血球计数板使用
血球计数板计数法
精度高
血球计数板由精密的网格构成，能够精确地 计算细胞数量，误差较小。
样本用量少
血球计数板计数法需要的样本量较少，适用 于珍贵样本的计数。
缺点
主观性强
血球计数板计数法需要人工识别和计数细胞，因此容易受到主观因素 的影响，不同操作者之间可能存在差异。
无法计数非网格区域细胞
血球计数板上的网格区域有限，对于非网格区域的细胞无法计数，可 能会造成计数误差。
改进样本处理方法，提高细胞分散效果，降低细胞聚集现象， 提高计数的准确性。
增加血球计数板的网格密度，以减少计数误差，提高计数的准 确性。
将血球计数板计数法与其他检测方法相结合，如染色法、流式 细胞术等，以提高计数的准确性和可靠性。
06 血球计数板计数法：血常规检测中的血细胞计数
红细胞计数降低
常见于缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血、溶血性贫血等，也 可见于慢性病、肿瘤、月经期、孕妇等生理性贫血。
白细胞计数结果解读
白细胞计数正常值
成人（4.0~10.0） × 10^9/L，新生儿 （15.0~20.0） × 10^9/L。
白细胞计数升高
常见于感染、炎症、组织损伤、恶性肿瘤等，也可 见于生理性升高，如剧烈运动、体力劳动、月经期 和排卵期等。
常见于免疫性血小板减少症、再 生障碍性贫血、骨髓增生异常综 合征等，也可见于某些药物影响 或放化疗后骨髓抑制。
05 血球计数板计数法的优缺点
CHAPTER
优点
操作简便
血球计数板计数法是一种直接、快速的细胞 计数方法，操作简便，易于掌握。
适用范围广
该方法适用于各种类型的细胞计数，包括细 菌、红细胞、白细胞等。
总结词
血球计数板计数法在血常规检测中广 泛应用，用于准确计数红细胞、白细 胞和血小板等血细胞数量，为临床诊 断提供重要依据。
血球计数板的计数方法
血球计数板的计数方法血球计数板是一种常见的实验室设备，用于进行血液细胞计数。
本文将详细介绍血球计数板的计数方法，包括准备工作、样本处理、装载计数板、显微镜观察和计算结果等方面。
一、准备工作1.清洁：将血球计数板从存放位置取出，用酒精或去离子水擦拭干净，确保无灰尘和污垢。
2.检查：检查血球计数板是否完好无损，如有破损或变形应及时更换。
3.校准：使用前应进行校准，确保读数准确可靠。
二、样本处理1.采集样本：从受试者的静脉或指尖采集适量的血液样本，并将其加入到已经预先混合好的抗凝剂中。
2.混匀：轻轻摇动管子使其充分混匀，避免产生气泡。
3.稀释：将适量的稀释液加入到混合好的样本中。
通常情况下，白细胞需要进行稀释，而红细胞不需要稀释。
具体稀释倍数应根据实际情况而定。
三、装载计数板1.取出计数板：将血球计数板取出，放在干净的台面上，注意不要碰到玻璃面。
2.装载样本：使用移液器或吸管将稀释好的样本加入到计数板的样本槽中。
注意不要加过多，以免溢出。
3.震荡：轻轻震动计数板，使其充分混合。
四、显微镜观察1.调节显微镜：将显微镜调整到适当的倍率，并调节焦距，以便观察细胞。
2.观察细胞：在计数板上找到一个适当的视野，并开始观察细胞。
对于白细胞和红细胞，应分别选择不同的区域进行观察。
3.计数细胞：使用目镜和标尺，在每个小方格内逐一计数细胞。
对于白细胞和红细胞，应分别进行计数，并记录下来。
五、计算结果1.白细胞计算：根据已经记录下来的白细胞数量和稀释倍数，按照公式进行计算得出白细胞计数结果。
2.红细胞计算：根据已经记录下来的红细胞数量和稀释倍数，按照公式进行计算得出红细胞计数结果。
3.血红蛋白计算：根据已经记录下来的红细胞数量和血红蛋白浓度，按照公式进行计算得出血红蛋白计数结果。
4.其他指标计算：根据实验需要，可以进一步计算其他指标，如平均红细胞体积、平均血红蛋白含量等。
六、注意事项1.避免使用过期或损坏的血球计数板。
2.样本必须充分混匀，以确保稀释均匀。
血球计数板的使用
血球计数板生物实验用具血球计数板是显微镜上的外挂物件,可用来测量细胞,细菌等一些微小物体的长度,还有就是测量数量,如单位体积细胞的数量.血球计数板的构造和使用血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3.计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成,见图.血球计数板的使用以计数酵母菌为例(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数.(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.(3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.(4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内.(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数.(6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞).(7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数.3.计算公式(1)16格×25格的血球计数板计算公式:酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数(2)25格x16格的血球计数板计算公式:酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数4.血球计数板的清洁血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净,则必须重复清洗直到干净为止.实验六微生物的显微直接计数法一、实验目的了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直接计数的技能。
