2株鸭源肠球菌的生物学特性的观察_韩梅红
鸭大肠杆菌病病原菌的分离鉴定及耐药性监测
１ 细 菌 的 分 离培 养 ． ３
无 菌 取 病 鸭 的 肝 、 脏 病 心
较 敏 感 的 药 物 来 进 行 预 防 和 治疗 ．达 到 有 效 控 制
疾 病 的 目的 １ 材 料 和 方 法 １１ 病 例 来 源 山 西 省 长 子 县某 养 殖 户 的 ２月 ． 龄 病 鸭 送 检 时 已死 亡 问诊 可 知 病 鸭 拉 白 色 稀
１５ １ 糖 类 分 解 试 验 ．． 结果。 １５２ 硫 化 氢 试 验 ．．
挑 取 普 通 琼 脂 平 板 上 可 疑
菌 落 接 种 于 各 种 糖 培 养 基 上 ３ ｃ 培 养 ２ ｈ．观 察 ７Ｃ ４ 挑 取 普 通 琼 脂 平 板 上 可 疑 菌
膜 覆 盖 。 胆 囊 肿 大 ． 汁 充 盈 。小 肠 臌 气 ， 膜 增 胆 粘
料 分 别 划 线 接 种 于普 通 琼 脂 平 板 、麦 康 凯 琼 脂 平 板 、伊 红 美 蓝 琼 脂 平 板 及 营养 肉 汤 于 ３ ℃有 氧 情 ７
况 下 培 养 ２ ｈ后 观 察 结 果 ４ １４ 涂 片 染 色镜 检 ． 菌 落 形 态
１５ 生 化 试 验 ．
挑 取 普 通 琼 脂 平 板 上 可 疑
霉 素 （）泰 乐 菌 素 （Ｌ 、 红 霉 素 （）利 福 平 （ Ａ 、 氟 沙 星 （Ｆ ）诺 氟 沙 星 （Ｏ 、 丙 沙 星 Ｋ、 Ｔ ）硫 Ｅ、 Ｒ ）氧 Ｏ Ｌ、 Ｎ Ｒ）环
ｆ Ｉ） 恩 诺 沙 星 ｆ Ｎ ） 药 。结 论 ： ＣＰ 、 Ｅ Ｒ耐 交替 使 用 头 孢 噻 肟 、 头孢 曲松 钠 、 大霉 素 、 庆 头孢 拉 啶 和 氟苯 尼 考 对 该 病 进 行 治疗 ， 临床 效 果 显 著 。 关 键 词 ： 大肠 杆 菌病 ； 离 ； 定 ； 鸭 分 鉴 药敏 试验 中 图分 类 号 ：８ ４４３ ￥ ５ ． 文献 标 识 码 ： Ｃ 文 章 编 号 ：６ ３ １ ８ （ ０ ０）４ ０ ３ — ３ １７ — ０ ５ ２ １ ０ — ０ ９ ０
2株鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及致病性研究
离菌少许 ， 于蒸馏水中混 匀， 滴加 未稀释的阳性血清 １ 滴。将
载 玻 片 反 复 摆 动 ， 用 接 种 环 涂 开 ， 意 观 察 结 果 。 几 秒 钟 或 注 后， 出现 清 晰 的乳 白 色 絮状 凝 集块 者 ， 即判 定 为 阳性 反 应 ， 阳
赵 宝华 ，范建华
（ 国农 业 科 学 院 家禽 科 学 研 究 所 ， 苏 扬 州 ２５ ０ ） 中 江 ２ ０ ３
摘 要 ： 江 苏 省 镇 江 市 发 病 的鸭 场 和 扬 州 市 发 病 的 鹅 场 各 分 离 到 １ 细 菌 ， 分 离 培 养 、 色 镜 检 、 化 特 性 鉴 从 株 经 染 生
特性 试 验 、 清 型 鉴 定 和 致 病性 研 究 。 血
１２ １ 细菌的分离 与培养 无菌 挑取心包积液分别接种绵 ． ． 羊鲜血琼脂平板 、 麦康凯琼脂平板 和巧 克力琼脂平板 ３种培
养 基 各 ２份 ， 中一 份 ３ 其 ７℃ 常 规 温 箱 中 培 养 ２ ４ ， 一 ４～ ８ｈ 另
的致病性。 关 键 词 ： 疫 里 默 氏杆 菌 ；生化 特性 ； 集 试 验 ； 病 性 试 验 鸭 凝 致 中图 分 类 号 ： ８ ８ ３ 文 献 标 志 码 ： 文章 编 号 ： ０ ￥ ５ ．２ Ａ １ ２—１０ （０ ０ ０ ０ ２ ０ ０ ３ ２ ２ １ ）５— ３ １— ２ 鸭 疫 里 默 氏 杆 菌 （ ｉ ｅｅａａ ａ ｅ ￣ｒ 缩 写 Ｒ 感 染 Ｒｅ ｎｌ ｎ ＠ ｓ ｅ， ｍ ｌ ｔ Ａ） 海 兽 医 研 究 所 胡 清海 博 士 惠 赠 。
定 和玻 片凝 集试 验 ， 定 从 镇 江 市 发 病 鸭 分 离 的 细 菌 为 Ｘ 确 Ｖ型 鸭 疫 里 默 氏杆 菌 ， 扬 州 市 发 病 鹅 分 离 的 细 菌 是 Ⅱ型 鸭 从
湖北省鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析
Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报2023,31(3):41-45·研究论文·湖北省鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析朱玲玲1，孙敏华2，胡 怡1，汪 婷1，徐 欢1，汪 威1，殷世彬1，汪招雄1（1.长江大学动物科学学院，荆州434025；2.广东省农业科学院兽医研究所，广州510640）摘 要：鸭传染性浆膜炎是由鸭疫里默氏杆菌（RA ）感染引起的一种雏鸭高度接触性传染病。
为了解该病在鸭群中的发病情况、细菌耐药性变化，本研究从湖北省不同地区鸭场采集鸭传染性浆膜炎疑似病例肝脏，分离到34株细菌，对分离细菌进行培养、形态观察、生化鉴定、耐药性检测和氟苯尼考耐药基因测定。
药敏试验显示34株分离株对头孢噻肟、大观霉素和阿米卡星敏感性比较高，对新霉素和诺氟沙星耐药性最强。
PCR 扩增RA 氟苯尼考flor 基因，16株分离株可以扩增出该基因，所得序列与Flor 蛋白全基因序列比对，相似性高达100%。
关键词：鸭疫里默氏杆菌；PCR 鉴定；耐药性检测；fl or 基因测定中图分类号：S852.61文献标志码： A文章编号：1674-6422（2023）03-0041-05Isolation, Identifi cation and Drug Resistance of Riemerella anatipestifer in Hubei ProvinceZHU Lingling 1, SUN Minhua 2, HU Yi 1, WANG Ting 1, XU Huan 1, WANG Wei 1,YIN Shibin 1, WANG Zhaoxiong 1(1. College of Animal Science, Yangtze University, Jingzhou 434025, China; 2. Institute of Veterinary Medicine, Guangdong Academy ofAgricultural Sciences, Guangzhou 510640, China)收稿日期：2021-01-03基金项目： 湖北省农业科学学院农业部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室开放课题资助（KLAEMB-2017-04）作者简介：朱玲玲，女，硕士，主要从事为动物传染病防制和病原感染宿主致病机制研究通信作者：汪招雄，E-mail：****************Abstract: Infectious serositis in duck is a highly contagious infection caused by Riemerella anatipestifer . In order to understand the incidence of this disease in the duck population and the drug resistance, liver samples were collected from ducks suspicious of infectious serositis from different regions of Hubei province and 34 bacterial strains were isolated and identifi ed as R. anatipestifer based on culture, morphology, biochemical reaction. These strains were tested for their drug resistance. These strains were susceptible to cefotaxime,spectinomycin and amikacin and resistant to neomycin and norfl oxacin. In addition, the fl orfenicol fl or gene was amplifi ed in PCR from 16 isolates and compared with the whole flor gene sequence at 100% identity.Key words: Riemerella anatipestifer ; PCR identification; drug resistance test; fl or gene 鸭传染性浆膜炎（infectious serositis of duck）是由鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer , RA）感染鸭引起的一种高度接触性败血性传染病[1-2]。
2株鸭源肠球菌的鉴定和药敏试验
（ ｅ ａｔ ｎ ｆ ｉ ｌ ｃｅ ｃ ， ｎ ｔ ｎｖ ｒｉ ，ｉｇ ｈ ｕ ４ ４ ２ ， ｈｎ ） Ｄｐｒ ｍｅ ｔ ｍａ ｉｎ ｅ Ｙａ ｇｚ Ｕ ｉｅｓｔ Ｊｎ ｚ ｏ ３ ０ ５ Ｃ ｉａ ｏ Ａｎ Ｓ ｅ ｙ
ｆ ｍ ｄｉｇｄｃ ｓａｄｏｅｒｆｒｎｅｓ ａｎｏ ．ａｉ ｉｗ ｒ ｔｄｅ． ｈ ｈｅ ａｔ ａｓａｅ ｌ ｗｎ ｈｒｃｅ ｓｃ： ｐ ｅｒ ｇ ｒ ｙｎ ｕｋ ｎ ｎ ｅｅｃ ｔ ｉ ｆ ｆｃａｓ ｅｅｓ ｉ Ｔ ｅｔｒｅｂ ｃ ｒ ｈ ｒｄｆｌ ｉｇｃａａｔ ｉ ｉ ａｐ ａ ｎ ｏ ｅ ｒ Ｅ ｌ ｕ ｄ ｅ ｉ ｏｏ ｒａ ｓ ａ ｄｙ ａ ｄ Ｆ ｅ ｃｅ ｃ ｉ ｌＨｕ ｂ ｎ ｒ ｎ ｅ ｄ Ｓ ｉｎ ｅ
２ ０， １（ ） １ １ ８ ０１ ３ １ ：８ —１ ２
２ 株鸭源肠球菌的鉴定和药敏试验
曾 涛 ． 梅 红 韩
（ 江 大学 动 物 科 学 学 院 ， 北 长 湖 荆州 ４４ ２ ） ３ ０ ５
Ａｂｓｒ ｃｔ ｔ ａ ：Ｔｈｅ ｍｏｐｈｏｏ ｉ ａ，ｃ ｌｕｒ ｌｃ ａ ａ ｔｒ ，ｂｉｃ ｅ ｓｒ ａ ａ ｔｒ ｎｄ ｔ ｒ ｇ ｓ ｎ ｉｉｉｙ ｏ ｗｏｅ ｅ ｏ ｏ ｃ ｔａ ｎ ｓ ｌ ｔｄ ｒ ｌｇ ｃ ｌ ｕ ｔ ａ ｈ ｒ ｃ ｅ ｓ ｏ ｈ ｍｉｔｙ ｃｈ ｒ ｃｅ ｓａ ｈｅ ｄ ｕ ｅ ｓｔｖｔ ｆｔ ｎｔｒ ｅ ｅ ｕｓｓｒｉ ｓ ｉｏ ａｅ
