土壤中分解尿素的细菌的分离和计数_课件
合集下载
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(共20张PPT)
耐高温菌种提取耐高温酶。
启示： 根据它对生存条件的要求，到相应的环境中去寻找
（二）实验室中目的菌株筛选
原理 ： 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包
括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止
回答： 其他微生物生长。
1、在该配方中，为微生物生长提供碳 源和氮源的是什么物质？葡 只有萄能糖够、以尿尿素素
作为氮源的微生
C半固体培养基
D天然培养基
放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的 微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数。
优点：设备简单、能观察微生物的形态特征。 缺点：不能区分死菌和活菌；
难以计数微小的细菌。 一般用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。
2．间接计数法： 最常用稀释平板计数法。
原理： 1个活菌→1个菌落
统计原则 ①选 30~300 个菌落的平板统计 ②每个稀释度取3个平板取其平均值
关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质 地等等，都是区分细菌的重要手段。
4、鉴定： 筛选后必鉴定 鉴别培养基：不影响微生 物的生存
酚红培养基： 鉴定分解尿素的细菌。 原理：脲酶催化尿素分解 成氨→培养基碱性增强→ 酚 红变红→脲酶阳性
五、实验过程注意
1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前 都要灭菌。
2）应在火焰旁称取土壤 10 g。将称好的土样倒入 盛有90mL无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。
3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰 旁进行。
4）实验时要对培养皿作好标记。 注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。 5）为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当
事先规划时间。
六、结果分析与评价
注意：菌落计数偏差
1、统计的菌落数比活菌的实际数目 低 。这是因为当 两个或多个细胞在一起时，每平克板样上品中观的察菌到株的数只是 一个
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数_课件
实验组
尿素唯一氮源 牛肉膏蛋白胨
对照组
生长多种微生物
选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微
生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
㈡.统计菌落数目：
1、显微镜直接计数： 血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品 中微生物的数量。
2. 稀释涂布平板法 （活菌计数法） （1）原理：
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
微生物的培养与观察
三.结果分析与评价
测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的 细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？
/v_show/id_XMjY3NDM3 MTg0.html
/v_show/id_XMTc3Mjg3OTU2.html
NaH2PO4 MgSO4`7H2O 葡萄糖 尿素
1.4g
2.1g 0.2g 10.0g 1.0g
琼脂
15.0g
①从物理性质看属于哪类？从功能上属于哪类培养基？
固体培养基
选择培养基 氮源：尿素
②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源：葡萄糖、尿素
4、怎样证明此培养基具有选择性呢？
培养基类型
结果
只生长分解尿素细菌
◆分离不同的微生物采用不同的稀释度
测定土壤中细菌的数量，一般选用 104 105 106 测定放线菌的数量，一般选用103 104 105 测定真菌的数量，一般选用102 103 104
为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？
人教版选修1 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 课件(21张)
1.使用选择培养基的目的是（ ） A.培养细菌 B.培养真菌 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微生物 加以区别
㈡.统计菌落数目： 1、显微镜直接计数法：
利用血球计数板，在显微镜Biblioteka 计算一定容积里 样品中微生物的数量。
2.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固
2.下列说法不正确的是（ ） A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的 TaqDNA聚合酶 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为 M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数 的估计值 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中 非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果 的可信度 D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数 量最大，种类最多。
㈢.设置对照：
设置对照的主要目的是排除实验组中非测 试因素对实验结果的影响，提高实验结果 的可信度。
实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌 落数目的实验时，A同学从对应的106 倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌 落，但是其他同学在同样的稀释度下 只选择出大约50个菌落。分析其原因。
原因：⑴土样不同， ⑵培养基污染或操作失误 (或者是混入了其他的含氮物质)
专题二 微生物的培养与应用
课题 2 <<土壤中分解尿素的细菌的 分离与计数>>
一、课题背景
直接吸收?
