第十章 微生物的分布与消毒、灭菌详解
细菌的分布与消毒灭菌课程PPT课件
6.表面活性剂 0.05%-0.1% 新洁尔灭 7.染料 龙胆紫 8.醛类 甲醛 9.酸碱类 醋酸 生石灰 5-10ml/m加 等量水蒸发 按1：4--1： 8配成糊状 2%-4%
外科手术洗手,皮肤粘 膜消毒,浸泡手术器械 浅表创伤消毒
42
辐射杀菌法
紫外线 波长200~300nm的紫外线具有杀菌作 用，其中265—266nm最强
杀菌机理：干扰DNA的复制与转录
特
点： 紫外线穿透力较弱
应用范围：空气消毒 手术室、传染病房、细菌实验室 不耐热物品的表面消毒
电离辐射
包括高速电子、X射线和 γ 射线 杀菌机理：产生游离基,破坏DNA。
应用范围： 一次性医用塑料制品的消毒
• 压力—103.4KPa（1.05Kg/cm2） • 温度—121.3 ℃
• 时间—15-30min
• 效果—杀灭包括芽胞在内所有微生物 • 应用—所有耐高温、高压、耐湿的物品
（1）湿热灭菌法
煮沸消毒法：
• 100 ℃ 5分钟，可杀死细菌繁殖体；
• 杀死芽胞需一至数小时。
• 如在水中加入2%碳酸氢钠可提高沸点，增强杀灭芽胞
第一节 细菌的分布
一、细菌在自然界的分布 细菌在自然界的分布极为广泛，江河、湖泊、 海洋、土壤、空气中都有数量不等、种类不一的 细菌存在。在人类、动物、植物的体表，以及与 外界相通的腔道中，也有大量细菌存在。
一、细菌在自然界的分布
1、土壤
一、细菌在自然界中的分布
（一）、土壤 土壤中细菌可分三类：①天然生活在土 壤中的自养菌；②土壤中腐物寄生菌；③ 来自人或动物的排泄物及尸体进入土壤的 致病菌。 土壤中细菌大部分为非致病菌。
微生物实验报告(微生物形态观察、分布、灭菌消毒)
微生物实验微生物实验细菌形态观察细菌分布消毒灭菌细菌形态观察一、实验目的1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护2.掌握细菌的三种形态3.掌握临床常见细菌的形态及染色4.掌握细菌的特殊结构5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点二、实验原理1. 普通光学显微镜（油镜）的使用1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰3. 根据需要调节显微镜亮度2. 普通光学显微镜的维护1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内4.做好使用记录3．微生物知识1．细菌按形态分类：球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等）杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等）螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等）2．细菌的基本结构细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体3．细菌的特殊结构荚膜：如肺炎双球菌鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。
如：变形杆菌为周毛菌菌毛芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。
原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体真核类：真菌、原生动物、显微藻类非细胞类：病毒、亚病毒5．真菌单细胞：圆形、芽生孢子。
如：酵母菌多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽。
