) 取本品0.2g，加水20ml
溶解后，取溶液2ml，加硫酸铜试液0.2ml与碳 酸钠试液1ml，即显蓝紫色；加三氯甲烷2ml， 振摇后放置，三氯甲烷层显黄色。
15
盐酸利多卡因在酸性溶液中与氯化钴试液作用， 生成亮绿色钴盐沉淀。
CH3 NHCOCH2N(C2H5)2 + CoCl2 CH3
第八章对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类局麻药物的分析
+ NaNO2 + 2HCl
N
N Cl
COOCH2CH2N(C2H2)2 + NaCl + 2H2O
N
N Cl
COOCH2CH2N(C2H2)2 +
OH + NaOH
OH N= N
COOCH2CH2N(C2H2)2
+ NaCl +H2O
橙红色沉淀
8
盐酸丁卡因（芳香第二胺结构）与 NaNO2 作用生成乳白色 N亚硝基化合物沉淀，可与芳伯胺基的同类药物区别。
31
（4）滴定速度 重氮化反应属分子反应，反应速度比较慢，滴定 速度不能过快。 尤其是近终点时，更要慢慢地滴定。近终点时， 游离芳伯胺浓度非常低，反应速度更慢。所以， 每加一滴滴定液，要搅拌15分钟后再判断终点。
32
中国药典规定：在 30 C 以下，把滴定管 尖端插入液面下2/3处进行滴定。在滴定 时一边搅拌一边加入大部分标准溶液。
离子对的浓度：是控制反相离子对色谱溶质保留值的主要因 素，通常对离子的浓度为320mmol/L。 流动相pH的选择：调解流动相的pH值可在较大范围内，改变 弱酸或弱碱样品的保留值和分离选择性。通常测定酸性物质
时调至pH77.5；测定碱性药物时调至pH33.5。
二、盐酸普鲁卡因注射液中有关物质和光解产物的检查：LC-
处理后亚硝酸钠滴定测定含量一般较少采用
25
2. 操作中的主要条件
滴定反应特点：
重氮化反应属于分子反应
滴定液NaNO2及反应生成的重氮盐都不稳定
反应速度受多种因素影响：温度、速度等
26
（1）加入溴化钾加快反应速度 重氮化反应机制：
第8章对氨基苯甲酸酯类药物分析(2012)
加入溴化钾（ChP2010规定加入2g）
KBr + HCl
HNO2 + HBr HNO2 + HCl
HBr + KCl
NOBr + H2O NOCl + H2O
KHBr KHCl
∵ KHBr 比KHCl大300倍 ∴生成NOBr量大得多 ∴加快重氮化反应速度
(2)加过量盐酸加速反应： 因胺类药物盐酸盐溶解度﹥硫酸盐 ①重氮化反应速度加快 ②重氮盐在酸性溶液中稳定 ③防止生成偶氮氨基化合物
密称定，置烧杯中，除另有规定外，可加水 40ml与盐酸溶液（1→2）15ml，置电磁搅拌器 上，搅拌使溶液，再加溴化钾2g，插入铂-铂电 极后，将滴定管的尖端插入液面下约2/3处，用 亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L或0.05mol/L）迅速 滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管的 尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液并入 溶液中，继续缓缓滴定，至电流计指针突然偏 转，并不再回复，即为滴定终点。
H2N
CONCH2CH2N(C 2H5)2 + H2O OH
FeCl3
H 2N
CONCH 2CH 2N(C 2H 5)2 O
Fe + 3 HCl
3
紫红色
暗棕色
棕黑色
三、水解产物反应 1.盐酸普鲁卡因的鉴别
盐酸普鲁卡因+NaOH→白色↓（普鲁卡因）
H2N COOCH2CH2N(C2H5)2 HCl
