大鼠热休克蛋白72基因真核表达载体构建及在COS7细胞中的表达

褶纹冠蚌热休克蛋白HSP7O基因的克隆及表达研究

褶纹冠蚌热休克蛋白HSP7O基因的克隆及表达研究谢彦海;胡宝庆;文春根【摘要】The sequences of HSP70 cDNA were cloned from the haemocytes of freshwater mussel Cristaria plicata using degenerate primers to integrate the reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). The Semi-quantitative PCR method was applied to further study the HSP70 mRNA expression in various tissues of C. Plicata. The results revealed that the HSP70 cDNA clone consisted of 2664bp(Gen-Bank accession number: ADM64336)with a 5'-untranslated region (UTR) of 364 bp and a 3'-UTR of 383 bp. The open reading frame of Hsp70 was 1917 bp and intronless,. The ORF encoded a putative protein of 638 amino acids with a predicted molecular mass of 70. 3 kDa0 The theoretical isoelectric point of the protein is 5. 61. There were three HSP70 family signatures,I. E. JDLGTTYS (residues 10-17) , VFDLGGGT-FDVSIL (198-211), VVLVGGSTRIPKVQK (336-350). The deduced amino acid sequence of HSP70 shared high identities with the HSP70s of Mytilus galloprovincialis and Crassostrea virginica, with 79. 47% and 77% autoploidy respectively. The expression of HSP70 mRNA was all detectable in blood,mantle, gill, muscles and hepatopancreas in common situation. Challenge of Cristaria plicata with heat shock(35 "O or the pathogenic bacteria Aeromonas hydrophila resulted in a dramatic increase in the expression of HSP70 mRNA level in these tissues. The expression of HSP70 in hemocytes and gills by the heat shock treatment increased in the most significant,while in gills and muscles,the mostsignificant rise of the expression of HSP70 is by injection A. Hydrophila.%运用兼并引物结合RT-PCR方法从褶纹冠蚌(Cristaria plicata)血细胞中克隆出热休克蛋白70(HSP70)的cDNA序列.用半定量PCR方法研究了HSP70 mRNA在褶纹冠蚌不同组织的表达情况.结果表明:HSP70cDNA全长为2664 bp,5’非编码区364个核苷酸,3’非编码区383个核苷酸,开放阅读框为1917 bp,编码638个氨基酸组成的蛋白质,该蛋白理论等电点为5.61,分子量为70.3 kD.HSP70基因不含内含子.氨基酸序列分析发现,推导的氨基酸序列含有HSP70家族的3个标签序列(I10 DLGTTYS17,V198 FDLGGGTFDVSIL211和V336VLVGGSTRIPKV QK350).氨基酸序列同源性比较显示HSP70与紫贻贝(Mytihcs galloprovincialis)和美洲牡蛎(Crassostrea virginica)氨基酸序列同源性分别为79.47％和77％.半定量PCR分析显示在正常褶纹冠蚌血液、外套膜、鳃、闭壳肌和肝胰腺5种组织中均能检测到HSP70的基因表达.经过热休克或病原菌刺激后,蚌各组织中HSP70 mRNA的表达显著增加,其中热休克处理后,蚌的鳃和血液中HSP70 mRNA表达量增加最为显著；而嗜水气单胞菌刺激后蚌的肌肉和鳃组织中HSP70 mRNA表达量增加最明显.【期刊名称】《南昌大学学报（理科版）》【年(卷),期】2011(035)005【总页数】7页(P457-463)【关键词】褶纹冠蚌、热休克;HSP70、表达;嗜水气单胞菌【作者】谢彦海;胡宝庆;文春根【作者单位】南昌大学生物科学系,江西南昌 330031;南昌大学实验动物科学部,江西南昌 330031;南昌大学生物科学系,江西南昌 330031;南昌大学生物科学系,江西南昌 330031【正文语种】中文【中图分类】Q959.215热休克蛋白（Heat shock protein，HSP）是一种普遍存在于所有生物体内的可溶性的细胞内蛋白，它是一种高度保守的蛋白，从原核生物到真核生物具有很高的同源性［1］。

细胞外热休克蛋白72作为Toll样受体内源性配体在大鼠缺血再灌注肝损伤中的表达及作用

ｏｖｕｌｉｃｅｓｄ（ｌＰ＜００）ｎｈＩ．Ｎ一ａｄＨＰ２ｉｔｅＢｇｏｐｗｒｈｇｅｂｉｓｎｒｅａｏｙａｌ．１．ａｄｔｅＡＪＴＦ仅ｎＳ７ｎｈｒｕｅｅｉｒＴｈ
ｔａｔｅｒｕｓｉｔｅＩＲｇｏｐｆｌＰ＜ＯＯ）ＴｅＨＰ２ｍＮｎｔｅＰａｄＩＲｈｎｏｒｇｏｐｎｈ／ｒａｈｕｌ．１．ｈＳ７ＲＡｉｈｎ／
ｍＮＲＡ及其蛋白。结果
Ｐ组术后血浆ＴＦ叭ＨＳ＇Ｎ．Ｐ２水平较术前均显著升高（／Ｐ均＜００）．１。Ｂ
组处理后相较ＩＲ组其他分组，浆ＡＴＴＦＯＨＳ７均显著升高均＜００）／血Ｌ、Ｎ．、Ｐ２ｔ．１。Ｐ组及ＩＲ／
ｐｏｉ２（Ｓ７）ｒｇｒｅｓｅｄｇｎｕｉｎｆＴｌｌｅｒｃｐｏｓｏｅａｃｉｈｍｉｒｔｎ７ｅＨＰ２ｅａｄｄａｎｏｅｏｓｌａｄｏｏ —ｋｅｅｔｎｈｐｔｓｅａｇｌｉｒｉｃ。ｒｐｒｓｎ（／）ｉｕｙｉｒｓＭｅｈｄＡｔｔｆ１０Ｓａｓｉｈ／ｒｕｅｅｅｅｆｉｕｏＩＲｎｒｎａ．ｊｔｔｏｓｏｌｏ２ＤｒｎｔｅＩＲｇｏｐｗｒａｔ
Ｕｉｅｓｔ，Ｓａｘｎ１００ｎｖｒｉｙｈｏｉｇ３２０，Ｃｉａｈｎ
［ｂｔａｔＯｂｅｔｅＴｘｌｒｔｅｅｐｅｓｎａｄｅｅｔｏｘｒｃｌｌｅｔｈｃＡｓｒｃ］ｊｃｖｏｅｐｏｅｈｘｒｓｉｎｆｃｆｅｔｅｕａｈａ— ｏｋｉｏｆａｌｒｓ

