48孔培养板示意图(A4纸打印版)
培养瓶、培养皿规格及面积
4.0
3×106
100cm玻璃培养瓶
37.5
10.0
6×106
250cm玻璃培养瓶
78
15.0
2×107
2500cm旋转培养瓶
700
100~250
2.5×108
24孔板：PLL 100-200μl（200μl）即可，铺板2h后，吸出PLL（回收），PBS冲洗2次，晾干备用或不晾干直接用。加培养液量1ml ，注意调整细胞密度。
100ml
细胞培养瓶:
产品编号
产品描述
建议上液量
430639
规格：25cm2，矩形，斜颈，透气盖
5ml
430641?
规格：75mm2，矩形，斜颈，透气盖
15ml
430825
规格：150cm2，矩形，斜颈，透气盖?
30ml
431080
规格：175cm2，矩形,角度颈,透气盖
35ml
3001
规格：225cm2，矩形，斜颈，透气盖
25cm2（5ml）→（1:2）50cm2（10ml）——（1:3）75cm2（15ml）
2cm2（1ml）→1/25——1/40总细胞悬液
96孔板：PLL 20-40μl（40μl）即可，铺板2h后，吸出PLL（回收），PBS冲洗2次，晾干备用或不晾干直接用。加培养液量0.1ml-0.2ml ，注意调整细胞密度。
25cm2（5ml）→（1:2）50cm2（10ml）——（1:3）75cm2（15ml）
0.32cm2（0.1-0.2ml）→1/150——1/250总细胞悬液
2.5
2.5×106
4孔培养板
28
5.0
7×106
3.5cm培养皿
成败，在铺板的那一刻就定了
成败，在铺板的那一刻就定了展开全文果子老师问我下一个专题写什么？我思考了很久都没有定。
我还是喜欢回头来把细胞培养系列讲完，所以这周会讲到细胞铺板。
后面会陆续分享相应的专题。
我把这些分享完以后，就会分享细胞增殖，凋亡，活性的系列检测方法。
细胞铺板其实是一个常规，简单的操作。
但是也不是所有人都可以把它做的很好。
这需要有多方面的考虑，比如你的目的，要用到的检测方法，时间，细胞周期等等一系列因素。
先讲讲细胞铺板的步骤。
以贴壁细胞T75为例：•1. 将1XPBS与培养基先放在室温或者37℃水浴箱中复温。
•2. 取出细胞，用手拍走死细胞后(果子标注：这点会给你带来不适，但是真的很有效，高师姐的逻辑是，你既然都可以被拍得死，那么就不是我的菜)，弃上清。
•3. 加入1XPBS 10mL来回晃动2-3次，再次用手拍走死细胞，弃上清。
•4. 重复以上步骤两次，在最后一次将PBS吸干净•5. 加入 1 mL胰酶（其实，你如果用的是sigma或者Themofisher的胰酶，还需要再用PBS稀释成0.25X的）。
•6. 放入37℃孵箱中放置2-5min，如果实验室有37℃摇床，可以放在摇床上左右摇动2-5 min。
胰酶消化细胞的原理是，可以使细胞结合处的蛋白降解，这个时候细胞由于内部的骨架蛋白张力而变为球形，细胞就分开了。
由于细胞膜上表达大量膜蛋白，消化过头的话会对细胞损害。
此处建议新手或者养的是一个新细胞时，自己要观察最佳胰酶消化时间及浓度。
下图就是消化的比较好的图片HeLa 229.png下图是消化过了的图片，可见细胞聚集在一起。
Picture9.png下图是混合的图片，有些细胞已经消化过了，而有些细胞还未消化下来。
HeLa 229.png•7. 用2-3倍的完全培养基中和胰酶反应.为什么是完全培养基？因为完全培养基中有血清。
胰酶是一种丝氨酸蛋白酶，血清中含有抗凝血酶III，恰好是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，所以可以中和此反应。
各种孔板细胞接种量
各种孔板细胞接种量（总结下各种孔板细胞接种量仅供参考）：
培养板细胞接种量生长面积容量细胞数（大约）
96孔板4~5×10435mm培养皿1×10 6
48 孔板 1.3×10 5 60mm培养皿 2.6×10 6
24孔板 2.5×10 5100mm培养皿7×10 6
12孔板5×10 5150mm培养皿 1.8×10 7
6孔板 1.2×10 6
细胞瓶面积容量工作体积细胞数
12.5cm225ml 2ml 5×10 5
25 cm250ml 5ml 1×10 6
35 cm275ml 10ml 2×10 6
75 cm2250ml 15ml 4×10 6
150 cm2700ml 40ml 1.1×107
6孔板底面积9.6cm2，加培养液的量2.5ml；
12孔板底面积4.5cm2，加培养液的量2ml；
24孔板底面积2cm2，加培养液的量1ml；
96孔板底面积0.32cm2，加培养液的量0.1ml。
补充：不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2~3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量（参考下表）。
若加液量过多会影响气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。
具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。
注：各种单层生长的细胞在培养皿中长满的细胞数，主要取决于器皿底表面积和细胞体积的大小。
上表以Hela细胞为例给出的可获细胞量仅作参考。
各种孔板细胞接种量
各种孔板细胞接种量（总结下各种孔板细胞接种量仅供参考）：
培养板细胞接种量生长面积容量细胞数（大约）
96孔板4~5×10435mm培养皿1×10 6
48 孔板 1.3×10 5 60mm培养皿 2.6×10 6
24孔板 2.5×10 5100mm培养皿7×10 6