如：霉菌6．白假私酵母菌（白念）生物学性状：G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定致病性：皮肤粘膜——鹅口疮、内脏感染、CNS感染微生物学检查：直接涂片、染色后镜检——菌体、芽生孢子、假菌丝7．新型隐球菌生物学性状：圆形酵母型菌、外周有厚荚膜（比菌体大1-3倍）致病性：吸入后侵犯皮肤、粘膜等——慢性炎症和脓肿；侵袭CNS——亚急性或慢性脑膜炎微生物学检查：脑脊液离心后取沉淀、痰和脓标本直接检查；墨汁负染见出芽菌体外围有宽厚荚膜为阳性三、实验材料记号笔：1支；大镊子：1支；火柴：1盒；蜡笔：1支；试管架：1个；酒精灯：1个；接种环：1支；Olympus显微镜：1台；显微镜使用记录本：1个四、实验内容1. 观察细菌三种形态1）球菌链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌（子弹形）、脑膜炎双球菌（蚕豆形）、四联菌2）杆菌破伤风杆菌、白喉杆菌（异染颗粒）、绿脓杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌3）螺形菌弧菌——霍乱弧菌；螺菌；螺杆菌——幽门螺杆菌；弯曲菌2. 观察细菌的特殊结构芽胞、鞭毛、荚膜、异染颗粒、钩端螺旋体、幽门螺杆菌3. 绘图葡萄球菌(staphyloccocus)；肺炎双球菌(pneumo coccus)；脑膜炎球菌(meningococcus)；破伤风杆菌（Clostridium Tantenus）；霍乱弧菌（vibrio cholera)；芽胞(spore)；鞭毛（flagellum)；荚膜(capsule)；钩端螺旋体(leptospira)五、实验结果绘8幅细菌镜下图，已交。
细菌的分布与消毒灭菌资料
细菌素：是某些细菌产生的，只对产生菌亲缘关系相近的细菌有抗菌 作用的一类蛋白质。
中草药：一些中草药有抑菌、杀菌作用。
复习思考题
一．解释热原质、菌群失调、消毒、灭菌、防腐、无菌操作等 概念 细菌有哪些代谢产物？它们分别有哪些医学意义？ 了解细菌的分布与护理工作有什么关系？ 何种情况下正常菌群可转变为条件致病菌？ 请为下列物品或部位选一种最理想的消毒灭菌方法： 手术室 、手术 器械、注射器、排泄物、碗筷、牛奶。
消毒剂
环境
种类
作用时间
菌龄
有机物
温度
数量
表面张力
细菌 浓度 种类 酸碱度 穿透力
来苏： 煤酚皂液的杀菌能力与苯酚相似，其石炭酸系数随 成分与菌种的不同而异，处于1.6～5之间。含0.3%～0.6% 本品溶液10分钟能使大部分致病菌死亡，杀灭芽孢需要较高 浓度和较长时间。本消毒剂中主要杀菌成分为甲酚，三种异 构体的杀菌作用相似，其石碳酸系数介于2.0～2.7之间。
胃 一般无菌 肠 道 大肠埃希菌、产气肠杆菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌、葡萄球菌、
肠球菌、类杆菌、产气荚膜梭菌、破伤风梭菌、双歧杆菌、乳杆 菌、白假丝酵母菌 尿 道 葡萄球菌、类白喉棒状杆菌、非致病性分枝杆菌。 阴 道 乳杆菌、大肠埃希菌、类白喉棒状杆菌、白假丝酵母菌。
三、人体正 常菌群及其 意义
参与
人体常见的正常菌群
部位
主要菌群
皮 肤 葡萄球菌、类白喉棒状杆菌、铜绿假单胞菌、丙酸杆菌、白假丝酵 母菌、非致病性分枝杆菌。
口 腔 葡萄球菌、甲型和丙型链球菌、肺炎链球菌、奈瑟菌、乳杆菌、类 白喉棒状杆菌、放线菌、螺旋体、白假丝酵母菌、梭菌。
鼻咽腔 葡萄球菌、肺炎链球菌、奈瑟菌、类杆菌。 外耳道 葡萄球菌、类白喉棒状杆菌、铜绿假单胞菌、非致病性分枝杆菌。 眼结膜 葡萄球菌、干燥棒状杆菌、类白喉棒状杆菌。
微生物的消毒和灭菌技术
微生物的消毒和灭菌技术一、微生物消毒和灭菌的概念消毒:是指杀死病原微生物、但不一定能杀死细菌芽孢的方法。
通常用化学的方法来达到消毒的作用。
用于用于消毒的化学药物叫做消毒剂。
灭菌:是指把物体上所有的微生物(包括细菌芽孢在内全部杀死的方法, 通常用物理方法来达到灭菌的目的。
灭菌方法分为物理灭菌法和化学灭菌法。
防腐:是指防止或抑制微生物生长繁殖的方法。
用于防腐的化学药物叫做防腐剂。
无菌:不含活菌的意思,是灭菌的结果。
防止微生物进入机体或物体的操作技术称为无菌操作二、微生物的消毒方法常用的消毒方法有物理法和化学法。
物理法就是用物理方法杀灭或清除病原微生物和其他有害生物,主要有热消毒法、紫外线消毒法、电离辐射法、微波法等。
最常用的物理消毒方法是热消毒法和紫外线消毒法。
热消毒法(煮沸法 :是最简单有效的消毒方法,不需要特殊设备即可进行。