关于血球计数板的使用及注意事项
血球计数板的使用及注意事项如下：
1.血球计数板在使用前应先进行清洗和消毒，以确保使用时的卫生
性和准确性。
2.使用血球计数板时，应严格按照使用说明书中的步骤进行操作，
避免出现误差。
3.在进行血细胞计数时，应调整显微镜的放大倍数，以确保检测结
果的准确性。
4.使用血球计数板时，应保持操作环境的清洁和安静，避免干扰和
误操作。
5.血盖片应具有一定的重量，平整、光滑、无裂痕，厚薄均匀一致。
6.红细胞稀释液应等渗、新鲜、无杂质微粒。
7.严格操作，从消毒、采血、稀释、充池到计数都应规范。
血球计数板实验报告
血球计数板实验报告实验目的：通过使用血球计数板，观察和计数血液中的不同种类的细胞，以确定它们的数量和比例。
实验步骤：1.准备工作：a.将实验室仪器和试剂摆放整齐，并按要求进行消毒。
b.对血液样本进行稀释，使得细胞数量在可计数范围内。
2.使用血球计数板：a.将稀释后的血液样本注入血球计数板的计数室中。
b.轻轻晃动计数室，使血细胞均匀分布在计数室的每个小格子中。
c.在显微镜下逐个计算并记录不同种类的细胞数量，如红细胞、白细胞和血小板。
d.对每个种类的细胞数进行统计并计算平均值。
实验结果：根据实验步骤，我们观察到并记录了血细胞计数的结果。
具体数据如下：- 红细胞计数：平均值为4.5 某10^6 cells/μL- 白细胞计数：平均值为7.8 某10^3 cells/μL- 血小板计数：平均值为3.4 某10^5 cells/μL实验讨论：1.根据实验结果，我们可以得出血液中红细胞数量最多，白细胞数量较少，血小板数量也较少的结论。
2.实验结果可能会受到样本稀释时的误差影响。
如果样本稀释不准确，会导致细胞计数值不准确。
4.血球计数板是一种常用的血液检测工具，可以用于观察和计数各种血细胞，对于疾病的诊断和治疗提供重要依据。
实验总结：通过本次实验，我们学习了使用血球计数板进行血细胞计数的方法。
通过观察和计数不同种类的细胞，我们可以得到血液中细胞的数量和比例。
同时，我们也了解到实验结果可能受到多种因素的影响，需要进行准确的样本稀释和细胞计数操作。
血球计数板是一种非常实用的工具，对于临床医学领域的疾病检测和治疗具有重要意义。
血球计数板的使用方法
血球计数板的使用方法
一、注意事项
1. 血球计数板只能用于血液检查，不能用于测量其他物质；
2. 将血球计数板放置于平面上，确保平稳，防止晃动和碰撞；
3. 在开始测定之前，要根据靶点的电极安装完整；
4. 滴血时要涂抹几种抗凝剂，防止血液沉淀。
如果血液较深，可在计数前用刨子将血液挖出。
二、步骤
1. 将血液精确滴在血球计数板上；
2. 连接血球计数板上的接头，打开电源；
3. 根据靶点调整电位器；
4. 将光学镜头的焦距调节到节点最佳状态；
5. 通过镜头观察血液样本，一次性计数红细胞、白细胞和血小板的数量；
6. 通过刀片移动的方式，进行血球的细致观察和计数；
7. 计数结束后，关闭电源，清理血球计数板上的血液，清洗各个部分，涂抹上抗菌剂。
血球计数板的使用方法
血球计数板的使用方法
血球计数板是一种用于测量血液中各种血球数量的实验室工具。
下面是使用血球计数板的一般步骤：
1. 准备工作：
- 清洁血球计数板：使用酒精或其他适当的清洁剂将血球计
数板彻底清洁，并确保完全干燥。
- 准备血液样本：采集血液样本，并将其置于抽血管中。
2. 充填血液样本：
- 将橡胶管连接至抽血管的一端，并将另一端放入含有适当
稀释液（例如乙醇，盐水等）的试管中。
- 轻轻压抽血管，让血液与稀释液混合，确保样本适当稀释。
3. 填充计数室：
- 将计数室的一角放入混合好的血液样本液中。
- 逐渐放松手指，使液体自然充满整个计数室。
4. 观察计数室：
- 使用显微镜，在10倍或40倍放大倍数下观察计数室的血
球图像。
- 记录计数室内的血球数量。
5. 计算血球数量：
- 将计数室中各种血球的数量进行计算和统计。
- 根据计数室内的面积和深度，计算总血球数量。
- 可以使用计数室所覆盖的血球数量与已知的面积，以得出
总血球数量的近似值。
6. 清洗和储存：
- 使用适当的清洁剂彻底清洗计数室，确保无血液残留。
- 将计数室储存在干燥，洁净的地方，以防止污染和损坏。
请注意，使用血球计数板可能需要一定的实验室训练和技巧，以确保准确性和可靠性。
在进行血液分析时，应遵循实验室的操作指南和安全规定。
血球计数板的计数方法
血球计数板的计数方法
血球计数板是一种常用的实验仪器，用于计算血球数量。
具体的计数方法如下：
1. 准备工作：首先，确保血球计数板干净，无污染。
可用洗涤剂和双蒸水进行清洗和冲洗，然后用无纹纸巾擦干。
2. 取血样：使用无菌针头采集一定量的血液样本，通常使用的样本量为0.02毫升。
3. 加样：将血液样本滴入血球计数板的计数区。
滴落的血液应均匀地分布在计数区的每个小方格内。
4. 观察：视觉放大镜或显微镜的帮助下，通过目镜观察计数区的血球数量。
