OA自动化-第20章自动化仪器分析 精品

（二）方法评价
本法敏感度大大高于普通比浊法，可达ng/L水平， 操作简便，易自动化；血清中的类风湿因子(RF)可 与IgG Fc段结合，使IgG致敏胶乳颗粒出现非特异 性凝集，用F(ab′)2片段代替IgG既可消除此干扰， 又可克服IgG致敏胶乳的自凝现象；免疫胶乳轻度 自凝或抗体活性降低会严重影响结果。
第二十章 免疫检验自动化仪器分
析
第一节 自动化免疫浊度分析系统 一、免疫透射比浊法 二、免疫胶乳比浊法 三、免疫散射比浊法 四、免疫比浊分析的影响因素和临床应用
第二节 自动化发光免疫分析系统 一、吖啶酯标记化学发光免疫分析仪 二、酶联发光免疫分析仪 三、 电化学发光免疫分析仪 四、在临床免疫检测中的应用
第三节 自动化荧光免疫分析系统 一、时间分辨荧光免疫分析仪 二、荧光偏振免疫分析仪
第四节 自动化酶联免疫分析系统
思考题 小结
免疫检验自动化 （automation of immunoassays) 是将免疫学反应检测过程中的取样、加试剂、混合、 温育、固相载体分离、信号检测、数据处理、打印报 告和检测后的仪器清洗等步骤由计算机控制，自动化 进行。
1.将待检标本和抗原参考品作适当稀释。
2.将待测标本和标准抗原溶液（5个浓度抗原标准品） 与适当过量的抗血清混合，在一定条件下，抗原抗体 反应完成后，在340nm处测定各管吸光度。
3.按log-logit转换或y=ax3+bx2+cx+d方程进行曲线 拟合，制备剂量-反应曲线，由计算机处理，计算 出抗原浓度。
仪器测定技术要点
• 开启机器，进行定标 • 反应阶段 • 抗原过量检测
抗原抗体复合物形成的速率
累计时间（s） 形成IC总量 速率 累计时间（s） 形成IC总量 速率
5
8
－
35
10
13
5
40
15
25
12
45
20
60
35
50
25
150
90
55
30
230
80
60
300
70
360
60
415
55
450
45
定时散射比浊法是在保证抗体过量的情况下，加入 待测抗原，此时反应立即开始，在反应的第一阶段， 溶液中产生的散射光信号波动较大，所获取的信号 计算出的结果会产生一定的误差。定时散射比浊法 是避开抗原抗体反应的不稳定阶段，即散射光信号 在开始反应7.5s～2min内的第一次读数，专门在抗 原抗体反应的最佳时段进行读数，将检测误差降到 最低。
第一节 自动化免疫浊度分析系统
免疫浊度分析的基本原理是：抗原、抗体在特定的电解质溶液 中反应，形成小分子免疫复合物（<19S），在增浊剂（如PEG、 NaF等）的作用下，迅速形成免疫复合物微粒（>19S），使反 应液出现浊度。在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫 复合物量随抗原量的增加而增加，反应液的浊度亦随之增大， 即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。
（三）方法评价
优点: 灵敏度高，稳定性好，操作简便，结果准确
不足: ①抗体用量较大； ②溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大 ③透射比浊测定在抗原－抗体反应的第二阶段，检 测需在抗原抗体反应达到平衡后进行，耗时较长。
二、免疫胶乳比浊法
（一）原理：
用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒（一般为0.2 μm），在 遇到相应抗原时，胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒 凝聚 ，使透射光和散射光即出现显著变化。如图所示：a为单个胶乳 颗粒不阻碍光线透过，b为抗原抗体结合形成的凝聚胶乳大颗粒使透 射光减弱或散射光增强。
式I θ中为与入射光成θ角处散射光强度；λ和I0为入 射光的波长和强度；dn/dc为校正因子，反映了溶液折 射指数和颗粒浓度的变化；M为颗粒分子量；c为浓度； N为阿佛加德指数；γ为颗粒到检测器的距离；θ为散 射光与入射光的夹角（散射夹角）。
(二)定时散射比浊法（fixed time nephelometry）
一、免疫透射比浊法
（一）原理：
一定波长的入射光线通过抗原抗体反应后的溶液 时，被其中的免疫复合物微粒吸收、反射和折射而 减弱，在一定范围内，吸光度与免疫复合物量呈正 相关，而形成的免疫复合物量与参与反应的抗原和 抗体的量呈函数关系。与已知浓度的抗原标准品比 较，可确定标本中抗原含量。
（二）仪器工作过程
1. 仪器测定技术要点
(1) 抗原抗体预反应阶段 (2) 反应阶段 (3) 信号检测
2. 抗原过量检测
(1) 抗体适当过量 (2) 对抗原过量进行阈值限定
Байду номын сангаас 定时散射比浊法测定原理示意图
BN ProSpec全自动特定蛋白分析仪
(三)速率散射比浊法（rate nephelometry）
速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的动力学测定 法。所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免 疫复合物的量（不是免疫复合物累积的量），连续测 定各时间复合物形成的速率与其产生的散射光信号联 系在一起，形成动态的速率散射比浊法，每项检测仅 1～2min即可完成。
三、免疫散射比浊法
(一) 原理
粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到光 线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成散 射光。悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒 的大小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等 因素密切相关，其公式如下：
Iθ＝ I0［4π2（dn/dc) 2 Mc(1+cosθ)］ Nγ2λ4
480
30
500
20
抗原抗体反应速率的动态变化
IMMAGE全自动特定蛋白分析仪
(三)方法评价
散射比浊法是目前临床应用较多的一种方法，本 法自动化程度高，具有快速、灵敏、准确、精密 等优点。采用抗原过量检测方法，保证了结果的 准确性。但仪器和试剂价格比较贵, 对抗体的质 量要求很高。
四、免疫比浊分析的影响因素和临床应用
（一）免疫比浊分析的影响因素
1.抗原抗体比例 2.抗体的质量 3.增浊剂的使用
4.伪浊度 5.入射光光源和波长 6.结果报告中的计量单位
7.标准曲线制备与质量控制
（二）临床应用
免疫比浊分析法主要用于检测免疫球蛋白IgG、IgA、 IgM、κ链、λ链、免疫球蛋白亚类；补体C3、C4；血 浆蛋白如前白蛋白(PAB)、白蛋白(ALB)、α1-抗胰蛋白 酶(α1-AT)、β2-微球蛋白(β2-MG)、转铁蛋白(TRF)、 铜蓝蛋白(CER)、结合珠蛋白(HP)、，C-反应蛋白 (CRP)、载脂蛋白ApoAI、ApoB、脂蛋白(a)、类风湿 因子(RF)、尿微量蛋白系列和某些治疗性药物浓度等。