12孔板5×10 5150mm培养皿 1.8×10 7
6孔板 1.2×10 6
细胞瓶面积容量工作体积细胞数
12.5cm225ml 2ml 5×10 5
25 cm250ml 5ml 1×10 6
35 cm275ml 10ml 2×10 6
75 cm2250ml 15ml 4×10 6
150 cm2700ml 40ml 1.1×107
6孔板底面积9.6cm2，加培养液的量2.5ml；
12孔板底面积4.5cm2，加培养液的量2ml；
24孔板底面积2cm2，加培养液的量1ml；
96孔板底面积0.32cm2，加培养液的量0.1ml。
补充：不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2~3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量（参考下表）。
若加液量过多会影响气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。
具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。
注：各种单层生长的细胞在培养皿中长满的细胞数，主要取决于器皿底表面积和细胞体积的大小。
上表以Hela细胞为例给出的可获细胞量仅作参考。
各种孔板细胞接种量
各种孔板细胞接种量（总结下各种孔板细胞接种量仅供参考）：
培养板细胞接种量生长面积容量细胞数（大约）
96孔板4~5×10 435mm培养皿1×10 6
48 孔板 1.3×10 5 60mm培养皿 2.6×10 6
24孔板 2.5×10 5100mm培养皿7×10 6
12孔板5× 10 5150mm培养皿 1.8×10 7
6孔板 1.2×10 6
细胞瓶面积容量工作体积细胞数
12.5cm225ml 2ml 5×10 5
25 cm250ml 5ml 1×10 6
35 cm275ml 10ml 2×10 6
75 cm2250ml 15ml 4×10 6
150 cm2700ml 40ml 1.1×107
6孔板底面积9.6cm2，加培养液的量2.5ml；
12孔板底面积4.5cm2，加培养液的量2ml；
24孔板底面积2cm2，加培养液的量1ml；
96孔板底面积0.32cm2，加培养液的量0.1ml。
补充：不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2~3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量（参考下表）。
若加液量过多会影响气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。
具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。
注：各种单层生长的细胞在培养皿中长满的细胞数，主要取决于器皿底表面积和细胞体积的大小。
上表以Hela细胞为例给出的可获细胞量仅作参考。
各种孔板细胞接种量
各种孔板细胞接种量
总结下各种孔板细胞接种量仅供参考
细胞培养瓶（板）接种量生长面积容量细胞数（大约）
96孔板4~5×10 4 35mm培养皿1×10 6
48 孔板 1.3×10 5 60mm培养皿 2.6×10 6
24孔板 2.5×10 5 100mm培养皿7×10 6
12孔板5×10 5 150mm培养皿 1.8×10 7
6孔板 1.2×10 6
细胞瓶面积容量工作体积细胞数目
12.5cm2 25ml 2ml 5×10 5
25cm2 50ml 5ml 1×10 6
35cm2 75ml 10ml 2×10 6
75 cm2 250ml 15ml 4×10 6
150cm2 700ml 40ml 1.1×107
补充：不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2~3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量（参考下表）。
若加液量过多会影响气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。
具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。
注：各种单层生长的细胞在培养皿中长满的细胞数，主要取决于器皿底表面积和细胞体积的大小。
上表以Hela细胞为例给出的可获细胞量仅作参考。
各种孔板细胞接种量
各种孔板细胞接种量（总结下各种孔板细胞接种量仅供参考）：
培养板细胞接种量生长面积容量细胞数（大约）
96孔板4~5×10 435mm培养皿1×10 6
48 孔板 1.3×10 5 60mm培养皿 2.6×10 6
24孔板 2.5×10 5100mm培养皿7×10 6
12孔板5× 10 5150mm培养皿 1.8×10 7
6孔板 1.2×10 6
细胞瓶面积容量工作体积细胞数
12.5cm225ml 2ml 5×10 5
25 cm250ml 5ml 1×10 6
35 cm275ml 10ml 2×10 6
75 cm2250ml 15ml 4×10 6
150 cm2700ml 40ml 1.1×107
6孔板底面积9.6cm2，加培养液的量2.5ml；
12孔板底面积4.5cm2，加培养液的量2ml；
24孔板底面积2cm2，加培养液的量1ml；
96孔板底面积0.32cm2，加培养液的量0.1ml。