ｐ ｎ ｃｌｉ ｖ ｎ ｍｙ ｉ ｇ ｎ ａ ｅ ｎａ ｅ ｏ ｏ ｃｎ， ｕｔ ｅ ｉｔ ｎ ｏ ｔｔａ ｙ ｌｎｅ ｅ ｉ ｉ ｎ， ａ ｅｏ ｃｎ， ｅ ｔ ｍｙ ｉ ｎｄｌ ｖ ｆ ｘａ ｉ ｂ ｓｓａ ｔｔ ｅ ｒｃ ｃ ｉ ． ｌ ｌ ｒ Ｋｅ ｙ ｗｏｒ ｄｓ： ｃ ｅ ｔ ｒ ｅ ｅｕ ；ｄｅ ｔｆｃ ｔｏ ｄｒ ｇ ｓ ｎ ｉｉｅｔ ｓ ｄｕ ｋ； ｎ ｅ ｏ ｏｅ ｓ ｉ ｎ ｉ ａｉｎ； ｕ ｅ ｓｔｖ ｅ ｔ ｉ
鸭致病性大肠杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析
表 明：ｍ Ａ ｐｓ ｚ ｏ ｐ 、 和 ｓ三种基 因高度保 守， ｆ 在分 离菌株 中的检 出率为 １０ ； ｓ ０％ ｉ、 ｓ ∞ 、 、 Ｃ ｃａ 柚 ｍ 、ｖＣ和 ｉ Ｃ基 ｒ ｏ
因的 检 出率 达 到 ７ ％ 以 上 ， 重要 的 鸭 致病 性 大肠 杆 菌毒 力相 关 基 因。 ２ 为
中 国 动物 传 染 病 学 报
２ １ ，８ ２ ：４— ０ ００ １ （ ）３ ４
Ｃ ｉ ｓ Ｊｕ ａ ｏＡ ｉａＩｅｔｕ Ｄｓ ｓ ｈ ｅｅ ｏｒ ｌｆ ｎ ｌｎ ｃｏｓ ｉ ａ ｓ ｎ ｎ ｍ ｆ ｉ ｃ ｅ
・
研 究 论文 ・
鸭 致 病 性 大 肠 杆 菌 的 分 离 鉴 定 及 其 生 物 学 特 性 分 析
关键词 ：鸭大肠杆 菌； 血清型； 流行病 学调 查
中 图 分 类 号 ： ８ ２６ ２ ￥ ５ ． ￥５ ．１ ：８２ ５ 文 献标 识 码 ： Ａ 文章 编号 ：１７ ． ２ （０ ０ ０ －０ ４０ ６ ４６ ２ ２ １ ） ２０ ３ － ４ ７
ＣＨＡＲＡ ＣＴＥＩ ＵＺＡＴＩ ｏＮ Ｆ ｏ ＤＵＣＫ ＰＡＴＨｏ ＧＥＮＩ ＥＳ Ｃ Ｃ黝
陈文静 ， 韩先 干 何 亮 胡青海 于圣青 ， 一， ，
（ ．中国农 业科 学院上 海兽 医研究所 ， １ 上海 ２０ ４ ； ．扬 州大学 ， ０２１ ２ 扬州 ２ ５ ０ ） ２０９
摘 要： 鸭致病性大肠杆菌病是危 害养鸭业的最为重要 的细 菌性传 染病之一。本研 究分 离鉴定 了 ６ ５株鸭致
病 性 大肠 杆 菌 ， 对 其 Ｏ血 清 型 、 药谱 以及 毒 力 相 关基 因进 行 了检 测 。 结 果表 明 ： 并 耐 大肠 杆 菌 Ｏ Ｏ 和 Ｏ ， ， ．为 主 要 流 行 血 清型 ， 占分 离株 的 ７ ％ 、Ｉ 和 ５ 。对 １ 常 规 抗 菌 素 或 药 物 的 药敏 试 验 结 果 表 明 ：０ ％ 的 各 ５ Ｉ％ ％ ５种 １０
2株鸭源肠球菌的生物学特性的观察
氏染色 、 镜检 并接种 于 下一代 培 养基 ， 最后 将纯 化 的细菌接 种 于 ＴＨＢ液 体培 养 基 ， ７℃恒 温 培养 １ ￣２ ３ ８ ４
ｈ 置 ４℃冰箱备 用 。 ，
１ ４ 培 养 特 性 及 细 菌 形 态 观 察 ．
无菌挑 取 纯化 的菌 液分 别接种 于 ＴＨＢ血琼脂 平 板 、 马丁琼脂 平板 、 ＴＨＢ 血清 马 丁肉汤 等培 养基 ，７ 、 ３
［ 收稿日期］ ｏ ７ ０ — ８ ２ ｏ — ６ ２ ［ 第一作者简介］ 韩梅红（ ９９ ） 女 ， １ ７ 一 ， 河南汝州市人 ， 农学硕士 ， 助教 ， 主要从事免疫病理学方向研究．
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长江大 学学报（ 自科版）农学卷 ２０ 年 ９ 第 ４ 第 ３ ０７ 月 卷 期 Ｊ ｕｎ ｌ ｆ ａｇｚ ｎｖｒ ｔ（ ｔ ｃ Ｅ ｉ ｇｉ ｃ Ｖ Ｓ ｐ ２０ 。 ｏ． ｏ ３ ｏｒａ ｏ ｎ ｔ Ｕ ｉ ｓ ｙＮａ Ｓｉ ｄｔ ｒ Ｓｉ ｅ． ０ ７ Ｖ １４Ｎ ． Ｙ ｅ ｅｉ ）Ａ
复 苏培 养时 ， 浸 过 ７ 酒精 的脱脂 棉 擦 拭 封存 有 冻 干粉 末状 肠 球 菌 的安 瓿 管 ， 安瓿 管 口端置 酒 用 ０／ ９ ６ 将
精灯 火焰 上烧 热 ， 立即滴 ｌ 无 菌冷水 于烧 热 的部位 将安 瓿 管顶 部炸 裂 ， 无 菌镊 子 敲下 口端 的玻璃 ， 滴 用 再
生 。２ ０ ￣２ ０ ０ ０ ０ ４年 ， 京 、 北等 地鸭 场先后 多 次爆发 该病 ， 北 湖 死亡 率均 高达 ４ 以上 ， 成 了严 重 的经 ０ 造
济损失 。本研 究对 上述 ２株 临床 分离 株和 ｌ 参考 菌株 的生物 学特 性进 行 了初步 探讨 。 株
鸭疫里氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析
鸭疫里氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析韩心语,邓建峰,张丽霞,刘倩,王颖,田文霞（山西农业大学动物医学学院，山西太谷030801）摘要:为调查鸭疫里氏杆菌对常用抗菌药物的敏感性，试验从广东和山东地区病鸭体内分离到10株病原菌，通过细菌形态观察、革兰氏染色、瑞氏染色和PCR 对菌株进行种属鉴定，并采用Kirby-Bauer 纸片法测定鸭疫里氏杆菌对15种常见抗菌药物的耐药性。
结果表明，分离到10株菌均为鸭疫里氏杆菌；10株菌均对茁-内酰胺类（阿莫西林、青霉素、氨苄西林）、氨基糖苷类（庆大霉素、链霉素、大观霉素、卡那霉素）和林可霉素类药物（林可霉素）的耐药率在50%以上，对大环内酯类（红霉素）耐药率较低，为10%；但分离菌株都对喹诺酮类（左旋氧氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星）、四环素类药物（四环素）、氯霉素类（氟苯尼考）和头孢噻呋钠高敏。
通过对鸭疫里氏杆菌的耐药性检测，其结果对当地鸭疫里氏杆菌病的临床用药具有一定的指导意义。
关键词:鸭疫里氏杆菌；分离；鉴定；Kirby-Bauer 纸片法；耐药性检测中图分类号:S858.32文献标识码:A文章编号:1002-2481（2021）05-0675-04Isolation ，Identification and Drug Resistance Analysis of Riemerella anatipestiferHAN Xinyu ，DENG Jianfeng ，ZHANG Lixia ，LIU Qian ，WANG Ying ，TIAN Wenxia（College of Veterinary Medicine ，Shanxi Agricultural University ，Taigu 030801，China ）Abst ract ：To investigate the susceptibility of Riemerella anatipestifer to commonly used antibacterial drugs,10strains of pathogens were isolated from diseased ducks in Guangdong and Shandong,and the strains had been identified by morphological observation,Gram staining,Swiss staining and PCR.The resistance of Riemerella anatipestifer to 15common antibacterial drugs were determined by Kirby-Bauer disc method.The results showed that the 10strains isolated were all Riemerella anatipestifer ,all 10strains were resistant to β-lactams （amoxicillin,penicillin,ampicillin ）,aminoglycosides （gentamicin,streptomycin,spectinomycin,kanamycin ）and lincomycin drugs （lincomycin ）,and the resistance rate was more than 50%,the resistance rate of macrolides （erythromycin ）was low,which was 10%.But the isolated strains were all highly sensitive to quinolone （levofloxacin,ciprofloxacin,enrofloxacin ）,tetracyclines （tetracycline ）,chloramphenicol （florfenicol ）and ceftiofur sodium.The detection results of drugs resistance of Riemerella anatipestifer had a certain guiding significance for clinical medication.Key words ：Riemerella anatipestifer ;isolation;identification;Kirby-Bauer disc method;drug resistance detection收稿日期:2020-12-24作者简介:韩心语（1995-），男，河北石家庄人，在读硕士，研究方向：动物疫病发生与免疫。
鸭源致病性大肠杆菌的分离与药敏试验
鸭源致病性大肠杆菌的分离与药敏试验作者：季峥嵘来源：《中国动物保健》2014年第05期摘要：对安徽省鸭场病死鸭的脑、肝脏、和脾脏和心脏进行分离培养，经革兰氏染色、生化试验、菌落研究，初步鉴定为大肠杆菌。
在致病性试验中，以3.0×108 CFU/mL剂量感染健康昆明小鼠，小白鼠在8～24 h内全部死亡。
药物敏感试验结果显示该鸭分离的菌株对链霉素、氯霉素、磺胺异恶唑、青霉素、红霉素、呋喃妥因、四环素、阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、阿莫西林、恩诺沙星、氟苯尼考和强力霉素已经产生了很强的耐药性,为提高临床合理用药提供科学依据。