热休克蛋白DnaK在大肠杆菌中的克隆与表达

试剂盒（ｎｉｏｅＴ）ＰＲＭａｔｘＰａｎｍＩｖｔｇｎＭ；ＣｓｒｒｅＭｉ（ｌｕｉｔ
类（或家族），其中Ｈｐ０家族是研究最为深入ｓ７
的一种。目前认为Ｈｓ７具有多种功能，是一种ｐ０非特异性细胞保护蛋白，机体细胞在受到各种应激（高热、氧化等有害应激）时产生的Ｈｓ７如ｐ０可增强细胞对损害的耐受程度，维持细胞正常的功能代谢，提高细胞的生存能力，因此，Ｈｓ７ｐ０的研究备受关注【。为更好地研究这种蛋白质的２】生物学功能和作用机制，本研究构建了两种重组
热休克蛋白ＤｎＫ在大肠杆菌中的克隆与表达ａ
陈帅君，边靖２
（．天津农学院农学系，天津３０８；２１０３４．天津市静海县水产良种场，天津３１０）０６０
摘
要：ＰＲ扩增了热休克蛋白Ｄａ（Ｐ０ＣｎＫＨＳ７）基因，将其连接到ｐＡＤＤｒｃｏａＴＯ载体ＢｉｔｎｌＯＰ。ｅｉ
ＥｘｒｓｉｎＫｉ．ｉａｏｉｏｅｉｄｃｏ．ａ（ｐ０）ｈｓｂｅｕｃｓｆｌｘｒｓｅｏ０Ｅｏｉｅｌ．ｅｔｒ—ｌｔｐｅｓｏｔＷｔＬ－ｒｂｎｓｕｔｎＤｎＫＨｓ７ｈｎｉａｅｎｓｃｅｓｕｌｅｐｅｓｄｉＴｐ１ｃｌｃｌｓＷｓｅｂｏｙｎｎ
ｓｏｄｔｅｓｅｉｃｒａｔｎｏｅｅｐｅｓｄｐｏｅｎｗｉｎｃｏａｕｅａｔＤｎＫ，ｈｓｃｎｒｄｔｅｒｃｍｂｎｔｒｔｉｈｗｅｐｃｆｃｏｆｘｒｓｅｒｔｉｔｍｏｏｌｎｌｈｉｅｉｈｔｈｍｏｓｉｎ — ａｔｕｏｆｍｅｏｉａｏｅｎｉｈｅｎｐ

外源性热休克蛋白70基因对心肌细胞损伤的保护作用

外源性热休克蛋白70基因对心肌细胞损伤的保护作用刘季春;万力;何明【期刊名称】《中国临床医学》【年(卷),期】2010(017)001【摘要】目的:探讨热休克蛋白70(HSP70)基因转染对心肌细胞急性实验性缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制.方法:进行大鼠乳鼠原代心肌细胞培养,随机分为4组,对照组、缺氧/复氧(A/R)组、热休克处理后缺氧/复氧(A/R +HS)组和pCDNA HSP70质粒转导后缺氧/复氧(A/R +pCDNA HSP70)组.用脂质体包裹pCDNA HSP70质粒,并转导入心肌细胞内.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HSP70 mRNA表达,Western blot检测HSP70蛋白表达.以心肌细胞存活率(MTT法)、培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、心肌细胞超微结构改变(透射电镜)及Ca2+负荷来检测心肌细胞损伤程度.结果:与A/R组相比,A/R +HS组和A/R +pCDNA HSP70组细胞存活率显著提高;LDH活性明显降低;细胞超微结构明显改善;心肌细胞Ca2+ 负荷明显减轻.A/R组HSP70 mRNA和蛋白含量均较A/R +HS组和A/R+pCDNA HSP70组显著减低( P<0.01),而A/R +pCDNA HSP70组的含量与A/R +HS组相比显著增多( P<0.01).结论:通过基因转染使HSP70基因高表达能对抗缺氧/复氧对心肌细胞的损伤,这一作用与其能抗细胞Ca2+负荷有关.【总页数】4页(P4-7)【作者】刘季春;万力;何明【作者单位】南昌大学第一附属医院心脏外科,江西南昌,330006;南昌大学第一附属医院心脏外科,江西南昌,330006;南昌大学医学院药学系,江西南昌,330006【正文语种】中文【中图分类】Q789【相关文献】1.重组外源性人热休克蛋白70基因真核表达载体的构建及鉴定 [J], 韩世伟;张阳德;万小平;陈玉祥2.原发性高血压血瘀证患者的热休克蛋白70基因及c-fos基因--基因表达与微观辨证的关联 [J], 马民3.太平洋真宽水蚤(Eurytemora pacifica)热休克蛋白70(HSP70)基因克隆及在金属胁迫下的表达分析 [J], 李彬;景斐;武敏敏;张建设4.河流型水牛热休克蛋白70(HSP70)基因CDS序列的多态性分析 [J], 李显;龙开旭;俸祥仁;潘堂峰;李铭;李芳芳;李美珍;江明生;王国利5.外源性皮质酮对大鼠主动脉内皮细胞热休克蛋白70表达的影响 [J], 王晓兵;田国祥;张薇;张海娟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

重组鼠骨形态发生蛋白_7基因转染心肌细胞及其表达

重组鼠骨形态发生蛋白-7基因转染心肌细胞及其表达许霁虹*张铁铮*刘晓江**沈阳军区总医院麻醉科 110016摘要为探讨重组鼠骨形态发生蛋白-7(rrB M P -7)真核表达载体在心肌细胞获得稳定高效表达的可行性,采用PCR 技术扩增B M P-7基因,将其插入真核表达载体p CDNA 311(+)中;利用差速法分离培养心肌细胞,将构建的B M P -7表达质粒转染心肌细胞,检测其表达效率。

结果表明,经过PCR 及酶切鉴定证明获得了真核表达质粒p CDNA 311-rr B M P7;通过逆转录PCR 和免疫细胞化学鉴定证明B M P -7在转染后的心肌细胞中得到了稳定高效表达。