补充：不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2~3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量（参考下表）。
若加液量过多会影响气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。
具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。
注：各种单层生长的细胞在培养皿中长满的细胞数，主要取决于器皿底表面积和细胞体积的大小。
上表以Hela细胞为例给出的可获细胞量仅作参考。
各种孔板细胞接种量
各种孔板细胞接种量
总结下各种孔板细胞接种量仅供参考
细胞培养瓶（板）接种量生长面积容量细胞数（大约）
96孔板4~5×10 4 35mm培养皿1×10 6
48 孔板 1.3×10 5 60mm培养皿 2.6×10 6
24孔板 2.5×10 5 100mm培养皿7×10 6
12孔板5×10 5 150mm培养皿 1.8×10 7
6孔板 1.2×10 6
细胞瓶面积容量工作体积细胞数目
12.5cm2 25ml 2ml 5×10 5
25cm2 50ml 5ml 1×10 6
35cm2 75ml 10ml 2×10 6
75 cm2 250ml 15ml 4×10 6
150cm2 700ml 40ml 1.1×107
补充：不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2~3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量（参考下表）。
若加液量过多会影响气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。
具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。
注：各种单层生长的细胞在培养皿中长满的细胞数，主要取决于器皿底表面积和细胞体积的大小。
上表以Hela细胞为例给出的可获细胞量仅作参考。
各种孔板细胞接种量
各种孔板细胞接种量（总结下各种孔板细胞接种量仅供参考）：
培养板细胞接种量生长面积容量细胞数（大约）
96孔板4~5×10 435mm培养皿1×10 6
48 孔板 1.3×10 5 60mm培养皿 2.6×10 6
24孔板 2.5×10 5100mm培养皿7×10 6
12孔板5× 10 5150mm培养皿 1.8×10 7
6孔板 1.2×10 6
细胞瓶面积容量工作体积细胞数
12.5cm225ml 2ml 5×10 5
25 cm250ml 5ml 1×10 6
35 cm275ml 10ml 2×10 6
75 cm2250ml 15ml 4×10 6
150 cm2700ml 40ml 1.1×107
6孔板底面积9.6cm2，加培养液的量2.5ml；
12孔板底面积4.5cm2，加培养液的量2ml；
24孔板底面积2cm2，加培养液的量1ml；
96孔板底面积0.32cm2，加培养液的量0.1ml。
补充：不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2~3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量（参考下表）。
若加液量过多会影响气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。
具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。
注：各种单层生长的细胞在培养皿中长满的细胞数，主要取决于器皿底表面积和细胞体积的大小。
上表以Hela细胞为例给出的可获细胞量仅作参考。
各种孔板细胞接种量
各种孔板细胞接种量（总结下各种孔板细胞接种量仅供参考）：^6l:培养板细胞接种量生长面积容量细胞数（大约）-i( q/ S96孔板4~5×10 435mm培养皿1×10 6' 48 孔板 1.3×10 5 60mm培养皿 2.6×10 624孔板 2.5×10 5100mm培养皿7×10 612孔板5× 10 5150mm培养皿 1.8×10 76孔板 1.2×10 6{" s; ?$ q8 l# |1 l细胞瓶面积容量工作体积细胞数@(O0 O, n 12.5cm225ml 2ml 5×10 525 cm250ml 5ml 1×10 68 VF8 }1 35 cm275ml 10ml 2×10 6, ^.75 cm2250ml 15ml 4×10 68 o9 _8 150 cm2700ml 40ml 1.1×1076孔板底面积9.6cm2，加培养液的量2.5ml；12孔板底面积4.5cm2，加培养液的量2ml；24孔板底面积2cm2，加培养液的量1ml；96孔板底面积0.32cm2，加培养液的量0.1ml。
补充：不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2~3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量（参考下表）。
若加液量过多会影响气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。
具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。
注：各种单层生长的细胞在培养皿中长满的细胞数，主要取决于器皿底表面积和细胞体积的大小。
上表以Hela细胞为例给出的可获细胞量仅作参考。