关键词：鸭大肠杆菌；分离鉴定；药敏试验Abstract:Duck duck farming in Hubei province died of brain, liver, and spleen and heart were isolated and cultured by Gram staining, biochemical testing, colonies of initially identified as E. coli. In pathogenicity tests to infect healthy dose of 3.0 × 108 CFU/mL mouse, mice in all died within 8～24 h. Drug sensitivity tests revealed that the duck isolates to streptomycin, chloramphenicol, sulfonamides isoxazole, penicillin, erythromycin, nitrofurantoin, tetracycline, amikacin, gentamicin, kanamycin, A amoxicillin, enrofloxacin, florfenicol and doxycycline have produced a very strong resistance, to improve the scientific basis for rational clinical use of the drug.Key words: duck E.coli; isolation; susceptibility test近年来，随着我国养禽业的迅速发展，家禽饲养密度不断增加，集约化程度不断提高，引种、异地贩运日益频繁，大肠杆菌的交叉污染，给养禽业带了了严重的经济损失，是禽病调查中最常见报道的疾病及胴体废弃的主要原因。
鸭疫里氏杆菌分子生物学研究进展
摘 要 ： 疫里 氏杆 菌 （ ｉｍｅｅｌ ｎ ｔ ｅｔ ｒ Ｒ 感染 是 当前 严 重 危 害 养鸭 业 的 主要 传 染 病之 鸭 Ｒ ｅ ｒｌ ａ ａｉ ｓ ， Ａ） ａ ｐ ｉ
胶 内酶解 和 肽 质 量 指 纹 图 谱 分 析 ， ｗ１为 热 休 克 蛋 白 Ｈｓ２ ｐ ０家族成 员 ， 、 ３为转 座酶 ， Ｗ２ Ｗ 推测 它们 可 能与 里 氏杆 菌 的毒 力密 切相关 。
２ 耐药 相 关 因子 的研 究
细菌 耐药性 的产 生机 制分 为 自发性 基 因突 变 和 耐药基 因掺 人 ， 细菌 耐药基 因不 仅 由其 染色 体携 带 ， 还 常 由染 色体外 的质 粒 、 座子 （ｒｎ ｐ ｓｎ Ｔｎ 或 转 ｔａ ｓｏ ｏ ， ）
２ ３ 基 因 盒一 合 子 系 统 ． 整
蔡 秀磊口］ 用 Ｐ Ｒ技 术 对 鸭 疫里 氏杆 菌 浙 江 应 Ｃ 上研 究该 菌耐药 性产生 与传 播机 制 。整 合子 可变 区
扩增 得 到两 种 大 小 不 同基 因 盒 ， 长度 分 别 为 １ ０ ８ ４
ｂ （ｎ— 和 ２３ ２ｂ （ｎ— ） ＩＩ 中含 有 一 个 耐 ｐ ＩＩ Ａ） ５ ｐ ＩＩ 。 ｎ— Ｂ Ａ
白质与毒 力有关 ， 并且 证明 Ｖａ Ｄ１ 列仅 存 在于 含 ｐ 序 质 粒 的 Ｒ 菌 株 中 。Ｗｅ ｇ Ｓ Ｃ 等Ｌ 从 大 小 为 Ａ ｎ ４ ］
５ ６ｋ 的质粒 ｐ Ｆ ２中发 现一个 插 入 序列 元 件 Ｉ — ． ｂ Ｃ Ｃ Ｓ
Ｒ ｌ为 编码 毒 力 相关 类 蛋 白基 因， 且 为 首 次 在革 ａ， 并
动物源性肠球菌的研究进展
动物源性肠球菌的研究进展曾钰然;高原;潘振东【摘要】Research advance in a summary of the classification of enterococcus from animal source,biological charac-teristic,pathogenicity,epidemiology,laboratory diagnosis and drug resistance.% 综述了动物源性肠球菌的生物学特性，致病性，流行病学，实验室诊断和耐药性的研究进展。
【期刊名称】《内蒙古民族大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(000)003【总页数】3页(P310-312)【关键词】肠球菌;致病性;实验室诊断【作者】曾钰然;高原;潘振东【作者单位】内蒙古民族大学动物科技学院，内蒙古通辽 028043;内蒙古民族大学动物科技学院，内蒙古通辽 028043; 内蒙古高校毒物与动物疾病监控重点实验室培育基地，内蒙古通辽028043;通辽市科左中旗宝龙山动物防疫站，内蒙古宝龙山 029315【正文语种】中文【中图分类】S85肠球菌作为目前一种非常重要的条件性致病菌，多种动物都可以受到它的感染.肠球菌在人和动物之间可以水平传播〔1-2〕.研究者从猪、鸡、鸭、鹧鸪、羔羊和家蚕等多种动物体内均分离到了致病性的肠球菌.这给养殖业造成了严重的损失.能使动物致病的肠球菌的主要是粪肠球菌，坚强肠球菌和屎肠球菌也可感染动物.笔者对动物源性肠球菌的生物学特性、致病性、流行病学以及实验室诊断的研究进展进行了综述，为肠球菌的进一步研究奠定了基础.肠球菌的形状为椭圆形或者圆形，它是兼性厌氧性革兰氏阳性菌.在液体培养基中培养后，肠球菌呈链状或成对排列.肠球菌在血清培养基上培养良好，在脑浸肉汤培养基上培养成完整的圆形菌落且表面光滑.肠球菌对环境适应力强且要求较低.人类及动物肠道中的都普遍存在肠球菌，2002年，毒力岛首次由美国科学家报告在粪肠球菌内被发现.粪肠球菌的毒力岛中，某些基因具有产生蛋白质的功能，这种功能可以帮助肠球菌附着在表面上；还有一些基因可以能控制肠球菌产生毒素，它们可以帮助肠球菌侵入到细胞的内部.肠球菌在离开肠道后，由于这些基因的存在，使它的感染能力得到了增强.研究者发现，毒力岛的基因在猪源肠球菌与人源肠球菌中同源性极高.所以，他们认为肠球菌的毒力岛可以在动物与人之间可以水平转移.2004年有研究报告称，只有在宿主细胞存在的前提下，肠球菌才可以生长，并且在这种条件下溶细胞素才可以被生成.细菌表面有粘附素，肠球菌可以借助它被吸附到肠道、心脏细胞以及尿路上皮细胞.此外，肠球菌还能产生一种叫做“聚集物质”的毒素，这种“聚集物质”可以使粪肠球菌在机体外对肾小管上皮细胞的粘附作用得到增强.此外，有研究推测，肠球菌可以同时诱发细胞因子依赖纤维蛋白以及诱发血小板聚集，推测认为该机制与由肠球菌感染而导致心内膜炎的产生的致病机理有关.在国内，由于感染肠球菌而使动物致病的报道有公猪睾丸炎〔3〕；鸵鸟肺部及胸腔化脓〔4〕；鹑鸡败血症〔5〕；感染肠球菌而导致死鸡胚和弱死雏鸡〔6〕；羊羔脑炎〔7〕.此外，肠球菌引起牛前心包炎、狗尿道感染、鸡败血症及牛乳房炎等疾病的报道也引起人们的关注.在家禽中，鸭源肠球菌对鸡、鸭、火鸡、鹅、和鸽几种动物都具有易感性，在它们中鸡的敏感性最强.肠球菌可以使多种日龄的鸡患病.研究者从实验中得出鸭源肠球菌的人工感染潜伏期大概从1d至几周不等，该病在各个季节均容易爆发，易在一个地方流行或在多个地方爆发，该病的死亡率在0.5%-50%之间.感染途径为损伤的皮肤和粘膜伤口，也可经呼吸道和消化道传播.新生的家禽通过脐带而感染此病〔8〕.在猪的胃肠道中，猪肠球菌普遍存在，属正常菌群.研究者从病死猪的病料组织中共分离到了三种肠球菌（屎肠球菌、粪肠球菌和铅黄肠球菌），以小鼠为试验动物，这三种肠球菌都具有较高的致病能力〔9〕.在实验过程中，肠球菌的初选极易与链球菌混淆.实验中，除了通过显微镜来观察其属性以外，实验室最常采用链球菌选择培养基来进行肠球菌和链球菌的筛选，首先将培养物（待检菌新鲜培养物）接种至链球菌选择培养基上，置35℃温箱中培养，4h后观察结果，培养基（PH值：5.4-5.8）为阳性时颜色为黑色或者褐色〔10〕.1985 年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应（polymerase chain reaction PCR）.PCR方法通过DNA聚合酶扩增基因，该方法可以检测特异基因片断.PCR反应花费时间较少，简单而且方便，该方法是已被广泛应用于检测肠球菌.分子生物学鉴定方法是20世纪80年代生物学界鉴定细菌种属较常使用的方法，该方法在阐明亲缘关系和新菌种的发现中有中药的作用〔11〕.16SrDNA分析法通过PCR扩增基因序列、构建克隆文库、测定核酸序列等操作，样本的16S rDNA的序列信息从该病原微生物样本中获得，比对它与与基因数据库中的16SrDNA序列数据，进而确定其在系统进化树中的位置、评价该样本的遗传多态性及系统发生发育关系〔12〕.运用16SrRNA基因序列分析技术，不仅能准确地确定细菌的种属，而且还可以体现不同的细菌菌属之间的差异.目前，研究者们发现一种新的手段来获得细菌的基因型的信息，这种方法为长度多态性技术分析.过去十年中，肠球菌已经成为非常重要的人畜感染的病原体，人们对于肠球菌耐药性增加的关注越来越多，导致感染疾病的病原体越来越难以治疗.在世界范围内，动物饲料中添加抗生素药物作为生长促进剂已经越来越普遍.目前，粪肠球菌对万古霉素最敏感，对氨苄西林、庆大霉素、青霉素、利萘唑烷较敏感.但近年来，由于临床免疫抑制剂的广泛使用，以及对某些疾病的放射线和化学治疗，使粪肠球菌感染的机会增加，对糖苷类（如万古霉素）的耐药性也在逐年增加，甚至出现了耐万古霉素粪肠球菌〔13〕，成为医院院内感染的重要病原菌之一.多重耐药肠球菌的出现是一个值得关注的动物健康问题.肠球菌的耐受性比较强，但对它的这种机制目前了解较少，包括对抗生素的使用.脂肽类抗生素允许用于治疗革兰氏阳性细菌感染，包括由于肠球菌引起的感染.推出以来，已报道过抗达托霉素的粪肠球菌菌株和屎肠球菌菌株，但十分罕见.研究者描述了基因突变随着耐达托霉素粪肠球菌的存在而增加〔14〕.研究结果表明，不同的遗传变化贯穿整个跃迁、转换和删除碱基的过程.齐亚〔7〕银等采集病死羊的组织，并对该病料依次进行了病原菌的分离培养、生化鉴定、血清学鉴定，最后进行动物回归实验，最终确定是由粪肠球菌导致的疾病的产生；韩红梅等在随后也用相同方法对4株鸭源性肠球菌进行了鉴定；杨霞〔15〕等对12株疑似猪源肠球菌的菌株采用肠球菌的16SrDNA基因的序列分析、构建系统进化树的等方法进行研究，快速鉴定了猪肠球菌及猪链球菌；程金平〔16〕等从来自河南省一些地区的病猪体内分离到了11株菌株，这些菌株被疑似为肠球菌.