生化实验基本操作
八种常用生化实验步骤
实验一基因的PCR扩增技术一、实验目的与原理简介聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）是体外克隆基因的重要方法，它可在几个小时内使模板分子扩增百万倍以上。
因此能用于从微量样品中获得目的基因，同时完成了基因在体外的克隆，是分子生物学及基因工程中极为有用的研究手段。
常规PCR反用于已知DNA序列的扩增，具体可分为三个主要过程：一、变性。
通过升高温度使DNA双链模板分子中氢断裂，形成单链DNA分子，温度为94℃，时间1min。
二、复性。
降低温度使DNA单链分子同引物结合。
温度为55℃，时间1min。
三、延深。
升高温度，在DNA聚合酶最佳活性的条件下在引物3端加入dNTP，实现模板的扩增，温度为72℃，时间2min。
同时第一步变性前要在94℃下预变性5分钟，使DNA双链完全解开。
经过 25-35个循环之后，在72℃下继续延伸10分钟。
PCR反应包含的七种基本成分：1）热稳定性DNA聚合酶：Taq DNA聚合酶是最常适用的酶，商品化Taq DNA酶的特异性活性约为80000单位/mg.2）寡核苷酸引物：寡核苷酸引物的设计是影响PCR扩增反应的效率与特异性的关键因素。
3）脱氧核苷三磷酸（dNTP）：标准的PCR反应体系应包括4种等摩尔浓度的脱氧核苷三磷酸，即dATP、dTTP、dCTP和dGTP。
每种dNTP的浓度一般在200-250μl之间，高浓度的dNTP对扩增反应会起抑制作用，可能是dNTP与Mg2+螯合有关。
4）二价阳离子：一般需要Mg2+来激活热稳定的DNA聚合酶，由于dNTP与寡聚核酸结Mg2+合，因而反应体系中阳离子的浓度一般要超过dNTP和引物来源的磷酸盐基团的摩尔浓度。
Mg2+的最佳浓度为1.5mmol/L。
5）维持PH值的缓冲液：用Tris-Cl在室温将PCR缓冲液的PH值调至8.3-8.8之间，标准PCR缓冲液浓度在10mmol/L。
在72℃温育时，反应体系的温度将下降1个多单位，致使缓冲液的PH值接近7.2。
生物化学实验基本操作
2.容量分析仪器如吸量管、容量瓶、滴定管等，不能 用毛刷刷洗。用后应及时用自来水多次冲洗，细心 检查洁净程度，根据挂不挂水珠采取不同处理方法。 （1）如不挂水珠，用蒸馏水冲洗、干燥，方法同上； （2）如挂水珠，则应沥干后用重铬酸钾洗液浸泡 4~6小时，然后按上法顺序操作，即先用自来水冲洗， 再用蒸馏水冲洗，最后干燥。
⑶使用刻度吸量管的注意事项： ①选择适当规格的吸量管：吸量管的最大容积 应等于或略大于所需容积（ml数）。 ②仔细看清吸量管的刻度情况：刻度是否包括 吸量管尖端的液体？读数方向是从上而下，还 是从下而上？ ③拿吸量管时，刻度一定要面向自己，以便读 数。
④吸取试剂时应注意三点：一是先吹去吸量管 内可能存在的残留液体，二是将吸量管插入试 剂液面深部(以免吸液过程中因液面降低而吸 入空气产生气泡或管内试剂进入洗耳球)，三 是使用洗耳球(不可直接用口吸)。 ⑤按吸量管上口时应该用食指，不能用拇指。
生物化学实验基本操作
一. 玻璃仪器的洗涤 在生化实验中，玻璃仪器洁净与否，是获得准确结果的 重要环节。洁净的玻璃仪器内壁应十分明亮光洁，无 水珠附着在玻壁上。 ㈠ 常用的洗涤方法： 1.一般仪器，如烧杯、试管等可用毛刷蘸肥皂液、合 成洗涤剂仔细刷洗。然后用自来水反复冲洗，最后用 少量蒸馏水冲洗2~3次，倒置在器皿架上晾干或置于 烘箱烤干备用。
3.奥氏吸量管：准确度最高，使用时必需吹出 留在尖端的液体。
㈡ 定量吸(移)液器(微量加样器)：定量吸液器是 吸量管的革新产品。由塑料制成。目前，因产 地厂家不同其质量、价格差异十分悬殊。 1.定量吸液器的优点：使用方便，取、加样迅 速，计量准确，不易破损，能吸取多种样品 （只换吸嘴即可）。
②按“零”点位置来分，有“O”点在吸量管 上端的（即读数从上而下逐渐增大），也有 “O”点在吸量管下端的（读数从下而上逐渐 增大)。两种标示方法，在使用时各有方便之 处。 ③按刻度方法来分，刻度吸量管也有两种，一 种是刻度刻到尖端的，将液体放出时，应吹出 残留在吸量管尖端的少量液体(我实验室的刻 度吸量管全部是这一种)，另一种是刻度不刻 到尖端的。
实验一生化实验基本操作(移液管、离心机,分光光度计的使用)
➢ 放置 检查离心机，机内应无异物和无用的套管，并 且运转平稳。将已配平的两管对称地放入离心机的离 心孔内，做好标记，盖好上盖，开启电源。
➢ 离心 顺时针慢慢旋动转速调节钮，增加离心机转速 。当离心机转速达到要求时，记录离心时间。
B：
• A.选用最大刻度的吸管
• B.应选用取液量最接近的刻度吸管
• C.选用最小刻度的吸管
• 3.离心时平衡好放入离心机时
A：Leabharlann • A.对称放置 B.分开放置 C. 紧挨放置
Lambert 定律 lgI0/I=K1L
Beer 定律 lgI0/I=K2C
Lambert-Beer 定律 lgI0/I=KCL
令A= lgI0/I 则 A= -lgT= KCL T为透光度； A为吸光度； K为消光系数