NaOH
N2+Cl
_
+ NaCl + 2H2O COOCH2CH2N(C2H5)2
HO
_ + N2 Cl
N N OH + + NaOH
医疗行业-08对氨基苯甲酸和酰苯胺类局麻药的分析 精品
H2N
COOC2H4N(C2H5)2 HCl
盐酸普鲁卡因
(procaine hydrochloride)
盐酸普鲁卡因胺与盐 酸普鲁卡因的化学结 构仅存在羧酸酯与酰 胺的差异,化学性质 与本类药物很相似,
因此一并讨论
2021年5月8日
第一节对氨基R苯1 甲酸酯和N酰H 苯C胺R的2 结构与性质
二、酰苯胺类
型及其对应的还原型物质，在此溶液中插入铂
电极，按照Nernst方程式，铂电极将反映出I2/I电对的电极电位。
E
E0
RT 2F
ln
[I2] [I ]2
2021年5月8日
（10~200mV）
I2 2e 2I (1)： 阴极(负极) 2I 2e I2 (2)： 阳极(正极)
铂
铂
铂
铂
2021年5月8日
2021年5月8日
2021年5月8日
1.什么是永停滴定法 2.永停滴定法的特点 3.实验原理简介
2021年5月8日
永停滴定法
何所谓永停滴定法
永停滴定法又称死停滴定法（dead-stop titration） (死停终点法)，是把两个相同的铂电极（或者其他金 属电极）插入滴定溶液中，在两个电极之间外加一小 电压,观察滴定过程中通过两个电极间的电流突变， 根据电流的变化情况确定滴定终点。
药物分析
Pharmaceutical Analysis
第八章: 对氨基苯甲酸酯和 酰苯胺类局麻药物的分析
主讲: 罗容珍
2021年5月8日
前言
局麻药是一类能在局部可逆性地阻 断感觉神经冲动发生与传导的药物
亲脂
局麻药物的
亲水性
性芳
化学结构
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第八章 对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类 局麻药物的分析
主讲人 肖国君
一、结构、性质与分析方法
O
（一）对氨基苯甲酸酯类
H R 1N
C OR2
盐酸普鲁卡因 (procaine hydrochloride)
苯佐卡因(benzocaine)
盐酸氯普鲁卡因 (chloroprocaine hydrochloride)
2010年版：检查对氨基苯甲酸，离子对色谱法 盐酸普鲁卡因注射液 均检查对氨基苯甲酸 ChP 2005年版：TLC法 2010年版：离子对色谱法
2005年版盐酸普鲁卡因注射液中检查“对氨基苯甲酸”
方法：——杂质对照品法
硅胶H薄层板
TLC法
展开剂：苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14：1：1：4） 对二甲氨基苯甲醛显黄色
3 指示终点的方法
（1）永停滴定法： ChP、BP多采用
主要原理：
NaNO2滴定时，达终点前， NaNO2产
生的HNO2用于重氮化反应，不与电极作
用，检流计无电流通过不偏转；达到终点
时，溶液中微量HNO2即会使电极起氧化 还原反应，检流计指针突然偏转，且不再 回复。
阳极：NO + H2O
HNO2 + H+ + e
乳白色
（二）与重金属离子反应
1、 与CuSO4反应 盐酸利多卡因 Na CO 蓝紫色
2 3
CuSO4
CHCl3
CHCl3层黄色
盐酸普鲁卡因、丁卡因、苯佐卡因，同样条件下不发生此反应。
2、 与CoCl2反应
盐酸利多卡因
CoCl2 H+
亮绿色细小
3、与Hg2+反应
盐酸利多卡因 对氨基苯甲酸酯类 稀HNO3+ Hg(NO3)2 黄色 红色或橙黄色