5. 计数：随机选择若干个小方格，计算这些方格中血球的数量。
一般使用的计数面积为3个或4个方格。
6. 计算：将所选方格中的血球数量相加，然后乘以血球计数板的稀释倍数和倒干涉系数。
根据计算公式，可得出血球的浓度，常用单位为每立方毫米的血液中血球的数量。
7. 结果：将最终计算出的血球浓度记录下来，并报告给相关的医务人员或研究人员。
使用血球计数板进行血球计数时，需要严格按照操作规程进行，
避免出现污染或操作错误。
在完成计数后，要及时清洗血球计数板，以备下次使用。
血球计数板计数实验
环工综合实验血球计数板计数实验实验报告环境科学与工程学院实验中心使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。
2.血球计数板计算微生物数量的优缺点是什么？血球计数板与平板稀释法对细菌个数进行测定，结果往往差别很大。
分析原因。
答：⑴将细菌（或其他微生物）以染料（例如结晶紫）染色后，直接以显微镜观察的方式计数，再推算回细菌数，所得即为总菌数，即死菌、活菌一并计算。
优点：简单、快速、重复性高。
不足：不能区分死细胞和活细胞，应用范围较窄；一些小的细胞在显微镜下很难看到；样品中菌液浓度不能低于106个/mL；不能用于菌丝体或呈链状而不分散的微生物测定⑵血球计数板计量时所得到的结果为死菌与活菌的总数，而平板稀释法培养得到的为活菌数目，因此结果差异较大。
四、实验步骤1.稀释：取接种酵母菌的斜面一支，加入5ml无菌水，摇晃试管一分钟，使形成菌液；将菌液倒入洁净的150ml锥形瓶中，加结晶紫三滴，摇晃2分钟，再加入无菌水至50ml。
2.镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。
若有污物，则需清洗后才能进行计数。
2.加样品：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的细口滴管将稀释的酿酒酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。
注意不可有气泡产生。
4.显微镜计数：静止5分钟后，将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。
在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。
一般样品稀释度要求每小格内约有5—10个菌体为宜。
每个计数室选5个中格（可选4个角和中央的中格）中的菌体进行计数。
位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。
如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作两个菌体计数。
计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算样品的含菌量。
血球计数板使用说明
而由于仪器（计数板、盖片、吸管等）不够准确与精密带来的误差称仪器误差；
由于细胞分布不均匀等因素带来的细胞计数误差属于分布误差或计数域误差（filed error）。
仪器误差和分布误差统称为固有误差或系统误差。技术误差和仪器误差可通过规范操作、提高熟练程度和校正仪器而避免或纠正，但细胞分布误差却难于彻底消除。质量控制一般需采用以下措施。
n为测定例数，∑d2为双样之差的平方和。
3．人员质量评价一般用两差比值法或双样试验标准差评价法进行质量评价或工作人员自我考核；变异百分数法通常用于评价细胞计数的结果。
（1）两差比值法用于考核实验结果的精密度。采用同一稀释样间隔2h后进行重复计数，求出两次镜下计数值之差（取绝对值）与两次计数值标准差的比值，即两差比值（r）。
评分：score=100-20.1×r，20.1为失分系数（40/1.99）。评级：90-100为优秀，80-89为良好，70-79为中等，60-69为及格，<60时为不及格。
（2）细胞稀释液应等渗、新鲜、无杂质微粒，同时应该保证细胞没有明显的团块。
（3）严格操作，从取样、重悬、稀释、充池到计数都应规范，尤其应注意的是样品稀释及充池时既要作到充分混匀，又要防止剧烈震荡为破坏红细胞。必须一次性充满计数室，防止产生气泡，充入细胞悬液的量以不超过计数室台面与血盖片之间的矩形边缘为宜。
血球计数板计数法
5×400×10000×10＝2×108 。
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例6、 在用血球计数板（2mm×2mm方格）对某一稀释 50倍样品进行计数时，发现在一个计数室内（盖玻片下 的培养液厚度为0.1mm）酵母菌平均数为16个，据此估 算10mL培养液中有酵母菌 ▲ 个。
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计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个 大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25 个小方格，共400小格；另一种是一个大方格分 成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格， 总共也是400小格。所以无论是哪种规格的计数 板，每一个大方格中的小方格数都是相同的。 每一个大方格边长为1㎜，则每一大方格的面积 为1㎜2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的 高度为0.1㎜，所以计数室的容积为0.1㎜3。
