外周血涂片的制备染色分类计数..

合集下载

血涂片的制备、染色、观察方法、复检

04
章节 PART
血涂片的复检
血涂片的复检
血涂片复检的意义，首先是复核该复检标本的血常规报告的准确性，其次是在观察血细胞形态时，根据所观察到的外周血细胞形态，提供给临床有效的信息，要做到保证血常规结果的准确、不漏检、不误诊、不误导。切实的结合临床，关注已知的患者信息，查看患者的相关检查结果，了解
靠等待自然干燥章。节 PART
血涂片的染色
4、瑞氏染色是最经典，最常用的染色法，尤其对于细胞质成分，中性颗粒等可获得很好的染色效果，但对细胞核的着色能力略差。姬姆萨染液对细胞核着色较好，结构更清晰，但对细胞质成分的着色能力略差。采
用瑞-姬姆萨章复节合染PA液R可T使细胞质、颗粒、胞核等均获得满意的染色效果。
患者出现的体章征节、P症A状R（T 必要时要询问临床医生），在此基础上，了解临
床医生的诊断或治疗思路，然后在显微镜下有目的地进行查找，才能做到有百密而无一疏。
红系统细胞形态
一、正常红细胞
章节 PART
红系统细胞形态
二、红细胞大小改变
章节 PART
红系统细胞形态
三、红细胞血红蛋白含量改变
章节 PART
章节 PART
红系统细胞形态
3、卡波环
章节 PART
红系统细胞形态
4、有核红细胞
章节 PART
红系统细胞形态
5、网织红细胞：是指晚幼红细胞脱核后到完全成熟的红细胞之间的过度细胞，分为4型。Ⅰ型：丝球形，Ⅱ型：网型， Ⅲ型：破网型，Ⅳ型：点粒型（图2-165、2-166、2-167）
红系统细胞形态
章节 PART
血涂片的制备
二、将推片接近血滴处，然后轻轻接触血滴并压在血滴上，使血滴呈”一”字型展开, 充满推片宽度(如果能做到边缘血量较少,中间血量稍多为最佳)(图1-2,图1-3).

血涂片制作与白细胞分类计数

淋巴细胞
1.细胞大小为7～15µm。 2.细胞核与细胞浆比率为5:1～2:1。 3.细胞呈圆形或卵圆形。 4.细胞核通常呈圆形或卵圆形；偶见核凹陷或轻度切迹。 5.核染色质散在致密或粗颗粒状聚集；副染色质无或少量。 6.无核仁；有时，可见小的、淡的核小体。 7.细胞浆少至中等量；淡蓝色至中度嗜碱性；可见核周淡染区；有时有副核窝；小淋巴细胞无颗粒；大淋巴细胞的细胞浆较多，含少数粗大嗜天青颗粒。
单核细胞
1.细胞大小为12～20µm。 2.细胞核与细胞浆比率为4:1～2:1。 3.细胞呈圆形，可有伪足。 4.细胞核形态各异，呈圆形、卵圆形、马蹄形、切迹形或分叶形。 5.核染色质轻度聚集。 6.无核仁。 7.细胞浆含蓝灰色颗粒，少量空泡。
1.手工涂片法
取一滴血滴于洁净无油脂的玻片一端. 左手持玻片，右手再取边缘光滑的另一玻片作为推片。将推片边缘置于血滴前方，然后向后拉，当与血滴接触后，血即均匀附在二玻片之间。此后以二玻片约呈30—45度的角度平稳地向前推至玻片另一端，推时角度要一致，用力应均匀，即推出均匀的血膜（血膜不可过厚、过薄）。将制好的血
（4）用蒸馏水冲洗（如自来水的pH值稳定于7.2左右时亦可代用）。冲洗血膜时应将玻璃片持平，冲洗后斜置血涂片于空气中干燥。或先用滤纸吸取水分迅速干燥，即可镜检。
血涂片的染色步骤：
判断染色结果：红细胞
淡红色，无核的圆形细胞，因红细胞为双凹形，故边缘部分染色较深，中心较浅，直径7-8微米。
颗粒白细胞
•
2.细胞呈圆形或卵圆形。
•
细胞核分叶，叶间有丝状
•
连接，分为2～5叶。
•
3.核染色质聚集。
•
4.无核仁。

