免疫检验自动化仪器分析PPT(共95页)

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免疫检验自动化仪器分析

免疫检验自动化仪器分析

免疫检验自动化仪器分析
免疫检验自动化仪器的优势之一是提高了检测速度。

免疫检验常用于
临床诊断和药物研发等领域,而这些领域对检测速度要求非常高。

传统的
手工操作方式耗时长,需要大量的人力和时间投入,而免疫检验自动化仪
器不仅能够进行连续不间断的检测,还能够很大程度上提高检测速度。


用了自动化仪器后,可以减少人工操作的时间,提高整体的检测效率。

此外,免疫检验自动化仪器的可靠性也是其一个重要的优势。

在实现
自动化仪器的过程中,注重了仪器的稳定性和可靠性。

自动化仪器能够实
现长时间连续运行,不易出现故障和失灵,有效保证了检测过程的可靠性。

同时,自动化仪器还能够提供准确的结果分析和数据管理能力,方便用户
进行后续的数据处理和分析。

免疫检验自动化仪器广泛应用于临床诊断、药物研发和生物学研究等
领域。

在临床诊断方面,免疫检验自动化仪器可以用于检测各种常见的疾
病标志物,如肿瘤标记物、免疫球蛋白等,帮助医生进行疾病的诊断和治
疗监测。

在药物研发方面,免疫检验自动化仪器可以用于筛选药物靶点、
评估药物的活性和作用机制等,加速药物研发的进程。

在生物学研究方面,免疫检验自动化仪器可以用于研究细胞的免疫应答、血液中免疫系统的功
能等,对于深入了解免疫系统的机制和功能非常有价值。

综上所述,免疫检验自动化仪器在提高检测速度、准确度和可靠性方
面具有明显优势,并且广泛应用于临床诊断、药物研发和生物学研究等领域。

未来随着科技的不断进步,免疫检验自动化仪器将会更加智能化和集
成化,为医学和生物学领域的研究带来更多的便利和突破。

免疫检验课件ppt

免疫检验课件ppt

移植免疫监测
器官移植后,患者需要接受免疫抑制治疗以防止排斥反应。通过监测免疫功能和相关抗体,有助于评估患者的免疫状态和移植效果。
02
CHAPTER
免疫检验基础知识
抗原是指能够刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答的物质,包括外源性抗原和内源性抗原。
抗原
抗体是指机体在抗原刺激下产生的具有高度特异性的蛋白质分子,能够与相应抗原结合,发挥免疫效应。
通过检测T细胞增殖和转化能力,评估机体的细胞免疫功能。
通过检测细胞因子表达水平,了解机体的免疫应答状态。
通过检测免疫细胞的杀伤、吞噬、释放细胞因子等功能,评估机体的免疫功能。
利用基因芯片等技术对免疫相关基因的表达水平进行检测,了解机体的免疫应答机制。
基因表达谱分析
通过制备针对特定抗原的单克隆抗体,用于免疫学检测和免疫治疗。
通过检测炎症因子(如IL-1、IL-6、TNF等)的水平,了解机体的炎症反应状态。
通过检测自身抗体(如类风湿因子、抗核抗体等)的水平,了解机体的自身免疫状态。
04
CHAPTER
常见免疫检验项目及解读
总结词
乙肝两对半检测是常见的免疫检验项目之一,用于检测乙型肝炎病毒的抗原和抗体。
详细描述
乙肝两对半检测包括乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、表面抗体(HBsAb)、e抗原(HBeAg)、e抗体(HBeAb)和核心抗体(HBcAb)的检测。通过检测这些抗原和抗体,可以了解个体是否感染了乙型肝炎病毒,以及感染阶段和免疫状态。
01
免疫组学技术
利用免疫组学方法,研究免疫细胞和分子的功能和相互作用,为免疫疾病的诊断和治疗提供新思路。
02
生物信息学
结合生物信息学技术,对免疫相关基因和蛋白质进行大数据分析,挖掘免疫相关疾病的发病机制和潜在治疗靶点。