尿素是一种重要的农业氮 肥。尿素不能直接被农作物吸 收。土壤中的细菌将尿素分解 成氨之后才能被植物利用。
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶
脲酶
CO(NH2)2
+ H2O
2NH3 +
CO2
代表菌株
体培养基上所形成的一个菌落是由一个单 细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的 一个单细胞。 ⑵常用方法：稀释涂布平板法。 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数定稿(ppt)
微生物的培养与观察
三.结果分析与评价
1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染， 菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则 菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出 分解尿素的微生物。
2.提示：选择每个平板上长有30—300个 菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。 同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相 差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。
注意事项
①为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30——300的平板上进行计数。
②为使结果接近真实值可将同一稀释度加 到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培 养计算出菌落平均数。
③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。
㈢.设置对照：
设置对照的主要目的是排除实验组中非测 试因素对实验结果的影响，提高实验结果 的可信度。
⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固 体培养基上所形成的一个菌落是由一个单 细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的 一个单细胞。
⑵常用方法：稀释涂布平板法。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平 均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液 的体积(ml)，M代表稀释倍数。
结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误； 如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养 基的配制有问题。
方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情 况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是 否受到污染。
小结：通过这个事例可以看出，实验结果 要有说服力，对照的设置是必不可少的。
二.实验的具体操作 ㈠.土壤取样
6、怎样证明此培养基具有选择性呢？
培养基类型
是否 接种
目的
结果
实验组
以尿素为 唯一氮源
是
分离 只生长尿 尿素 素细菌
好《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》课件
分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因 是 不同微生物在土壤中含量不同 ，其目的是保证 获得 菌落数在30～300之间、适于计数 的平板。 细菌稀释度一般为
104、105、106 103 、 104、105
，
放线菌稀释度为
真菌稀释度为
，
102、103、104
。
为什么分离不同的微生物要采用不同的 稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中 能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相 同吗？ 答：这是因为土壤中各类微生物的数量（单 位：株/kg）是不同的，例如在干旱土壤中的上 层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万， 放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此， 为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释 度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培 养的条件。
关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质 地等等，都是区分细菌的重要手段。
关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质 地等等，都是区分细菌的重要手段。
三、操作提示
1、无菌操作 2、做好标记 3、规划时间
阅读P25页
〖思考〗在研究未知微生物时务必规范操作， 致病微生物 以防被 感染，实验后一定要洗 手。
（二）统计菌落数目：
活体计数法
（1）操作方法：
稀释涂布平板→统计菌落数
（2）原理：
1个菌落→1个活菌
为什么？
（3）统计原则
①选 30∼300 个菌落的平板统计
②每个稀释度取3个平板取其平均值
二、实验设计：
1、实验设计的内容包括
具体的实施步骤以及时间的安排 实验方案、所需仪器、材料、用具和药品 ,
. 2、 观察图示2－7理解后思考实验流程。 实验流程：
土壤中分解尿素的细菌分离和计数ppt课件
A 土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤 B 先铲去表层土3-8cm左右，再取样 C 取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌 D 应在火焰旁称取土壤
2、下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离”实验步骤排列
正确的是 ①土壤取样
C
②称取10g土壤加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中
③吸取0.1ml进行平板涂布
④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107 稀释度
不正确的是（D）
A 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨，高温、高压灭菌后道平板 B 取104、105、106 倍土壤稀释液和无菌水各0.1ml涂布不同平板 C 将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24h-48h D 确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的平板进行计数。
15
利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中， 从对应稀释倍数为106的培养基中，A、B两同学分别 得到以下两种统计结果。
稀释倍数： 测细菌数： 一般用104、105、106稀释液
测放线菌： 一般用103、104、105稀释液 测真菌数： 一般用102、103、104稀释液
思考：为什么分离不同的微生物要用不同的稀释度？
土壤中各类微生物的数量不同
如果是第一次做这个实验，稀释倍数的范围
可以放宽103-107.