血涂片制作、染色白细胞分类计数 PPT课件

稍靜置0.5 ～ 1min。再滴加緩衝液5～10滴，與上述染液充分混勻。
❖ 染色：染色5～10min. ❖ 沖洗：不要先倒掉染液，平持血塗片用流水緩緩沖洗乾淨。 ❖ 乾燥：直立血塗片，使其自然乾燥。 ❖ 低倍鏡觀察 ❖ 油鏡觀察 ❖ 計算求出各類細胞所占的百分率。
2021-11-7
1
思考題
• 試述外周血白細胞正常形態特徵和異常形
低倍鏡下所見
1
各類成熟白細胞的形態學：
中性粒細胞（Ne）：圓形，直徑10～13µm，
胞漿染淡桔紅色，核形可呈杆狀核或2至5葉不等，以3葉多見，染成深紫紅色，質地粗糙，胞漿中有許多細小均勻紫紅色顆粒。
2021-11-7
1
嗜酸性粒細胞（Eo）：較中性粒細胞
稍大，胞核多為兩葉，呈眼鏡、八字形，核染色質粗糙染深紫紅色，胞漿內充滿粗大均勻的嗜酸性顆粒，瑞氏染色時呈桔紅色，有折光性。
2021-11-7
1
• 血紅蛋白、嗜酸性顆粒為鹼性物質，故與
酸性染料伊紅結合而染成紅色，呈嗜酸性。
• 細胞核的核蛋白與原、幼細胞的胞漿為酸
性物質，故與鹼性染料美蘭和天青結合，染成深藍色或深紫紅色，呈嗜鹼性。
• 中性顆粒與美蘭和伊紅同時結合而染為淡
紫紅色，呈嗜中性。
2021-11-7
1[器材]ຫໍສະໝຸດ • 光學顯微鏡洗乾淨。
❖乾燥：直立血塗片，使其自然乾燥。
2021-11-7
1
3．白細胞分類：
先用低倍鏡選擇厚薄適宜，染色良好，細胞分佈均勻的體尾交界處，滴加香柏油一滴，油鏡下分類計數。分類時要有秩序的連續進行，避免主觀選擇視野。通常分類計數100個白細胞，計算並報告各種白細胞所占比例。
2021-11-7

实验五白细胞分类计数

WBC 百分率（%）
中性杆Nst 1~5
中性分Nsg 50~70
嗜酸性 E 0.5~5
嗜碱性B
0~1
淋巴 L
20~40
单核M
3~8
绝对值（ ×109/L ） 0.04~0.50 2.00~7.00 0.05~0.50 0~0.10 0.80~4.00 0.12~0.80
精选课件
8
七、注意事项
1.计数区域：以体尾交界处最佳。
精选课件
19
按胞核的形态分为：
N杆状核（Nst）
核径最窄处大于最宽处1/3 为杆状核，核型多样，可呈C形、S形、V形或不规则形。
N分叶核（Nsg）
核径最窄处小于最宽处1/3为分叶核，细胞分2~5叶，甚至5叶以上。
精选课件
20
中性粒细胞
精选课件
21
杆状核
精选课件
22
分叶核
精选课件
胞浆：含粗大但大小不一、分布不均匀的紫黑色嗜碱性颗粒，颗粒常覆盖于核上，致使核的轮廓与结构模糊不清
胞核：核分叶不明显，形态不规则。
精选课件
27
嗜碱性粒细胞（血涂片）
颗粒特点大小不一分布不均嗜碱性强
精选课件
28
精选课件
29
精选课件
30
4. 淋巴细胞（L）
形态：直径6-15um，分为大L和小L。
精选课件
14
淋巴细胞（Lymphocyte，L）பைடு நூலகம்
B细胞疫
T细胞
浆细胞生成Ab 免疫活性物质
体液免细胞免疫
精选课件
15
单核细胞（Monocyte，M）
吞噬，杀灭病原体清除损伤或已死亡的细胞处理抗原