结论:应用本文介绍的方法,成功构建了B M P-7真核表达质粒并在心肌细胞中稳定高效的表达,为应用于抗缺血再灌注损伤的研究创造了条件。

关键词骨形态发生蛋白-7 心肌细胞基因表达转染骨形态发生蛋白-7(B MP -7)也称成骨蛋白-1(OP-1),作为B MP 家族的成员之一,是一种较强的生物活性因子。

研究表明,人成骨蛋白-1(hOP-1)产生显著的抗缺血效应[1~3]。

临床需要应用高达毫克级B MP-7才能有效发挥其生物作用,而通过基因重组技术所获得的B MP -7具有价格昂贵等缺点。

因此,本实验试图通过构建重组鼠B M P-7(rr B M P-7)的真核表达载体并在体外观察其在大鼠心肌细胞中的表达情况,为进一步体内应用于抗缺血再灌注损伤打下基础。

1 材料和方法111试剂和仪器胎牛血清、DME M 培养基干粉、无糖DME M 培养液,购自G i b co 公司;p MD18-T S i m ple 载体、质粒pCDNA311(+)、E 1co li 感受态细胞J M 109,由大连宝生物公司提供;Fugene6转染试剂盒购自罗氏公司。

SP 超敏二抗试剂盒购自迈新公司。

B MP-7抗体购自Santa Cruz 公司。

小鼠GITR真核表达载体的构建及表达

ｇｎａｍｅｔｂＲＴ．ｅｅｆｇｎｙｒＰＣＲ．Ａｈｅｈｒｃｍｂｎｎｖｃｏｓｒｔｅｅｏｉａｔｅｔｒ
试剂抽提小鼠脾细胞总ＲＡ，Ｒ —ＣＮ经ＴＰＲ扩增出ＧＴＩＲ全长基因，构建真核重组载体ｐＲＳ－ＧＰｍＧＴ经鉴定后ＩＥ２ＥＦ — ＩＲ，
采用脂质体介导ＤＡ法转染ＣＳ７细胞。结果：ＮＯ－从小鼠脾细胞中成功扩增得到ＧＴＩＲ全长基因。重组载体ｐＲＳ一ｌＥ２
［ｂｔａｔ０ｂｅｔｅＴｏｓｕｔｕａｙｔｘｒｓｏｅｔｆｕｅＧＴｅｅｆｇｎ．ｈｕＡｓｒｃ］ｊｃｉ：ｏｃｎｔｃｅｋｒｏｃｅｐｅｓｎｖｃｒｓＩＲｇｎａｍｅｔＴｅｅ— ｖｒｉｉｅｏｍｏｒ
ｋｒｏｉｅｏｉｎｅｔｒｈｎｗｅｅｔａｓｅｔｄｉｔａｙｔｃｒｃｍｂｎａｔｖｃｏｓｔｅｒｒｎｆｃｅｎｏＣＯＳ７ｃｌｓｔｘｒｓ－ｅｌｏｅｐｅｓｍＧＩＴＲｒｔｉＭｅｈｄｓ：ｐｏｅｎ．ｔｏ
小鼠豫真核表达载体的构建及表达
沈培，郑东，刘艳，田洁，赵银霞，刘青玲，朱晨露，
马洁，苏兆亮，马斌，化溪，王胜军许
（江苏大学基础医学与医学技术学院免疫学研究室，江苏镇江２２１１０３）
，
［摘
要］目的：构建小鼠Ｇ（ＩＲ的真核表达载体，，ｍＧＴ）转染ＣＳ７细胞表达小鼠ＧＴＯ－ＩＲ蛋白。方法：用ＴＩｌＲｚｏ

热休克蛋白HSP72在大鼠脊髓缺血耐受中的表达及其作用

福建医药杂志２０１４年２月第３６卷第】期Ｆｕ）ｉａｎＭｅｄＪ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ２０１４，Ｖｏ１．３６，Ｎｏ．】
・
６５・
为成纤维细胞增生和基底膜胶原沉积。国内研究发
节和控制鼻息肉成纤维细胞，对防止慢性鼻窦炎、
鼻息肉及减慢其病程可能有潜在的临床及生物学意
现慢性鼻一鼻窦炎鼻息肉内镜术后鼻腔黏膜也发生
组织重塑，术前及术后及时地抑制重塑，对鼻窦疾
病的治疗和预防复发十分重要］。
［３］ＰｏｎｉｋａｕＪＵ，ＳｈｅｒｒｉｓＤＡ，ＫｅｐｈａｒｔＧＭ，ｅｔａ１．Ｆｅａｔｕｒｅｓｏｆ
ａｉｒｗａｙｒｅｍｏｄｅｌｌｉｎｇａｎｄｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎｃｈｒｏｎｉｃｒｈｉ —
义。辛伐他汀是临床治疗高脂血症的常用降脂药，
安全性高，其能否防止慢性鼻窦炎鼻息肉术后复发，将有待于进一步的动物体内实验加以证实。
参考文献
［１］曹雪秋．慢性鼻一鼻窦炎鼻息肉药物治疗进展概述［刀中文医
理形态学研究［Ｊ］．中华耳鼻咽喉头颈外科杂志，２００３，４

一种基于病毒加帽酶的稳定T7表达系统及其在真核生物中表达蛋白质的方法[发明专利]

专利名称：一种基于病毒加帽酶的稳定T7表达系统及其在真核生物中表达蛋白质的方法
专利类型：发明专利
发明人：王文雅,唐宏宇,李强
申请号：CN202111465745.1
申请日：20211203
公开号：CN114181957A
公开日：
20220315
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种基于病毒加帽酶的稳定T7表达系统及其在真核生物中表达蛋白质的方法。

所述稳定T7表达系统包含T7RNA聚合酶、T7转录单元和病毒加帽酶，所述T7转录单元由T7启动子、T7终止子和目标基因构成。

所述方法包括将T7RNA聚合酶整合到宿主基因组，将T7启动子启动的转录单元构建到载体或基因组，利用病毒加帽酶为T7RNA聚合酶合成的mRNA加5′Cap结构，帮助T7RNA聚合酶转录的mRNA运输到细胞质，并在细胞质与核糖体结合，完成翻译和高水平表达目标蛋白质。