二 鉴别试验
（一）重氮化-偶合反应（ Ar-NH2 ）
（二）与重金属离子反应 （三）水解产物的反应 （四）制备衍生物测熔点
（五）UV光谱、IR光谱
（一）重氮化-偶合反应（ Ar-NH2 ）
NaNO2 HCl
（普鲁卡因、苯佐卡因 氯普鲁卡因、普鲁卡因胺）
NaOH 橙黄至猩红色 NaNO2 HCl
盐酸丁卡因（仲胺N）
用量：理论用量为ArNH2 ： HCl =1：2；但实际用 量要多得多，通常为 ArNH2 ： HCl =1：2.5 ∽ 6。
其原因为：
① 强酸介质加速反应进行
② 重氮化合物在酸性介质中较稳定
③ 防止生成偶氮氨基化合物 + H2N-Ar
ArN=N-NHAr + HCl
但酸的用量亦不能太多。
2 、酯键：水解反应，其产物可用于鉴别。
3 、脂肪烃侧链叔胺N原子（除苯佐卡因外）：弱碱性，可采 用非水溶液滴定法测定含量； 4、 酰胺氮原子：与重金属离子发生沉淀反应 5、 苯环、 -OH 、-NH2、酯键：UV、IR吸收 6、溶解性：游离碱难溶于水，可溶于有机溶剂；盐酸盐易溶 于水和乙醇，难溶于有机溶剂
. HCl
CH3
盐酸罗哌卡因 (ropivacaine hydrochloride) 用于术后镇痛和产科麻醉
芬太尼（Fentanyl）
强效麻醉性镇痛药
结构特点：
1 、芳伯胺基： 重氮化-偶合反应，亚硝酸钠滴定法
对氨基苯甲酸酯类 （除盐酸丁卡因而外）， 具有芳伯胺基 酰苯胺类因酰氨基邻位存在两个甲基，有空间位阻，较难 水解。
盐酸丁卡因(tetracaine hydrochloride).
盐酸普鲁卡因胺(抗心律失常)
(procainamide hydrochloride)
（二）酰苯胺类
盐酸布比卡因 (bupivacaine hydrochloride)
CH3
C3H7 O
N
NHC
盐酸利多卡因 (lidocaine hydrochloride)
ChP（2010年版）盐酸普鲁卡因及注射液中 “对氨基苯甲酸”的检查
离子对色谱法
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
以甲醇－缓冲液（0.05mol/L磷酸二氢钾，0.1％庚烷
磺酸钠，pH 3.0）（32：68）为流动相；
检测波长为279nm
检查方法：外标法
四 含量测定
（一）NaNO2滴定法
盐酸普鲁卡因、注射用盐酸普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸普 鲁卡因胺等
（三）水解产物的反应
NaOH 盐酸普鲁卡因
白色
HCl
+
白色
碱性，使湿润的红色石蕊 试纸变兰
NaOH 苯佐卡因
+
C2H5OH
I2
CHI3
黄色，臭味
NaOH
（四）制备衍生物测熔点
盐酸丁卡因
NaAC NH4SCN
溶解
白色
m.p 131℃
（六）UV光谱、IR光谱
三
特殊杂质检查
（一）盐酸普鲁卡因及注射液中“对氨基苯甲酸” 的 检查
② 多次外试，可损失供试品而增加滴定误差。
（4）内指示剂法
（二）非水溶液滴定法（非水碱量法）（侧链脂烃胺）
非水溶剂：冰HAC+醋酐 终点指示：电位法 滴定液：HClO4
+ HClO4
HClO4
+ HCl
（三）UV法
注射用盐酸丁卡因采用UV法测定含量
250ml 3.0ml
HCl+磷酸 盐缓冲液
（二）非水溶液滴定法（非水碱量法)
盐酸布比卡因
（三）UV法
注射用盐酸丁卡因等
（四）HPLC法
盐酸利多卡因、制剂、体内样品
（一）NaNO2滴定法
1 原理：
ArNHCOR + H2O
H+
ArNH2 + RCOOH
ArNH2 + NaNO2 + 2HCl