全自动化学发光免疫分析仪运行原理ppt课件

全自动化学发光免疫分析仪运行原理ppt课件
39
谢谢!
40
• 在位置87 - 90清洗站2#清洗RV杯混合物吸走没结合物质.
23
二步法 (i System) 5
• 在位置94加入预激发液(Pre-trigger), 然后振动混合. • 在位置98 CMIA光学系统读空白值, 然后加入激发液(Trigger), 再测CMIA
光学系统速率读数. • 在位置100液体从RV杯中废液吸走. • 在位置109退出RV杯装置(UL)推出RV杯道废物盒.
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快速反应一步法 (i System) 1
• 在位置47快速反应针加样品到RV杯中. • 在位置48试剂R2针加微粒子和吖啶酯标记的连接物试剂. • 在位置49振动混合样品和试剂. • 在位置50-86孵育11分钟.
29
快速反应一步法 (i System)2
• 在位置87 - 90清洗站2#清洗RV杯混合物吸走没结合物质.
即:磁性微粒子包被的捕捉分子(抗原,抗体或病毒颗粒) 特异的与被分析物中抗原、抗体结合形成抗原抗体复合物, 再与吖啶酯标记的连接物反应形成双抗体夹心抗原抗体复合 物。吖啶酯在过氧化氢的稀碱溶液中发生氧化还原反应生成 10-甲基吖啶酮,当它恢复到基态时发光,根据发光强度可 计算出分析物的浓度 。
6
A + B = C + D*(激发态分子) D*→D + hv(激发态分子D*的光辐射)
2
化学发光的反应条件
(1)能快速地释放出足够的能量 (化学 发光反应多为氧化还原反应,激发能与反 应能相当,DE=170~300 kJ/mol);发光 位于可见光区;
(2)化学反应的能量至少能被一种物质 所接受并使之生成激发态;
7
CMIA分析成份

免疫检测法PPT课件

免疫检测法PPT课件
质。
缺点
01
02
03
04
交叉反应
有时会出现交叉反应,导致假 阳性结果。
抗体依赖
免疫检测法依赖于抗体的质量 和特异性,因此抗体制备的难
度和成本较高。
样品处理要求高
对于某些生物样品,需要进行 复杂的预处理才能进行检测。
检测时间较长
相对于一些快速检测方法,免 疫检测法可能需要更长时间才
能获得结果。
改进方向
分类
根据检测原理和应用领域,免疫 检测法可分为酶联免疫吸附试验 、放射免疫分析、荧光免疫分析 、化学发光免疫分析等。
免疫检测法的应用领域
01
02
03
医学诊断
用于检测人体内的肿瘤标 志物、激素、病毒抗原、 药物残留等,辅助医生进 行疾病诊断和病情监测。
食品安全
用于检测食品中的农药残 留、兽药残留、毒素等有 害物质,保障食品安全。
情监测。
激素水平检测
性激素检测
通过检测性激素水平,有助于评估男性和女性的生殖健康状况,如 睾酮、雌二醇、孕酮等激素的检测。
甲状腺激素检测
甲状腺激素对人体的新陈代谢和生长发育具有重要作用,通过检测 甲状腺激素水平,有助于甲状腺功能亢进和减退的诊断和治疗。
肾上腺激素检测
肾上腺激素与人体应激反应、免疫功能等方面密切相关,通过检测肾 上腺激素水平,有助于相关疾病的诊断和治疗。Fra bibliotek传染病检测
结核病检测
性病检测
通过检测结核病抗体,有助于早期发 现和诊断结核病,为预防和治疗提供 依据。
免疫检测法在性病检测中发挥着重要 作用,如梅毒、淋病、尖锐湿疣等, 通过检测相关抗体和抗原,及时发现 和治疗性病。
肝炎检测