本发明的基于病毒加帽酶的T7表达系统不随宿主细胞的分裂而丢失，在真核生物中高效稳定地表达外源蛋白。

申请人：北京化工大学
地址：100029 北京市朝阳区北三环东路15号
国籍：CN
代理机构：北京林达刘知识产权代理事务所(普通合伙)
更多信息请下载全文后查看。

pdf下载编码人b722 胞外区cd na 的克隆表达及生物活性鉴定

编码人B722胞外区cD NA的克隆、表达及生物活性鉴定袁志宏,奚永志,孔繁华,张惠丽,刘　楠,梁　飞(军事医学科学院附属医院免疫学研究室及国家生物医学分析中心免疫分析实验室,北京100039)摘要 B722分子是共刺激信号系统B7/CD28/CTLA24中的重要成员之一,为了更深入地探讨B722分子在调控T细胞增殖、分化及相关信号传导过程中的作用,本研究通过聚合酶链式反应(PCR)扩增编码人B722分子胞外区的cDNA,测序后定向插入多个原核表达载体并诱导目的蛋白表达,用Western印迹和M TT鉴定生物活性。

结果表明:通过p GEX24T22载体实现了在宿主菌BL221(DE3)2codenplus2RIL中较高水平的表达,蛋白表达量为20%。

经Western印迹和M TT鉴定,所表达及初步纯化的B722胞外区重组蛋白能与抗人B722单抗发生特异性结合;在抗人CD3单抗的协同下,B722胞外区重组蛋白能有效地促进外周血单核细胞的增殖。

结论:B722胞外区重组蛋白的获得为进一步研究B722分子结构与功能的关系奠定了基础。

关键词人B722分子;共刺激信号系统;原核表达;基因克隆中图分类号 Q753Cloning,Expression and Biological Activity Identif ication of a cD NA Encoding the Extracellular R egion of H uman B722YUAN Zhi2Hong,XI YON G2Zhi,KON G Fan2Hua,ZHAN G Hui2Li,L IU Nan,L IAN G Fei (Depart ment of I m m unology,Hospital A f f iliated to Academy of Military Medical Sciences,L aboratory of I m m unoassay,N ational Center of Biomedical A nalysis,Beiji ng100039,Chi na)Abstracts As one important member of B7/CD28/CTLA24costimulatory signal pathway,B722molecule plays a critical role in regulating T2cell response.In order to further ex plore its effects on regulation of T cell activation, proliferation and associated signal pathways,the cDNA encoding extracellular region of human B722was amplified via PCR and subcloned into some prokaryotic expression vectors to express target protein in host strains.The ex pressed protein was identified with Western blot and M TT.Results showed that after screenin g,the expression level of the protein of interest attained the yield of over20%total bacterial protein by using p GEX24T22vector and E.coli BL21 (DE3)2CodonPlus2RIL host cells.The recombinant protein could specially react with B722McAb and could stimulate T2 cell proliferation combined with anti2CD3antibody.In conclusion,the recombinant protein was bioactive,therefore the study will make it possible for the research of relationshi p between B722structure and its function.K ey w ords human B722;costimulatory signal pathway;prokaryotic expression;gene cloning B7/CD28/CTLA24是T细胞活化所必需的最为重要的抗原非依赖性共刺激信号系统,不仅在介导T细胞功能方面发挥重要的调控作用,如提供所需的第二信号、刺激T细胞增殖和促进细胞因子释放,而且还在临床上防治自身免疫性疾病、移植物抗宿主病、器官移植排斥以及促进肿瘤免疫的研究中已经成为极为重要的新靶点[1,2]。