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5.对每个样品计数三次，取其平均值， 计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。
第一室 第二室
各中格中菌数
A
B
二室平均值
12345
A-五个中方格的总菌数 B-稀释倍数
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菌数/ml 16
6．清洗血球计数板 血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切
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推导：1mm×1mm方格的计数
1mm×1mm表示计数室的边长，即一个大方格的边长。由于计 数室厚度为0.1mm，所以计数室的总体积为0.1mm3。
1．16×25型的计数公式： 酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/ 100
×400×10000×稀释倍数
血细胞计数板的使用
血细胞计数板的使用：
①取清洁干燥的血球计数板，加盖玻片盖住网格和两边的槽。
②将待测菌液充分摇匀后，用无菌吸管吸少许，由盖玻片边缘或槽内加入计数板，使其自行渗入计数室内，计数室内不能有气泡。
静置5-10分钟。
③在低倍镜下找到小方格网后更换高倍镜观察计数，上下调动细螺旋，以便看到小室内不同深度的菌体。
位于分格线上的菌体，只数两条边上的，其余两边不计数。
即数上线就不数下线，数左边线就不数右边线。
④计数时，若使用刻度为25中方格×16小方格的计数板，计数四个角的4个中方格，及中央1个中方格的菌数（即80小方格）；若使用刻度为16中方格×25小方格的计数板，就数四个角的4个中方格（即100小方格）内的菌数。
每小方格中菌数以5-10个为宜，如菌液过浓可适当稀释。
⑤每个样品重复计数2-3次，取其平均值，按下式计算样品中的菌数。
刻度为25中方格×16小方格的计数板：
每毫升菌数=80小格内的菌数/80*4*10的6次方*稀释倍数
刻度为16中方格×25小方格的计数板：
每毫升菌数=100小格内的菌数/100*4*10的6次方*稀释倍数。
血球计数板的使用(有图指导)
血球计数板的构造和使用血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的•玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台•中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面，刻有一个方格网•方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用•这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm 3.计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造；它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16 X 25=25 X 16=40个小方格组成，见图.血球计数板的使用以计数酵母菌为例(1) 用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数•(2) 样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每小方格内含有4-5 个酵母细胞为宜，一般稀释10倍即可.(3) 将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央计数室上加盖专用的厚玻片.(4) 将稀释后的酵母菌悬液，用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌 液缓缓渗入，多余的菌液用吸水纸吸取，捎待片刻，使酵母菌全部沉降 到血球计数室内.(5) 计数时，如果使用16格X 2格规格的计数室，要按对角线位，取左上 右上，左下，右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25 格X 1格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中 格(即80个小方格)的酵母菌数.LJ L I.--—■ ■V ■ ■ \ ——hft ■ S ■ ■ * *■ ■ * - ■ . ntV R « ■ fl p- 1 d L W 1龊兀石的片敦了 血球片散板的恂适(6) 当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞).(7) 对每个样品计数三次，取其平均值，按下列公式计算每1ml菌液中3.计算公式(1) 16格X 2格的血球计数板计算公式：酵母细胞数/ml=100 小格内酵母细胞个数/100 X 400稀释倍数(2) 25格x16格的血球计数板计算公式：酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80 X 40X稀释I倍数4•血球计数板的清洁血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇，无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥•通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物•若不干净, 则必须重复清洗直到干净为止.。