免疫分析技术和相关仪器ppt课件

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优势
自动化程度高:
前后处理一体化设计,减少人与样品的 接触机会,降低感染。各种自动安全检 测能。
稳 定:
只要避免人为操作错误, 可连续数年良好工作。
准 确:
不存在交叉感染。反应振荡, 确保检测 准确。
优势
高 速:
加注、读板速度快
扩 展 性:
软件可升级,样本量增加,可联机使用
用户做主更多:
(二)酶免疫分析仪的维护
重点是光学部分
1.滤光片波长精度检查 2.通道差与孔间差检测
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四、酶免疫分析仪的临床应用
1.病原体及其抗体的检测 2.各种免疫球蛋白和细胞因子、补体等 3.肿瘤标志物 4.多种激素 5.药物和毒品
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第二节 发光免疫分析仪
开放式试剂 WINDOW操作系统 中/英/日自选操作界面 自定义编程 自动/自定义时间表 无限存档
3全自动微孔板式ELISA分析仪
全自动ELISA仪器本身的精密度一般在3% 左右。 应用优质试剂测定结果的精密度,定量测 定可达到7%以下; 常用的定性测定为感染性疾病抗原、抗体 的检测,精密度在10%左右。
美国生产自动酶免疫分析仪应用聚苯乙烯微 粒(颗粒直径0.47μm)作为固相,特异抗体 或抗原包被在微粒上。 第一次抗原抗体反应后,将反应液通过特制 的玻璃纤维膜,聚苯乙烯微粒吸附在玻璃纤 维膜上,液体则通过膜滤出。 以后的反应在膜上进行,标记酶为ALP,底物 为4-甲基伞酮磷酸酶,反应后进行荧光测定。
根据是否需要分离结合与游离的酶标记物,可分为: 酶扩大免疫测定
非均相(或异相)酶免疫测定
克隆酶供体免疫测定 液相酶免疫法
均相酶免疫测定

免疫检验自动化仪器分析PPT(共95页)【95页】

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Iθ= I0[4π2(dn/dc) 2 Mc(1+cosθ)] Nγ2λ4
定时散射比浊法是在保证抗体过量的情况下,加入待测抗原,此时反应立即开始,在反应的第一阶段,溶液中产生的散射光信号波动较大,所获取的信号计算出的结果会产生一定的误差。定时散射比浊法是避开抗原抗体反应的不稳定阶段,即散射光信号在开始反应7.5s~2min内的第一次读数,专门在抗原抗体反应的最佳时段进行读数,将检测误差降到最低。
速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的动力学测定法。所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免疫复合物的量(不是免疫复合物累积的量),连续测定各时间复合物形成的速率与其产生的散射光信号联系在一起,形成动态的速率散射比浊法,每项检测仅1~2min即可完成。
(三)速率散射比浊法(rate nephelometry)
(二)定时散射比浊法(fixed time nephelometry)
1. 仪器测定技术要点
(1) 抗原抗体预反应阶段 (2) 反应阶段(3) 信号检测
2. 抗原过量检测
(1) 抗体适当过量 (2) 对抗原过量进行阈值限定
定时散射比浊法测定原理示意图
BN ProSpec全自动特定蛋白分析仪
二、免疫胶乳比浊法
(一)原理:
(二)方法评价
本法敏感度大大高于普通比浊法,可达ng/L水平,操作简便,易自动化;血清中的类风湿因子(RF)可与IgG Fc段结合,使IgG致敏胶乳颗粒出现非特异性凝集,用F(ab′)2片段代替IgG既可消除此干扰,又可克服IgG致敏胶乳的自凝现象;免疫胶乳轻度自凝或抗体活性降低会严重影响结果。
第一节 自动化免疫浊度分析系统
免疫浊度分析的基本原理是:抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应,形成小分子免疫复合物(<19S),在增浊剂(如PEG、NaF等)的作用下,迅速形成免疫复合物微粒(>19S),使反应液出现浊度。在抗体稍微过量且固定的情况下,形成的免疫复合物量随抗原量的增加而增加,反应液的浊度亦随之增大,即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。