通过提取细菌菌种的基因组，对其16SrRNA基因进行PCR扩增，克隆过程完成后进行序列分析，进而与GenBank上已经注册的一些肠球菌菌株以及肠球菌的标准菌株的16SrRNA基因序列进行序列比对，然后绘制系统发育树，最终对所分离的菌株进行鉴定.11株分离的菌株中有4株最终被鉴定是粪肠球菌（E.faecalis），7株为屎肠球菌（E.faecium）.吴艳艳〔17〕等分离培养了一些蜜蜂幼虫，它们患有欧洲幼虫腐臭病，分离后获得1株未知菌株.从形态学、分离培养特性、生理生化特性和分子生物学等方面对该未知菌株进行了鉴定，得知该菌株为粪肠球菌，它是欧洲幼虫腐臭病的次生菌，属于肠球菌属，并暂定名为Enterococcus faecalis FB102.鲁兴萌〔18〕等从三种家蚕（感染细菌性肠道病家蚕、感染微粒子病家蚕、健康家蚕）的消化道内分离到了200株肠球菌，并进行了一些实验数据分析.粪肠球菌是动物致病性肠球菌感染的首要细菌.目前检测粪肠球菌应用最多、最可靠的检测方法是16SrRNA基因序列分析技术.粪肠球菌靠菌体分泌的黏附素吸附于靶细胞表面，聚集物质可增强这种作用；溶血素可增加感染程度，引发败血症.粪肠球菌敏感药物万古霉素产生耐药性，而成为感染的重要病原菌.对于肠球菌的鉴定的过程及结论均可证明肠球菌极易感染动物，所以对动物源性肠球菌的研究十分必要.〔1〕程金平.感染猪的肠球菌的生物学特性研究〔D〕.郑州:河南农业大学,2009. 〔2〕李光辉，张婴元.肠球菌感染研究进展〔J〕.国外医学内科学分册.1999,26.（11）.471-474.〔3〕张文东,王永贤,张应国，等.公猪睾丸炎肠球菌的分离与鉴定〔J〕.云南畜牧兽医,1998（3）:18.〔4〕单松华,谢爱织.进口鸵鸟的粪肠球菌的分离与鉴定〔J〕.上海农业学报,1998,14（1）:87-89.〔5〕唐正安,张乃芬,胡燕，等.鹌鸡肠球菌引起败血症3例〔J〕.云南医药,2002,23（5）:426.〔6〕尹崇,乌尼.鸡源肠球菌的分离与鉴定〔J〕.湖南畜牧兽医,1999,（2）:6-7. 〔7〕齐亚银.致羔羊脑炎肠球菌的分离鉴定及部分生物学特性研究〔D〕,石河子:新疆石河子大学,2005.〔8〕韩梅红.鸭源肠球菌的致病性和致病机制的研究〔D〕.武汉:华中农业大学,2006.〔9〕王亚宾,张红英,陈丽颖，等.临床感染猪肠球菌菌株的分离与鉴定〔J〕.河南农业大学学报,2008（42）5:528-531.〔10〕潘跃顺.赵克义.肠球菌的试验室诊断技术近况〔J〕.预防医学文献信息,2001（7）1:46-48.〔11〕都立辉,刘芳.16SrRNA基因在细菌菌种鉴定中的应用〔J〕.乳业科学与技术,2006,21（5）:207-209.〔12〕Brosius J,Dull T J,Sleeter D D,et al.Gene organization and primary structure of a ribosomal RNA operon Escherichia coli〔J〕.J MolBiol,1981,148（2）:107-127.〔13〕史宇翔,李宁.肠球菌的耐药性与耐药机制研究现状〔J〕.中国药师,2008,11（7）:850-852.〔14〕Palmer K L,Daniel A,Hardy C,et al.Genetic Diversity among Enterococcus faecalis〔J〕.Antimicrob Agents Chemother. 2011，55（7）:3345-56.〔15〕杨霞.致病性猪源肠球菌16S rDNA-RFLP研究及系统进化分析〔J〕.中国兽医学报,2010（30）3:332-336.〔16〕程金平.应用16S rRNA基因序列分析鉴定猪源肠球菌〔J〕.江西农业学报,2008,（11）20:1-4.〔17〕吴艳艳.蜜蜂幼虫粪肠球菌的分离与鉴定〔J〕.微生物通报,2010（10）37:1486-1490.〔18〕费晨.家蚕肠球菌16S rDNA序列及生化特性分析〔D〕.杨凌:西北农林科技大学.2006.。
两株不同疾病型鸭呼肠孤病毒部分生物学特性的比较
两株不同疾病型鸭呼肠孤病毒部分生物学特性的比较陈仕龙;陈少莺;林锋强;王劭;程晓霞;朱小丽;李兆龙;王锦祥【摘要】通过电镜观察、血清交叉中和试验、病毒的细胞病变特征、病毒基因组特征及S3蛋白基因分析等方法,比较2株不同疾病型鸭源呼肠孤病毒的生物学及基因组特性差异.染毒细胞的超薄切片观察结果表明,2种病毒为球形,直径约70 nm,新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)在胞浆中呈晶格状分布,而番鸭呼肠孤病毒(MDRV)呈零星、散在分布；MDRV和NDRV之间的相关系数R值很小,抗原相关性较低；NDRV的细胞病变类型以巨融合为主,而MDRV则以细胞圆缩、坏死为主；经尿囊腔接种,NDRV能致死鸡胚,而MDRV不能致死鸡胚.MDRV及NDRV的S基因片段的迁移率明显不同；两者S3基因处在不同的进化分支.结果初步表明不同疾病型的水禽呼肠孤病毒MDRV和NDRV的生物学特性有较大差异.%Muscovy duck reovirus (MDRV) and Novel duck reovirus (NDRV), which belong to Orthoreovirus, are important pathogens of waterfowl. This study was conducted to compare the biological characteristics of MDRV and NDRV. Several methods were undertaken such as ultrathin sections observation, cross virus-neutralization test, the pathogenicity to avian embryos and cell lines, comparison of genome segment profiles and the characteristics analysis of S3 gene. The results of ultrathin sections observation showed that MDRV and NDRV viral particles were spherical and the diameter was both about 70 nm. MDRV scattered in MDEF cytoplasm, whereas NDRV particles arranged in crystal lattice. Relatedness (R) values showed that the antigen of the two viruses were generally different. MDRV's CPE feature was cell rounding, while which of NDRV was cell fusion. NDRV induced thedeath of 9-day-old chicken embryos, whereas MDRV did not. The migration profiles of NDRV and MDRV genome segments were different. The S3 genes of the two viruses were at different branches of molecular phylogenetic tree. In conclusion, the biological characteristics of MDRVand NDRV were obviously different.【期刊名称】《福建农业学报》【年(卷),期】2013(028)001【总页数】4页(P1-4)【关键词】番鸭呼肠孤病毒;新型鸭呼肠孤病毒;生物学特性【作者】陈仕龙;陈少莺;林锋强;王劭;程晓霞;朱小丽;李兆龙;王锦祥【作者单位】福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建福州 350013;福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福建福州 350013【正文语种】中文【中图分类】S852近年来，我国水禽的呼肠孤病毒感染不断发生。
不同地区鸭疫里氏杆菌的分离鉴定与药敏试验
不同地区鸭疫里氏杆菌的分离鉴定与药敏试验雍燕;刘国昌;方炳虎;乔妍红【摘要】In order to understand the prevalence of the duck infectious serositis in different re-gions,and further to determine the sensitivity of the commonly used drugs for the Riemerella anatipestifer in thesearea.Bacteria were isolated from suspected infected ducks in Yunfu,and Kaiping in Guangdong province and Changshan in Zhejiang province.The isolated bacteria were identified by differential culture,microscopic examination and biochemical test.Micro dilution method was carried out in drug sensitivity test,and the MIC values of the isolated strains to the commonly used drugs were determined.As a result,a total of 16 strains of Riemerella anatipes-tifer were isolated and identified from threeareas.Data of the MIC showed that all isolates were highly sensitive to cephalosporins and florfenicol;Doxycycline andspectinomycin were sensitive too,but enrofloxacin,neomycin and other tested drugs showed different degrees of resistance. The present study provided a systematic method for the isolation and identification of the Rieme-rella anatipestifer and for the drug sensitivity test.At the same time,it also provided theoretical guidance for the rational drug control of the duck infectious serositis.%为了解不同地区鸭疫里氏杆菌病的流行情况，并进一步测定这些地区鸭疫里氏杆菌对常用抗菌药物的敏感性。