杀灭繁殖型细菌与病毒效果好, 对芽胞作用较小。
煮沸时间一般为 10~30分钟。
金属器械、棉织品、食具、玻璃制品等可用煮沸消毒。
但毛皮、呢绒和塑料制品等不能煮沸消毒。
热消毒法不适用于芽胞污染的消毒紫外线消毒法就是利用紫外线照射使微生物诱变致死, 达到将被服中的有害微生物除掉的目的。
消毒用紫外线灯管有 15W 、 20W 、 30W 等规则。
瓦数代表灯管在 25~40℃时紫外线输出能量。
灯管寿命一般为 3000~4000小时, 超过此时限效果不可靠。
紫外线对一般细菌、病毒均有杀灭作用。
革兰阴性菌最敏感, 其次为革兰阳生菌。
但结核杆菌却有较强抵抗力。
一般紫外线消毒对细菌芽胞无效。
紫外线广泛用于室内空气消毒, 如手术室、烧伤病房、传染病房、实验室等。
灯管距地面约 2.0~2.5m 高。
每 10~15cm 2面积可设 30W 灯管一个,最好每照射 2小时后,间歇 1小时后再照,以免臭氧浓度过高。
灯管用铝制灯罩作反向或侧向照射,可用于有人在的条件下消毒空气。
对污染表面消毒时, 灯管距表面不超过 1m , 灯管周围 1.5~2cm 处为消毒有效范围。
消毒与灭菌—微生物在自然界中的分布(动物微生物与免疫课件)
手提式高压蒸 汽灭菌器
全自动高压蒸 气灭菌器
分布
一般在畜舍、医院、宿舍、城市街道等地空气中含微生物量较高，而在大洋、高山 或极地上空的空气中，微生物的含量就很少。
检测空气中微生物常用的方法主要有滤过法和沉降法两种。
滤过法的原理是使一定体积的空气 通过一定体积的某种无菌吸附剂 （通常为无菌水），然后用平板培 养吸附剂中的微生物，以平板上出 现的菌落数推算空气中的微生物数。
动物微生物与免疫
消毒与灭菌
对有害微生物的 控制方法
消毒 灭菌
灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。
消毒：杀死物体表面上的病原微生物，
1
达到控制微生物传染的方法,并不一定
2
能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。
无菌：不存在活菌的意思。
防腐：防止或抑制体外细菌生长繁殖 的方法。
➢ 消毒是相对的，不一定达到无菌的要求。 ➢ 消毒是一种采用较温和的化学、物理等方法，仅杀死物体表面或
概念
正常菌群
在正常动物的体表或与外界相通的腔道经常有一些微生 物存在，它们对宿主不但无害，而且是有益的和必需的， 这些微生物称为正常微生物群或正常菌群。
2.正常菌群对机体的有益作用：
营养作用 免疫作用 生物颉颃
体表的微生物
种类
以球菌最多，包括葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌、 绿脓杆菌等。
当皮肤出现创伤时，其中某些菌是引起化 脓感染的主要原因。
菌群失调的概念
宿主受到日粮突然变化、环境变化、患病、 手术等应激，或是滥用抗菌药物等情况下， 正常菌群中的微生物种类、数量发生改变， 菌群平衡受到破坏，即称为菌群失调。
无菌动物（GF动物）
微生物 消毒与灭菌(共87张PPT)
缺点——穿透力差，故需高温、长时间（繁殖体100℃，杀灭； 芽孢140℃，2h可杀灭）——160－170℃，1－2h可杀死繁殖体 和芽孢。
①降到室温（60℃）后再取物品
注意事项 ②温度不能超过170℃
③物品不宜包、放过紧过厚、帖壁
10
电热干燥箱
11
湿热灭菌法
高压蒸汽灭菌法 最有效的灭菌方法 121 ℃ 20~30分钟
方法－－紫外线灯－－照射－－杀菌 应用－－手术室、病房、无菌室、实验室消毒（G-、G+）
24
光复活现象：微生物经致死量的紫外线照射后，若在3h内在遇到 可见光照射，部分微生物可以恢复其活力，这种现象称之。
影响因素－－时间、强度、距离（一般要求距地面2m， 时间1－2h，1W／m2）
紫外线作用的特点： ①穿透力弱，只能用于房间空气、物体表面消毒； ②对眼睛角膜和皮肤有损伤作用，工作人员切勿在紫外线
保存半年。
15
(3)流通蒸汽消毒法 ：又叫常压蒸汽消毒法，用普通蒸笼或阿 诺氏（Arnold）流通蒸汽灭菌器，在1个大气压下，用100℃ 左右的水蒸汽，30min，可杀灭繁殖体。不杀芽孢和霉菌的 孢子。
用于食品、食具及不耐用高温的物品消毒。如敷料、糖培养基 、半乳糖培养基