2021大鼠ERα基因表达载体构建及其在rBMSCs中的表达范文2

2021大鼠ERα基因表达载体构建及其在rBMSCs中的表达范文0引言.雌激素受体是雌激素作用于靶器官的重要路径之一.雌激素水平、雌激素受体表达的差异,都会使细胞产生对雌激素的不同应答[1 -3].雌激素受体为配体依赖的类固醇超家族成员之一,有α,β 2 种亚型,虽有高度同源性,但功能不同[4].骨髓基质干细胞具有高度自我更新和多向分化的潜能,可以定向或横向分化为多种细胞[5],目前已成为生命科学中的研究热点.作为雌激素靶器官的 BMSCs,不仅表达ERα[6],更与ERα的生理功能相关.随着对ER 研究的深入,有关 ER 的实验要求也随之越来越高,如何建立一个稳定的实验平台更好地进行相关研究成了迫切需要解决的问题.本实验构建大鼠ERα基因表达载体,并观察其在 rBMSCs 中的表达,为进一步探讨ERα的生理功能,尤其是在研究雌激素靶器官中的信号通路奠定基础.1 材料与方法.1. 1 实验动物 8 周龄雌性 SD 大鼠,4 只,购于北京大学医学部动物中心.动物实验合格证号: 京动字8910R018.动物实验遵从实验动物操作规范及伦理规范.SD 大鼠的饲养环境: 空气充足,12 h 光照,室温( 22 ±2) ℃,湿度45%~65%,自由饮食及饮水.1. 2 实验材料胎牛血清( 美国 Gibco 公司) ,DMEM培养液( 美国 Hyclone 公司) ,总 RNA 提取试剂( 北京欣博盛生物技术公司) ,cDNA 合成第一链试剂盒( 日本Toyobo 公司) ,2 × Trans Taq HIFI PCR SuperMixⅡ(北京全式金生物技术公司) ,限制性内切酶BamHⅠ及XhoⅠ、T4 DNA 连接酶、Prime STARTM HS DNA 聚合酶、pMD18-T 载体、DNA marker DL2000( 大连宝生生物有限公司) ,质粒抽提及胶回收纯化试剂盒( 美国 QIA-GEN 公司) ,E. Coli 菌株 DH5( 上海第二军医大学生化教研室) ,pcDNA3.1(+) 质粒( 美国 Invitrogen 公司) ,rBMSCs( 广州赛业公司) ,LipofectamineLTX 转染试剂盒( 美国 Invitrogen 公司) ,兔抗大鼠ERα、HRP 标记的羊抗-兔二抗( 美国 SouthernBiotech 公司) ,SYBR greenPCR master mix( 北京基诺来普试剂公司) .1. 3 实验方法.1. 3. 1 免疫细胞化学染色培养皿中置入预先切割好的薄盖玻片( 1cm ×1 cm) ,细胞以 1 ×104/ cm2的密度接种于培养皿,使细胞在盖玻片上贴壁生长,培养2 d.将爬满细胞的盖玻片取出,按照免疫组化染色方法,对细胞进行脱水、固定、破膜、一抗孵育、二抗孵育、显色、透明,晾干后,中性树脂封片,显微镜观察.1. 3. 2 大鼠ERα基因的引物设计与 cDNA 合成①参照全长的ERα基因序列( GenBank 序列号 NM_012689) ,设计合成扩增大鼠全长ERα的引物,上游引物 F-ER: 5'-GGATCCGCCGCCACCATGACCAT-GACCCTTCAC-3',下游引物 R-ER: 5'-CTCGAGAACT-CAGATGGTGTTGGGGAAGCCCT-3'.上游引物引入BamHⅠ位点,下游引入XhoⅠ位点.引物由上海生工生物工程有限公司合成并经 PAGE 纯化定量.②大鼠子宫及双侧附件匀浆,Trizol 抽提 RNA.RNA 电泳检测结束后,对 RNA 浓度和 A 值进行测定.反转录按照Toyobo 反转录试剂盒 First Strand cDNA SynthesisKit 说明书进行.对于所用的试剂均用 DEPC 处理水配制,置于冰上,在超净工作台上操作.1. 3. 3 ERα的 PCR 扩增① PCR 反应体系为:cDNA 5 μL,M正向( F) 引物( 10 μmol / L) 1 μL,M反向( R) 引物( 10μmol/L)1μL,2 ×Trans Taq HIFI PCRSuperMi ×Ⅱ 12. 5 μL,去离子水 5.5 μL,终体积为25 μL.②PCR反应条件为: 94 ℃ 3 min→40 × ( 94 ℃30s→55℃ 30 s→72℃ 1 min→72℃ 5 min→4℃∞ ,共35 个循环.③扩增结束后,取 PCR 产物 5 μL在 1%的琼脂糖凝胶电泳上进行扩增产物检测分析.1. 3. 4 重组 pcDNA3. 1(+) 表达质粒构建及鉴定按照 DNA 回收试剂盒的说明,回收纯化 PCR 产物,与 T载体连接,用于转化感受态大肠埃希菌DH5α.将转化的感受态细菌涂布于含氨苄青霉素的琼脂培养平板.挑选生长菌落,碱裂解法提取质粒 DNA,以BamHⅠ+XhoⅠ酶切鉴定,并测序证实.1. 3. 5 pcDNA3. 1(+) /ERα质粒转入 rBMSCs ①将复苏成功并进入对数生长期的 rBMSCs 以 2 ×105个/孔的密度,接种于6 孔板,加入无抗生素的 DMEM,每孔2 mL.②37℃孵箱孵育至细胞铺满孔板的 60% ~80% .转染前 1 d,确定细胞形态正常,培养液颜色、性状正常.③按照 LipofectamineLTX 试剂盒说明书操作,转染0.2μg重组质粒于 rBMSCs,同时转染空质粒作为对照,37 ℃培养箱培养 5 ~ 7 h.④去除培养液,加入含 10% 胎牛血清的 DMEM,继续培养,48 h后,提取细胞用做后续实验.1. 3. 6 RT-PCR 及 Western blotting 检测鉴定转染后产物①收集转染pcDNA3.1(+) /ERα后的rBMSCs,按照1.3.2与1.3.3 的方法提取总 RNA,RT-PCR 检测ERα mRNA的表达情况.②收集转染 pcDNA3. 1(+) /ERα后的rBMSCs至 1. 5 mL 离心管,离心半径 10 cm,离心转速为5000 r / min,离心 5 min 后弃去培养液,加 10 倍体积的细胞裂解液于4℃裂解细胞沉淀30min,加适量的5 ×样缓冲液混合,100℃煮5min; 离心1min,取上清电泳.将电泳后的蛋白转至PVDF 膜,TBS 缓冲液洗膜、封闭,4℃过夜.加入兔抗大鼠ERα抗体( 1∶1000)作为一抗,4℃过夜.HRP 标记的羊抗兔抗体作为二抗,37℃孵育1h.TBST 漂洗 PVDF 膜,ECL 化学发光显色.1. 3. 7 MTT 检测将细胞悬浮于含 10% 胎牛血清的 DMEM 中,以 104个细胞/孔的密度接种于 96 孔板,每孔200μL.根据实验设计,选取不同的时间点进行 MTT 检测.将25 mg/mL 的 MTT20 μL加入待测孔,37 ℃孵育 4 h.去除上清液,加入 150 μL的DMSO,震荡 10 min.选取 490 nm 的波长,在酶联免疫检测仪上,检测每孔的光吸收值,记录数值.1. 3. 8 Realtime-PCR 检测①引物设计与合成ERα:5'-GGATCCGCCGCCACCATGACCATGACCCTTCAC-3',5'-CTCGAGAACTCAGATGGTGTTGGGGAAGCCCT-3';β-actin:5'-ACCTTCTACAATGAGCTGCG-3',5'-CCTG-GATAGCAACGTACATGG-3'.②提取RNA 后,以反转录好的 cDNA 做为模板,进行 Realtime-PCR 实验.PCR 反应体系为: SYBR Green 荧光燃料 MIX 5 μL,引物 UP( 10μmol/L)0.5μL,引物 Down( 10μmol/L)0.5μL,cDNA第 1 条反应产物 2 μL,去离子水 2 μL,总体积 10 μL.③Realtime-PCR反应程序: 95℃ 5 min→95℃ 30 s→40 × ( 62 ℃ 30 s)→4℃∞.④溶解曲线反应程序:95℃15s→60℃15s→95℃ 15s.1. 4 统计学分析采用 SPSS 12. 0 统计软件进行单因素方差分析,实验数据采用均数 ± 标准差( x ± s) 表示,两两组间比较用 LSD 检验.以P≤0. 05为差异有统计学意义.2 结果.2. 1 免疫组化染色以 MCF-7 细胞为阳性对照,rBMSCs 的细胞核、细胞质中都可见ERα阳性棕色颗粒表达,以细胞质表达为多,见图 1.2. 2 重组质粒pcDNA-ERα的构建及鉴定抽提大鼠子宫及双侧附件总 RNA,以1.5%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定.结果显示,抽提的 4 只大鼠的总 RNA 均完整.将抽提的总 RNA 逆转录,以合成的 cDNA 为模板,PCR 扩增全长ERα基因.将 PCR 产物纯化回收,克隆入载体,以BamHⅠ+XhoⅠ酶切筛选出阳性重组子,并进行 DNA 测序,测序结果显示与 GenBank 公布序列( 序列号: NM_012689) 完全吻合( 结果未显示) .重组质粒pcDNA3. 1(+) /ERα引入BamHⅠ+XhoⅠ酶切位点,酶切鉴定,见图 2.2. 3 重组质粒在 rBMSCs 中表达分别提取瞬时转染组[rBMSCs-pcDNA3. 1(+)/ERα]、空载体转染组[rBMSCs-pcDNA3.1(+) ]、空白对照组( rBMSCs) 细胞总 RNA,做逆转录 PCR.取 RT-PCR 产物行 1%琼脂糖凝胶电泳,结果显示,在β-actin一致的条件下,瞬时转染组细胞ERα的表达与正常组、空载体转染组细胞相比有明显升高,表明 pcDNA3. 1(+) /ERα转入细胞后,成功增加了ERα基因表达,见图3a.分别提取瞬时转染组[rBMSCs-pcDNA3.1(+) /ERα]、空载体转染组[rBMSCs-pcDNA3. 1( +) ]、空白对照组( rBMSCs) 细胞蛋白,做免疫印迹分析.Westernblotting 显示,ERα蛋白在空转染组和对照组细胞均有表达,而在转染组条带明显增强,表明重组质粒转入细胞后,成功增加了 PELP1 的蛋白表达,与基因水平鉴定结果相一致,见图 3b.2. 4 重组质粒转染前后对细胞生长的影响 MTT 显示,ERα的高表达对细胞的生长产生了抑制,但3 组细胞之间的生长曲线趋势未发生明显变化,见图 4a.Realtime-PCR 显示,在 3 组不同处理的细胞组中,ERαmRNA的表达存在差异,证明载体转入细胞后有效,在 mRNA 的水平成功增加了ERα的表达,见图4b.3 讨论高表达载体的建立,目前应用的有多种方法[7 -8].为了最大程度地保证产物与模板的一致性,实验利用真核表达载体上的多克隆位点和重组质粒的酶切位点,将ERαcDNA 定向连接于两酶切位点间,成功构建了ERα真核表达载体,并通过脂质体转染使ERα可以在 BMSCs 中高表达.实验中选择阳性菌落进行质粒小量提取[9],有利于简化步骤,提高效率.构建的真核表达载体经酶切并测序后,证实结果与预期一致,表明ERα的真核表达载体构建成功,可作为转移ERα的工具.本实验在选择转染方法上采用了瞬时转染.因为稳定转染需要进行较长的稳定筛选,骨髓基质干细胞不断分化可能降低了其作为干细胞的特性.转染前细胞的状态与转染效率密切相关.骨髓基质干细胞为贴壁生长的细胞,对数生长期为32 h左右,转染前 24 h 胰酶消化重新接种,转染前 4 h更换新鲜培养液,可以最大限度保证细胞的良好生长状态.基因转入细胞后,对其表达的检测受到时间限制,因为转染了外源基因的细胞代谢负荷大,增殖较慢,过长的筛选时间会使细胞被没有外源基因转入的细胞淹没,导致阳性克隆筛选失败.本实验在转染 48h 后收集细胞进行检测,在基因和蛋白水平均成功检测出了ERα的高表达.骨髓基质干细胞具有多向分化潜能,可在条件分化液的作用下向成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞、软骨细胞等分化[10 -11].作为雌激素的靶细胞,本实验也证明,骨髓基质干细胞在细胞核和细胞质中均表达ERα.有研究表明,ERα与骨髓基质干细胞的骨向分化能力正相关[7],参与细胞的多种生理功能.选择骨髓基质干细胞作为受体细胞,不仅可更深入地研究ERα功能,更能拓展骨髓基质干细胞的研究范围,进而开拓更广的临床应用前景.实时定量PCR 动力学较宽、在低表达水平下也可以分析基因表达的细微变化等,目前作为监测基因表达的有效工具[12 -13].实时定量检测结果显示了基因由外源性插入后,在细胞中表达的时间性变化.在 48h 时,基因的表达量达到峰值,随后随着培养时间的延长,基因表达水平随之下降.本实验选取 48 h 作为细胞检测时间点,可提高检测效率.MTT 检测显示,ERα转入细胞后,抑制了细胞的生长.推测外源性ERα基因的插入,改变了细胞中ERα的核浆表达比例,使细胞对于外环境的应答发生了改变,进而影响了细胞的生长.但增殖曲线的变化不能完全说明ERα的转入对细胞生长的影响[6,14],因为外源基因的插入,细胞出现过负荷现象,自身的生长减缓,也会对生长曲线产生影响,需要进一步的实验证明ERα高表达与细胞生长的相关性.综上所述,本实验成功构建了ERα真核表达载体,使骨髓基质干细胞中ERα过表达,并对转染后细胞的生理功能进行了初步探讨,为ERα和骨髓基质干细胞的后续研究奠定了基础.。

