小鼠破骨细胞使用说明
分离小鼠骨髓中的免疫细胞的方法
分离小鼠骨髓中的免疫细胞的方法小鼠骨髓免疫细胞分离骨髓是造血的场所，含有各种类型的免疫细胞，包括粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和髓系干细胞。
分离这些细胞对于研究免疫系统、干细胞生物学和疾病机制至关重要。
以下是分离小鼠骨髓中免疫细胞的详细方法：材料：小鼠PBS（pH 7.2-7.4）细胞培养液（例如 RPMI 1640）琼脂糖琼脂（0.5% w/v）40 µm细胞过滤器50 mL离心管移液器台式离心机步骤：1. 屠宰小鼠：使用二氧化碳或异氟烷麻醉小鼠，然后通过颈椎脱臼法将其屠宰。
2. 取出股骨：将小鼠固定在工作台上，用无菌镊子和剪刀小心取出股骨。
3. 暴露骨髓：使用无菌剪刀剪开股骨两端，用 PBS 冲洗髓腔，将骨髓液冲入一个 50 mL 离心管中。
4. 过滤细胞：用 40 µm 细胞过滤器将骨髓液过滤到另一个50 mL 离心管中。
5. 离心细胞：以300 × g 的速度离心 10 分钟，除去沉淀的骨骼碎片和未裂解的细胞。
6. 收集沉淀：小心地吸出上清液，并收集沉淀的细胞。
7. 再悬浮细胞：用细胞培养液将细胞重悬浮，调整细胞密度至1-2 × 10^6 个细胞/mL。
免疫细胞的分离：分离免疫细胞需要专用的抗体和磁珠。
不同的抗体靶向不同的细胞表面标志物，使特定细胞类型与磁珠结合。
磁珠与细胞的结合强度取决于抗体的亲和力和细胞表面标志物的表达水平。
1. 抗体标记：向细胞悬液中加入抗体，孵育 30 分钟，4°C。
2. 磁珠孵育：加入与抗体匹配的磁珠，孵育 15 分钟，4°C。
3. 磁分离：将细胞悬液转移到磁分离柱上，放置在磁架上。
靶细胞将被磁珠吸附在柱上，而未标记的细胞将流出。
4. 洗涤：用 PBS 洗涤磁柱多次，除去未结合的细胞和抗体。
5. 洗脱：使用洗脱缓冲液将靶细胞从磁珠上洗脱，收集洗脱液中的细胞。
细胞分析：分离的免疫细胞可以使用流式细胞术进行分析。
小鼠骨髓内破骨细胞诱导形成的实验观察
小鼠骨髓内破骨细胞诱导形成的实验观察刘翠萍;李菊明;唐伟;刘超【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2005(9)2【摘要】目的:建立骨髓间充质干细胞诱导培养成为破骨细胞的培养方法并进行初步的形态观察,为破骨细胞学及与其相关疾病的发病机制的研究提供更有意义的手段。
方法:采用小鼠骨髓间充质干细胞通过1,25-(OH)2D诱导分化为破骨3细胞的培养方法,并观察原代成骨细胞对该方法破骨细胞形成及其功能的影响。
根据是否加原代成骨细胞,分成未加成骨细胞、加成骨细胞二组,未加成骨细胞组是骨髓间充质干细胞直接诱导培养,加成骨细胞组是骨髓间充质干细胞与原代成骨细胞共同培养。
分别培养6,9,12及15d,各组细胞到培养时间后取出进行TRAP染色阳性的多核细胞计数、骨片甲苯胺蓝染色及扫描电镜观察。
结果:未加成骨细胞、加成骨细胞两组的骨髓间充质干细胞经培养后均出现破骨细胞,而且随着培养时间的延长,破骨细胞及骨片吸收陷窝的数目增多。
培养相同时间的未加成骨细胞、加成骨细胞两组之间的破骨细胞及骨片吸收陷窝的数目差异无显著性意义。
结论:通过1,25-(OH)2D诱导骨髓中的间充质干细胞培养破骨细胞的3方法是可行的,而且骨髓间充质干细胞诱导培养成破骨细胞时加入原代成骨细胞共同培养对破骨细胞的形成和骨吸收功能并无明显促进作用。
【总页数】4页(P47-49)【作者】刘翠萍;李菊明;唐伟;刘超【作者单位】南京医科大学第一附属医院内分泌科;南京医科大学第一附属医院骨科【正文语种】中文【中图分类】R318【相关文献】1.淫羊藿苷对小鼠骨髓源性破骨细胞诱导生成及骨吸收功能的影响 [J], 吕明波;刘兴炎;葛宝丰;陈克明;白孟海2.破骨细胞分化因子诱导小鼠骨髓细胞形成破骨细胞的实验研究 [J], 郭子杰;栾文民;于世凤;张铁梅3.OPGL诱导小鼠外周血单核细胞分化为破骨细胞及其破骨活性 [J], 徐虎;李明全;胡蕴玉4.辛伐他汀对PTHrP诱导的破骨细胞性骨吸收及小鼠颅盖骨代谢的影响 [J], 黄鲁豫;胡蕴玉;陶惠人;毕龙5.IL-6体外诱导成年大鼠骨髓破骨细胞形成的实验观察 [J], 李永明;林珠;段银钟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大鼠破骨细胞分化因子(ODF)酶联免疫分析 试剂盒 说明书