Fingure 1. The main elements of spectrometer
端旁；用橡皮球吸液体至刻度上，眼睛看着液面 上升；吸完后用食指顶住吸管顶端；吸管保持垂 直，尖端与试剂瓶接触，用食指控制液体下降至 所需体积的刻度处，液体凹面、刻度和视线应在 同一水平面上；吸管移入准备接受溶液的盛器中 ，放开食指，使液体自动流出
二、离心机的使用
➢ 装液 将待离心的液体置于玻璃离心管（刻度离心管 ）或短试管中。
➢ 直接计算法： C样=A样/A标*C标
➢ 标准曲线法：浓度为X轴，吸光度为Y轴绘制标 准曲线，在标准曲线上获得未知浓度CoSO4的浓 度。
结果
管号 空白管 1
Abs
0
生物化学实验指导1
生化实验室的一般规则1. 进入实验室应穿着工作服。
留长发的同学应挽短、戴帽。
2. 整洁。
实验台必须洁净，各种仪器放置要有秩序。
实验完毕，必须将仪器洗净、放好，拭净台面，方可离开实验室。
3. 安静。
实验时不可谈笑，如有问题可以小声请教师解答。
4. 废物及废液处理。
实验完的废液应倾入水槽中，并用水冲净。
但浓酸、浓碱及氰化物等不可倒入水槽，应倾入预先准备的废液盆或污物桶中。
少量浓酸、浓碱可直接倾入水槽，然后以大量流水冲净。
火柴梗、废滤纸、棉花等不可扔入水槽，应弃入废物盆或垃圾箱中，以免堵塞水管。
5. 试剂与标准溶液。
取用试剂后，应立即将瓶塞盖好；放回原处。
取用有毒试剂时，须用滴定管或滴管。
取样时，应注意用多少取多少。
如未用完只可弃去，不可倒回瓶中；6. 凡可产生烟雾或有毒气体的实验必须在通风橱中操作。
7. 在用恒温水浴箱保温时，应注意随时盖好箱盖。
调节温度到所需温度后，即不再旋动调温旋扭。
8. 贵重仪器如分光光度计、离心机等必须爱护，使用前应熟读使用方法，记住操作要点，按操作规程工作。
如有问题应请教师帮助，不得自行拆卸检修。
9. 防火。
勿使酒精、乙醚或其它易燃试剂靠近火焰。
若蒸发此类溶液时，应用水浴，不得直火加热，以免发生火灾。
10. 实验前应熟读实验指导，记住要点。
实验时应仔细操作并注意观察现象及结果，及时记录。
生化实验的基本操作-1-一、玻璃器皿的洗涤玻璃器皿的洗涤在生物化学实验中是一项重要的工作。
实验性质不同所采取的洗涤方法也不同。
例如研究酶制备的反应时，组织匀浆对金属的污染是非常敏感的，至于细菌的悬浮液对少量的金属可能不敏感，但少量的维生素和其它有机物质则有较大的影响。
一般氧化剂洗液如重铬酸洗液不能有效地除去油脂、硫酸钡等污迹。
因此污迹不同所应采用的洗涤试剂和方法也不同。
如可用汽油或洗涤剂（洗衣粉液或洗洁净）除去油脂，用酸性硫代硫酸钠溶液或热草酸除去氧化性污迹MnO2等，用40％尿素除去附着管内壁的血凝块等。
实验一生化实验基本操作
四、组织与分组
❖ 1．每一实验室推选学生课代表一名，负责下列工 作：
❖ ①实验报告的收集与分发； ❖ ②安排清扫值日名单； ❖ ③反映同学学习情况及对教学工作的意见； ❖ ④其它临时性的工作。
2．一般实验都为每个学生单独进行。有的实验要 两人一组实验前，实验者应根据黑板上公布本实验 使用的仪器种类与数目，检查。
❖ 分发在实验桌上的各种仪器，如有缺损应于清洗前 立即向准备室负责老师补换。实验中如有破损，则 必须登记，按学院规定处理。实验后应将完整仪器 洗涤清洁，点交管理人员。 2．公用仪器（包拈贵重仪器，如光电比色计、电 动离心机等）使用时时间不宜过长，以免妨碍他人 工作。设有使用登记薄的仪器，使用后必须登记， 以示负责。对于不熟悉之仪器，切勿随意乱动应请 教师指导之。
七、玻璃仪器的洗涤
❖ 一般玻璃仪器用肥皂或去污粉以毛刷洗涤即足以满 足要求，洗后应将肥皂或去污粉仔细冲掉，将水倾 去后，器壁不挂水珠，视为合格。铬酸洗液仅用于 毛刷不能洗净的仪器，切勿滥用普通玻璃仪器之洗 涤。使用铬酸洗液时，仪器应干燥；过多的水份将 使洗液迅速失效。用过之铬酸洗液须加以保存以反 复使用，直至变为绿色后方可舍弃；其舍弃法与浓 硫酸液相同。用洗液浸洗过的玻璃仪器，应先用自 来水冲洗，然后再用蒸馏水或去离子水清洗，清洗 时，宜采用“少量多次”原则以节约蒸馏水，同时 清洗的效率也高。
八、舍弃物的处理
❖ 舍弃物必须依照其性质作适当之处理。以免 造成实验材料之浪费，损坏水槽及下水管道， 或污染实验环境。 1．所有固体舍弃物（例如用过的滤纸、损坏 的软木塞及橡皮物、玻璃渣、火柴梗等）。 必须放入废物筒或篓中，切勿丢水槽中。 2．废硫酸或洗液，应先倾入大量水中，再倒 入水槽中，并以大量水冲走。 3．实验完成后的沉淀或混合物，若含有可提 取或收回的贵重物品者，不可随意舍弃，应 放入教师指定的回收器中。
生化基本操作方法
生化基本操作方法生化学作为一门重要的科学，广泛应用于医学、生物学、化学等领域。
生化基本操作方法是生化学研究中必不可少的一部分，其正确性和可靠性对于实验结果的准确性和科学性有着决定性的影响。
本文将介绍生化基本操作方法。
一. 实验前的准备在进行生化实验之前，首先需要进行实验前的准备工作。
这包括实验室的准备和实验物品的准备。
实验室的准备：实验室应该是整洁、干净和有序的，以防止实验过程中出现误差。
