小鼠肝脏取材固定方法

小鼠肝脏取材固定方法

试剂：

小鼠麻醉剂：4%水合氯醛，

肝脏固定液：4% PFA

器材：手术器械（剪刀，镊子），1 mL注射器

称取小鼠体重，记录体重值。腹腔注射4%水合氯醛麻醉小鼠（20 μL/10 g 体重），2-3 min 后，用镊子捏小鼠四肢失去反应时，大头针固定解剖盘(塑料泡沫盒)中。剪断下腔静脉，充分放出血液，用吸水纸吸干流出的血液。

用镊子捏住边缘膜系结构完整剪下整个肝脏，不要破坏组织结构，放入10cm 培养皿中，称量记录肝脏重量值。

取肝脏中叶分成50 mg左右的小块，放入冻存管中，立即放入液氮中速冻30 分钟，每个肝脏冻存多份，转移至-80℃冻存用于提取蛋白质和RNA。

取中叶的同时，取小鼠肝脏左右两叶肝片，放入盛有4% PFA 的50 mL离心管中固定。摇床上固定8-12小时（过夜）。固定液体积至少是组织块的体积的10倍，室温固定。固定结束，用1x PBS摇床上洗3次，每次10 min，除去组织残留的固定液。然后保存于70% 乙醇，4℃，可保存2周。

取材中小鼠编号，冻存管编号，50 mL离心管编号要完全一致，不可混淆。