20
1 、关于土壤取样的叙述，错误的是（ C ）
是
。
(3)示意图A和B中,
表示的是用稀释涂布平
板法接种培养后得到的结果。
(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部
分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现:振
荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因
是：振荡培养能提高培养液中
的含量，同时可
2、下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离”实验步骤排列
正确的是 ①土壤取样
C
②称取10g土壤加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中
③吸取0.1ml进行平板涂布
④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107 稀释度
不正确的是（D）
A 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨，高温、高压灭菌后道平板 B 取104、105、106 倍土壤稀释液和无菌水各0.1ml涂布不同平板 C 将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24h-48h D 确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的平板进行计数。
15
利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中， 从对应稀释倍数为106的培养基中，A、B两同学分别 得到以下两种统计结果。
稀释倍数： 测细菌数： 一般用104、105、106稀释液
测放线菌： 一般用103、104、105稀释液 测真菌数： 一般用102、103、104稀释液
思考：为什么分离不同的微生物要用不同的稀释度？
土壤中各类微生物的数量不同
如果是第一次做这个实验，稀释倍数的范围
可以放宽103-107.
20
1 、关于土壤取样的叙述，错误的是（ C ）
是
。
(3)示意图A和B中,
表示的是用稀释涂布平
板法接种培养后得到的结果。
(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部
分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现:振
荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因
是：振荡培养能提高培养液中
的含量，同时可
2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(共63张PPT)
跟踪练习 1. 分析下列培养基配方，回答有关问题。 MgSO4 KH2PO · 青霉素 琼脂 蒸馏水 FeSO4 NaNO3 成分 葡萄糖 4 7H2O 0.1万 1g 0.01 g 3g 0.5 g 15 g 1L 含量 30 g 单位 (1)根据物理性质，该培养基属于________ 固体 培养基；根据用途划 选择 培养基。根据培养基成分，所培养微生物的同化 分，则属于________ 作用的类型是________ 异养 。 (2)不论何种培养基，在各种成分溶化后，分装前，要进行的是 ________________ 。 调节pH
2．结果分析与评价 (1)在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成 了氨。氨会使培养基的碱性增强，pH 升高。因此，我们可以通过检测 培养基 pH 的变化来判断该化学反应是否发生。 (2)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细 菌后，如果该细菌能够分解尿素，则 p严格厌氧型：短时 间的有氧也会造成 生长停滞或死亡， 如某些甲烷杆菌兼 性厌氧型：无氧时 进行无氧呼吸，有 氧时进行有氧呼 吸，如酵母菌一般 厌氧型：有、无氧 都进行无氧呼吸， 如某些链球菌
典例精析 (多选)依据不同的划分标准，培养基的类型不同，作用也不 同。下表中划分培养基的依据和培养基的类型及作用，正确的匹配是 ( ) 为了筛选土壤中能够降解某除草剂的细菌(目的菌)。有人做了如下图 实验：
3．对分解尿素细菌的鉴定 (1)原理 脲酶 CO2＋2NH3 CO(NH2)2＋H2O――→ 可通过检测pH的变化来判断该化学反应是否发生。 (2)方法 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细 菌，若指示剂变红，则pH升高，说明该种细菌能分解尿素。
许多细菌如变形杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌，可将尿中的尿素分 解成氨，其代谢类型大都属于异养厌氧型； 大肠杆菌可将大便中的尿素分解成氨，其代谢类型属于异养、兼 性厌氧型。
【精品课件】土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件
利于
生长的条件(包抑括制 营养阻、止 温度、
pH等)，同时 或 其他微生物生长。
• (3) 选 择 培 养 基 ： 在 微 生 物特学定中 ， 将 允 许
种类的微抑生制物阻生止长，同时
和
其他
种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。
• 2．统计菌落数目
• (1)常用方稀法释：涂布平板
法。
• (2)统计依据：当样稀品释的度
•______________________________________
•解析 根据微生物对营养的需求，在培养基中加 入或不加某些物质以达到促进目的菌生长，抑制 或阻止其他杂菌生长的目的，然后再用涂布平板 法、平板划线法或其他方法筛选出单个目的菌落， 再接种培养即可获得纯目的菌。为防止培养基中 水分蒸发形成的水珠落入培养基中影响菌体生长，原则，操作中要严格进行无菌操 作。
•(4)通过某些特殊环境分离微生物：如在高盐环 境中可分离耐盐菌，其他菌在盐浓度高时易失水 而不能生存；在高温环境中可分离得到耐高温的 微生物，其他微生物在高温环境中因酶失活而无 法生存。
•2．结果分析与评价
内容
现象
对照的培养皿
中无菌落生长
有无杂菌 污
培养物中菌落 数偏高
染的判断
菌落形态多样
，菌落数偏高
•(3)选择培养基一般只生长具有特定代谢特性的 微生物，鉴别培养基可以存在其他微生物，而且 能鉴别特定的微生物。
• 【巩固1】 苯酚是工业生产排放的有毒污染物 质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工 厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的 苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解 利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所 示，①为土壤样品。请回答下列问题。