实验室应该要有充足的安全设施，例如事故处理设施和防护设施，以预防任何实验失误而导致的伤害。
实验物品的准备：实验物品是生化实验中必不可少的物品，包括试剂、器材、培养基等。
在准备实验物品时，需要考虑物品的纯度、存储条件和到期日等因素，并按照实验的需要正确选取和配制所需的物品，以确保实验的准确性和稳定性。
二. 实验操作的步骤1. 分配试样将待测试的样品分配到适当的量的试管或反应器中，这是生化实验的第一步。
2. 预处理样品为了得到准确的测试结果，通常需要对试样进行预处理。
例如，对于生化酶的活性测定，通常需要通过离心或超滤等步骤分离和浓缩酶的样品。
3. 装载试剂将所需的试剂和溶液配制好，并按照一定的比例加入到待测试的试样中。
为确保测试结果的准确性，必须严格控制每种试剂和溶液的质量和分量。
4. 开始测试开始测试前，首先需要对测试仪器进行预热和校准。
一旦测试仪器准备就绪，就可以将试样装入测试器中，开始进行测试。
在进行生化测试时，必须严格按照测试步骤和时间表的要求进行操作。
例如，在生化酶活性测定中，必须在恰当的时间内准确的读取试样的吸光度。
5. 结果分析在测试完成后，需要对结果进行分析和处理。
根据不同的实验要求和目的，分析和处理方法也有所不同。
例如，在酶活性测定中，可以使用Michaelis-Menten 方程式计算酶的动力学参数，如Km值和Vmax值，从而了解酶的性质和功能等。
三. 实验过程中的注意事项在进行生化实验时，需要特别注意以下几点：1. 实验操作过程中应保持实验室干净、整洁和有序，避免实验失误。
生化实验基本操作
生化实验基本操作目的要求：1．熟悉实验室规则及常用生化仪器2．清点洗刷实验用具。
3．掌握各种仪器的正规操作及维护实验操作1．玻璃仪器的洗涤(1) 洗涤液：①洗洁精，肥皂水，洗衣粉。
②玻璃仪器专用洗涤液：主要成份为中性稀氯氧化剂，上海日化研究所出品(2) 洗涤的要求与步骤：要求：洁净的玻璃器皿表面应不挂任何水滴。
步骤：不净的器皿：洗衣粉或肥皂水刷洗自来水冲净对使用过的仪器应养成及时清洗的习惯，特别是血液分析时用以吸取血液样本的吸管，用过后应当立即用水将所沾的血液冲去，否则放置过久，血液干燥硬结，就很不容易清除。
(3)玻璃仪器的干燥一般的玻璃仪器均可洗净后倒置架上，让其水分蒸发自然干燥，如需迅速干燥者应按仪器的不同类型按下述不同方法处理：①试管、离心管、烧杯、烧瓶等普通玻璃器皿可置烤箱中100—105℃烘烤②少量仪器如需急用也可在电炉上或酒精灯上烘烤。
烘烤时应将器皿时时转动，务使受热缓慢且均匀，并将管口(或杯口)倾斜向下，以便水蒸气冷凝成水滴，顺口流出，不致使水滴接触烘热了的器壁而使仪器爆裂。
③使用电吹风干燥一般玻璃仪器也很便利常用。
④下列玻璃仪器应避免烘烤：吸管：容易造成器壁变形而致容量不准。
比色杯：易在烘烤时发生破裂。
2．移液操作：(1)吸量管的使用①吸量管的选择：在一次完成转移的前提下，应选用容量较小的吸量管。
·对于同一次实验中同一种试剂的移取，应选用同一支吸量管②操作·用洗耳球将液体吸至超过标线·移开洗耳球，迅速用食指压紧管口·必要时将管尖端外围拭净·调液面至标线·放开食指，使液体流入容器·将最后液滴沿器壁而下或吹出③读数·吸量管保持垂直·视线与液面应水平·管中液面与刻度线应呈切线注：对于刻度由上至下的吸量管应尽量使用上端刻度管尖残液是否需吹出，(2)枪式移液器的使用①枪式移液器的结构1. 液体吸放钮2．体积选取钮3. 体积、显示4．枪头排放钮5. 枪头排放器6．枪头接嘴其内部柱塞分2段行程，第1档为吸液，第2档为放液，手感十分清楚。
制药药剂教案
实验1 生化实验基本操作一、生化实验特点介绍生化的重要性和有趣性，引起学生对生化课的兴趣，帮助学生树立正确的实验态度1、简介生物化学学科特点：1）一门在分子水平上研究和探索生命现象和本质的学科，发展迅速，进展快，是生命科学的领头羊，其理论和技术已渗入到医学各学科，二十一世纪被称为分子生物学时代，这门学科的发展，已很大程度上改变着人类的生存状态，但仍有很多未知领域。
2）从同学们关心的角度（考研）说明生化的重要性。
3）是一门实验性学科，每一理论的提出都来自于科学实验，实验本身是这门学科的基础和重要组成部分，是探究问题的重要途径，培养我们发现问题、分析问题解决问题的能力，而非机械的操作（多问为什么！多想怎么办！）。
2、生化实验的特点：1）主要运用化学的原理和方法设计的科学实验。
2）生化实验拥有先进的实验手段。
3）微量和定量是生化实验的一大特点。
二、生化实验室规则让学生树立科学正确的实验意识，培养基本的科研素养。
1、实验前：认真预习，有自己的见解，提出实验思路和问题。
2、实验中：认真操作，仔细观察，如实纪录。
养成良好的科学实验习惯，注意安全。
3、实验后：独立完成实验报告，分析结果和出现的问题，培养分析解决问题的能力。
离开实验室时，清点仪器，安排值日，检查灯火水电气等。
三、生化实验基本操作1、玻璃仪器的清洗：（开始实验的重要步骤，是实验能否成功的重要因素）一般玻璃仪器：（如试管，烧杯）自来水冲洗—肥皂水刷洗—自来水冲洗—蒸馏水淋洗—干燥（倒置风干）容量分析仪器：（如吸量管，滴定管）自来水冲洗—铬酸洗液浸泡—大量自来水冲洗蒸馏水淋洗—干燥比色杯：自来水冲洗—酒精或盐酸浸泡—自来水冲洗—蒸馏水淋洗***注：切忌用试管刷、粗布擦洗，分清毛面光面，手拿毛面。