鸭源肠球菌的致病性试验
ｉ ｄ ｃ ｔ ｄｔ ａ ｎ ｅ ｏ ｏ ｅ ｓｓ ａｎ ａ ｒｅ ｔ ｃ ｎ ａ ｓ ｓ ｕ ａ ｇ ｎ ｅ ｔ ． ｎ ｉａ ｅ ｔ ｔ ｒｏ ｏ ｕ ｔ ｉ ｓ ｎ ｉ ｆｃ ｅａ ｄ ｃ ｕ ｅ ｔ ｓ ｅ ｄ ｍａ ｅ ａ ｄ ｄ ａｈ ｈ ｅ ｒ ｃ ｉ ｍｉ ｉ
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2017—2023_年安徽砀山鸭疫里氏杆菌的血清型与耐药性分析
杆菌病的防控提供了依据。
关键词： 鸭疫里氏杆菌； 血清型； 抗生素耐药； 耐药基因
中图分类号： Ｓ８５８ ３２ 文献标志码： Ａ 文章编号： ０５２９－５１３０（２０２４）０５－０１１３－０６
ｔａｘｉｍｅ ｗａｓ ｑｕｉｔｅ ｌｏｗ （８ ５％） ， ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｒａｔｅ ｔｏ ｉｍｉｐｅｎｅｍ ｗａｓ ０． Ｆｒｏｍ ２０１７ ｔｏ ２０２３， ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ １２０ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｒｉ⁃
ｅｍｅｒｅｌｌａ ａｎａｔｉｐｅｓｔｉｆｅｒ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｄｕｃｋｓ ｉｎ Ｄａｎｇｓｈａｎ ｔｏ ｔｒｉｍｅｔｈｏｐｒｉｍ， ｋａｎａｍｙｃｉｎ， ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ， ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ， ｅｎｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ， ｆｌｏｒｆｅｎｉｃｏｌ ａｎｄ
细菌分离， 共分离 出 １２０ 株 疑 似 ＲＡ 分 离 株， 其 中
２０１７ 年 ３ 株， ２０１８ 年 ２６ 株， ２０１９ 年 ２８ 株， ２０２０ 年
２０ 株， ２０２１ 年 １８ 株， ２０２２ 年 ２１ 株， ２０２３ 年 ４ 株。
１ ２ 主要试剂
ＲＡ 参考阳性血清购自齐鲁动物保健品有限公司
１ ７ 耐药基因对比分析
克林生化科技有限公司。
将疑似 ＲＡ 分离株接种于含 １０％ 牛血清的 ＴＳＡ
希望组生物科技有限公司进行全基因组测序与拼接。
使用 ＲＡＳＴ 进行线上基因注释， 使用 Ａｂｒｉｃａｔｅ 软
上， 置于 ５％ ＣＯ ２ ３７ ℃ 恒温培养箱中培养 ２４ ｈ。 从每
2株鸭源肠球菌对小白鼠的致病性
2株鸭源肠球菌对小白鼠的致病性韩梅红;谷长勤【摘要】以临床分离得到的2株鸭(Anas domestica)源肠球菌(Enteroco ccas)分别接种小白鼠,观察感染后小白鼠的主要临床症状和病变特点,测定感染小白鼠的发病率、死亡率及半数致死量,并制作切片,光镜下观察各组织病变,以探讨这2个菌株对小白鼠的致病性.结果表明,2株肠球菌均能造成小白鼠发病,其中北京株致病性较强.该病原主要侵害小白鼠肝脏、脾脏和肾脏,最明显的病变特征为脾肿大、淤血,镜下见脾脏淋巴细胞明显减少、脾巨细胞增多、脾小体萎缩等;肝脏淤血、出血,甚至坏死,镜下见肝窦状隙扩张,聚集有细菌团块或淋巴细胞,窦上皮细胞肿胀;肾间质血管淤血,肾小管上皮细胞变性、坏死以及肾小管的蛋白管型等.揭示肠球菌可引起小鼠感染发病并导致组织病变而死亡.【期刊名称】《长江大学学报（自科版）农学卷》【年(卷),期】2009(006)001【总页数】3页(P30-32)【关键词】肠球菌(Enteroco ccas);鸭(Anas domestica);小白鼠;致病性【作者】韩梅红;谷长勤【作者单位】长江大学动物科学学院,湖北,荆州,434025;华中农业大学动物医学院,湖北,武汉,430070【正文语种】中文【中图分类】S852.61+1家禽的急性肠球菌(原属于链球菌属D群)感染最初见于1902年Moore等报道的鸡类中风样败血症，1932年Vaillancourt等首次报道火鸡的链球菌病，1927年Katanbaf 等首次报告与链球菌有关的细菌性或赘生性心内膜炎[1]。
禽类链球菌感染虽不常见，但却呈世界范围分布[2,3]。
该病引起的急、慢性感染造成的损失可达50%。
该病急性感染时，主要造成全身败血性变化，并以发病快、死亡率高为特点[2,3]。
目前国内外尚未见肠球菌感染小白鼠的病理学研究的详细报道。
本研究初步探讨了肠球菌(Enteroco ccas)对小白鼠的致病性和病变特点，以期为全面认识鸭(Anas domestica)源链球菌的致病机理提供可借鉴的资料。
重组双基因鸭源大肠杆菌菌蜕的制备
重组双基因鸭源大肠杆菌菌蜕的制备彭凌;杨旭夫【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2018(34)7【摘要】目的利用裂解E基因和葡萄球菌核酸酶A(SN)基因的表达,制备鸭源大肠杆菌(E coli)菌蜕.方法通过将带有裂解E基因和葡萄球菌核酸酶A(SN)基因的质粒pET29a-E-S转化至鸭源E coli O92中,对E coli O92(pET29a-E-S)进行诱导,每隔30 min检测菌液的OD600值,并检测培养液中所含DNA.结果通过诱导,E coli O92(pET29a-E-S)OD600值在诱导90 min后开始持续下降,180 min时开始趋于平稳,到360 min溶菌效率达99.999％.并且葡萄球菌核酸酶把DNA降解为50～400 bp的小片断.结论通过裂解E基因和SN基因表达,成功制备了E coli O92菌蜕,本实验为进一步研究该菌蜕疫苗奠定了基础.【总页数】4页(P639-642)【作者】彭凌;杨旭夫【作者单位】韶关学院英东生命科学学院,韶关 512005;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所韶关学院动物疫病诊断中心联合实验室,韶关 512005;韶关学院英东生命科学学院,韶关 512005;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所韶关学院动物疫病诊断中心联合实验室,韶关 512005【正文语种】中文【中图分类】S852.61【相关文献】1.鸭源致病性大肠杆菌Ⅰ型菌毛pilA基因的原核表达及重组蛋白对强毒攻击的免疫保护作用 [J], 程安春;于小娜;汪铭书;朱德康;李玲;孙磊;陈孝跃2.猪源致病性大肠杆菌菌蜕的制备 [J], 王姣姣;张伟;陈龙;钱爱东;单晓枫3.鸭源大肠杆菌O78菌蜕的制备及免疫原性研究 [J], 吕敏娜;覃宗华;余劲术;袁建丰;孙铭飞;吴彩艳;蔡建平4.鸭源沙门氏菌与鸭源大肠杆菌融合菌株SD5免疫原性研究 [J], 胡欣;蒋文灿;杨丽红;姜洋;李鑫;曾晓慧5.鸭致病性大肠埃希菌的分离鉴定与毒力基因检测及菌蜕制备 [J], 袁橙; 郭长明; 张步彩; 左伟勇; 唐晨晨; 蔺辉星因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
安徽省某鸭场鸭疫里氏杆菌的分离鉴定
安徽省某鸭场鸭疫里氏杆菌的分离鉴定谢玉洁;李刚;李铁;吴雨寒;奚晓莉;吴翠娟【期刊名称】《中国动物保健》【年(卷),期】2009(011)009【摘要】对安徽省某鸭场病鸭的临床症状及剖检病变进行分析和细菌分离,并对分离的细菌进行形态培养、PCR检测和克隆测序,初步鉴定疑似为鸭疫里氏杆菌的有2株,分别命名为AH-1和AH-2,同时将测序结果与GenBank上公布的序列AY606207进行比对,结果发现AH-1和AH-2与其同源性分别为97.0%和100.0%.给健康鸭注射该分离菌可复制出心包炎、肝周炎、气囊炎等典型病理变化并引起死亡.药敏试验结果表明,这2株分离菌对头孢唑林、阿莫西林、氟苯尼考、氨苄青霉素高度敏感,对罗红霉素、利福平中度敏感,对庆大霉素、丁胺卡那、红霉素、氧氟沙星、强力霉素不敏感,对链霉素、恩诺沙星、环丙沙星完全耐药.【总页数】4页(P43-46)【作者】谢玉洁;李刚;李铁;吴雨寒;奚晓莉;吴翠娟【作者单位】中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,动物营养学国家重点实验室,北京,100193;合肥中大生物技术发展有限公司,安徽,合肥,230088;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,动物营养学国家重点实验室,北京,100193;合肥中大生物技术发展有限公司,安徽,合肥,230088;合肥中大生物技术发展有限公司,安徽,合肥,230088;合肥中大生物技术发展有限公司,安徽,合肥,230088;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,动物营养学国家重点实验室,北京,100193;安徽农业大学动物科技学院,安徽,合肥,230036【正文语种】中文【中图分类】S858.325.1【相关文献】1.规模化鸭场的鸭疫里氏杆菌病的防制措施 [J], 吴芳2.某番鸭场发生鸭疫里氏杆菌病的诊治 [J], 吴峻华3.安徽省部分地区鸭疫里氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究 [J], 李春芬;李郁;魏建忠;张小飞;黄显明;廖俊伟4.一株鹅源鸭疫里氏杆菌的分离鉴定及药敏试验 [J], 杨殿江;蒲龄;向小英;李培珍;徐景峨;张亚楠;陶宇航;韩雪;杨莉5.鸭疫里氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析 [J], 韩心语;邓建峰;张丽霞;刘倩;王颖;田文霞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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[收稿日期]2007-06-28[第一作者简介]韩梅红(1979),女,河南汝州市人,农学硕士,助教,主要从事免疫病理学方向研究.2株鸭源肠球菌的生物学特性的观察韩梅红 (长江大学动物科学学院,湖北荆州434025) 谷长勤(华中农业大学动物医学院,湖北武汉430070)[摘要]对2株鸭源肠球菌临床分离株和1株粪肠球菌参考菌株的形态特征、培养特性、生理生化特性、对药物的敏感性等生物学特性进行了初步研究。