血球计数板使用说明
血球计数板使用说明血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽3各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm.取样:1、样品应该保证充分的均匀的情况下才有意义;2、样品应该尽量减少结团情况，如有结团应该吹散(或者用胰酶消化)后再计数;3、样品的体积大概250ul(大概5-7滴);4、如果体积大于100ml，取样应该保证在两个以上;5、如果是生产的技术应该取三个样，并每次都要充分混匀后取样;6、样品的体积只有进口的离心管和吸管的数据可以取信，但是离心管会有一定的波动误差，应该计算有15ml(-100ul)50ul(-300ul);稀释:1、稀释液应该是等渗的，不能带有颗粒(如果有应该先用滤纸过滤);2、稀释的时候样品的体积至少要用50ul，同时取样前应该用200ul的枪吹打10次，并马上取样;稀释后的样品也要用200ul枪吹打10次再取样计数;3、稀释后的样品四个中格的细胞数应该保证50-150个/中格;四个的总数应该大于200个;4、细胞应该计数应该尽量使用原样，如果有离心操作，应该保证样品在500ul以上，并用250g 离心5min;加样:1、计数板要用酒精清洗干净后，晾干，表面不能有污垢和纤维;2、盖玻片应该也保持洁净，并防在血球技术板的中间位置，血球计数板要放在平面上，再每边加样，每边的加样量为8.5ul;3、平稳放置30sec后放到显微镜上面，用100倍镜每次计数一个中方格; 计数:1、每个样品应该计数至少三次(否则会有很大偏离);2、每个方格的数应该在50-150间，计数的标准应该统一，如果是团就记为一个，但是可以明确分出是几个细胞的可以据实计数;3、遵守记上不记下，记左不记右;细胞压线超过50%在线内才有效; 人员:1、人员应该做同一个样品测试，同一个样品的细胞数总量应该在10个以内(或者是5%波动);同一个样品稀释后计数的数据波动应该在5%以内;2、不同人员的测试同一个样品的波动误差应该在5%以内;3、达到上诉的操作的要求的人员的操作数据才能取信;结果记录表4次数 A B C D 稀释倍数细胞数×10 1 2 3.其他人对这个问题的分析【质量控制】血细胞计数的误差分别来源于技术误差和固有误差。
关于血球计数板的使用及相关问题
个小方格细胞总数 ×400×10000×稀释倍数血球计数板的构造（三）（25×16） 二、血球计数板的使用方法步骤 1．镜检计数室。
在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。
若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数； 2．加样品。
将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入，一次性充满计数室，防止产生气泡，多余培养液可用滤纸吸去； 3．计数。
稍待片刻（约5min），待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部后，先在低倍镜下找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、计数并记录。
三、血球计数板的使用注意事项 《培养液中酵母菌种群数量的动态变化》实验是一个历时较长（7天左右）的实验，事前一定要做好周密的计划，定程序、定时间、定人员。
每天采用抽样检测法使用血球计数板对酵母菌进行计数，在计数时应从以下几方面注意。
1．每天同一时间，各组取出本组的试管，用血球计数板计数酵母菌个数，并作记录，连续观察7天。
2．从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几下，这样使酵母菌分布均匀，防止酵母凝聚沉淀，提高计数的代表性和准确性，求得的培养液中的酵母菌数量误差小。
3．如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当对培养液进行稀释以便于酵母菌的计数。
具体方法是：摇匀试管，取1mL 酵母菌培养液，加入成倍的无菌水稀释，稀释n 倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以稀释倍数。
以每小方格内含有4—5个酵母细胞为宜。
特别是在培养后期的样液需要稀释后计数。
4．活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母细胞。
5．对于压在方格界线上的酵母菌应当计数同侧相邻两边上的菌体数，一般可采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则处理，另两边不计数。