清洁标准：对光面玻璃璧上有均匀的水膜，倒置不挂水珠。
教学内容与组织安排：2、吸量管的种类及使用分类：奥式吸量管，移液管，刻度吸量管（实验中要根据情况选取合适的吸量管）刻度吸量管：全流出式（刻度到尖端，吹）和不完全流出式使用：执管；取液（忌悬空）；调准刻度（液体凹面，视线，刻度平行）；放液（管尖贴内壁）；洗涤。
生化实验的基本操作
生化实验的基本操作（一）搅拌和振荡1.配制溶液时，必须随时搅拌或振荡混合。
配制完了时，必须充分搅拌或振荡混合。
2.搅拌使用的玻璃搅棒，必须两头都烧圆滑。
3.搅棒的粗细长短，必须与容器的大小和所配制的溶液的多少呈适当比例关系。
不能用长而粗的搅棒去搅拌小离心管中的少量溶液。
4.搅拌时，尽量使搅棒沿着器壁运动，不搅入空气，不使溶液飞溅。
5.倾入液体时，必须沿器壁慢慢倾人以免有大量空气混入。
倾倒表面张力低的液体(如蛋白质溶液）时，更需缓慢仔细。
6.振荡溶液时，应沿着圆圈转动容器，不应上下振荡。
7.振荡混合小离心管中液体时，可将离心管握在手中，以手腕、肘或肩作轴来旋转离心管; 也可由一手持离心管上端用另一手弹动离心管；也可用一手大拇指和食指持管的上端，用其余三个手指弹动离心管。
手指持管的松紧要随着振动的幅度变化。
还可以把双手掌心相对合拢，住离心管，来回挫动。
8.在容量瓶中，混合液体时，应倒持容量瓶摇动，用食指或手心顶住瓶塞，并不时翻转容量瓶。
9.在分液漏斗中振荡液体时，应用一手在适当斜度下倒持漏斗，用食指或手心顶住瓶塞，并用另一手控制漏斗的活塞。
一边振荡，一边开动活塞，使气体可以随时由漏斗泄出。
10.研磨配制肢体溶液时，要使杵棒沿着研钵的单方向进行，不要来回研磨。
（二）沉淀的过滤和洗涤1.过滤沉淀一般使用滤纸。
2.应根据沉淀的性质选择不同的滤纸.胶状沉淀,应使用质松孔大的滤纸.一般大小颗粒的结晶形成沉淀,应使用致密孔小的滤纸。
而极细的沉淀，则应使用致密孔最小的滤纸。
滤纸越致密，过滤就越慢。
3.滤纸的大小要由沉淀量来决定，并不是由溶液的体积来决定。
沉淀量应装到滤纸高度的1／3左右。
最多不应超过1／2，通常使用直径为7-9厘米的圆形滤纸。
4.折叠滤纸应先整齐的对折，错开一点再对折，打开后形成一边一层，一边三层的圆锥体。
折叠尖端时不可过于用力，以免容易出洞。
放入漏斗中时，滤纸边缘应完全吻合。
撕去三层一边的外面两层部分的尖端，使滤纸上缘能更好的贴在漏斗的壁上，不留缝隙。
生化实验基本操作技术
生化实验基本操作技术一：玻璃仪器的洗涤及干燥：（一）意义：去除干扰物，提高实验结果的准确性。
（二）常用洗涤剂：1．洗衣粉，肥皂，洗洁精，去污粉----用于一般去污。
2．强酸，强碱，尿素------去除蛋白质，核酸。
3．铬酸洗液------见附2。
4．水（自来水，蒸馏水）------用来冲洗容器。
（三）洗涤方法：* 洗涤程序：泡→洗（→泡）→冲→漱1．新仪器的洗涤：2%的盐酸浸泡数小时→自来水冲净→洗涤剂溶液中浸泡过夜→试管刷蘸肥皂、洗衣粉或去污粉擦洗容器内外壁→自来水冲10 遍→蒸馏水漱洗内壁3 遍→包装、消毒→干燥备用。
2．非定量敞口仪器的洗涤（试管、烧杯等）用后立即放入洗涤剂溶液或清水中浸泡过夜→试管刷蘸肥皂、洗衣粉或去污粉擦洗容器内外壁→自来水冲10 遍→检查是否洗净→蒸馏水漱洗内壁3 遍→包装、消毒→干燥备用。
注意：检查毛刷顶部是否裸露，洗刷时用力不可过猛，以免戳破玻璃仪器。
3．窄口仪器的洗涤（容量瓶、试剂瓶）使用后立即在洗涤剂溶液或清水中浸泡过夜→洗涤剂溶液倒入容器内（约1/4）→小心转动或摇动仪器→自来水冲10 遍→检查是否洗净→蒸馏水涮洗内壁3 遍→包装、消毒→干燥备用。
4．刻度吸管的洗涤使用后立即用大量自来水冲洗（切勿使样品干在管内，否则难以洗净）→干燥后放入铬酸洗液中浸泡过夜→取出，在特制的容器中用自来水冲洗30 分钟→蒸馏水涮洗内壁3 遍→包装、消毒→干燥备用。
（四）判断洗净的标准：洗净的玻璃仪器管壁光洁、清亮，无污渍；被水湿润后，管壁呈现均匀水膜，无挂水珠。
（五）干燥方法1、晾干：仪器倒立放在特制架子上，自然晾干。
2、烘干：尽量倒净仪器内部的水，将其倒立放在托盘上，放入烘箱烘干。
普通仪器用80-100℃，容量分析仪器用37-40℃。
3、有机溶剂干燥：体积小的容器急需干燥时，可用此法。
洗净的仪器先用少量酒精洗一次，再用少量丙酮或乙醚洗涤，吹干（不必加热）。
二：吸管和微量移液器的使用及注意事项：（一）刻度吸管：1．作用：用于准确移取一定体积的溶液。
李晶---药品检验基本操作(生化部分)
自来水冲洗 避免干涸
去离子水 洗净2次
强碱清洗 试管刷或粗 布、粗纸
腐蚀抛光的比色皿
磨损比色皿的抛光面
可用一支绸布 包裹的小棒或 棉花球棒清洗
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一、玻璃及塑料器皿的清洗和干燥方法 3. 塑料器皿的清洗