人教生物选修1专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数(共25张PPT)
3.设置对照 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响, 提高实验结果的可信度。
（二）设置对照
一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。
究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。实验方案有两种。 一种方案是可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验， 如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则 证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。另一种方 案是将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养， 作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。通过这个事例 可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。
结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
显微镜直接计数也是测定微生物数量的常
用方法。
每克样品中的菌株数
C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V：涂布平板时所用的稀释液的体积（ml) M：稀释倍数
说明设置重复组的重要性。第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组， 因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平 板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可 能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。这个实 例启示学生，在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增 强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的 结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。
[一]土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3 cm左右，再取样，将样品装 入事先准备好的信封中。
[二]样品的稀释
为什么分离不同的微生 物要采用不同的稀释度？ 测定土壤中细菌的总量 和测定土壤中能分解尿 素的细菌的数量，选用 的稀释范围相同吗？
人教生物选修1专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数(共24张PPT)
需培养基：
①从物理性质看 此培养基属于哪
KH2PO4 NaH2PO4
1.4g 2.1g
类？ 固体培养基
MgSO4`7H2O 葡萄糖
0.2g 10.0g
②在此培养基中 哪些作为碳源、 氮源？
尿素 琼脂
1.0g 15.0g
碳源：葡萄糖
氮源：尿素
③此培养基对微生物是否具有选择作用？ 具有。只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，才 能在此培养基上生长
灭菌的试管和1个灭菌的移液管。
③ 应在火焰旁称取土壤 10 g。在火焰附近将称好的土样倒入
盛有90mL 无菌水 的锥形瓶中，塞好 棉塞 。在稀释土壤溶液的
过程中，每一步都要在 火焰旁 进行（无菌操作）。
④ 为避免试管相互混淆，可以将已经进行过稀释的试管，按
稀释度递增的顺序
依次放在试管架的另一行。
① 按照浓度 从低到高的顺序 涂布平板，不 必更换移液管（无菌操作）。
② 实验时要对培养皿作好标记，注 明 培养基类型、、培养时间、、稀释度 等。
甲：没有重复实验（至少涂布3个平板） 乙：结果误差过大，不应用于计算平均值
计算公式： 每克样品中的菌株数 =（C÷V）×M
某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得
平板上菌落数的平均数为234，那么每克样
品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液
的体积为0.1ml） A. 2.34×108
( B)
B. 2.34×109
C. 234
D. 23.4
去①表从层富土含，有在机距物地、表潮约湿3、-8pHc≈m的7的土土壤壤层中取取样样，。再先将铲 样品装入事先准备好的 信封 中。（原因：土壤微生
物3主-8要分cm布的在近距中地性表土壤中，约70％-90％为
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
5.测定细胞总氮量或总碳量
7
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
8
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
1.想一想，如何从平板上的菌落数推测出每克样品中 的菌落数？
答：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计 3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁 栏的公式进行计算。
9
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
富集一些。
检测：酚酞的灵敏度不
如酚红，因此建
议最好使用酚红，
否则效果不明显。
31
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
培养基 类型
日期 第一天 第二天
平板细菌数（土壤稀释度）
选择性培养基
（涂布接种）
（未涂布接种）
牛肉膏蛋白胨 培养基
32
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
本课题知识小结:
33
12
两稀释度 菌数之比
1.6 2.2
-
菌落总数 个/g或个/ml
16400 38000 27100 513000
270 30500
报告方式 个/g或个/ml 16000或1.6×104 38000或3.3×104 27000或2.7×104 510000或5.1×105 270或2.7×102 31000或3.1×104
102
103
104
105
106
107
101