16
(4) 间歇灭菌法 （反复多次流通蒸汽）
20
二、辐 射灭菌法
辐射－－是能量通过空间传递的一种物理现象。能量可借 波动或粒子高速运行而传播。用于灭菌的辐射可分为两 种。
电离辐射－－α、β、γ、x射线及高能中子、质子等。 非电离辐射－－可见光、日光、紫外线等。 辐射的杀菌作用－－随波长的降低而增强。
①紫外、x 、γ－－杀菌增强
②可见光、红外线－－作用弱
微生物消毒与灭菌
4.When the second cell becomes infected with viruses, the AVP is activated. Active AVP stops viral replication.
干扰素抗病毒作用特点
1. 抗病毒作用生物活性高 2. 抗病毒作用具有广谱性 3. 选择性作用病毒感染的细胞 4. 抗病毒作用具有种属特异性 5. 无直接灭活病毒的作用
影响消毒灭菌效果的因素
1. 消毒剂的性质、浓度与作用时间。 2. 微生物的种类与数量。 3. 温度：温度升高，可提高消毒效果。 4. 酸碱度：酸碱度不同会影响消毒剂的浓度。 5. 有机物：消毒环境中存在有机物，可减弱消毒效果。
免疫预防（Immunoprophilaxis）
通过给人或动物接种生物制品，达到 预防感染性疾病的目的。
微生物感染的控制措施
Measures for Control of Microbial Infection
二 零 一 一 年 二 月
消毒与灭菌基本概念
消毒（disinfection）： 杀灭物体上病原微生物的方法，但不一定包括
细菌芽胞在内。
灭菌（sterilization）： 杀灭物体上包括细菌芽胞和病毒在内的所有微
Edward Jenner
人工主动免疫（ Artificial active immunization ）
用人工接种的方法给机体注射抗原性物质，使机体免疫系统 因受抗原刺激而产生体液和（或）细胞免疫应答的过程。
人工被动免疫（ Artificial passive immunization ）
给机体注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化的免疫球蛋白 抗体，使机体迅速获得特异性免疫力的过程。
细菌的分布与消毒灭菌(共10张PPT)
有感染疾病过程中产生的另一种新感染，所以，临床又
称二重感染。
二、消毒灭菌
• 1.消毒：杀死物体上病原微生物的方法，并不一定 能杀死含芽孢的细菌或非病原微生物。 2.灭菌： 杀死物体上所有微生物（包括细菌的芽孢） 的方法。 3.防腐：抑制体外细菌生长繁殖的方法。 4.无菌： 不存在任何活的微生物。 5.无菌操作： 防止细菌进入人体或其他物品的操作 技术。
• (一)、细菌在自然界的分布
• 1.土壤中的细菌 • 2.水中的细菌 • 3.空气中的细菌
（二）细菌在正常人体的分布
•
1.细菌在正常人体的分布概况
•
2.人体正常菌群及意义
（1）正常菌群的概念：正常人体的体表及与外界相通 的口腔、鼻咽腔、肠道及泌尿生殖道等腔道中，都存在 着不同种类和数量的微生物。在情况下，这些微生物对 人体无害，是人体的正常微生物群，称为正常菌群。
③干烤：干烤箱，加热至160~170℃，2 h。适用于
高温下不变质、不损坏、不蒸发的物品。
• 2.电磁波辐射杀菌法
• (1) 日光与紫外线
（2）电离辐射
• 3．滤过除菌法
（二）化学消毒灭菌法
消毒剂能影响细菌的化学组成、结构和生理活动 从而发挥防腐、消毒甚至灭菌的作用。主要用于人体 体表、医疗器械和周围环境的消毒。影响消毒剂作用 的因素有：
菌群当寄居部位入发生改变或免疫功能低下时可引起疾
病，这些细菌称为条件致病菌。
•
消毒和灭菌的方法主要有热力灭菌法、电磁波辐射
杀菌法、滤过除菌及化学消毒剂的使用，常用的有高压
蒸汽灭菌法、煮沸法、紫外线照射和化学消毒剂的使用
等。
解释消毒、灭菌、防腐、无菌及无菌操作的概念
微生物实验报告(微生物形态观察、分布、灭菌消毒)