缺血性脑损伤中大鼠海马CA1区热休克相关因子变化的研究

缺血性脑损伤中大鼠海马CA1区热休克相关因子变化的研究宋远见;刘红芝;温相如;刘永民【摘要】目的探明缺血性脑损伤过程中SD大鼠海马CA1区神经元热休克蛋白72(HSP72)mRNA和HSP72蛋白的表达情况.方法将SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注30 min组、缺血再灌注3 h组、缺血再灌注12 h组、缺血再灌注1d组、缺血再灌注3 d组、缺血再灌注5 d组和缺血再灌注7 d组.采用PT-PCR和免疫印迹方法检测SD大鼠海马CA1区在缺血再灌注后不同时期的HSP72 mRNA和HSP72蛋白表达情况.结果 HSP72 mRNA和HSP72蛋白在假手术组几乎没有表达,从再灌注3 h开始有少许表达,至再灌注3 d表达量最大,随后不断下降.结论缺血性脑损伤过程中HSP72 mRNA和HSP72蛋白在缺血再灌注不同时期有不同的表达量,在再灌注3 d时表达量达到最高峰.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2010(039)021【总页数】2页(P2864-2865)【关键词】缺血性脑损伤;HSP72;大鼠【作者】宋远见;刘红芝;温相如;刘永民【作者单位】徐州医学院基础学院,徐州医学院,江苏,221004;徐州医学院基础学院,徐州医学院,江苏,221004;徐州医学院公共教育学院,江苏,221004;徐州医学院公共教育学院,江苏,221004【正文语种】中文【中图分类】R365.743缺血性脑损伤常因脑血液循环障碍所致,患者常表现为猝然昏扑、不省人事或突然发生口歪眼斜、舌强言蹇、半身不遂、智力障碍等临床特征。