10g土壤
9ml
无菌水
9ml 无菌水
104
105
106
107
104
105
106
107
104
105
106
107
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数人教版选修PPT课件
课题 2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
关于菌种的筛选和计数 1．菌株的筛选 (1)自然界中目的菌株的筛选 ①根据它对___生__存__环__境___的要求到相应的环境中去寻找。 ②从土壤中分离出目的菌株。 (2)实验室目的菌株的筛选 原理：人为提供有利于___目__的___菌株生长的条件(包括营 养、温度、pH 值等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。
测定真菌：选用稀释 102、103、104倍
细菌：30～37 ℃；1～2 d 培养与观察 放线菌：25～28 ℃；5～7 d
真菌：25～28 ℃；3～4 d
计数
每克样品中的菌株数＝(C/V)×M， C——某一稀释液浓度下平板上生长的平均菌落数；
V——涂布平板所用稀释液体积(ml)；M——稀释倍数
5
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1．关于选择培养基 (1)概念：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长， 同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养 基。 (2)举例：以纤维素作唯一碳源的选择性培养基，可以分离 到分解纤维素的微生物；缺氮培养基可以分离到固氮微生物等。
答案：A
12
分离能分解尿素的细菌
【例 2】选择土壤中分解尿素的微生物，所用氮源为( )
A．硝酸
B．氨
C．尿素
D．蛋白胨
【名师点拨】：只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，缺
乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育
繁殖，从而受到抑制，所以，以尿素为唯一氮源的培养基能够
选择出分解尿素的微生物。
1
2．统计菌落数目的方法 (1)____直__接______计数法 ①过程：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在_显__微__镜___ 下计算一定容积里样品中微生物的数量。 ②缺点：不能区分死菌和活菌。 (2)间接计数法(活菌计数法) 根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个 ___单__细__胞_____繁殖而成，按比例稀释样品后，将稀释液接种培 养，统计___菌__落___的数目。
关于菌种的筛选和计数 1．菌株的筛选 (1)自然界中目的菌株的筛选 ①根据它对___生__存__环__境___的要求到相应的环境中去寻找。 ②从土壤中分离出目的菌株。 (2)实验室目的菌株的筛选 原理：人为提供有利于___目__的___菌株生长的条件(包括营 养、温度、pH 值等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。
测定真菌：选用稀释 102、103、104倍
细菌：30～37 ℃；1～2 d 培养与观察 放线菌：25～28 ℃；5～7 d
真菌：25～28 ℃；3～4 d
计数
每克样品中的菌株数＝(C/V)×M， C——某一稀释液浓度下平板上生长的平均菌落数；
V——涂布平板所用稀释液体积(ml)；M——稀释倍数
5
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1．关于选择培养基 (1)概念：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长， 同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养 基。 (2)举例：以纤维素作唯一碳源的选择性培养基，可以分离 到分解纤维素的微生物；缺氮培养基可以分离到固氮微生物等。
答案：A
12
分离能分解尿素的细菌
【例 2】选择土壤中分解尿素的微生物，所用氮源为( )
A．硝酸
B．氨
C．尿素
D．蛋白胨
【名师点拨】：只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，缺
乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育
繁殖，从而受到抑制，所以，以尿素为唯一氮源的培养基能够
选择出分解尿素的微生物。
1
2．统计菌落数目的方法 (1)____直__接______计数法 ①过程：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在_显__微__镜___ 下计算一定容积里样品中微生物的数量。 ②缺点：不能区分死菌和活菌。 (2)间接计数法(活菌计数法) 根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个 ___单__细__胞_____繁殖而成，按比例稀释样品后，将稀释液接种培 养，统计___菌__落___的数目。
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数_课件
3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基： KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4`7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g ①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属 于哪类培养基？ 固体培养基 选择培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？
②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
一.研究思路
㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照
㈠.筛选菌株
1、实例： DNA多聚酶链式反应是 一种在体外将少量DNA 大量复制的技术，此项 技术要求使用耐高温 （930C）的DNA聚合酶。 原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大 多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的 要求，到相应的环境中去寻找。
三.结果分析与评价