大鼠破骨细胞分化因子（ODF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用预期应用ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中ODF含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中ODF水平。
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入ODF、生物素化的抗ODF抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的ODF呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为20,000pg/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成20,000pg/mL，10,000pg/mL，5,000pg/mL，2,500pg/mL，1,250pg/mL，625pg/mL，312 pg/mL，其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0pg/mL，临用前15分钟内配制。
如配制10,000pg/mL标准品：取0.5ml20,000pg/mL的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3.样品稀释液：1×20ml/瓶。
4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。
5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。
6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A1：100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如1ul 检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7.检测溶液B：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液B1：100稀释。
小鼠破骨细胞分离培养及鉴定
小鼠破骨细胞分离培养及鉴定骨疾病的发生与骨形成、骨吸收失衡有关，骨吸收大于骨形成导致骨量减少，而骨吸收又与破骨细胞的数量和功能有关[1] 。
从破骨细胞着手揭示骨吸收机制，为许多由破骨细胞引起的疾病如绝经后的骨质疏松、风湿性关节炎、牙周病、肿瘤相关性骨溶解以及矫形外科中的植入体的丢失等提供防治依据。
与此相关，分离成熟的破骨细胞对于研究破骨细胞的特征、功能和调节来说显然是一种必不可缺少的工具。
该研究以小鼠为试验对象，建立小鼠共培养试验培养破骨细胞的方法，来获得具有特征性的破骨细胞。
1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1试验动物。
1日龄MF1小鼠，由扬州大学比较医学中心提供。
1.1.2主要试剂及仪器。
a -MEM胎牛血清，抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP染色试剂盒、1，25-(OH 2D3,甲苯胺蓝，直径5 mm的象牙片。
YJ2875B型医用净化工作台，PS29000705超纯水装置，24 孔培养板，二氧化碳培养箱，超声清洗仪，XSZ-D2 倒置显微镜，XL30-ESEM环境扫描电子显微镜[2-3]。
1.2 试验方法1.2.1 成骨细胞分离培养。
将1 日龄的小鼠浸入75%酒精浸泡3〜5 min。