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三、生化药品常规检验项目的基本操作
（三）SDS-PAGE电泳的凝胶制备方法
2. 灌胶
以微量移液器尽快吸取分离胶 ，迅速从两块玻璃的中间位置 灌入。室温聚合1h～2h以后， 可以从水平方向看到一个分界 线，表示凝胶聚合。此时先倾 倒掉凝胶表面的液体，用浓缩 胶缓冲液淋洗凝胶，然后迅速 配制、灌入浓缩胶至与低矮玻 璃板的顶端平齐。此时，迅速 插入与凝胶厚度相当的样品梳 。为防止气泡陷入，样品梳应 倾斜插入，然后摆成垂直方向
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反 向 吸 液 法
二、取液器的使用
正 反 吸 液 法 的 区 别
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二、取液器的使用
1. 目视检 查：① 活塞
可平滑地压下 或弹起。② 吸取超纯水后 保持移液器垂 直，10秒钟后 吸头尖端无液 滴出现
10l～100l有存液微量进样器： 不锈钢的针尖管部分 是空管，进样器的柱塞不能到达，因而管内会存有空 气或液体。
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生物化学实验的基本操作
一、玻璃仪器的使用及清洁（一）玻璃仪器的洗涤及干燥1、一般仪器：烧杯、试管、离心管等普通玻璃仪器，可直接用毛刷蘸餐洗净刷洗，然后用自来水冲洗，直至容器内不挂水珠即可。
最后用少量蒸馏水冲洗内壁2－3次，倒置晾干即可。
2、容量分析仪器：容量瓶、滴定管及吸管等容量仪器，用后用自来水多次冲洗，如能清洁（壁不挂水珠），再用蒸馏水少量冲洗2~3次晾干即可备用。
若仍不干净附有油污等，则须于干后放入铬酸洗液内浸泡数小时，然后倒净（或捞出）洗液，用自来水充分冲洗至水不显黄色后再冲几次，最后用少量蒸馏水冲洗2~3次晾干备用。
在做酶学实验时，对仪器的清洁要求更高，因如有极微量的污物（如重金属离子）即可导致整个实验失败。
因此，必要时仪器经上述方法洗涤后，还需用稀盐酸或稀硝酸洗涤，以除去铬及其它金属离子，然后再用自来水、蒸馏水冲洗。
生化实验室常用的洗液有以下几种：（1）铬酸洗液：为最常用的洗液，由重铬酸钾、粗硫酸及水配制而成，去污力强，清洗效果好。
其配制方法有多种，可根据需要进行选择，常用的配方如下表。
重铬酸钾（ｇ）100 60 100水（ｍｌ）750 300 200粗硫酸（ｍｌ）250 460 800清洁性能较弱较强（常用）最强配制方法为：先将重铬酸钾溶于水，再慢慢加入浓硫酸。
因配制过程产生大量热，容器需放入冷水中，边加硫酸边搅动混合。
由于产热量很大，使用玻璃容器有破裂的危险，所以最好用耐高温的陶瓷或耐酸的搪瓷容器。
洗液可多次反复使用，如效力变弱，可加入少量重铬酸钾及浓硫酸继续使用，但如果变为绿色，则不宜再用。
（2）10%尿素液：为蛋白质良好溶剂，帮适用于洗涤盛血的容器。
（3）草酸盐液：用于清洗过锰酸钾的痕迹。
（4）硝酸液：用1：1的硝酸水溶液，用于清洗CO2测定器及微量滴定管。
（5）乙二胺四乙酸二钠（EDTA－Nａ2）液：5~10%的EDTA－Nａ2液可用于洗涤器皿内无机盐类。
玻璃仪器的干燥方法可根据不同仪器的种类而定。
生化实验操作规程
生化实验操作规程一、实验目的本实验操作规程旨在确保生化实验的顺利进行，保证实验结果的准确性和可重复性。
二、实验前准备1. 确认所需实验器材和试剂的齐全性。
2. 检查实验室安全设备的完好性，如洗眼器、紧急淋浴等。
3. 穿戴实验室安全防护用具，如实验服、手套、眼镜等。
4. 清洁并消毒实验台面和各项实验器皿。
三、实验操作步骤1. 根据实验需求，准备好所需样本和试剂，并按照提供的配方准确称量。
2. 将准备好的样本和试剂按照实验器具要求加入相应容器中，并进行混匀。
3. 设置实验仪器或设备的参数，确保其正常运行。
4. 将准备好的样本和试剂按照实验要求进行处理，如加热、冷却、离心等。
5. 在实验过程中，保持实验操作区域的整洁，避免交叉污染。
6. 在实验操作完成后，根据实验要求及时保存或处理样本和试剂。
7. 清洁并消毒使用过的实验器具，确保下次使用前的准备工作。
四、实验安全注意事项1. 遵守实验室安全操作规范，严禁单独操作以及无指导下进行实验。
2. 注意个人防护，正确佩戴实验服、手套、眼镜等防护用具。
3. 使用化学试剂时，避免直接接触皮肤和吸入有害气体。
4. 注意实验仪器或设备的安全操作要求，避免损坏设备或引发事故。
5. 在实验过程中，及时清理溢出物和废弃物，并正确处理。
五、实验记录与结果分析1. 按照实验要求记录实验操作的步骤、试剂使用量等相关信息。
2. 将实验结果进行详细记录，并进行数据分析和解释。
3. 对实验结果进行总结，归纳出可能存在的误差和改进方向。
六、实验后处理1. 根据实验室规定，妥善处理产生的废弃物和实验材料。
2. 清洁实验器具并归位，确保实验室的整洁和安全。
七、实验注意事项1. 严格按照操作规程进行实验，不得随意更改实验过程或参数。
2. 在实验过程中严禁食品和饮品的摄入，以免引起误食或误呼吸。