计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数；如果规格为25格×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。
血球计数板使用
血球计数板血球计数板被用以对人体内红、白血球进行显微计数之用，也常用于计算一些细菌、真菌、酵母等微生物的数量，是一种常见的生物学工具血球计数板含义血球计数板（改良牛鲍计数板）用优质厚玻璃制成。
每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池。
计数池两侧各有一支持柱，将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm的计数池。
计数池画有长、宽各3.0mm的方格，分为9个大方格，每个大格面积为1.0mm².容积为0.1mm³（ul），其中，中央大方格用双线分成25个中方格，位于正中及四血球计数板角5个中方格是红细胞计数区域，用单线划分为16个小方格。
四角的4个大方格是白细胞计数区域，用单线划分为16个中方格。
根椐国际标准局（NBS）规定，大方格每边长度允许误差为±1%。
血球计数板血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。
计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。
但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
计数区边长为1mm，则计数区的面积为lmm2，每个小方格的面积为1/400mm2。
盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。
使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。
使用方法血球计数板血球计数板1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。
2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。
血球计数板的使用
血球计数板的使用姓名原理血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。
玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其体积为0。
1mm3。
计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格。
但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。
每一个大方格边长为1 mm，则每一个大方格的面积为1 mm2,盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0。
1mm，所以计数室的容积为0。
1 mm3血球计数板的使用方法（以计数酵母菌为例）：1 样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每小方格内含有4—5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可。
2 将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上加盖专用的厚玻片。
3 将稀释后的酵母菌悬液用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入。
多余的菌液用吸水纸吸取.稍待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计数室内.4 计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要按对角线位,取左上、右上、左下、右下4个中格(即100个小格）的酵母菌数；如果规格为25格×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格（即80个小方格）的酵母菌数.5 当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞（或只计数下方和左方线上的酵母细胞).6 对每个样品计数三次，取其平均值，按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。
计算公式：(1） 16格×25格的血球计数板计算公式：酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数(2) 25格x16格的血球计数板计算公式:酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数7血球计数板的清洁：血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷.洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95％的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。