反应历程为： NaNO2 + HCl HNO2+ HCl ArNH2
NOCl
+ 2 H2O
HNO2 + NaCl NOCl + H2O ArN=N-OH
HCl
慢
ArNH-NO
2 测定的主要条件：
（1）加入适量KBr, 加快反应速度
（2）酸的种类及其用量
HCl: 虽然在HBr中较之在HCl中快，但价格昂贵；
H2SO4和HNO3中反应较慢，且芳香伯胺的盐酸盐溶
解度较H2SO4盐为大，故常选用HCl。
盐酸普鲁卡因结构中有酯键，易水解生成对氨基苯甲酸。特
别是注射液随贮存时间延长或高温灭菌，可进一步脱羧转化为苯 胺，苯胺易被氧化，而使注射液变黄，疗效下降、毒性增加。
H2N 水解 HCl COOCH2CH2N(C2H5)2 · H2N -CO2 COOH H2N O
O
O
黄色
盐酸普鲁卡因 ： ChP 2005年版：不检查对氨基苯甲酸
(3) 反应温度：
温度↗ ，ν ↗，但形成的重氮盐亦随温度↗而
迅速分解；且温度过高， HNO2也易逸失或分解，
而使结果偏高，故药典规定在较低的温度下进行， 一般10～ 30℃ 。 + H2O 3HNO2 Ar-OH + N2 + HCl
HNO3 + H2O + 2NO
(4)滴定速度 ：
为避免HNO2的逸失或分解，滴定时可将滴定 管尖端插入液面下2/3处，一次将大部分NaNO2 在 搅拌下滴入，使其尽快反应；然后将滴定管尖端提 出液面，用水淋洗管尖，再缓慢滴定至终点。
2 NaNO2+2 KI+4 HCl
NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O
使用方法：先将糊剂在白瓷板上铺为薄层，接近终 点时，以细玻棒蘸取少许被滴定液划过。若显兰色， 即为终点；若不显兰色，继续滴定至再次外试显兰 色为止。
缺点： ①被滴定液酸性强，达终点前， KI在酸性液 中遇光被空气氧化析出I2遇淀粉显兰色而混淆终点。
供试品W供
100ml λ310nm 测定
（四）HPLC法
ChP（2005年版）亚硝酸钠滴定法 盐酸普鲁卡因注射液
ChP（2010年版）离子对色谱法
示例：盐酸利多卡因注射液 ChP（2005、2010年版）HPLC测定含量
色谱柱：ODS柱；
流动相：以乙腈－磷酸盐缓冲液（50：50，pH=8）； 检测波长：254nm 定量方法：外标法
阴极：HNO2 + H+ + e
NO + H2O
优点：装置简单，方法准确简便
缺点：电极易钝化。
（2）电位法:USP多用
原理：采用电位计，甘汞-铂电极系统。当到达终点
时，溶液中多余的HNO2使电位产生突跃，如用直
流式电位计，则可使电位计指针突然偏转而指示
终点。
（3）外指示剂法：
原理：常采用KI-淀粉糊剂或试纸（液）指示终点。 滴定终点时，稍过量的NaNO2在酸性液中氧化KI， 析出I2遇淀粉显兰色。
主讲人 肖国君
一、结构、性质与分析方法
O
（一）对氨基苯甲酸酯类
H R 1N
C OR2
盐酸普鲁卡因 (procaine hydrochloride)
苯佐卡因(benzocaine)
盐酸氯普鲁卡因 (chloroprocaine hydrochloride)
2010年版：检查对氨基苯甲酸，离子对色谱法 盐酸普鲁卡因注射液 均检查对氨基苯甲酸 ChP 2005年版：TLC法 2010年版：离子对色谱法
2005年版盐酸普鲁卡因注射液中检查“对氨基苯甲酸”
方法：——杂质对照品法
硅胶H薄层板
TLC法
展开剂：苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14：1：1：4） 对二甲氨基苯甲醛显黄色