无菌剪取其头盖骨，去除表面结缔组织和毛细血管，放入50 mL离心管，加入3 mL 0.25%胰蛋白酶，37 C气浴摇床消化20 min , 80 r/min，弃胰酶。
用PBS冲洗并尽量吹打以除去成纤维细胞。
将骨片剪成糊状，加入0.1%H型胶原酶3 mL 置气浴恒温振荡器内80 r/min、37 C振荡消化1 h[2-3]。
将头盖骨转入1.5 mL 指形管中，用剪刀剪碎，直至剪成糊状（需时30 min ），混匀转入50 mL离心管，封口，37 C 气浴摇床消化60 min , 80 r/min ;转入离心管用PBS洗涤然后转入15 mL离心管，离心10 min , 1 500 r/min 。
弃去上清，再反复用PBS吹打洗涤离心2次，1 000 r/min , 5 min。
小鼠成骨细胞使用说明
小鼠成骨细胞小鼠成骨细胞产品说明：为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠成骨细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠成骨细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
小鼠成骨细胞注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
小鼠成骨细胞其他相关小鼠原代细胞：小鼠小肠粘膜上皮细胞小鼠大隐静脉平滑肌细胞小鼠肺微血管内皮细胞小鼠冠状动脉平滑肌细胞小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠大隐静脉内皮细胞小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞小鼠冠状动脉内皮细胞小鼠气管上皮细胞小鼠骨细胞小鼠气管平滑肌细胞小鼠滑膜细胞小鼠肺成纤维细胞小鼠骨骼肌细胞小鼠支气管上皮细胞小鼠表皮细胞小鼠支气管成纤维细胞小鼠真皮成纤维细胞小鼠肺大静脉平滑肌细胞小鼠破骨细胞小鼠肺大动脉平滑肌细胞小鼠皮肤肥大细胞小鼠肺大动脉内皮细胞小鼠前脂肪细胞小鼠肺动脉成纤维细胞小鼠成骨细胞小鼠肺大静脉内皮细胞小鼠关节软骨细胞小鼠气管和支气管上皮细胞小鼠胎儿表皮角质形成层细胞小鼠胰岛细胞小鼠成年表皮角质形成层细胞小鼠胰腺星状细胞小鼠皮下脂肪细胞小鼠胰腺导管上皮细胞小鼠内脏脂肪细胞小鼠颌下腺上皮细胞小鼠脑动脉血管内皮细胞小鼠腮腺细胞小鼠脑动脉血管平滑肌细胞小鼠乳腺上皮细胞小鼠脑静脉血管内皮细胞小鼠胰腺上皮细胞小鼠脑静脉血管平滑肌细胞小鼠甲状腺上皮细胞小鼠脑膜细胞小鼠淋巴管内皮细胞小鼠神经胶质细胞小鼠淋巴成纤维细胞小鼠海马神经元细胞小鼠外周血白细胞小鼠脑微血管内皮细胞小鼠骨髓基质细胞小鼠脑成纤维细胞小鼠食管上皮细胞小鼠神经小胶质细胞小鼠食管平滑肌细胞小鼠雪旺氏细胞小鼠肠动脉内皮细胞小鼠小脑颗粒细胞小鼠肠静脉内皮细胞小鼠嗅鞘细胞小鼠肝实质细胞小鼠视网膜微血管内皮细胞小鼠肝动脉内皮细胞小鼠小梁网细胞小鼠肝动脉平滑肌细胞小鼠视网膜色素上皮细胞小鼠小肠血管内皮细胞小鼠视网膜muller细胞小鼠小肠隐窝上皮细胞小鼠虹膜色素上皮细胞小鼠肝内胆管上皮细胞小鼠晶状体上皮细胞小鼠胃粘膜上皮细胞小鼠角膜上皮细胞小鼠肝窦内皮细胞小鼠视网膜神经节细胞小鼠肝星形细胞小鼠角膜成纤维细胞小鼠直肠平滑肌细胞小鼠脉络膜血管细胞小鼠小肠平滑肌细胞小鼠牙乳头细胞小鼠结肠平滑肌细胞小鼠肝外胆管上皮细胞小鼠肠上皮细胞小鼠肝Kupffer细胞小鼠肠微血管细胞小鼠骨髓间充质干细胞小鼠肠巨噬细胞小鼠下丘脑神经元细胞小鼠子宫内膜上皮细胞小鼠睾丸支持细胞小鼠卵巢颗粒细胞小鼠心肌微血管内皮细胞小鼠子宫颈上皮细胞小鼠真皮微血管上皮细胞小鼠子宫平滑肌细胞小鼠胚胎成纤维细胞小鼠卵巢上皮细胞小鼠心脏干细胞小鼠子宫成纤维细胞小鼠神经干细胞小鼠卵巢成纤维细胞小鼠骨髓来源内皮祖细胞小鼠肾实质细胞小鼠椎间盘髓核细胞小鼠肾系膜细胞小鼠肾足突细胞小鼠膀胱上皮细胞小鼠肾小管平滑肌细胞小鼠膀胱平滑肌细胞小鼠肾成纤维细胞小鼠肾动脉内皮细胞小鼠尿道上皮细胞小鼠肾动脉平滑肌细胞小鼠输尿管上皮细胞小鼠肾小管上皮细胞小鼠肾管状上皮细胞小鼠肾小球内皮细胞小鼠心肌细胞小鼠前列腺上皮细胞小鼠心肌成纤维细胞小鼠肾上皮细胞小鼠主动脉内皮细胞小鼠膀胱成纤维细胞小鼠主动脉平滑肌细胞小鼠血管外膜成纤维细胞。