结果表明,3个被检菌株在光学显微镜下呈球形、革兰氏阳性染色和链状排列方式,能在10e 、45e 和6.5%NaCl 肉汤等条件下生长,能耐热60e 30min,其特性均符合肠球菌属的特征,各菌株生化反应特性均与粪肠球菌特性基本一致,3个菌株均可鉴定为粪肠球菌。
药敏试验结果表明,3个菌株均对青霉素、万古霉素、庆大霉素、红霉素和氯霉素敏感而对四环素耐药。
[关键词]鸭;肠球菌(Enter ococcus );生物学特性[中图分类号]Q852161+1;S858132[文献标识码]A [文章编号]1673-1409(2007)03-S051-03鸭的肠球菌(原属于链球菌属D 群)病是由肠球菌感染引起的小鸭的一种急性或慢性细菌性疾病,在世界各地呈散发性发生[1]。
近几年来,随着集约化养禽业的发展,该病在我国部分地区的爆发时有发生[2,3]。
2000~2004年,北京、湖北等地鸭场先后多次爆发该病,死亡率均高达40%以上,造成了严重的经济损失。
本研究对上述2株临床分离株和1株参考菌株的生物学特性进行了初步探讨。
1 材料与方法1.1 材料与主要试剂鸭源肠球菌临床分离株郑3株和北京株,由湖北省农业科学院畜牧兽医研究所提供,分离于自然感染发病濒死期和已死亡鸭的肝脏、心腔血和脑组织液;参考菌株1927(C55614)粪肠球菌,购自中国兽医药品监察所;药敏试验质控菌株AT CC25923,购自中国药品生物制品鉴定所;细菌微量生化鉴定管和抗菌药物药敏纸片均购自杭州微生物试剂有限公司;胰蛋白胨(Try ptone)为OXOID 产品,批号324075。
1.2 培养基配制马丁琼脂培养基、血清马丁肉汤、色素生成试验专用培养基和半固体琼脂等培养基常规配置[4,5];TH B(T odd -H ew itt Broth)培养基按文献[6]方法配制;水解酪蛋白琼脂培养基,购自中国药品生物制品鉴定所,批号20040112,按产品说明配制。
1.3 细菌的复苏与纯化复苏培养时,用浸过70%酒精的脱脂棉擦拭封存有冻干粉末状肠球菌的安瓿管,将安瓿管口端置酒精灯火焰上烧热,立即滴1滴无菌冷水于烧热的部位将安瓿管顶部炸裂,用无菌镊子敲下口端的玻璃,再用无菌吸管吸取适量灭菌生理盐水注入安瓿管内,轻摇以溶解菌块,然后在无菌条件下用接种环挑取菌体悬浮液划线接种于含5%绵羊血的TH B 琼脂培养基上,37e 恒温培养24h 。
剩余的菌液分别注入2管含10%兔血清的T H B 培养基中,37e 恒温培养18~24h 。
各菌株复苏培养24h 后,在TH B 血琼脂培养基上传代培养2~3次,每次均挑取单个典型菌落革兰氏染色、镜检并接种于下一代培养基,最后将纯化的细菌接种于T H B 液体培养基,37e 恒温培养18~24h,置4e 冰箱备用。
1.4 培养特性及细菌形态观察无菌挑取纯化的菌液分别接种于TH B 血琼脂平板、马丁琼脂平板、T H B 、血清马丁肉汤等培养基,37#51#长江大学学报(自科版)农学卷 2007年9月第4卷第3期Journal of Y angtze University(Nat Sci Edit)Ag ri Sci V Sep 12007,V o l 14N o 13e 恒温培养18~24h,观察细菌生长情况及菌落特征。
挑取肉汤培养物及平板上单菌落涂抹于洁净玻片上,常规方法作革兰氏染色,光学显微镜下观察细菌形态和染色特征。
1.5 生理生化特性观察(1)耐热试验 分别进行10e 、45e 和60e 耐热试验,按照文献[5]方法进行。
(2)生化鉴定 分别用3个菌株的18h T H B 培养物接种甘露醇、山梨醇、阿拉伯糖、蔗糖、棉子糖、山梨糖、乳糖、精氨酸脱羧酶、丙酮酸盐、胆汁七叶苷、6.5%NaCl 肉汤、pH 9.6葡萄糖肉汤等12种细菌微量生化鉴定管,按文献[5]的方法培养及判断结果。
(3)动力试验 采用半固体穿刺法,按照文献[5]方法进行。
(4)色素生成试验 检测非荧光色素生成情况,按照文献[5]方法进行。
1.6 药敏试验K-B 纸片扩散法检测被检菌株对青霉素、庆大霉素、链霉素、万古霉素、红霉素、环丙沙星、左氟沙星、氯霉素、利福平、四环素等10种抗菌药物的敏感性,操作方法、质量控制及结果判定均依据美国临床试验标准研究所CLSI/NCCLS 制定的最新规则及标准进行[7]。
2 结果与分析2.1 细菌形态及培养特性3个被检菌株在光镜下均为革兰氏阳性小球菌,单个、成对或呈链状排列,链的长短不一,形状各异,有直链、/S 0型或/人0型排列;3个菌株在TH B 血琼脂平板、马丁琼脂平板上均长出灰白色、半透明、表面光滑、边缘整齐、圆形微凸、粘稠不易挑起的小菌落,其中参考株菌落小如针尖,郑3株菌落稍大,北京株呈直径约1.2mm 的露滴状菌落;3个菌株在T H B 血琼脂平板上均不溶血;在血清马丁肉汤和T H B 中均能生长,表现为肉汤轻度浑浊,试管底部有白色絮状沉淀,不生成菌环、菌膜。
2.2 生理生化鉴定表1 3株鸭源肠球菌不同菌株生理生化反应结果Table 1 The biochemical identification results of 3strai ns ofEntero cocc us isolated from ducks 试验项目郑3北京参考试验项目郑3北京参考甘露醇+v +胆汁七叶苷+++山梨醇--+色素---阿拉伯糖---动力---蔗糖+++10e 生长+++棉子糖---45e 生长+++山梨糖---耐热60e 30min +++乳糖+++ 6.5%N aCl 肉汤+++精氨酸脱羧酶+++pH 9.6葡萄糖肉汤+-+丙酮酸盐+++注:/+0表示阳性反应;/-0表示阴性反应;/v 0表示结果不确定。
3个菌株的生理生化鉴定结果详见表1。
根据文献[5]的鉴定标准,这3株细菌均应鉴定为粪肠球菌。
2.3 药敏试验3个被检菌株对10种抗菌药物的敏感性结果详见表2。
由表2可知,3个菌株对不同抗菌药物有不同程度的敏感性。
其中,3个菌株均对青霉素、万古霉素、庆大霉素、氯霉素和红霉素高度敏感,而对四环素耐药,郑3株和北京株对环丙沙星中度敏感。
郑3珠对链霉素,参考株对链霉素、四环素和环丙沙星均不产生抑菌环。
表2 3株鸭源肠球菌不同菌株对药物的敏感性Table 2 The antibiotics sensiti vity of 3strains of Entero coc cus isolated from ducks菌株抑菌圈直径/mm青霉素万古霉素链霉素庆大霉素四环素氯霉素红霉素左氟沙星利福平环丙沙星郑330.25S 21.50S -31.67S 5.00R 31.17S 35.50S 22.75S 36.00S 20.25I 北京37.17S 19.17S 27.33S32.75S 8.75R27.50S 34.00S 0.50R 35.00S 19.10I参考25.00S18.00S-16.00S-26.00S31.00S22.50S14.00R-注:/S 0表示高度敏感;/I 0表示中度敏感;/R 0表示耐药;/-0表示无抑菌环产生。
#52# 长江大学学报(自科版)农学卷2007年9月3 小结与讨论根据被检菌株在光学显微镜下呈球形、革兰氏阳性染色和链状排列方式,以及能在10e 、45e 、60e (30min)和6.5%NaCl 肉汤等条件下生长的特性,可初步判定为肠球菌群[5,8]。
3个菌株的生化特性与粪肠球菌生化特性基本一致,因此可鉴定为粪肠球菌[5]。
但3个菌株对山梨醇的反应结果不一致,郑3株和北京株反应为阴性;北京株不能在pH 9.6的葡萄糖肉汤中生长;这些都不符合文献报道的判定标准[5,8]。
另外,北京株甘露醇反应多次试验结果不一致,因而不能确定其反应特性。
对于这些例外情况,笔者认为可能有以下3个方面的原因:第一,在体外人工培养条件下,由于受多种因素的影响,细菌的生物学特性可能会发生改变;第二,可能是由细菌变异引起的,王亚宾等[9]从发病鸡体内分离出2株粪肠球菌,其生化特性也表现为山梨醇反应阴性;第三,肠球菌的某些生化特性本身是不能确定的,郁庆福[8]报道粪肠球菌的山梨醇反应为阴性,而东秀珠等[5]则认为该反应为阳性。
因此,笔者认为在对临床分离的细菌进行鉴定时,不能仅仅依靠生化鉴定的结果,还应结合细菌的形态、培养特性、对药物的敏感性等生物学特性综合考虑,必要时还应结合分子生物学方法进行鉴定。
综合3个菌株的药敏试验结果,建议临床上考虑使用青霉素、万古霉素、庆大霉素和红霉素单独或联合治疗,少用或不用四环素治疗鸭的肠球菌病;氯霉素、左氟沙星和利福平也可考虑,但氯霉素毒副作用较大,不宜常规应用。
临床上最好先进行药敏试验,然后根据分离株的耐药特点来选择相应的治疗方案。