免疫检验自动化仪器分析

免疫检验自动化仪器分析

2016 第二十章免疫检验自动化仪器分析一、A11、免疫比浊测定中,导致钩状现象的主要原因是A、抗体过量B、抗体亲和力差C、抗原分子量偏大D、抗原含量超出检测范围E、体系中离子强度小2、免疫浊度试验的基本原则是A、体系中保持抗原过量B、体系中保持抗体过量C、体系中合适的离子强度D、体系中合适的pHE、必要时可加入增浊剂3、发光物吖啶酯标记的化学发光反应体系应在何种环境中进行A、酸性B、碱性C、中性D、酸性或中性E、碱性或中性4、电化学发光免疫分析(ECUA)常采用的标记物是A、吖啶酿B、ALPC、HRPD、三联吡啶钌E、三丙胺5、前临床治疗药物监测最常采用的方法为A、FPIAB、荧光酶免疫分析C、TRFIAD、ELISAE、免疫比浊分析6、化学发光免疫分析中直接参与发光反应的标记物主要是A、吖啶酯类标记物B、三联吡啶钌标记物C、二氧乙烷标记物D、鲁米诺标记物E、碱性磷酸酶标记物7、下列有关时间分辨荧光免疫测定的叙述中,错误的是A、以镧系螯合物作为荧光标记物B、镧系螯合物具有超短荧光寿命的特点C、可以有效地消除非特异性自然本底荧光的干扰D、在荧光分析的基础上发展起来的E、灵敏度较普通荧光素标记抗体技术高8、电化学发光免疫分析临床应用广泛,在日常工作中一般不用于检测A、肿瘤标记物B、甲状腺激素C、病毒标记物D、血药浓度E、免疫球蛋白9、发光物吖啶酯标记的化学发光反应体系应在何种环境中进行A、酸性B、碱性C、中性D、酸性或中性E、碱性或中性10、吖啶酯作为发光剂的化学发光免疫测定中,叙述错误的是A、氧化反应不需要催化剂B、发光迅速C、反应的本底低D、在酸性环境下进行E、试剂稳定性好11、化学发光的基本原理是发光物由于A、在一定波长激发光照射下发光B、在化学反应中获得能量而发光C、在电子激发态时发光D、在电子激发态返回基态时释光放能量而发光E、某物在化学反应中生成发光物而发光二、B1、A.吖啶酯类B.鲁米诺C.三联吡啶钌D.HRPE.AP<1> 、电化学发光免疫测定中常用的发光底物为A、B、C、D、E、<2> 、化学发光标记免疫测定中常用的发光底物为A、B、C、D、E、<3> 、化学发光酶免疫测定中常用的发光底物为A、B、C、D、E、答案部分一、A11、【正确答案】 D【答案解析】抗体量不足、抗原量过高是导致钩状现象的主要原因。

第二十章 免疫检验自动化仪器分析(二)

第二十章  免疫检验自动化仪器分析(二)