3. 如在实验过程中遇到问题或意外情况，应立即向指导老师报告。
通过以上的实验操作规程，我们能够确保每一次生化实验的顺利进行，并获得准确可靠的实验结果。
生化实验基本操作
• 4.新购置的玻璃仪器，应先置于1-2%稀盐酸 溶液中浸泡2-6小时，除去附着的游离碱，再 用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗2-3次。
总的原则：凡用过的玻璃仪器，均应立即洗 涤，久置干涸后洗涤十分困难。如不能及时洗 涤，先用流水初步冲洗后浸泡在清水中，待后 按常规处理。
• 3.粘附有血浆的刻度吸量管等，有三种洗涤方 法：
㈡ 混匀的方法通常有以下几种：
1. 颠倒混匀：用玻璃纸堵住管口，上下颠倒混 匀。
2.叩击混匀:左手执试管上端，用右手指轻击试 管下半部，使管内溶液作旋转运动。
3.利用旋涡混合（振荡）器混匀。 4.振荡混匀：右手执试管上部，手腕抖动混匀。 5.不得已时可用干燥清洁的玻璃棒搅匀。
㈢ 混匀的注意事项： • ⒈防止盛器内的液体溅出或被污染。 • ⒉严禁用手指堵塞管口或瓶口震荡混匀。
三. 溶液的混匀
㈠混匀的目的： • ⒈使反应体系内的各种物质分子很好地互相接
触，充分进行反应；
• ⒉使欲稀释的溶液成为浓度均一的溶液。
电动离心机的使用方法：
• 1.将欲离心的液体，置于离心管或小试管内。 并检查离心管或小试管的大小是否与离心机的 套管相匹配。
• 2.取出离心机的全部套管，并检查套管底部是 否铺有软垫，有无玻璃碎片或漏孔（有玻璃碎 片必须取出，漏孔应该用蜡封住）。检查合格 后，将盛有离心液的两个试管分别放入套管中， 然后连套管一起分置于粗天平的两侧，通过往 离心管与套管之间滴加水来调节两边的重量使 之达到平衡。
㈡ 定量吸(移料制成。目前，因产 地厂家不同其质量、价格差异十分悬殊。
• 1.定量吸液器的优点：使用方便，取、加样迅 速，计量准确，不易破损，能吸取多种样品 （只换吸嘴即可）。
2.定量吸液器的类型：有两种类型。
临床生化检验：加样器及移液管的使用
临床生化实验报告实验名称：吸量管与加样器的使用实验目的：掌握吸量管和加样器的使用，比较两者的准确度实验原理：①吸量管是用于准确量取一定体积液体的量出式的玻璃仪器。
②加样器是精密量器，只能在特定范围内使用，移液范围选择在满量程的35%到100%时，可以保证最佳的准确性和重复性，尽量避免将移液器量程设置为最大值的10%以下。
实验材料：自来水实验仪器：洗耳球、吸量管、加样器、烧杯、电子天平实验操作步骤：1.使用移液管，首先要看一下移液管标记、准确度等级、刻度标线位置等。
2．吸液：用右手的拇指和中指捏住移液管的上端，将管的下口插入欲吸取的1号烧杯中的水中，插入不要太深或太浅（一般1-2cm处）。
左手拿洗耳球，接在管的上口把液体慢慢吸入，先吸入该容量的1/3左右，用右手的食指按住管口，取出，横持，并转动管子使液体接触到刻度以上部位，以置换内壁的水分，然后将溶液从管的下口放出并弃去，如此反复洗3次后，即可吸取溶液至刻度以上5mm处，立即用右手的食指按住管口。
2.将空烧杯放置在调平的电子天平上并置零。
3．调节液面:将移液管向上提升离开液面，用滤纸将沾在移液管外壁的液体擦掉，管的末端靠在盛溶液的1号烧杯的内壁上，管身保持垂直，略为放松食指（有时可微微转动吸管）使管内溶液慢慢从下口流出，直至溶液的弯月面底部与标线相切为止，立即用食指压紧管口。
将尖端的液滴靠壁去掉，移出移液管，插入承接溶液的2号烧杯中。
4.放出溶液：将管的末端与2号烧杯内壁接触，移开食指，将移液管内的液体放入烧杯中。
并记录烧杯此时的重量，即为移液管内的水的重量。
5.将上述操作再重复两次，并记录下数据。
6.在吸液杆上安装与吸取量匹配的洗液嘴，套紧7.右手握住加样器，用拇指把“推进按钮”向下按到第一档位，将吸液嘴尖头浸入一号烧杯中1-3mm深度，在缓慢放开“推进按钮”，使其返回远处，停留1-2秒后，将吸液嘴离开溶液8.目测吸入体积是否合理，注意不要有气泡9.将3号烧杯放在电子天平上清零9．把吸液嘴尖头轻轻轻轻地接触3号烧杯内壁，成15-20°角倾斜，将推进按钮向下按到第一静止点，停留1-2秒，再按到第二档位，排出尖头残液，此时的重量即为加样器取出水的质量，观察并记录数据⑤将上述操作重复三次后记录数据⑥使用完毕，将吸头嘴卸下。
生化实验的基本操作和常用仪器使用-3
生化实验的基本操作和常用仪器使用-31、72型分光光度:72型分光光度计是可见光分光光度计，其波长范围为420—720毫微米。
（1）操作方法：① 按照接线要求，将稳压器和检流计连接在单色器上。
注意，将检流计与单色器相接时，应按三股接线的颜色准确连接。
而稳压器的输出接线柱与单色器相接。
② 在电源电压与仪器要求的电压相符时，分别插上稳压器和检流计的电源插头。
③ 将单色器的光路闸门找到黑点（关闭光路的指示）位置后，再将检流计上的电源开关旋到“开”处。
此时，指示光点即出现在标尺上，用零点调节器将光点中线准确地调至透光率标尺的。
“0”位上。
④ 打开稳压器的电源开关和单色器的光源开关，隔10分钟，再使用仪器。