[参考文献][1][美]西格芒德O H (攀 璞,李承开,陈昭弈,等译).默克氏兽医手册[M ].南昌:江西人民出版社,1984.563.[2]陈一资,蒋文灿,胡 滨.对鸭场爆发罕见的粪链球菌的研究[J ].中国兽医学报,2003,23(4):324~325.[3]吴信明,苗立中,李峰,等.商品肉鸭链球菌病的诊治[J].中国家禽,2003,25(20):14.[4]朱立平,陈学清.免疫学常用实验方法[M ].北京:人民军医出版社,2000.10~16.[5]东秀珠,蔡妙英.常见细菌系统鉴定手册[M ].北京:科学出版社,2001.244~258.[6]方绍庆,陆承平.猪链球菌2型江苏分离株溶血素的纯化[J ].中国预防兽医学报,2003,(5):44~46.[7]闻玉梅.美国微生物学会会讯摘要[J].国外医学微生物分册,2001,24:40.[8]郁庆福.现代卫生微生物学[M ].北京:人民卫生出版社,1995.161~170.[9]王亚宾,陈丽颖,王自振,等.鸡链球菌病病原分群鉴定[J].河南农业大学学报,2001,35(4):381~382.#53#第4卷第3期韩梅红等:2株鸭源肠球菌的生物学特性的观察Abstract:Different media w ere used to asses t he pollen viability of lily.T he results show ed t hat the germination rate w as only4.7%on t he medium added w ith no chem-i cals,and as high as79.7%on the medium added w ith10%sucrose,100mg#L-1Boricacid and0.02mg#L-1Zn2+.T he storag e environment affecting the pollen vitalit y w erealso evaluated.It indicated t hat t he pollen grain stored in cold and dry environment couldkeep the pollen vitality long er.Key words:L ilium long if lor um;germination rate;storage;pollen;viability037Comparative Study on Water Use Efficiency of4Bermudagrass VarietiesFEI Yong-jun,LI AO Qi-rong,ZENG Xua n Colleg e of H ortic ultur e and Gar dening,Yang tz e Univ er sity,Jing z hou,H u bei434025,ChinaAbstract:The net photosynthesis rates and transpiration rates of4bermudagrass varie-ties(Jackpot,Common,040459/680and Xinnong No.1)plant ed on vegetation concrete condition w ere measured.T heir w ater use efficiencies(W UE)w ere calculat ed.T he re-sult s indicated that the difference level of photosynthesis w ere higher than those of tran-spiration rate and w ater use eff iciency;The w ater use ef ficiency of4bermudagrass varie-ties from high to low w as:Common(3.69),040459/680(3.56),Jackpot(3.31),Xin nong N o.1(3.16);There w ere remarkable correlation among the net photosynthesis rate,the t ranspiration rate and w ater use efficiency of4bermudagrass varieties.Key words:Cy nodon dacty lon L.;net photosynthesis rate;t ranspiration rate;w at er use efficiency040Study on the Testing of Seed Viability of Leersia hexandra with Triphenyl Ttetrazolium Chloride MethodZHU Gui-cai Colle ge of L if e Science s,S un Yatsen Univ er sity,Guang z hou,Guang d ong510275,China;Colle ge of H or ticultu re and Gar de ning,Yang tz e Univ er sity,J ing z hou,H ubei434025,ChinaYAO Zhe n,LUO Chen-mei ZHOU We n-lin Colleg e of H orticu ltur e and Gard ening,Yangtz e Univ er sity, J ing z hou,H ube i434025,ChinaYANG Zho ng-yi(Colle ge of L if e S cience s,S un Yatsen Univ ersity,Guang z hou,G uang dong510275,China)Abstract:In order to research t he conditions of determining seed viability of L eer sia hex andra w ith T T C(triphenyl tetrazolium chloride)met hod,the seed viability of L eer-sia hex andra w as determined under t he conditions of different temperature(25e,30eand35e)and TT C concent ration(0.5%and1.0%)during the period of diff erent dye-ing time(0~48h).T he results show ed t hat under t he conditions of the temperature of 35e,t he TT C concentrat ion of0.5%and at the dy eing time of30h,the dyeing eff ect w as best.T hey could be t he most appropriat e condit ion t o determine L eersia hex andra seed viability.Key words:L eer sia hex andra;seed viabilit y;triphenyl tet razolium chloride042Research on Appraisal Method for Economic Value of Gardening Trees in C ourtyardGAO H ua n-zhang,HUANG Gua ng-y ua n Colle ge of H orticultur e and Gar dening,Yang tz e Univ er sity,J ing z hou,H u bei434025,Ch inaCHENG Shu-bing(Bur eau of L and sc ape A rch itecture of J in gz hou City,Jing z hou,H ube i434100,China)GE NG Hong-we i(B ure au of L andscap e A rchitecture of H ong.an County,H ong.an,H ubei436100,China)Abstract:According t o t he most popular guide for plant appraisal-N ort h American CT-LA2000and the present status of int ernal research,research on arbor and shrub on w estern campus of Yangt ze Universit y has w as done.It s total economic value has been evaluat ed by measuring the quant itat ive guide line of grow th,surveying the market price of corresponding species,analyzing influencing factors of economic value and adjust ing t he w eighed coefficient of influencing fact ors.The result s show ed t hat the application process w as simple,rapid,highly practical,and is suitable for t he act ual situation of the current g ardening trees.economic value.Key words:gardening trees;value appraisal;Yang tze U niversity051Identification and Virulence of Two Enterococcus Strains Isolated from Ducks HAN Me i-hong(Colle ge of A nimal S cience,Yang tze Univ ersity,J ingz hou,H u bei434025,China)GU Cha ng-qin(College of A nimal M ed icine,H u azh ong A gr icu ltur al Univ er sity,W uhan,H ube i430070,China)Abstract:T he morphological,cultural characters,biochemistry characters of tw o E n-#Ô#terococcus strains isolated from dying ducks and one reference strain of E.f acial s w ere studied and the sensitivity to 