试剂、再孵育、洗涤、读数和结果打印全自动进行。
(一)仪器组成和性能
1.条形码识别系统 2.样本架和加样系统 3.试剂架 4.温育系统
5.液路系统 6.洗板系统 7. 酶标板读数仪 8.自动装载传递系统 9. 计算机管理和信息系统
(二)仪器评价
• 全自动酶免分析仪中的连体机是将样本处理 工作站和全自动酶免分析仪联合起来,工作 速度快,自动化程度高,适合大批量样本的 处理,如血站系统。 • 分体机,由于它有一个独立的全自动样本处 理站,加样速度快,适合试验项目变化多、 样本批量不等的临床实验室。
ACCESS 系统特点
高稳定 发光信号稳定,持续
高质量原厂试剂, 无需预处理
稳定,持久的标准曲线,有效期长达28天以上
机上试剂冷藏系统,试剂3度保存,有效期长
多层覆膜试剂盒,确保试剂稳定
ACCESS 系统特点
高准确
超灵敏光电倍增管检测发光信号
发光稳定后,记录10次/s,取均值为结果
超声波清洗系统,严格防止交叉污染(<1ppm)
磁性微粒直径2.8µ m,表面的凸凹使包被面积放大。磁性微 粒体积小,悬浮于反应体系中,形成均一稳定的液相,在磁 场中易于分离。
仪器测定技术要点
• 抗原抗体结合 • 电化学发光反应 • 光信号检测 • 检测完毕
电化学发光免疫测定示意图
电化学发光免疫测定工作示意图
AMPPD特性
碱性PH环境下,非酶解性的水解很低 热稳定性好 PH9时酶解速度最快,PH9.5时信噪比 最低 发光为持续型,15min达到高峰, 60min内强度维持不变
AMPPD发光图谱
相对 发光 单位
00
5
10
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免疫自动化仪器分析及应用

免疫自动化仪器分析及应用

临床免疫检验自动化分析临床免疫自动化分析CONTENTS第一节第二节第三节概述免疫浊度测定的自动化分析临床常用免疫自动化分析仪第四节临床免疫检验自动化分析选择与应用临床免疫检验自动化分析取样加试剂混合温育固相载体分离信号检测数据处理结果报告仪器清洗自动化免疫分析仪的仪器结构都有共同的特点◆自动化免疫浊度分析系统⚫免疫透射比浊法⚫免疫胶乳比浊法⚫免疫散射比浊法◆自动化发光免疫分析系统⚫吖啶酯标记化学发光免疫分析仪⚫酶联发光免疫分析仪⚫电化学发光免疫分析仪◆自动化荧光免疫分析系统⚫时间分辨荧光免疫分析仪⚫荧光偏振免疫分析仪◆自动化酶联免疫分析系统检测原理液相沉淀试验:试验原理图(参照视频资料制作)➢抗原/抗体+ 电解质溶液= 免疫复合物(<19S)+ 增浊剂(如PEG、NaF等)微粒(>19S)浊度抗原浓度测定范围抗体过剩抗原过剩Ag * Ab混浊样品(透射浊度法) I0I光源检测器A检测器B(散射浊度法)定时散射比浊法(fixed time nephelometry )I θ=I 0[4π2(dn/dc) 2Mc(1+cosθ)]Nγ2λ4散射光强度:与颗粒的分子量、数目、大小及入射光强度成正比;与微粒至检测器的距离、入射光波长成反比1. 抗原抗体预反应阶段2. 反应阶段3. 信号检测4. 抗原过剩检测(1) 抗体适当过量(2) 对抗原过量进行阈值限定速率散射比浊法(rate nephelometry )是抗原抗体结合反应的动力学测定法PEAK RATETIMER A T E累计时间(s)形成IC总量速率累计时间(s)形成IC总量速率58-10135 152512 206035 2515090 30230803530070 4036060 4541555 5045045 5548030 6050020抗原抗体复合物形成的速率散射光峰值A BCDFGHI抗原浓度递增散射比浊法标准曲线免疫浊度测定临床应用•检测免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、κ链、λ链、免疫球蛋白亚类•补体C3、C4•血浆蛋白如前白蛋白(PAB)、白蛋白(ALB)、α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)、β2-微球蛋白(β2-MG)、转铁蛋白(TRF)、铜蓝蛋白(CER)、结合珠蛋白(HP)、,C-反应蛋白(CRP)、载脂蛋白ApoAI、ApoB、脂蛋白(a)、类风湿因子(RF)、尿微量蛋白系列•某些治疗性药物浓度临床免疫检验自动化分析的选择原则1. 资质要求:《企业法人营业执照》、《医疗器械注册证》和《医疗器械生产/经营企业许可证》2. 性能要求:性能指标(正确度、精密度、最低检测限、线性范围和临床可报告区间、分析干扰等);还应考虑检验科内部仪器所组成检测系统的一致性和测定结果的可比性。