血涂片制作和白细胞分类

血涂片制作和白细胞分类血涂片制作和白细胞分类是临床医学中常用的方法之一，它能够帮助医生准确诊断和评估一些血液疾病。

本文将介绍血涂片的制作过程以及白细胞的分类方法。

一、血涂片的制作过程血涂片的制作是通过将一滴新鲜的血液涂抹在载玻片上，并进行染色和固定处理后得到的。

这个过程主要包括以下几个步骤：1. 准备工作：在制作血涂片之前，需要准备好所需的材料，包括载玻片、血液采集器、消毒液、染色液等。

同时，需要确保工作台面整洁干净，以确保结果的准确性和可靠性。

2. 血液采集：使用消毒液消毒患者的指尖，并轻轻按压以促使血液涌出。

用血液采集器收集一滴新鲜的血液，并迅速将其滴在载玻片的一端。

3. 血液涂布：将另一张载玻片斜放在已涂血的载玻片上，并以一个较小的角度连续向前推动。

这个过程会将血液均匀地涂布在载玻片上，并形成一薄层。

4. 染色和固定：待血涂片完全干燥后，将其浸入染色液中，一般常用的染色液包括吉姆萨染色液、伊昔色素等。

染色时间一般为几分钟到几十分钟不等。

染色完毕后，用水冲洗干净，并将载玻片放在空气中晾干。

5. 封片：待载玻片完全干燥后，将其与另一张空白玻片背靠背，使用封片胶进行封片。

这样可以保护血涂片并防止其受损。

二、白细胞的分类方法白细胞是我们体内的一类免疫细胞，其数量和种类的变化可以反映出我们身体内的疾病情况。

目前，临床上常用的白细胞分类方法主要有以下几种：1. 常规分类：常规分类是根据杆状核的形态特征将白细胞分为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。

这种分类方法可以通过染色液的颜色变化来识别不同的白细胞类型。

2. 流式细胞仪分类：流式细胞仪是一种高级的实验仪器，可以通过细胞的物理和化学性质来对其进行分类和鉴定。

它可以根据细胞的大小、形状、颜色和表面标记等特征来区分不同种类的白细胞。

3. 形态学分类：形态学分类是通过观察白细胞的细胞形态特征来判断其种类。

这需要经过专业的细胞学家或医生的鉴定，通过显微镜观察细胞的大小、形状、核型等特点来进行分类。

临床血液学检验基础

正常血片中大颗粒细胞
白细胞数量异常
中性粒细胞增多中性粒细胞减少淋巴细胞增多淋巴细胞减少单核细胞增多单核细胞减少嗜酸性粒细胞增多嗜酸性粒细胞减少嗜碱性粒细胞增多嗜碱性粒细胞减少
未成熟粒细胞（早幼粒细胞、中幼粒细胞和晚幼粒细胞）
粒细胞数量增高
粒细胞数量减低