10antimicrobic agents w ere evaluated to identify the iso -lates.Results show ed that the bacteria shared t he follow ing characteristics:g ram -pos-i tive cocci,arrayed by chain,survival 10e ,45e and 6.5%NaCl brot h,f ermentation of sucrose and other biochemistry characters.M ost of t hese biological charact ers corre -spond w ith E.f acials .Additionally,the result s of drug sensitivity t est indicat ed that t he sensitive extent of different strains to the antimicrobial agents varied obviously.In conclusion,all the three strains w ere sensit ive to penicillin,vancomy cin and g ent amy -cin,but resist ant to tet racycline.Key words:duck;Enter ococcus ;biochemistry characters054Studies on the Manufacture of Xielijing Oil Emulsion InjectionLI Peng (Colle ge of A nima l S cie nce ,Yang tze Unive rsity ,J in gz hou,H ubei 434025,China)Abstract:Pef lox acin M esy late w as select ed as the main original medicine to develop the Xielijing oil emulsion injection.The quality,stuck thickness and t he unusual toxicity of t he injection had been ex aminated.The result indicated t hat the injection w as stable,se -cure and did not have the exceptionally poisonous and side effect s.T he manufacture of Xielijing oil emulsion injection w as feasible.Key words:Xielijing;oil emulsion inject ion;manufacture056Study on Pharmacokinetics of Defervescence Suppository for Animals in RabbitsJIANG Ta o (Colleg e of A nimal Sc ienc e ,Yangtz e Univ er sity ,J ingz hou,H ube i 434025,China)WEI Yun -fa ng (A nimal M e dicine F actor y of T ianmen City ,T ianmen,H ube i 431700,Ch ina)LIU Chu -han ,ZHAO Nia n -biao Department of B ioeng ine ering ,J in gz hou Vac ational and T echnical Colle ge ,Jing z hou ,H ube i 434100,ChinaLI Hong -guan ,DONG Xiu -jun (A H usband ry B ureau of J ing shan County ,J ing shan,H ubei 431800,LIU Zho ng -g ui (A nimal H usband ry B ureau of Gong .an County ,G ong .an,H ube i 434300,Ch ina)ZHAO Da o -xio ng (L iv estock and F ow l Comp any of L iu j iaxiang P rison ,Qianj iang ,H ube i 433125,China)Abstract:To study the plasma pharmacokinet ics of diclofenac sodium suppositories w hich w as made by ourself in rabbit,diclofenac sodium suppositories f or 6healthy rab -bits (as a single rect al formulation)w as used at a dose of 50mg per rabbit.T he plasma concentration of diclofenac sodium w ere determined using U V spectrophotometry,and pharmacokinetic analysis w as carried out by using softw are 3p97.The results show ed t hat the main pharmacokinetic parameters w ere as follow s:elimination half -life (t 1/2k )w as (5.1?1.2)h,the peak plasma concent ration (C max )w as (126.3?2.4)L g /mL ,t he time to C m ax (T m ax )w as (1.8?0.5)h,the area under the curve (A UC )w as (20.4?1.3)mg/(L #h),and t he concent rations -time data w ere best described by a one -com -partment open model w ith first order absorption.The data could be used for the applica -tion of diclofenac sodium t o be made of suppository rectally.Key words:suppository of defervescence f or animal;diclof enac sodium;pharmacokinet ics062Development of Taste Bud in Barbell of C hinese SturgeonCHAI y i Colleg e of Animal S cience ,Yangtz e Univ er sity ,Jing zh ou,H ubei 434025,China;H uaz hong A g riculturalUniv er sity Fisher y Colleg e,W uhan ,H u bei 430070,China;K ey L aborator y of Fre sh w ater F ish Ge rmp la smResourc es and Biotech nology ,M inistry of Ag riculture ,Yangtz e Riv er Re se arch I nstitu te ,ChineseAc ademy of Fish ery S ciences ,J ing z hou ,H ube i 434000,ChinaXIE Cong-xin (H uaz hon g A gr ic ultur al Univ e rsity Fisher y Colleg e ,W uh an,H u bei 430070,China)WEI Qi -w ei Key L abor atory of F reshw ater Fish Ger mp lasm Resourc es and Biotechn olog y ,the M inistry of A gr ic ultur e ofP RC,Yang tz e Riv er R esearch I nstitute ,Ch inese A cad emy of Fisher y Sc ienc es,Jingz hou,H u bei 434000,ChinaAbstract:Histological st udies w ere carried out on the tast e bud in barbell of rost ral of Chinese st urgeon,A cip enser sinensis .It show ed that taste bud developed at 15days after hat ch.The number and height and w idth of t aste bud increased w ith proceeding develop -ment.The developing af ter 40days after hat ch w as slow.At 50days after hatch,taste bud in barbell centralized in one side w hich is not close to vent er of rostral.It is adaptive t o its feeding requirement.Key words:taste bud;ontogeny;A cip enser sinensis ;histology065Availab ility of Th ree Different Inorganic Phosphoru s S ources in Hemibarbus maculatus Bleeker#Õ#。