血球计数板的使用
血球计数板的使用姓名原理血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。
玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用。
这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0。
1mm，其体积为0。
1mm3。
计数室通常有两种规格。
一种是大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。
但是不管计数室是哪一种构造,它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。
每一个大方格边长为1 mm，则每一个大方格的面积为1 mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1 mm3血球计数板的使用方法（以计数酵母菌为例)：1 样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每小方格内含有4—5个酵母细胞为宜，一般稀释10倍即可。
2 将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.3 将稀释后的酵母菌悬液用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入.多余的菌液用吸水纸吸取。
稍待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内。
4 计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要按对角线位,取左上、右上、左下、右下4个中格(即100个小格）的酵母菌数；如果规格为25格×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格（即80个小方格)的酵母菌数.5 当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞）.6 对每个样品计数三次,取其平均值，按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。
计算公式：（1） 16格×25格的血球计数板计算公式：酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数（2) 25格x16格的血球计数板计算公式：酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数7血球计数板的清洁：血球汁数板使用后,用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷。
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三、血球计数板的使用注意事项
• 1．每天定时取样计数，记录数据。 • 2．从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震 荡几下，这样使酵母菌分布均匀。 • 3．如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当对培 养液进行稀释以便于酵母菌的计数。 具体方法是：摇匀试管，取1mL酵母菌培养液，加入成倍 的无菌水稀释，稀释n倍后，再用血球计数板计数，所得 数值乘以稀释倍数。以每小方格内含有4—5个酵母细胞为 宜。特别是在培养后期的样液需要稀释后计数。 • 4．活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时， 即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个 酵母细胞。
• 2．25×16型的计数板 中央大方格以双线等分成25个中 方格，每个中方格又分成16个小方格，供细胞计数用（见 图三）。一般计数四个角和中央的五个中方格（80个小方 格）的细胞数。 细胞个数／1mL＝80个小方格细胞总数/ 80 ×400×10000×稀释倍数
二、血球计数板的使用方法步骤
• 1．镜检计数室。在加样前，先对计数板的计数室进行镜 检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数； • 2．加样品。将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专 用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻 片边缘，让培养液自行缓缓渗入，一次性充满计数室，防 止产生气泡，充入细胞悬液的量以不超过计数室台面与盖 玻片之间的矩形边缘为宜。多余培养液可用滤纸吸去； • 3．计数。稍待片刻（约5min），待酵母菌细胞全部沉降 到计数室底部后，将计数板放在载物台的中央，先在低倍 镜下找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、计数并 记录。