全自动化学发光免疫分析仪课件

全自动化学发光免疫分析仪课件

全自动化学发光免疫分析仪技术审查指导原则(第一次征求意见稿)一、前言本指导原则旨在指导注册申请人对全自动化学发光免疫分析仪注册申报资料的准备及撰写,同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。

本指导原则是对全自动化学发光免疫分析仪的一般要求,申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用,若不适用,需具体阐述理由及相应的科学依据,并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。

本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件,但不包括注册审批所涉及的行政事项,亦不作为法规强制执行,如果有能够满足相关法规要求的其他方法,也可以采用,但需要提供详细的研究资料和验证资料,相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。

本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的,随着法规和标准的不断完善,以及科学技术的不断发展,本指导原则相关内容也将适时进行调整。

二、适用范围化学发光免疫分析根据化学发光物质的类型和发光特点,可分为电化学发光免疫分析和化学发光免疫分析,其中化学发光免疫分析根据发光剂的不同,可分为直接化学发光免疫分析、酶促化学发光免疫分析和鲁米诺氧途径免疫分析。

目前,各类型化学发光免疫分析的常见发光剂包括:电化学发光剂为三联吡啶钌[RU(bpy)3]2+,直接化学发光剂为吖啶酯(AE),酶促化学发光剂为辣根过氧化物酶(HRP)催化鲁米诺(3-氨基苯二甲酰肼,luminol)及其衍生物或者碱性磷酸酶催化3-(2′-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3″-磷酰氧基)苯-1,2-二氧杂环丁烷(AMPPD),鲁米诺氧途径发光剂为酞箐、二甲基噻吩衍生物及Eu螯合物。

化学发光免疫技术根据反应过程中标记物是否需要分离可分为均相反应和非均相反应。

均相反应主要应用于鲁米诺氧途径免疫分析中,而非均相反应则应用于其他类型化学发光免疫分析中,通过采用固相分离、过滤分离、珠式分离、顺磁性颗粒分离等方式实现游离标记物和免疫复合物标记物的分离,其中顺磁性颗粒分离较其他分离方式更为常用。

免疫检验自动化仪器分析PPT45页

免疫检验自动化仪器分析PPT45页
44、卓越的人一大优点是:在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联来自免疫检验自动化仪器分析
51、没有哪个社会可以制订一部永远 适用的 宪法, 甚至一 条永远 适用的 法律。 ——杰 斐逊 52、法律源于人的自卫本能。——英 格索尔
53、人们通常会发现,法律就是这样 一种的 网,触 犯法律 的人, 小的可 以穿网 而过, 大的可 以破网 而出, 只有中 等的才 会坠入 网中。 ——申 斯通 54、法律就是法律它是一座雄伟的大 夏,庇 护着我 们大家 ;它的 每一块 砖石都 垒在另 一块砖 石上。 ——高 尔斯华 绥 55、今天的法律未必明天仍是法律。 ——罗·伯顿
41、学问是异常珍贵的东西,从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间,才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话,只需要教育; 而要挑战别人所说的话,则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔

免疫自动化仪器分析及应用

免疫自动化仪器分析及应用

自动化免疫分析仪的结构特点
主机部分
计算机部分


稀 释
样发 品射
信 号
加 样
处光 理源 系系
检 测 系
清 统统 统















结 果 报 告


统Hale Waihona Puke 第一节 免疫浊度测定的自动化分析
免疫浊度分析属于液相沉淀试验,基本原理是:抗原、抗体在 特定的电解质溶液中反应,形成小分子免疫复合物(<19S),在 增浊剂(如PEG、NaF等)的作用下,迅速形成免疫复合物微粒 (>19S),使反应液出现浊度。在抗体稍微过量且固定的情况下, 形成的免疫复合物量随抗原量的增加而增加,反应液的浊度亦随 之增大,即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。
一、时间分辨荧光免疫分析仪
时间分辨荧光免疫测定(time resolved fluorescence immunoassay, TRFIA)是以镧系元素标记抗原或抗体作 为示踪物,并与时间分辨测定技术相结合,建立起来的一 种新型非放射性微量分析技术,具有灵敏度高,镧系元素 发光稳定,荧光寿命长,不受样品自然荧光干扰,标准曲 线范围宽等特点,已在临床实验室广泛使用。
• 技术要点 – 抗原抗体反应 – 信号检测,结果计算
• 抗原过量检测 – 标准抗原,第二速率峰
IMMAGE800全自动特定蛋白分析仪
方法评价
散射比浊试验是目前临床应用较多的一种方法,本法 自动化程度高,具有快速、灵敏、准确、精密等优点。采 用抗原过量检测方法,保证了结果的准确性。但仪器和试 剂价格比较贵, 对抗体的质量要求很高。
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(三)方法评价
优点: 灵敏度高,稳定性好,操作简便,结果准确
不足: ①抗体用量较大; ②溶液中存在的抗原-抗体复合物分子应足够大 ③透射比浊测定在抗原-抗体反应的第二阶段,检 测需在抗原抗体反应达到平衡后进行,耗时较长。
二、免疫胶乳比浊法
(一)原理:
用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒(一般为0.2 μm),在 遇到相应抗原时,胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结合,引起胶乳颗粒 凝聚 ,使透射光和散射光即出现显著变化。如图所示:a为单个胶乳 颗粒不阻碍光线透过,b为抗原抗体结合形成的凝聚胶乳大颗粒使透 射光减弱或散射光增强。
(一)免疫比浊分析的影响因素
1.抗原抗体比例 2.抗体的质量 3.增浊剂的使用
4.伪浊度 5.入射光光源和波长 6.结果报告中的计量单位
7.标准曲线制备与质量控制
(二)临床应用
免疫比浊分析法主要用于检测免疫球蛋白IgG、IgA、 IgM、κ链、λ链、免疫球蛋白亚类;补体C3、C4;血 浆蛋白如前白蛋白(PAB)、白蛋白(ALB)、α1-抗胰蛋白 酶(α1-AT)、β2-微球蛋白(β2-MG)、转铁蛋白(TRF)、 铜蓝蛋白(CER)、结合珠蛋白(HP)、,C-反应蛋白 (CRP)、载脂蛋白ApoAI、ApoB、脂蛋白(a)、类风湿 因子(RF)、尿微量蛋白系列和某些治疗性药物浓度等。
1.将待检标本和抗原参考品作适当稀释。
2.将待测标本和标准抗原溶液(5个浓度抗原标准品) 与适当过量的抗血清混合,在一定条件下,抗原抗体 反应完成后,在340nm处测定各管吸光度。
3.按log-logit转换或y=ax3+bx2+cx+d方程进行曲线 拟合,制备剂量-反应曲线,由计算机处理,计算 出抗原浓度。
第三节 自动化荧光免疫分析系统 一、时间分辨荧光免疫分析仪 二、荧光偏振免疫分析仪
第四节 自动化酶联免疫分析系统
思考题 小结
免疫检验自动化 (automation of immunoassays) 是将免疫学反应检测过程中的取样、加试剂、混合、 温育、固相载体分离、信号检测、数据处理、打印报 告和检测后的仪器清洗等步骤由计算机控制,自动化 进行。
第一节 自动化免疫浊度分析系统
免疫浊度分析的基本原理是:抗原、抗体在特定的电解质溶液 中反应,形成小分子免疫复合物(<19S),在增浊剂(如PEG、 NaF等)的作用下,迅速形成免疫复合物微粒(>19S),使反 应液出现浊度。在抗体稍微过量且固定的情况下,形成的免疫 复合物量随抗原量的增加而增加,反应液的浊度亦随之增大, 即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。