白细胞减少症的诊断：中性粒细胞＜1.5×109/L为粒细胞减少症；＜0.5×109/L时称为粒细胞缺乏症。白细胞减少症的鉴别诊断

或合成洗涤剂清洗。目的：保持玻片接近中性

二：手工推片：先后移，后前推（30-45度），匀速，平稳；血滴大，角度大，速度快，血膜厚，反之，则血膜薄。
瑞氏染色（Wright染色）
瑞氏染料由酸性染料伊红（E-）和碱性染料亚甲蓝
（M+）组成。甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红；二是固定细胞形态。原理：既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力
染色质（H-J）小体
碱性点彩
卡博氏环
红细胞包涵体
胞内微生物：细菌、真菌、原生体或寄生
虫感染患者红细胞内或红细胞间游离
疟原虫
巴贝虫
红细胞包涵体
Pappenheimer小体(含铁血黄素颗粒) 红细胞内铁蛋白聚集物，血片瑞氏染色可见多个大小不等、形状不定、通常分布在一个较限制的胞浆局域内的嗜碱包涵体，铁染色（+）
红细胞包涵体
有核红
NRቤተ መጻሕፍቲ ባይዱC存在，用于WBC分类或计数校正
出现幼红细胞、巨幼红细胞
幼红细胞
巨幼红细胞
网织红细胞
RET是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡细胞，其胞质中残存的嗜碱性物质RNA经碱性染料（如煌焦油蓝、新亚甲蓝）活体染色后，形成蓝色或紫色的点粒状或丝网状沉淀物。网织红细胞自骨髓释放到外周血液后仍具有合成血红蛋白的能力，约1-2天后，过渡为成熟红细胞

外周血涂片的显微镜检查(许蕾)

外周血涂片的显微镜检查上海市临床检验中心许蕾主要内容：一.概况二.红系正常及异常形态（大小，形态，结构，染色，其他）三.白系正常及异常形态（5种WBC及其他）四.巨核系正常及异常形态（血小板等）五.血液中寄生虫形态六.血液中其他异常形态一、概况外周血涂片（血象）镜检：血象中的血细胞主要来自骨髓及其他，所以血象检查对造血系统及其他系统疾病的诊断和鉴别非常重要。

血涂片镜检涉及到患者状态，采血、涂片、染色、经验等。

一、概况血涂片染色方法：1.瑞氏染色法；2.姬（吉）氏染色法：3.混合染色法：4.Romanowsky染色法*5.快速染色法：一、概况镜检法先10* 40* 100*（油）城垛式从体尾交界处向尾部进行镜检。

一、概况白细胞分类计数参考方法（中华人民共和国卫生行业标准WS/T246-2005 中华人民共和国卫生部发布2005-12-01实施）包括样本采集，血涂片制备，染色，有核细胞检查步骤和方法，对检验人员要求和考核等内容。

一、概况血象可反映下列情况：1.红细胞，（网织红细胞），白细胞，血小板大致数量，正常人血涂片1-3WBC/10-15PLT/200RBC，非抗凝血血小板应有聚集现象。