FOR PERSONAL USE ONLY IN STUDY AND RESEARCH; NOT FOR COMMERCIAL USE微生物实验微生物实验细菌形态观察细菌分布消毒灭菌细菌形态观察一、实验目的1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护2.掌握细菌的三种形态3.掌握临床常见细菌的形态及染色4.掌握细菌的特殊结构5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点二、实验原理1. 普通光学显微镜（油镜）的使用1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰3. 根据需要调节显微镜亮度2. 普通光学显微镜的维护1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内4.做好使用记录3．微生物知识1．细菌按形态分类：球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等）杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等）螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等）2．细菌的基本结构细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体3．细菌的特殊结构荚膜：如肺炎双球菌鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。
如：变形杆菌为周毛菌菌毛芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。
原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体真核类：真菌、原生动物、显微藻类非细胞类：病毒、亚病毒5．真菌单细胞：圆形、芽生孢子。
如：酵母菌多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽。
如：霉菌6．白假私酵母菌（白念）生物学性状：G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定致病性：皮肤粘膜——鹅口疮、内脏感染、CNS感染微生物学检查：直接涂片、染色后镜检——菌体、芽生孢子、假菌丝7．新型隐球菌生物学性状：圆形酵母型菌、外周有厚荚膜（比菌体大1-3倍）致病性：吸入后侵犯皮肤、粘膜等——慢性炎症和脓肿；侵袭CNS——亚急性或慢性脑膜炎微生物学检查：脑脊液离心后取沉淀、痰和脓标本直接检查；墨汁负染见出芽菌体外围有宽厚荚膜为阳性三、实验材料记号笔：1支；大镊子：1支；火柴：1盒；蜡笔：1支；试管架：1个；酒精灯：1个；接种环：1支；Olympus显微镜：1台；显微镜使用记录本：1个四、实验内容1. 观察细菌三种形态1）球菌链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌（子弹形）、脑膜炎双球菌（蚕豆形）、四联菌2）杆菌破伤风杆菌、白喉杆菌（异染颗粒）、绿脓杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌3）螺形菌弧菌——霍乱弧菌；螺菌；螺杆菌——幽门螺杆菌；弯曲菌2. 观察细菌的特殊结构芽胞、鞭毛、荚膜、异染颗粒、钩端螺旋体、幽门螺杆菌3. 绘图葡萄球菌(staphyloccocus)；肺炎双球菌(pneumo coccus)；脑膜炎球菌(meningococcus)；破伤风杆菌（Clostridium Tantenus）；霍乱弧菌（vibrio cholera)；芽胞(spore)；鞭毛（flagellum)；荚膜(capsule)；钩端螺旋体(leptospira)五、实验结果绘8幅细菌镜下图，已交。
细菌的分布与消毒灭菌 消毒灭菌(病原生物学与免疫学课件)
（二）物理消毒灭菌法
1、热力灭菌法
1）煮沸法
湿
2）流通蒸气法
热
3）高压蒸气法
灭
菌
4）巴氏消毒法
法
5）间歇灭菌法
6）焚烧法
干
7）烧灼法
热
8）干烤法
灭
菌
法
湿热灭菌法和干热灭菌法的效果有何差别？
（二）物理消毒灭菌法 01 热力灭菌法
煮沸法