3 指示终点的方法
（1）永停滴定法： ChP、BP多采用
主要原理：
NaNO2滴定时，达终点前， NaNO2产
生的HNO2用于重氮化反应，不与电极作
用，检流计无电流通过不偏转；达到终点
时，溶液中微量HNO2即会使电极起氧化 还原反应，检流计指针突然偏转，且不再 回复。
阳极：NO + H2O
HNO2 + H+ + e
乳白色
（二）与重金属离子反应
1、 与CuSO4反应 盐酸利多卡因 Na CO 蓝紫色
2 3
CuSO4
CHCl3
CHCl3层黄色
盐酸普鲁卡因、丁卡因、苯佐卡因，同样条件下不发生此反应。
2、 与CoCl2反应
盐酸利多卡因
CoCl2 H+
亮绿色细小
3、与Hg2+反应
盐酸利多卡因 对氨基苯甲酸酯类 稀HNO3+ Hg(NO3)2 黄色 红色或橙黄色
二 鉴别试验
（一）重氮化-偶合反应（ Ar-NH2 ）
（二）与重金属离子反应 （三）水解产物的反应 （四）制备衍生物测熔点
（五）UV光谱、IR光谱
（一）重氮化-偶合反应（ Ar-NH2 ）
NaNO2 HCl
（普鲁卡因、苯佐卡因 氯普鲁卡因、普鲁卡因胺）
NaOH 橙黄至猩红色 NaNO2 HCl
盐酸丁卡因（仲胺N）
用量：理论用量为ArNH2 ： HCl =1：2；但实际用 量要多得多，通常为 ArNH2 ： HCl =1：2.5 ∽ 6。
其原因为：
① 强酸介质加速反应进行
② 重氮化合物在酸性介质中较稳定
③ 防止生成偶氮氨基化合物 + H2N-Ar
ArN=N-NHAr + HCl
但酸的用量亦不能太多。
2 、酯键：水解反应，其产物可用于鉴别。
3 、脂肪烃侧链叔胺N原子（除苯佐卡因外）：弱碱性，可采 用非水溶液滴定法测定含量； 4、 酰胺氮原子：与重金属离子发生沉淀反应 5、 苯环、 -OH 、-NH2、酯键：UV、IR吸收 6、溶解性：游离碱难溶于水，可溶于有机溶剂；盐酸盐易溶 于水和乙醇，难溶于有机溶剂
. HCl
CH3
盐酸罗哌卡因 (ropivacaine hydrochloride) 用于术后镇痛和产科麻醉
芬太尼（Fentanyl）
强效麻醉性镇痛药
结构特点：
1 、芳伯胺基： 重氮化-偶合反应，亚硝酸钠滴定法
对氨基苯甲酸酯类 （除盐酸丁卡因而外）， 具有芳伯胺基 酰苯胺类因酰氨基邻位存在两个甲基，有空间位阻，较难 水解。
盐酸丁卡因(tetracaine hydrochloride).
盐酸普鲁卡因胺(抗心律失常)
(procainamide hydrochloride)
（二）酰苯胺类
盐酸布比卡因 (bupivacaine hydrochloride)
CH3
C3H7 O
N
NHC
盐酸利多卡因 (lidocaine hydrochloride)
ChP（2010年版）盐酸普鲁卡因及注射液中 “对氨基苯甲酸”的检查
离子对色谱法
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
以甲醇－缓冲液（0.05mol/L磷酸二氢钾，0.1％庚烷
磺酸钠，pH 3.0）（32：68）为流动相；
检测波长为279nm
检查方法：外标法
四 含量测定
（一）NaNO2滴定法
盐酸普鲁卡因、注射用盐酸普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸普 鲁卡因胺等
（三）水解产物的反应
NaOH 盐酸普鲁卡因
白色
HCl
+
白色
碱性，使湿润的红色石蕊 试纸变兰
NaOH 苯佐卡因
+
C2H5OH
I2
CHI3
黄色，臭味
NaOH
（四）制备衍生物测熔点
盐酸丁卡因
NaAC NH4SCN
溶解
白色