小鼠破骨细胞分离培养及鉴定
小鼠破骨细胞分离培养及鉴定摘要选择小鼠为试验对象，观察体外培养破骨细胞的形态学和生物学特征。
采用小鼠共培养试验，结合倒置相差显微镜、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色和扫描电镜（SEM）对其形态和功能进行观察鉴定。
结果表明：利用小鼠共培养试验方法得到的破骨细胞具有典型的破骨细胞的形态特点：属多核大细胞，TRAP染色阳性，能在骨片表面形成吸收陷窝。
提示小鼠共培养试验能够得到一定数量具有骨吸收活性的破骨细胞。
关键词破骨细胞；TRAP染色；骨吸收陷窝；小鼠骨疾病的发生与骨形成、骨吸收失衡有关，骨吸收大于骨形成导致骨量减少，而骨吸收又与破骨细胞的数量和功能有关[1]。
从破骨细胞着手揭示骨吸收机制，为许多由破骨细胞引起的疾病如绝经后的骨质疏松、风湿性关节炎、牙周病、肿瘤相关性骨溶解以及矫形外科中的植入体的丢失等提供防治依据。
与此相关，分离成熟的破骨细胞对于研究破骨细胞的特征、功能和调节来说显然是一种必不可缺少的工具。
该研究以小鼠为试验对象，建立小鼠共培养试验培养破骨细胞的方法，来获得具有特征性的破骨细胞。
1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 试验动物。
1日龄MF1小鼠，由扬州大学比较医学中心提供。
1.1.2 主要试剂及仪器。
α-MEM，胎牛血清，抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色试剂盒、1，25-（OH）2D3，甲苯胺蓝，直径5 mm的象牙片。
YJ2875B型医用净化工作台，PS29000705超纯水装置，24孔培养板，二氧化碳培养箱，超声清洗仪，XSZ-D2倒置显微镜，XL30-ESEM环境扫描电子显微镜[2-3]。
1.2 试验方法1.2.1 成骨细胞分离培养。
将1日龄的小鼠浸入75%酒精浸泡3～5 min。
无菌剪取其头盖骨，去除表面结缔组织和毛细血管，放入50 mL离心管，加入3 mL 0.25%胰蛋白酶，37 ℃气浴摇床消化20 min，80 r/min，弃胰酶。
用PBS冲洗并尽量吹打以除去成纤维细胞。
004破骨细胞培养及鉴定
1．主要实验材料 (1)实验动物 大鼠、兔、人等。 (2)培养液 M199培养基、RPMI 1640培 养基或MEM培养基，配制时须加20％的小牛血 清、HEPES 25mmol/L，粒细胞-巨噬细胞集落 刺激因子100ng／m1。 (3)淋巴细胞分离液 密度为1.077g／m1。
2．培养方法 (1)薄骨片的制备 同成熟破骨细胞 分离细胞培养法中的薄骨片制备。 (2)骨髓单核细胞分离及培养 所有 取材、分离细胞及培养过程均须在无菌 条件下进行。
／m1)的抗生素溶液的小容器中，每次10-20min。最
后可浸在盛有含抗生素的培养液的容器内，置4℃(短 期)或-20℃(较长期)冰箱内保存备用。
(2)破骨细胞的分离和培养 所有取材、 分离与培养过程须在无菌条件下进行。 ①取出生后3-5d的大鼠，拉颈处死后置 于盛有75％酒精的容器中，消毒3-5min后取 出放入培养皿中。 ②用手术剪剪开其四肢皮肤、肌肉，取 股骨和胫骨等长骨，放入盛缓冲液的培养皿 中。除去骨表面的软组织、骨膜以及软骨。
③将除去骨膜等多余组织后的长骨干部分清 洗后，置于盛有少量培养液的培养皿中。用手术 刀或手术剪纵行剖开骨干。用手术刀轻刮骨的内 表面，同时用尖吸管不断吸取培养皿中的培养液， 冲洗骨内表面多次，直至骨内表面变白为止。 ④用吸管吸打上述含碎骨片及分离细胞的培 养液2－5min，使附着于碎骨片上的破骨细胞分离 脱落于培养液中。静置1－2min后，待碎骨片沉降， 收集细胞悬液。
⑵单个核细胞分离：采用密度梯度离心法，向 采集的血样标本内加入等量的PBS，取6支10ml离心 管，分别加入大鼠淋巴细胞分离液各3ml，再小心
缓缓地向各离心管内加入上述含PBS的血样各2.5ml，