在1个大气压下，水煮沸 100℃5min。可杀死细 菌的繁殖体，杀死芽胞 则需1～2h。
（二）物理消毒灭菌法 01 热力灭菌法
焚烧法
用于废弃垃圾、感染的 动物尸体等的灭菌。
（二）物理消毒灭菌法 01 热力灭菌法
烧灼法
实验室的金属器械（镊、剪 、接种环等）接种环、接种 针、试管口等的灭菌。
（二）物理消毒灭菌法
01 热力灭菌法
干烤法
在干烤箱中加热至160 ℃ ～ 170℃,２h～３h。 仅用于耐高温的玻璃器皿、瓷 器、玻璃注射器油类制剂、粉 剂药品等的灭菌。
（二）物理消毒灭菌法
02 辐射杀菌法
紫外线 265~266nm 杀菌原理： 干扰DNA正常复制导致细菌死亡或变异 。 用途与缺陷 穿透力弱，一般用于手术室、病房、实验室的空气消毒。
（二）物理消毒灭菌法 03 滤过除菌法不耐热血清、 Nhomakorabea气的除菌
各式细菌滤器
（二）物理消毒灭菌法 04 超声波杀菌法
用于粉碎细胞,撮细 胞组分
（二）化学消毒灭菌法
02 消毒剂的杀菌机制
消毒剂的杀菌机制
使菌体蛋白质 变性或凝固
干扰微生物 酶系统
影响其代谢
损伤细胞壁 或细胞膜
（二）化学消毒灭菌法
微生物知识及消毒与灭菌知识培训
概念
灭菌——使达到无菌状态的方法（GMP 指南）。用物理或化学方法杀灭传播媒 介上所有的微生物，使其达到无菌 （GB）。通常是指杀灭或除去全部活的 微生物（包括繁殖体和芽孢）。 消毒——用物理或化学方法杀灭或清除 传播媒介上的病原微生物，使其达到无 害化（GB）。通常是指杀死病原微生物 的繁殖体，但不能破坏其芽孢。所以消 毒是不彻底的，不能代替灭菌。
滤过除菌
利用细菌不能通过致密孔滤材的原理，除去对 热不稳定的药品溶液或液体物质中的细菌的方 法。过滤法一般只能除菌，不能除去支原体和 病毒。过滤除菌的效果与滤膜的性能、孔径的 大小、密度、滤膜的厚度等因素有关。滤过除 菌法要求最终过滤的滤膜孔径为0.22μm。由于 各厂家生产的相同规格的滤膜质量并不一致， 为了保证除菌效果，在使用前后应检查滤器的 完好性（如压力维持试验或起泡点试验）。一 个过滤器的使用时间应根据品种验证后确定， 一般不应超过8小时。
干热灭菌
常见的有火焰、烧灼、干烤和红外线灭菌等。 ①火焰、烧灼：通常用于实验室无菌操作中金 属或其它耐火材料制成的器具的灭菌。 ②干烤和红外线：利用干热空气或热辐射进行 灭菌。一般135~145℃需3~5h，160~170℃需 2h以上，170~180℃需1h以上，180~200℃需 0.5~1h。除热原，则需250℃30min，或 200℃45min，180℃2h。空气传热慢，穿透力 不强，故干热灭菌时间长。干热灭菌时烤箱内 装入物品应留有空隙，以利空气流动，否则使 箱内温度不均，部分物品灭菌不彻底。
湿热灭菌
通过热蒸汽或沸水使蛋白质变性而杀灭微生物 的方法。湿热穿透力强，灭菌效果较干热好。 ①煮沸或流通蒸汽灭菌：常压下沸水和蒸汽的 温度是100℃，一般处理30~60min可杀死细菌 繁殖体，但不能完全杀灭芽孢。此法适用于不 能高压蒸汽灭菌的物品。 ②低温间隙灭菌（巴斯德灭菌法）：将物品先 用60~80℃加热（或煮沸）1h，然后置 20~25℃保存24h（或常温过夜），使其中残存 的芽孢萌发成繁殖体，再用以上条件灭菌，如 此反复三次。本法适用于不耐高温或高温下易 变质的物品，但很费时。
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10
法 最常用是：
121℃，103.1kPa，15-20min
2020/9/22
29
高压蒸汽灭菌锅
2020/9/22
30
常用设备：手提式热压灭菌器
2020/9/22
31
常用设备：卧式热压灭菌柜
①
高
压
蒸
汽
灭
菌
法
2020/9/22
32
高压蒸气灭菌注意点:
❖ 检查压力表是否灵敏，压力与温度是否对应 ❖ 灭菌初期先排净锅内冷空气; ❖ 灭菌时间计算：达到规定压力和
白2念0珠 20菌 /9/、22类白喉杆菌 非致病性分枝等
肠道
大肠杆菌、产气杆菌、变形杆菌
绿脓杆菌、葡萄球菌、厌氧性细
菌
真菌、乳杆菌，双歧杆菌等
5
（三）正常菌群的作用
1、生物拮抗作用——屏障 2、免疫作用— 免疫刺激 3、营养与代谢作用——合成维生素 4、抑制肿瘤的作用