m.p 131℃
（六）UV光谱、IR光谱
三
特殊杂质检查
（一）盐酸普鲁卡因及注射液中“对氨基苯甲酸” 的 检查
② 多次外试，可损失供试品而增加滴定误差。
（4）内指示剂法
（二）非水溶液滴定法（非水碱量法）（侧链脂烃胺）
非水溶剂：冰HAC+醋酐 终点指示：电位法 滴定液：HClO4
+ HClO4
HClO4
+ HCl
（三）UV法
注射用盐酸丁卡因采用UV法测定含量
250ml 3.0ml
HCl+磷酸 盐缓冲液
（二）非水溶液滴定法（非水碱量法)
盐酸布比卡因
（三）UV法
注射用盐酸丁卡因等
（四）HPLC法
盐酸利多卡因、制剂、体内样品
（一）NaNO2滴定法
1 原理：
ArNHCOR + H2O
H+
ArNH2 + RCOOH
ArNH2 + NaNO2 + 2HCl
反应历程为： NaNO2 + HCl HNO2+ HCl ArNH2
NOCl
+ 2 H2O
HNO2 + NaCl NOCl + H2O ArN=N-OH
HCl
慢
ArNH-NO
2 测定的主要条件：
（1）加入适量KBr, 加快反应速度
（2）酸的种类及其用量
HCl: 虽然在HBr中较之在HCl中快，但价格昂贵；
H2SO4和HNO3中反应较慢，且芳香伯胺的盐酸盐溶
解度较H2SO4盐为大，故常选用HCl。
盐酸普鲁卡因结构中有酯键，易水解生成对氨基苯甲酸。特
别是注射液随贮存时间延长或高温灭菌，可进一步脱羧转化为苯 胺，苯胺易被氧化，而使注射液变黄，疗效下降、毒性增加。
H2N 水解 HCl COOCH2CH2N(C2H5)2 · H2N -CO2 COOH H2N O
O
O
黄色
盐酸普鲁卡因 ： ChP 2005年版：不检查对氨基苯甲酸
(3) 反应温度：
温度↗ ，ν ↗，但形成的重氮盐亦随温度↗而
迅速分解；且温度过高， HNO2也易逸失或分解，
而使结果偏高，故药典规定在较低的温度下进行， 一般10～ 30℃ 。 + H2O 3HNO2 Ar-OH + N2 + HCl
HNO3 + H2O + 2NO
(4)滴定速度 ：
为避免HNO2的逸失或分解，滴定时可将滴定 管尖端插入液面下2/3处，一次将大部分NaNO2 在 搅拌下滴入，使其尽快反应；然后将滴定管尖端提 出液面，用水淋洗管尖，再缓慢滴定至终点。
2 NaNO2+2 KI+4 HCl
NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O
使用方法：先将糊剂在白瓷板上铺为薄层，接近终 点时，以细玻棒蘸取少许被滴定液划过。若显兰色， 即为终点；若不显兰色，继续滴定至再次外试显兰 色为止。
缺点： ①被滴定液酸性强，达终点前， KI在酸性液 中遇光被空气氧化析出I2遇淀粉显兰色而混淆终点。
供试品W供
100ml λ310nm 测定
（四）HPLC法
ChP（2005年版）亚硝酸钠滴定法 盐酸普鲁卡因注射液
ChP（2010年版）离子对色谱法
示例：盐酸利多卡因注射液 ChP（2005、2010年版）HPLC测定含量
色谱柱：ODS柱；
流动相：以乙腈－磷酸盐缓冲液（50：50，pH=8）； 检测波长：254nm 定量方法：外标法
阴极：HNO2 + H+ + e
NO + H2O
优点：装置简单，方法准确简便
缺点：电极易钝化。
（2）电位法:USP多用
原理：采用电位计，甘汞-铂电极系统。当到达终点
时，溶液中多余的HNO2使电位产生突跃，如用直
流式电位计，则可使电位计指针突然偏转而指示
终点。
（3）外指示剂法：
原理：常采用KI-淀粉糊剂或试纸（液）指示终点。 滴定终点时，稍过量的NaNO2在酸性液中氧化KI， 析出I2遇淀粉显兰色。