式I θ中为与入射光成θ角处散射光强度;λ和I0为入 射光的波长和强度;dn/dc为校正因子,反映了溶液折 射指数和颗粒浓度的变化;M为颗粒分子量;c为浓度; N为阿佛加德指数;γ为颗粒到检测器的距离;θ为散 射光与入射光的夹角(散射夹角)。
(二)定时散射比浊法(fixed time nephelometry)
定时散射比浊法是在保证抗体过量的情况下,加入 待测抗原,此时反应立即开始,在反应的第一阶段, 溶液中产生的散射光信号波动较大,所获取的信号 计算出的结果会产生一定的误差。定时散射比浊法 是避开抗原抗体反应的不稳定阶段,即散射光信号 在开始反应7.5s~2min内的第一次读数,专门在抗 原抗体反应的最佳时段进行读数,将检测误差降到 最低。
一、免疫透射比浊法
(一)原理:
一定波长的入射光线通过抗原抗体反应后的溶液 时,被其中的免疫复合物微粒吸收、反射和折射而 减弱,在一定范围内,吸光度与免疫复合物量呈正 相关,而形成的免疫复合物量与参与反应的抗原和 抗体的量呈函数关系。与已知浓度的抗原标准品比 较,可确定标本中抗原含量。
(二)仪器工作过程
三、免疫散射比浊法
(一) 原理
粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到光 线照射后,微粒子对光线产生反射和折射而形成散 射光。悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒 的大小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等 因素密切相关,其公式如下:
Iθ= I0[4π2(dn/dc) 2 Mc(1+cosθ)] Nγ2λ4
(二)方法评价
本法敏感度大大高于普通比浊法,可达ng/L水平, 操作简便,易自动化;血清中的类风湿因子(RF)可 与IgG Fc段结合,使IgG致敏胶乳颗粒出现非特异 性凝集,用F(ab′)2片段代替IgG既可消除此干扰, 又可克服IgG致敏胶乳的自凝现象;免疫胶乳轻度 自凝或抗体活性降低会严重影响结果。
1. 仪器测定技术要点
(1) 抗原抗体预反应阶段 (2) 反应阶段 (3) 信号检测
2. 抗原过量检测
(1) 抗体适当过量 (2) 对抗原过量进行阈值限定
定时散射比浊法测定原理示意图
BN ProSpec全自动特定蛋白分析仪
(三)速率散射比浊法(rate nephelometry)
速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的动力学测定 法。所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免 疫复合物的量(不是免疫复合物累积的量),连续测 定各时间复合物形成的速率与其产生的散射光信号联 系在一起,形成动态的速率散射比浊法,每项检测仅 1~2min即可完成。
480
30
500
20
抗原抗体反应速率的动态变化
IMMAGE全自动特定蛋白分析仪
(三)方法评价
散射比浊法是目前临床应用较多的一种方法,本 法自动化程度高,具有快速、灵敏、准确、精密 等优点。采用抗原过量检测方法,保证了结果的 准确性。但仪器和试剂价格比较贵, 对抗体的质 量要求很高。
四、免疫比浊分析的影响因素和临床应用
第二十章 免疫检验自动化仪器分

第一节 自动化免疫浊度分析系统 一、免疫透射比浊法 二、免疫胶乳比浊法 三、免疫散射比浊法 四、免疫比浊分析的影响因素和临床应用
第二节 自动化发光免疫分析系统 一、吖啶酯标记化学发光免疫分析仪 二、酶联发光免疫分析仪 三、 电化学发光免疫分析仪 四、在临床免疫检测中的应用
仪器测定技术要点
• 开启机器,进行定标 • 反应阶段 • 抗原过量检测
抗原抗体复合物形成的速率
累计时(s) 形成IC总量 速率 累计时间(s) 形成IC总量 速率
5
8

35
10
13
5
40
15
25
12
45
20
60
35
50
25
150
90
55
30
230
80
60
300
70
360
60
415
55
450
45
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