2020/9/22
6
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（1）煮沸法
方法：水中煮沸 15min 灭菌效果：可杀死所有营养细胞和一部
分芽胞 适用对象：玻璃注射器和外科器械的消 毒。
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Cncnc-micro
（2）流通蒸汽消毒法
方法：100 ℃蒸汽持续15－30min 效果：杀繁殖体 适用范围：外科手术器械、注射器、
胶管或食具等
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奶瓶消毒器
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（3）间歇灭菌 法
方法：常压蒸汽反复几次进行灭菌。
灭菌效果：可杀死芽胞。
适用对象：不宜高压灭菌的培养基， 不耐热的药物和营养物、 发酵车间的管道等。
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（4）巴氏消毒法 （低温消毒法）
方法：61.7－62.8ºＣ处理30min 或71.6ºＣ度处理15秒 或82℃处理4秒
灭菌: 杀死物体或介质中所有微生物的
方法（包括所有细菌繁殖体及芽 胞）。判断标准？
防腐（抑菌）:防止或抑制微生物生长繁
殖的方法。（微生物不一定死亡）
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无菌: 在一定范围内没有活的 微生物存在。
无菌操作:防止细菌进入机体 或对象的技术，称无 菌操作。
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无菌操作
干热灭菌法
热力灭菌法
湿热灭菌法
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焚烧----最彻底的灭菌方法
烧灼----直接用火焰灭菌方法
如接种环、试管口、三角瓶口
干烤----加热160-170℃ 2h
药粉、玻璃器皿、陶瓷 红外线----热效应，与干烤类似
灭菌效果：可杀死营养体和芽胞
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灼 烧 灭 菌 法
培养基、生理盐水、玻璃器 皿、敷料、手术器械、某些 注射液、手术衣等。
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灭菌条件
①
高
温度/℃ 压力/kPa(kg/cm2) 时间/min
压
110
40.52(0.4)
40
蒸
115
70.91(0.7)
30
汽
120
101.3(1.0)
20
灭
125
141.82(1.4)
15
菌
130
182.34(1,8)
最有效的湿热灭菌
水煮100 ℃ 5mim(杀繁殖体)-5h(杀芽胞)
流通蒸汽消毒法
水蒸汽100 ℃ 15-30mim(杀繁殖体)
间歇灭菌法
反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌(杀芽胞）
巴氏消毒法
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较低的温度 61 ℃ 30mim/71 ℃ 30s（杀致病菌）
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红外线接种 环灭菌器
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实验室常用设备
干 烤 灭 菌 法
真空干燥灭菌箱
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电热烘箱
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湿热灭菌与干热灭菌的比较
同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果好