1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染， 菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则 菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出 分解尿素的微生物。
2.提示：选择每个平板上长有30—300个 菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。 同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相 差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。
原因：土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg）
㈣.取样涂布
◆实验时要 对培养皿作 好标记。注 明培养基类 型、培养时 间、稀释度、 培养物等。
◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板， 则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如 果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试 验不精确，需要重新实验。
㈤.微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验
结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误； 如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养 基的配制有问题。 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情 况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是 否受到污染。 小结：通过这个事例可以看出，实 验结果要有说服力，对照的设置是 必不可少的。
D)
3.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中 加入（ C ） A.较多的氮源物质 B.较多的碳源物质 C.青霉素类药物 D.高浓度食盐
二.实验的具体操作
1、土壤取样 2、制备培养基：
制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。
3、样品的稀释 4、取样涂布 5、微生物的培养 与观察 6、细菌计数
微生物的培养与观察
三.结果分析与评价
1.对照的未接种的培养基在培养过程中是 否有菌落生长 ； 用牛肉膏蛋白胨基础培养基来培养的菌落 数是否与用选择培养基来培养的菌落数相 同。
㈡.统计菌落数目：
1、显微镜直接计数： 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里 样品中微生物的数量。
缺点 不能区分死菌与活菌；
不适于对运动细菌的计数； 个体小的细菌在显微镜下难以观察；
2.间接计数（活菌计数法） （1）常用方法：稀释涂布平板法。
当样品的稀释度足够高时，培养基表 （2）原理：
面生长的一个菌落，来源于样品稀释 液中的一个活菌，通过统计平板上的 菌落数，就能推测出样品中大约含有 活菌数。
原因：因为热泉高温，淘汰了绝大多数微生物只有耐 热细菌被筛选出来。
启示：寻找目的菌种时要根 据它对生存环境的要求，到 相应的环境中去寻找。
2、实验室中微生物的筛选原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、 pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。（P21）
2、该培养基选择分解尿素的微生物的原理 该培养基的唯一氮源为尿素，只有能合成脲酶的 微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲 酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能 生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就 能够选择出分解尿素的微生物。
4、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
一.研究思路
㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照
㈠.筛选菌株
1、实例：
DNA多聚酶链式反应是一种 在体外将少量DNA大量复制 的技术，此项技术要求使用 耐高温（930C）的DNA聚合 酶。
美国黄石公园的一个热泉
一、课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农 作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才 能被植物利用。 2、细菌利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它 们能合成脲酶 脲酶 NH3 + CO2 CO(NH2) +H2O
2
3、常见的分解尿素的微生物
芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状 芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。
注意事项
①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30— —300的平板上进行计数。
②为使结果接近真实值应将同一稀释度的菌液 涂布到至少三个平板中，经培养计数，取平均 值。
③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。
㈢.设置对照：
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素 对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
四、操作提示
无菌操作 做好标记 规划时间
五.课外延伸
大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征
大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属光泽
实践训练 1.使用选择培养基的目的是（ C ）
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
A.培养细菌 B.培养真菌 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别 3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是( A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素