据报道,每年约460万人死于脑卒中,其中约86%因缺血所致。

因此,积极探索缺血性脑损伤中所涉及关键因子的状况,具有极其重要的医学价值。

热休克蛋白72(heat shockproteins72,HSP72)是HSP家族中最重要的成员,也是应激诱导表达最多的成员。

作为重要的分子伴侣,HSP72能够结合各种变性蛋白,以防这些蛋白遭受免疫细胞的攻击[1],因此HSP72对维持细胞稳态和细胞存活具有重要意义。

野生型抑癌基因PTEN真核表达载体的鉴定及其在COS-7细胞株表达产物的鉴定

野生型抑癌基因PTEN真核表达载体的鉴定及其在COS-7细胞株表达产物的鉴定马斌林;徐虓;库热西·玉努斯;耿中利【摘要】目的:电泳并真核细胞鉴定pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒.方法:将含有pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒的E coli JM109细胞挑少许于LB液体培养基上,振荡过夜,离心,碱裂解法裂解细菌,参照UNIQ-10柱式质粒抽提试剂盒操作步骤抽提质粒,电泳鉴定,将获得的pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒采用脂质体转染法转入COS-7细胞株,传代培养细胞株,West-Blot鉴定PTEN蛋白质的表达.结果:实验得到的pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒大小约为6.0kb,质粒浓度为0.080 μg/μl.该质粒目的基因在COS-7细胞株表达产物经West-Blot鉴定证实为目的基因表达产物.结论:pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒内含有所需目的基因,该真核表达系统能在真核细胞株COS-7表达所需目的基因产物,可以应用该质粒对PTEN基因缺失或杂合性缺失的肿瘤细胞进行试验性治疗.【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2008(031)002【总页数】4页(P129-132)【关键词】PTEN抑癌基因;pcDNA3.0-PTEN真核表达载体;COS-7细胞株【作者】马斌林;徐虓;库热西·玉努斯;耿中利【作者单位】新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺头颈外科,新疆乌鲁木齐830011;新疆医科大学,新疆乌鲁木齐830011;新疆医科大学分子生物学教研室,新疆乌鲁木齐830011;新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺头颈外科,新疆乌鲁木齐830011【正文语种】中文【中图分类】R57;Q786PTEN基因即与张力蛋白同源10号染色体缺失的磷酸酶基因(gene of phosphate and tension homology deleted on chromosome ten,PTEN)，目前该基因已被确定为一个抑癌基因，该基因编码的蛋白PTEN能特异性地使磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸(phosphatidylinositol 3,4,5-triphosphate，PIP3)去磷酸化，拮抗磷脂酯肌醇3激酶(PI3K)/AKT信号传导通路，具有调节细胞生长、增殖、迁移、分化等多种效应[1]。

稳定表达绿色荧光蛋白的COS7细胞系的筛选和鉴定

稳定表达绿色荧光蛋白的COS7细胞系的筛选和鉴定龙鼎新;李小玲;温元武【期刊名称】《中南医学科学杂志》【年(卷),期】2012(040)001【摘要】目的构建稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的COS-7细胞系,为相关实验对照提供方便. 方法常规方法培养COS-7细胞,将含pEGFP-N3基因的质粒转染COS-7细胞,G418抗性筛选,并用荧光显微镜进行跟踪检测,挑选耐药单细胞克隆并扩大培养至稳定细胞株. 结果 G418筛选的最适浓度为500 μg/mL.筛选到的COS7 -GFP克隆荧光显微镜下发出明亮的绿色荧光,细胞的生物学性状保持稳定,通过Western blot能检测到GFP蛋白. 结论成功筛选并建立了稳定表达的COS7 -GFP细胞系.【总页数】4页(P11-13,50)【作者】龙鼎新;李小玲;温元武【作者单位】南华大学公共卫生学院,湖南衡阳421001;南华大学公共卫生学院,湖南衡阳421001;南华大学公共卫生学院,湖南衡阳421001【正文语种】中文【中图分类】Q813【相关文献】1.利用重组慢病毒载体建立稳定表达绿色荧光蛋白细胞系 [J], 周磊;陈婕;徐欣;张敏;张新2.绿色荧光蛋白报道基因转染鼻咽癌细胞系CNE1后的表达:用做转染报道基因的可行性鉴定 [J], 唐泽立;苏维勇;陈小毅;陈燕;谢玲3.反转录病毒介导的稳定表达HIV-1Gag蛋白和增强型绿色荧光蛋白细胞系的建立 [J], 王婧;李昌;李林溪;胡博;丛艳昭;任大勇;王卓越;杜寿文;金宁一4.稳定表达绿色荧光蛋白的COS7细胞系的筛选和鉴定 [J], 龙鼎新;李小玲;温元武5.稳定表达敲入增强绿色荧光蛋白标记的干扰素γ受体2基因Ifngr2的黑素瘤细胞系的构建与鉴定 [J], 樊浩;周涛;李卫华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

清热复方对热休克大鼠肝肺组织热休克蛋白基因表达的调控作用

清热复方对热休克大鼠肝、肺组织热休克蛋白基因表达的调控作用作者：王洪琦，邹素芬，李建国【关键词】热证／中药疗法摘要：【目的】探讨清热复方对大鼠热休克蛋白70(HSP70)表达的调控作用。

【方式】将70只大鼠随机分为热休克模型组、热休克加白虎汤组、热休克加黄连解毒汤组、内毒素模型组、内毒素加白虎汤组、内毒素加黄连解毒汤组和正常对照组7组，每组10只。

采用逆转录聚合酶链反映(RTPCR)对热休克模型组、内毒素模型组和正常对照组大鼠的肝、肺组织进行了HSP70mRNA表达的检测，观察清热复方白虎汤和黄连解毒汤别离对两种模型大鼠肝、肺组织HSP70mRNA表达的影响。