（3）血球计数板的计数室长和宽各为1mm，深度为0.1mm， 其中25×16型的血球计数板计数室以双线等分成25个中方格 ，每个中方格又分成16个小方格。一般计数时选取的中方格 位于计数室的 四个角和中央的五个中方格 。下图1表示的 是其中一个中方格的情况，对该中方格中的酵母菌进行计数 的结果是 个。如果计数的几个中方格中的细胞平均数 24 为20个，则1mL培养液中酵母菌的总数为 个。 5×106
（4）某同学为探究温度对酵母菌种群数量变化的影响，得 到上图2所示结果，由此并不能得出酵母菌的最适培养温 度为25℃。为了确定培养酵母菌的最适温度，需要进一步 实验，写出实验设计思路： 。
在25℃左右再设计以上的温度梯度
2.在生态学中，通常要从种群、群落、生态系统等三个层 次开展研究。 ⑴ 在“探究培养液中酵母菌数量的动态变化”实验中，用 血球计数板进行抽样检测。下图是血球计数板放大图， 第一次抽样检测结果是4个中方格中共有40个酵母菌， 则每毫升菌液中含有酵母菌 1.6×106 个。所计算出 的酵母菌是 C （从以下选项中选择）。 A.活的菌数 B.死的菌数 C.总菌数 D.新板对培养液中酵母菌进行计数， 若计数室为1mm×1mm×0.1mm方格，由400个 小方格组成，如果一个小方格内酵母菌过多，难 以计数，应先 稀释 后再计数。若多次重复计 数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则 10mL该培养液中酵母菌总数有 2×108 个。 解析 ：根据公式：5×400×10000×10＝2×108
1．（7分）酵母菌是探究细胞呼吸方式、种群数量变化的理 想实验材料。血球计数板是酵母菌计数的常用工具。结 合所学知识，回答下列问题： （1）酵母菌与大肠杆菌相比，在结构上的主要区别是酵母 菌具有 以核膜为界限的细胞核 。
（2）酵母菌常被用来探究细胞呼吸的方式，是因为它
在有氧和无氧条件下都能生存（属于兼性厌氧菌） 。
⑵“离离原上草，一岁一枯荣。野火烧不尽，春风吹又生。远芳 侵古道，晴翠接荒城。”诗中可体现出群落的次生演替 现 象。研究群落通常要研究其丰富度，探究土壤中小动物优势 取样器取样 种的种类及丰富度，随机取样时常用的方法是 取样法。 ⑶人工设计并制作生态缸，目的是观察这一人工微生态系统的 稳定性。在构建时，是依据生态系统原理，在有限的空间内 把生态系统具有的 基本成分 进行组织。为了使其正常运 转，在设计时一定要考虑 不同营养级生物之间的合适比例 。
浸泡和冲洗
例4：（2009福建高考1 ） ( C ) A.在观察洋葱细胞有丝分裂实验中，将已经解离、漂洗、 染色的根尖置于载玻片上，轻轻盖上盖玻片后即可镜 检 B.对酵母菌计数时，用吸管吸取培养液滴满血球计数板的 计数室及其四周边缘，轻轻盖上盖玻片后即可镜检 C.在叶绿体色素提取实验中，研磨绿叶时应加一些有机 溶剂，如无水乙醇等 D.检测试管中的梨汁是否有葡萄糖，可加入适量斐林试 剂后，摇匀并观察颜色变化 下列对有关实验的叙述，正确的是
• 5．对于压在方格界线上的酵母菌应当计数同侧相邻两边 上的菌体数，一般可采取“数上线不数下线，数左线不数 右线”的原则处理，另两边不计数。 • 6．计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计 算，对每个样品可计数三次，再取其平均值。计数时应不 时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体。按公式计算每 1ml（或10mL）菌液中所含的酵母菌个数。 • 7．血球计数板的清洁 血球计数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗 后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、 丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是 否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直 到干净为止。
• 例2：检测员将1 mL水样稀释10倍后，用抽样检测的方法 检测每毫升蓝藻的数量；将盖玻片放在计数室上，用吸管 吸取少许培养液使其自行渗入计数室，并用滤纸吸去多余 液体。已知每个计数室由25×16＝400个小格组成，容纳 液体的总体积为0．1 mm3。
现观察到图中该计数室所示a、b、c、d、e 5个中格80个 小格内共有蓝藻n个，则上述水样中约有蓝藻 ▲个／mL
血球计数板使用
一、血球计数板的规格
• 人教版建议使用2mm×2mm×0.1mm方格 • 苏教版推荐使用1mm×1mm×0.1mm方格
计数室
计数室两种规格
• 1．16×25型的计数板 将计数室放大，可见它含16中格， 一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格） 计数 。 细胞个数／1mL＝100个小方格细胞总数/ 100 ×400×10000×稀释倍数
解析 ：酵母细胞个数／1mL＝ 80个小方格细胞总数/ 80 ×400×10000×稀释倍数 ＝n/ 80×400×10000×10＝5n×105
• 例3（2008江苏高考31．）
（4）在整个实验过程中，直接从静置的培养瓶中取培养原液 计数的做法是错误的，正确的方法是 摇匀培养液后再取样 _ 和 。 （5）实验结束后，用试管刷蘸洗涤剂擦洗血球计数板的做法 培养后期的样液稀释后再计数 是错误的，正确的方法是 。