原 1、湿热中细菌菌体蛋白较易凝固 因 2、湿热的穿透力比干热强
3、湿热的蒸汽有潜热
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高压蒸汽灭菌法
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占位性生物屏障作用
（四）、条件致病菌和菌群失调
正常菌群/
？
非致病菌
条件致病菌
机体方面 细菌方面
免疫功能下降
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寄生部位改变 菌群失调
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第二节 消毒与灭菌
➢消毒灭菌概念 ➢物理方法 ➢化学方法 ➢生物学方法
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消毒灭菌有关概念
消毒:杀死物体或介质中的病原微生物
的方法（芽胞及非病原微生物不 一定能杀死）。
效果：消毒
适用对象：牛奶、奶酪、果汁、酒类、 糖浆等食品消毒。
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UHT技术 （超高温灭菌瞬时灭菌） 135℃~152℃
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（5）高压蒸气灭菌 湿热灭菌法中效果最好的方法
❖灭菌效果：杀芽孢 ❖适用范围：耐高温的物体，如普通
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一、物理方法
常用方法
（一）热力法（干热、湿热）
（二）辐射（紫外线、电离幅射、微波）
（三）滤过除菌（除菌滤器、适用物品）
（四）超声波（机制：裂解细菌，主要用
于粉碎细胞、提取抗原）
（五）干燥
（六）低温
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（一）热力灭菌法
原理：
➢使微生物蛋白质变性凝固，酶失活； ➢核糖体解体 ➢破坏细胞膜的结构； ➢微生物体内的DNA断裂。
温度开始计。
❖ 锅内水分要充足; ❖ 灭菌物品装量不宜太满; ❖ 灭菌结束需缓慢减压； ❖ 灭菌结束，趁热取出物品。
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（二）辐射 1、日光与紫外光
紫外线 波长265nm的杀菌作用最强
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二、微生物在人体的分布
（一）正常菌群的定义
－分布在人类的体表及其与外界相通 的腔道中，在机体免疫机能正常时是无害的 微生物群体。
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（二）人体微生物的分布
眼结膜 白色葡萄球菌、干燥杆菌
人 体 内 正 常 菌 群 的 分 布
外耳道 葡萄球菌、类白喉杆菌 绿脓杆菌、非致病性分枝杆菌
鼻咽腔 葡萄球菌、甲，丙型链球菌 肺炎球菌、奈氏菌、类杆菌等 表皮葡萄球菌 口腔 甲，丙型链球菌 类白喉杆菌、肺炎球菌 奈氏菌、乳杆菌、梭杆菌 螺旋体、放线菌、白念珠菌
皮肽 葡萄球菌、绿脓杆菌、白念珠菌 丙酸杆菌、类白喉杆菌、 非致病性分枝杆菌
尿道 白色葡萄球菌、类白喉杆菌、 非致病性分枝杆菌
阴道
大肠杆菌、乳杆菌
第十章 消毒灭菌
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看书找答案
❖ 1、什么是正常菌群？ ❖ 2、什么是灭菌、消毒、防腐、无菌及无
菌操作？想想消毒、灭菌和防腐有什么 区别？
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第一节 微生物的分布
一、微生物在自然界的分布 （一）土壤中的微生物 （二）水中的微生物 （三）空气中的微生物
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