⑤ 将比色杯架暗厢盖打开，取出比色杯架，将4支比色杯中的1支装入空白溶液或蒸馏水，其余3支装入待测液。
将比色杯置于架上，空白溶液杯应放在第一格内，放回暗厢内，盖好暗厢盖。
此时，空白溶液杯应在光路上。
⑥ 旋转波长调节器，将所需波长对准红线。
把光路闸门拨到红点（打开光路的指示）位置上，并以顺时针方向旋动光点调节器，使光点中线移至透光率“100”的刻度处。
数分钟后，待光电池趋于稳定，再轻轻转动光点调节器，使光点中线准确地处于透光率“100”的位置。
⑦ 将单色器的光路闸门拨回黑点处，校正检流计的光点中线于“0”位上。
然后，立即开启光路闸门，拨至红点处，校正检流计光点中线对准透光率“100”刻度上。
⑧ 调节好后，可以进行样品溶液的测定。
将比色杯定位装置的拉杆轻轻地拉出一格，使第二个比色杯内的待测液进人光路。
此时，检流计标尺上光点中心线所指示的读教，即为该溶液的光密度或透光率。
依此测定第二、第三个待测液，并读出数据。
重复2—3次后，取其平均值。
⑨ 在测定过程中，应经常关闭光路闸门，核对检流计的零点位置。
如有改变，及时用零点调节器核准。
⑩ 测定完毕，将每个旋钮、开关和调节器等复原或关闭。
拔掉电源插头，切断电源，并盖好仪器罩。
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临床生物化学与分子生物学教研室
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生物化学基本技术及应用
一、实验常识 （一）、实验室规则及安全及防护知识 1．自觉地遵守课堂纪律，维护课堂秩序，
保持室内安静。必须穿白大褂，不能穿背心、 拖鞋进入实验室。
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2．要认真、严肃、积极、主动地做实验， 要听从教师的指导。实验过程中要认真做好 观察、记录。完成实验后经教师检查同意， 方可离开。实验完成后要及时的按要求完成 实验报告。
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9．使用浓酸、浓碱，必须极为小心地操作， 防止溅失。用吸量管取这些试剂时，必须使 用橡皮球，绝对不能用口吸。若不慎溅在实 验台或地面，必须及时用湿抹布擦洗干净。 如果触及皮肤，应立即治疗。
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10．如果不慎倾出了相当量的易燃液体，则 应按下法处理：(1)立即关闭室内所有的火 源和电加热器。(2)关门，开启小窗及窗户。 (3)用毛巾或抹布擦拭洒出的液体，并将液 体拧到大的容器中，然后再倒入带塞的玻璃 瓶。
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2．实验报告
实验结束后，应及时整理和总结实验结 果，写出实验报告。下面列举实验报告的书 写格式，仅供参考。
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实验报告书写要求：实验名称、实验日期、 目的和要求、原理、实验测定的数据、图纸 及结果、结果分析和讨论。
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原理：实验原理简要归纳，一些可用化学反 应式表示。
数据、图纸及结果：将一定实验条件下获得 的实验结果和数据进行整理、归纳、分析和 对比，并尽量总结成各种图表，如原始数据 及其处理的表格、标准曲线图以及实验组与 对照组实验结果的比较图表等。
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7ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
7．使用电器设备(如恒温水浴、离心机、电 炉等)时，严防触电；绝不可用湿手或在眼 睛旁视时开关电闸和电器开关。检查电器设 备是否漏电应用试电笔或手背触及仪器表面。 凡是漏电的仪器一律不能使用。
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8．可燃物，特别是易燃物(如乙醚、丙酮、 乙醇、苯等)时，应特别小心。不要大量放 在桌上，更不应放在近火焰处。低沸点的有 机溶剂不准在火焰上直接加热，只能在水浴 上利用回流冷凝管加热或蒸馏。
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3．注意保持实验室的整洁。实验完毕，须 将药品试剂排列整齐，仪器要放好，将实验 台面抹拭干净。使用后的玻璃仪器要清洗干 净放好。
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4．要爱护实验仪器，节约使用各种试剂、 物品。使用仪器时，应小心仔细，防止损坏 仪器。使用贵重精密仪器时，应严格遵守操 作规程，发现故障立即报告教师，不要自己 动手检修。仪器损坏时，应如实向教师报告。