2.红系：观察有无有核红细胞，成熟红细胞有无大小，形态，结构（e.g. H-J body等)，染色等异常。

3.粒系：观察各种粒系所占比例，有无幼稚细胞出现，有无病理形态出现(e.g. 中毒颗粒，空泡等）。

4.其他白细胞系统：观察各系所占比例，有无幼稚和异常形态结构的细胞（e.g. 异淋，浆细胞等）。

5.血小板：有无数量，大小，形态，染色，聚集性等的异常，有无巨核细胞。

6.有无寄生虫和其他特殊异常细胞（e.g. 疟原虫，癌细胞，破碎细胞等)。

二、红系正常及异常形态正常RBC ：园盘形，φ6.7-7.7 (6-9)um ，淡红色,有中央淡染区，无核。

异常RBC 形态及相关疾病：一、大小异常1.RBC 生成加速。

2.MA,HA,急失血贫。

血涂片染色及白细胞分类计数

•
6、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。 2020年 12月12 日星期六上午 1时7分 24秒01 :07:242 0.12.12
•
7、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。。20 20年12 月上午 1时7分 20.12.1 201:07 December 12, 2020
•
8、业余生活要有意义，不要越轨。20 20年12 月12日星期六 1时7分 24秒01 :07:241 2 December 2020
12-Dec-2020.12.12
• 14、我只是自己不放过自己而已，现在我不会再逼自己眷恋了。20.12.1201:07:2412 December 202001:07
2.WBC分类计数
2.1原理 2.2器材:显微镜、香柏油、拭镜纸、清洁剂 2.3操作步骤
1.采末梢血——染色 2.低倍镜下选择细胞分布均匀、着色良好的域，滴香柏油一滴
3.油镜下分类，分类时要有秩序的连续进行
（“几” 字形），避免主观选择视野。通常分类 100个白细胞，计数并报告各种白细胞所占百分比。
滴加等量或稍多的II液（洗耳球混匀）
5-10min
冲洗（注意）
干燥
注意事项
1.血涂片干后方可染色 2.加染液不能过少 3.冲洗时应以流水冲洗 4.染色过淡可复染，先加缓冲液再加染液 5.染色过深可用水冲洗或浸泡一定时间，也可用
甲醇脱色 6.染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关。
应在具体实践中摸索合适的时间。
嗜酸性粒细胞+淋巴细胞
10-12 μm
圆形
胞质着色不清
胞质内颗粒量少、大小不匀、排列零乱、紫黑色，可盖核上
核形不清染色质粗糙，紫红色

外周血涂片的制备染色分类计数解析

少量粗大、大小不均的紫红色嗜天青颗粒。
29/0282/200/290/28
17
淋巴细胞（血涂片）
29/0282/200/290/28
18
5.单核细胞（M）
• 形态：为外周血中最大的细胞，直径15-25um。
• 胞浆：较多，染淡蓝色或灰蓝色，呈毛玻璃样半透明。胞浆内含少量细小、弥散分布的灰尘样淡紫红色嗜天青颗粒，可见空泡。
实验三、血涂片的制备、
单击此处编染辑色母版标题样式分类计数
29/0282/200/290/28
1
操作流程采血→推血片→血片两端画线→滴瑞氏染液3-5滴 →滴等量PBS液→流水冲洗→干后镜检
29/0282/200/290/28
2
血涂片制备
推片先后退
推片
再向前推
血液
载玻片
将推片匀速向前，勿停顿
12
2.嗜酸性粒细胞（E）
• 形态：略大于中性粒细胞
• 胞浆：胞浆内充满粗大、整齐、均匀、排列紧密、有立体感的桔红色嗜酸性颗粒
• 胞核：长呈分叶状，二叶居多，呈眼镜状，染色质粗，染深紫红色。
29/0282/200/290/28
13
嗜酸性粒细胞（血涂片）
29/0282/200/290/28
14
嗜碱性粒细胞（血涂片）
29/0282/200/290/28
颗粒特点大小不一分布不均嗜碱性强
15
4. 淋巴细胞（L）
• 形态：直径6-15um，分为大L和小L。
• 胞核：圆形或肾形，深紫红色。染色质粗糙，排列均匀。
• 核膜明显，偶见假核仁。
29/0282/200/290/28
16
• 胞浆：小淋巴极少,浆内无颗粒。大淋巴胞浆丰富，呈透明蓝色，常有

外周血涂片的制备染色分类计数

7
28/0202/200/280/20
8
血涂片染色
涂片干燥后两端蜡笔画线加瑞氏染色3-5滴固定0.5-1分钟
勿冲洗再加磷酸盐缓冲液3-5滴后静置5-10分钟
直接流水冲洗（切勿先倒掉染液）
28/0202/200/280/20
123
涂片经水洗干燥后用油镜分类计数100个白细胞李四
9
血涂片的观察
少量粗大、大小不均的紫红色嗜天青颗粒。
28/0202/200/280/20
17
淋巴细胞（血涂片）
28/0202/200/280/20
18
5.单核细胞（M）
• 形态：为外周血中最大的细胞，直径15-25um。
• 胞浆：较多，染淡蓝色或灰蓝色，呈毛玻璃样半透明。胞浆内含少量细小、弥散分布的灰尘样淡紫红色嗜天青颗粒，可见空泡。
嗜碱性粒细胞（血涂片）
28/0202/200/280/20
颗粒特点大小不一分布不均嗜碱性强
15
4. 淋巴细胞（L）
• 形态：直径6-15um，分为大L和小L。
• 胞核：圆形或肾形，深紫红色。染色质粗糙，排列均匀。
• 核膜明显，偶见假核仁。
28/0202/200/280/20
ห้องสมุดไป่ตู้
16
• 胞浆：小淋巴极少,浆内无颗粒。大淋巴胞浆丰富，呈透明蓝色，常有
低倍镜观察 1.染色情况(满意、偏酸、偏碱） 2. 细胞分布情况油镜下分类计数：体尾交界处。油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。
李四
123
28/0202/200/280/20
10
外周血正常白细胞形态
• 1.中性粒细胞（N） • 直径10-15um • 胞质：粉红色，含较多细小均匀的紫红色中