然后以2000rpm,水平离心20min，取出后在絮状层
小鼠骨髓细胞提取及培养
小鼠骨髓细胞提取及培养小鼠骨髓细胞的提取1、脱臼处死小鼠，投入到装有75%酒精的烧杯中浸泡3-5分钟，把小鼠拿到细胞房。
2、用保鲜袋平铺在安全柜内，并将小鼠放置在保鲜袋上进行实验操作。
3、用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤，用眼科剪小心剪开皮肤，并分离两下肢的皮肤，往下在脚踝处剪断，往上在髋关节处剪断，这样可以游离出小鼠的两条下肢。
4、小心剥离下肢的肌肉，取下胫骨和股骨，并放到装有75%酒精的培养皿中。
5、把小鼠尸体拿出，清理干净安全柜，换上新的手套。
6、拿5ml和20ml的无菌注射器各一支，用20ml的注射器吸取已配好的1640，换装一个5ml注射器的针头。
轻轻插入骨髓腔，对准一个无菌50ml离心管，将细胞冲出。
7、将骨髓细胞都冲出来后，4300rpm离心5分钟，去上清。
8、加进3-4ml的红细胞裂解液静置3-4min以裂解红细胞，加入30-40ml无菌的PBS（按加入红细胞裂解液与PBS间1:9的比例加入PBS）。
9、将含BM细胞的混合液通过细胞筛过滤到新的50ml离心管中。
10、4300rpm离心5min，弃上清，得到骨髓细胞沉淀。
骨髓细胞的培养1、加入一定量的GEBICO原装的1640，吹匀细胞沉淀，然后用计数板计数BM细胞的总数。
2、按照24孔板每个孔的细胞数来铺孔，算出要铺孔的数目。
3、根据每个孔需要2ml的培养基，可以算出所需培养基的总体积。
4、培养BM细胞的培养基是按照90% GEBICO原装的1640、10%FBS、1%双抗、1‰β-ME和万分之二的GM-CSF来配成。
5、细胞跟培养基充分混匀后，把细胞混合液铺倒24孔板中培养。
注意：1、一定要注意整个过程都要在无菌环境下操作，一切用品都要保证无菌。
2、剥离骨头时一定要保持骨头的完整，小心不要剪断。
3、培养基和PBS一定要各自分装好标清楚，自己用自己的，避免交叉污染。
破骨细胞谱系
破骨细胞谱系
破骨细胞（Osteoclast，OC）是骨吸收的主要功能细胞，在骨发育、生长、修复、重建中具有重要的作用。
它由骨髓中的髓系祖细胞分化而成，通过单核巨噬细胞相互融合，形成多核巨细胞。
破骨细胞的分离培养始于20世纪80年代，到2018年7月，破骨细胞的培养方法主要有：骨髓机械分离法，骨髓细胞诱导法，脾干细胞诱导法，血液单核细胞诱导法，小鼠RAW264.7细胞系诱导法及骨巨细胞瘤分离法。
目前发现的可诱导分化为破骨细胞的细胞系常见的是小鼠RAW 264. 7细胞系。
诱导RAW 264.7细胞分化为破骨细胞的方法主要有：
1、LPS诱导：10ng/mL、30ng/mL、50ng/mL、100ng/mL LPS均能诱导，但30、50、100ng/mL LPS诱导的多核细胞数量更多，且30ng/mL LPS 诱导的多核细胞大小明显增加。
2、RANKL诱导：用含100μg/L RANKL的α-MEM培养基诱导，隔天换液一次，诱导培养至第4~5天出现大量多核细胞。
3、M-CSF+ RANKL诱导: 使用100 ng /mL RANKL 与100 ng /mL M-CSF 的DMEM完全培养基，每两天更新培养液一次，第4天左右开始出现破骨细胞。
正常成熟破骨细胞原代培养
正常成熟破骨细胞原代培养实验材料：1. 细胞来源：新生大鼠或兔，妊娠6个月以内的引产胎儿等；2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2；3. 细胞支持物：薄骨片、盖玻片；4. 培养液：199培养基、MEM或DMEM培养基均可，须补加15%—20%小牛血清、25mm ol/L HEPES及青霉素100IU/ml、链霉素100μg/ml；实验方法：1. 薄骨片的制备：取新鲜牛股骨干的密质部分，沿骨纵轴用骨锯切割成大小约0.5cm×0.5C M、厚为0.1cm的小块，再用金刚砂轮磨成厚约10—50μm（以便在相差显微镜下观察）的薄骨片。
使用前用超声波清洗仪超声洗涤3次，每次约10min。