【结果】热休克模型组、热休克加白虎汤组和热休克加黄连解毒汤组中HSP70mRNA的表达高于正常对照组（Ｐ＜００５）；热休克加白虎汤组和热休克加黄连解毒汤组均高于热休克模型组（Ｐ＜００５）；内毒素模型组、内毒素加白虎汤组和内毒素加黄连解毒汤组之间的HSP70mRNA表达和与正常对照组相较均无显著性不同（Ｐ＞００５）。

【结论】提示不同因素致使的热证状态下HSP70的基因表达不一致，清热复方可诱导热休克大鼠肝、肺组织中HSP70表达的增加，从而提高细胞的耐受力，避免细胞组织的损伤。

关键词：热证／中药疗法；白虎汤／药理学；黄连解毒汤／药理学；热休克蛋白70；疾病模型，动物生物体在高温或其他因素刺激下会诱导基因开放而合成一组新的蛋白质―热休克蛋白(heatshockproteins,HSPs)。

许多研究证明整体动物的热处置可预防随后的心、脑、肺、视网膜等损伤，并以为全身热处置对这些器官的保护作用与HSPs的表达有关［１］。

HSPs作为分子伴侣，在维持细胞的正常形态及功能中起着重要作用，参与其他蛋白质的折叠、转运、合成等进程，与细胞内的其他肽类蛋白质结合，参与细胞的抗损伤、修复和热耐受进程，其在多种疾病进程中的重要作用已经被大量证据证明。

本研究主要采用逆转录聚合酶链反映(ＲＴＰＣＲ）观察白虎汤和黄连解毒汤对热休克、内毒素两种大鼠热证模型的HSP70基因表达的调控，以探讨清热解毒中药对HSP70表达的影响。

清热复方对热休克大鼠肝、肺组织热休克蛋白基因表达的调控作用

清热复方对热休克大鼠肝、肺组织热休克蛋白基因表达的调控作用王洪琦;邹素芬;李建国【期刊名称】《广州中医药大学学报》【年(卷),期】2004(21)1【摘要】[目的]探讨清热复方对大鼠热休克蛋白70(HSP70)表达的调控作用.[方法]将70只大鼠随机分为热休克模型组、热休克加白虎汤组、热休克加黄连解毒汤组、内毒素模型组、内毒素加白虎汤组、内毒素加黄连解毒汤组和正常对照组7组,每组10只.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对热休克模型组、内毒素模型组和正常对照组大鼠的肝、肺组织进行了HSP70 mRNA表达的检测,观察清热复方白虎汤和黄连解毒汤分别对两种模型大鼠肝、肺组织HSP70 mRNA表达的影响.[结果]热休克模型组、热休克加白虎汤组和热休克加黄连解毒汤组中HSP70 mRNA的表达高于正常对照组(P＜0.05);热休克加白虎汤组和热休克加黄连解毒汤组均高于热休克模型组(P＜0.05);内毒素模型组、内毒素加白虎汤组和内毒素加黄连解毒汤组之间的HSP70 mRNA表达以及与正常对照组相比均无显著性差异(P＞0.05).[结论]提示不同因素导致的热证状态下HSP70的基因表达不一致,清热复方可诱导热休克大鼠肝、肺组织中HSP70表达的增加,从而提高细胞的耐受力,避免细胞组织的损伤.【总页数】3页(P37-39)【作者】王洪琦;邹素芬;李建国【作者单位】广州中医药大学,广州,510405;深圳市宝安区中医院,广东,深圳,518101;广州中医药大学,广州,510405【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.野生型90β对热休克蛋白90β基因表达的调控作用 [J], 张业;崔玉坤;吴宁华;沈珝琲2.腺病毒介导的热休克蛋白70对新生大鼠肺组织热休克蛋白70表达水平的影响[J], 王乐;赵婷;李明霞3.热休克蛋白70调控Bcl-2/Bax对缺氧性肺高压新生大鼠肺血管内皮细胞凋亡及肺动脉压力的作用 [J], 赵倩;曹静;李明霞4.牛珀至宝微丸对内毒素休克肺组织热休克蛋白70表达的调控 [J], 黎晖;杜少辉;李伊为;陈东风;周健洪;张赛霞;李春5.蛋白酶体抑制剂MG-132对心肌梗死大鼠早期心功能及热休克蛋白70、热休克蛋白70羧基端相互作用蛋白的影响 [J], 张新民;戴翠莲;唐疾飞;杨鹏麟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

构建人热休克蛋白70基因重组腺病毒载体及鉴定

构建人热休克蛋白70基因重组腺病毒载体及鉴定韩世伟;张忠涛;王宇【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2010(014)037【摘要】背景:腺病毒载体作为低毒高效的基因载体己被广泛应用,但是人热休克蛋白70基因腺病毒载体较为少见.目的:构建重组人热休克蛋白70基因的腺病毒载体,鉴定外源基因在真核细胞中的良好表达.方法:采用AdMax腺病毒系统将外源基因人热休克蛋白70基因重组入腺病毒载体中,转染人胚肾293细胞并重组包装出毒,检测外源基因的表达和病毒滴度.结果与结论:观察转染后的人胚肾293细胞出现明显细胞病变效应后,收获并纯化重组病毒;荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况良好,Western blot检测人热休克蛋白70蛋白表达良好,收获病毒的滴度为1×1011 efu/mL,证明实验己成功构建携带人热休克蛋白70基因的重组腺病毒载体.【总页数】5页(P6922-6926)【作者】韩世伟;张忠涛;王宇【作者单位】首都医科大学附属北京友谊医院,北京市,100050;首都医科大学附属北京友谊医院,北京市,100050;首都医科大学附属北京友谊医院,北京市,100050【正文语种】中文【中图分类】R318【相关文献】1.人白细胞介素32γ基因重组腺病毒载体的构建及鉴定 [J], 李松林;朱妍妍;李霏;尹元琴2.人nm23-H1基因重组腺病毒载体的构建与鉴定 [J], 范红渠;周卫兵;郝鲁峰;邵磊;王智勇3.人转录因子 PU ．1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定 [J], 刘晨阳;颜文杰;王敏;孙文逵;苏欣;施毅4.人生长终止特异性同源盒基因重组腺病毒载体的构建及鉴定 [J], 郑辉;薛松;黄日太;胡振雷;汪永义5.热休克蛋白70重组腺病毒载体的构建及鉴定 [J], 徐小娜;曲彦因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。