外周血涂片镜检与血细胞分析仪对白细胞分类计数的比较研究

技术应用Womens Health Research2021年5月第10期文章编号:WHR202006317外周血涂片镜检与血细胞分析仪对白细胞分类计数的比较研究李雪娟任玲芬云南省澄江市妇幼保健院，云南澄江652599【摘要】目的：对外周血涂片镜检与血细胞分析仪对白细胞分类计数的比较进行分析。

方法：选取2019年1月至2019年12月到本院就诊的共120例患者的血液标本作为研究样本，分别应用外周血涂片镜检与血细胞分析仪对白细胞分类计数进行比较,对照结果数据。

结果：血细胞分析仪及血涂片镜检对白细胞分类计数中存在显著差异的类目为单核细胞及嗜碱性粒细胞，组间对照呈现显著统计学差异。

中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞相关性明显P V0.05)。

单核细胞及嗜碱性粒细胞其相关性不明显，无对照价值P>0.05)。

结论：白细胞分类计数通过全自动血细胞分析仪确定整体价值较高，但在具体的细胞形态及结构鉴定方面存在缺点,通过外周血涂片镜检进行细胞形态学检查确定白细胞的其他参数,对于血液分析评价的准确性具有补充性的关键意义。

【关键词】外周血涂片镜检;血细胞分析仪;白细胞分类计数【中图分类号】R446.11【文献标识码】B白细胞分类是在进行血液显微镜检查时,将白细胞分类计数的一种医学检测法。

血液中的白细胞共有5种，即中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞。

白细胞分类是血常规检查的重点项目之一，常规的血常规检查方法为全自动血细胞分析仪，这种方法检测准确率相对较高，且操作便捷、高效，有突出的优势。

外周血细胞涂片镜检是血常规检验的重要组成部分之一，血细胞分析仪的主要内容为全血细胞计数及分类，是一种新型过筛手段。

随着全自动血细胞分析仪的广泛应用，越来越多的医院开始使用血细胞分析仪进行血常规检测，外周血涂片镜检逐渐变少,但细胞形态学检查操作成本较高、难度较大,对于检查者的专业能力要求较高，且其细胞形态及结构方面的显像存在提升空间。