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刻度吸管的使用：
（1）选择：使用前先根据需要选择适当的 吸量管，刻度吸管的总量最好等于或稍大于 最大取液量。临用前要看清容量和刻度。
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11．实验中一旦发生火灾切不可惊慌失措， 应保持镇静。首先立即切断室内一切火源和 电源。然后根据具体情况积极正确地进行抢 救和灭火。
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（二）、实验记录及实验报告
1．实验记录
实验中观察到的现象、结果和数据，应及时 地直接记在记录本上。原始记录必须准确、 简练、详尽、清楚。记录时，应做到如实正 确记录实验结果，不可夹杂主观因素。在定 量实验中观测的数据，如称量物的质量、滴 定管的读数、光度计的读数等，都应设计表 格准确记下读数，并根据仪器的精确度准确 记录有效数字。
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2．使用过的玻璃仪器的清洗
(1)一般玻璃仪器：如试管、烧杯、锥形瓶 等、，先用自来水冲洗至无污物，再选用大 小合适的毛刷沾取去洗衣粉或肥皂水，将器 皿内外(特别是内壁)细心刷洗，再用自来水 冲洗干净，洗至容器内壁光洁不挂水珠为止， 最后用蒸馏水冲洗2～3次，倒置在清洁处晾 干，急用时可用干燥箱烤干。
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实验中使用仪器的类型、编号及试剂的规 格、化学式、分子量、准确的浓度等，也应 如实记录，以便在总结实验时进行核对和作 为查找成败原因的参考依据。
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如果发现记录的结果有可疑、遗漏、丢失 等，都必须重做实验。因为，将不可靠的结 果当做正确的记录，在实际工作中可能造成 难以估计的损失。所以，在学习期间就应一 丝不苟，努力培养严谨的科学作风。
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四、实验室基本操作和常识
（一）玻璃仪器的清洗
玻璃仪器是生物化学中不可缺少的器具。实 验中所使用的玻璃仪器清洁与否，直接影响 实验结果，往往由于仪器的不清洁或被污染 而造成较大的实验误差，甚至会出现相反的 实验结果。因此，玻璃仪器的洗涤清洁工作 是非常重要的。
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（二）吸量管的使用
吸量管（简称吸管）是生化实验中最常用 的仪器，可分为三类：①奥氏吸管，②移液 管，③刻度吸管。
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5．废弃液体(强酸强碱溶液必须先用水稀释) 可倒入水槽内，同时放水冲走。废纸及其他 固体废物和带有渣滓沉淀的废液都应倒入指 定的垃圾筐内，不得倒入水槽或到处乱扔。
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6．对实验的内容和安排不合理的地方可提 出改进意见。对实验中出现的一切反常现象 应进行讨论，并大胆提出自己的看法，做到 生动、活泼、主动地学习。
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结果分析和讨论：讨论部分不是对实验结果 的重述，而是关于实验方法(或操作技术)和 有关实验的一些问题，如对实验的正常结果 和异常现象以及思考题进行探讨；对于实验 设计的认识、体会和建议；对实验课的改进 意见等。
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1．新购置玻璃仪器的清洗 新购买的玻璃 仪器表面常附着有游离的碱性物质，可先用 肥皂水(或去污粉)洗刷，再用自来水洗净， 然后浸泡在l％～2％盐酸溶液中过夜(不少 于4h)，再用自来水冲洗，最后用蒸馏水冲 洗2～3次，在烘箱内 。
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(2)容量仪器：如吸量管、滴定管、量瓶等， 使用后应立即浸泡于凉水中，勿使物质干涸。 工作完毕后用流水冲洗，以除去附着的试剂、 蛋白质等物质，晾干后浸泡在铬酸洗液中 4～6 h(或过夜)，再用自来水反复冲洗干净， 最后用蒸馏水冲洗2～3次，晾干备用。
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(3)其他：盛装具有传染性样品的容器，如 病毒、传染病患者的血清等沾污过的容器， 应先进行高压(或其他方法)消毒后再进行清 洗。盛过各种毒品，特别是剧毒药品和放射 性同位素物质的容器，必须经过专门处理 (略)，确知没有残余毒物存在方可进行清洗。