【正式版】血涂片制备、白细胞分类计数PPT资料

5、蘸在玻片上的血液量要适度，过多或过少均会影响涂片的结果。
血涂片染色
实验原理：
不同种类的细胞及细胞的不同成分对酸性或碱性染料的亲和力
要避免重复计数或漏计，不可主观选择视野。
1、要不制备同良好，的血因涂片而，玻瑞片必氏须干染净。色后各种血细胞显示出各自的染色特征。
4、冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲洗以防染料沉着在血涂片上。
1、疾病的鉴别与诊断；
2、最好使用非抗凝血制备，也可以EDTA抗凝血制备。将玻片平置于染色架上，滴加染液3-5滴，使其迅速盖满血涂片，约0.
1、采血：直接用洁净的玻片蘸一滴血（使用毛细血管采血的方法）。 2、镜检：使用低倍镜浏览全片，观察细胞的着色、分布情况。
要白3避细、免胞重计血复数计与膜数分或类应漏计计数厚，通不常薄可用主于适观：选当择视，野。头尾及两侧应有一定的空隙。
血涂片制备
注意事项： 5、染色过淡，可以复染，复染时应先加缓冲液，创造良好环境，而后加染液，或加染液与缓冲液的混合液而不能先加染液。
2、冲洗：室温染色5-10min后用流水冲去染液，待干。 3、观察结果：将干燥后的血片置显微镜下观察。
高要1倍避、镜免检重要查复有计制无数异或备常漏或计良外，来不好细可胞主的。观选血择视涂野。片，玻片必须干净。
度十分敏感。染色环境偏酸，增强伊红着色，红细胞和嗜酸粒细胞偏红，细胞核呈淡蓝或不着色，染色环境偏碱，增强天青着色，所有细胞呈灰蓝色，颗粒深蓝。
白细胞分类计数
实验原理：
血细胞经涂片、固定和染色后，根据不同的形态和染色特征可将各种白细胞区分开来，计数一定数量的白细胞并进行分类、汇总，可计算出各种白细胞所占的百分比。
血涂片染色
注意事项： 1、未干透的血膜不能染色，否则细胞容易脱落。 2、染液的量应适度，过少易挥发沉淀。 3、染色时间的长短与染液浓度、染色时温度及血细胞的多少有关。 4、冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲洗以防染料沉着在血涂片

外周血涂片的制作方法

外周血涂片的制作方法1、采血：胶头滴管吸取血液，血液直接滴加到洗净烘干并且硅化过的载玻片的一头。

2、推片：将推片的平齐端置载玻片上血滴的稍前方，将推片略向后移使与血液相接触，血液遂于推片与载玻片的夹角间散开。

以约30度的夹角向前均匀地推动推片即可制成血涂片。

其薄厚度要适中，分布均匀而无空泡，边缘整齐。

3、固定：推片做好后，涂片后潮干固定，以免细胞漂落太多，影响制片质量，甲醇固定液固定：涂片直接浸入固定液内，因固定液充足，固定效果较好。

但细胞易脱落而发生交叉污染，因此应该分瓶固定，固定液回收时应过滤。

多数标本用此法固定，固定时间15-30分钟。

14、染色：瑞氏-基姆萨双染1）从固定缸里取出载片后，在室温下通风晾干。

将载片平放在玻璃板上准备染色。

2）所用的两种染料事先过滤好（染料中有颗粒物，会沉淀在载玻片上影响载片的质量）3）将染料滴加到载玻片上以后，让其均匀覆盖住载片上的血细胞，染色时间约为2到3分钟。

等瑞氏染液有变红的趋势时，迅速滴加与瑞氏染液等量的PBS 溶液。

继续染色2到3分钟。

4）染色时间到后，用PBS溶液冲片，小股水流，防止将大量的细胞从载片上冲落下来从而影响以后的观察。

冲片结束后将载片放到阴凉处风干。

5）在玻璃板上放好牙签，将风干的载片倒扣在一根牙签上，从背面滴加基姆萨染液进行扣染。

染色时间约为10分钟。

时间到后用蒸馏水冲片，洗净染液后常温下风干。

5、封片：中性树胶封片，制作成永久涂片。

6、显微观察：将干燥后的血涂片置显微镜下观察。

用低倍镜观察血涂片体、尾交界处的血细胞。

在显微镜下，成熟红细胞染成粉红色；血小板染成紫色；中性粒细胞胞质染成粉红色，含紫红色颗粒；嗜酸性粒细胞含大的桔黄色颗粒；嗜碱性粒细胞胞质含有大量深紫蓝色颗粒；单核细胞胞质染成灰蓝色；淋巴细胞胞质染成淡蓝色。

所需材料：硅化过的载玻片，推片，甲醇瑞氏-基姆萨双染，过滤，PBS，牙签，蒸馏水，中性树胶，显微镜，吸耳球1．载玻片使用前，必须仔细清洗，并用乙醇或软布清洁。