然后依次浸泡在3个盛有含青霉素（1000IU/ml）、链霉素（1000μg/ml）、两性霉素B（3μg/ml）的抗生素溶液的小容器中，每次10—20min。
最后可浸于盛有含抗生素的培养液的容器内，置4℃（短期）或-2 0℃（较长期）冰箱内保存备用；2. 取生后3—5d的大鼠，拉颈处死后置于盛有75%酒精的容器中，消毒3—5min后，取出放入培养皿中；3. 用手术剪剪开其四肢皮肤、肌肉，取股骨和胫骨等长骨，放入盛缓冲液的培养皿中。
除去骨表面的软组织、骨膜以及软骨；4. 将除去骨膜等多余组织后的长骨干部分清洗后，置于盛有少量培养液的培养皿中。
用手术刀或手术剪纵行剖开骨干。
用手术刀轻刮骨的内表面，同时用尖吸管不断吸取培养皿中的培养液，冲洗骨内表面多次，直至骨内表面变白为止；5. 用吸管吸打上述含碎骨片及分离细胞的培养液2—5min左右，使附着于碎骨片上的破骨细胞分离脱落于培养液中。
静置1—2min后，待碎骨片沉降，收集细胞悬液；6. 将细胞悬液加入到预置有薄骨片或盖玻片的24孔培养板中，在37℃、5%CO2培养箱中培养；7. 培养30min左右，取出薄骨片或盖玻片用培养液冲洗以除去未附着的骨髓造血细胞。
小鼠骨骼肌细胞使用说明
小鼠骨骼肌细胞小鼠骨骼肌细胞产品说明：为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠骨骼肌细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠骨骼肌细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
小鼠骨骼肌细胞注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
小鼠骨骼肌细胞产品简介：产品名称：小鼠骨骼肌细胞组织来源：小鼠肌肉组织产品规格：5×105cells / 25cm2培养瓶小鼠骨骼肌细胞简介：小鼠骨骼肌细胞分离自鼠肌肉组织，细胞多呈梭行，具有一定的方向性。
刚开始的细胞呈单个圆形或梭形，处于有丝分裂后期，细胞的活动性强，核成椭圆形，位于细胞中央，胞质内嗜碱性逐渐变为嗜酸性。
本公司生产的小鼠骨骼肌细胞总量约为5×105cells/瓶，细胞纯度75%~85%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
5、培养基信息：小鼠骨骼肌细胞培养基类型：DMEM培养基(GIBCO，添加NaHCO3 1.5g/L，Sodium Pyruvate0.11g/L)；添加因子：优质胎牛血清10%，细胞生长因子等。
破骨细胞的传代、冻存与复苏
（ 浙 江 中 医药 大 学 浙 江 省 骨 伤 研究 所 ， 浙江 杭州 ３ １ ０ ０ ５ ３ ）
【 摘要 】 目的 ： 探 讨 破 骨 细胞 传 代 、 冻存 与 复 苏 的 可行 性 ， 为 开展 破 骨 细胞 的相 关研 究 提 供 新 的技 术 手段 与 方 法 。
Ｈａ ｎｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ３ １ ０ ０ ５ ３ ， Ｚ ｈ ｅ ｊ ｉ ｎｇ ａ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ Ａ Ｂ Ｓ Ｔ Ｒ ＡＣ Ｔ Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｉ ｔ ｖ ｅ ： Ｔ ｏ ｅ ｘ ｐ ｌ ｏ ｒ ｅ ｔ ｈ ｅ ｆ ｅ ａ ｓ ｉ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｐ ａ ｓ ｓ ａ ｇ ｅ ， ｃ ｒ ｙ ｏ ｐ ｒ ｅ ｓ ｅ ｒ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ， ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｃ ｏ ｖ ｅ ｒ ｙ ｏ ｆ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ ｓ ｉ ｎ ｏ ｒ ｄ ｅ ｒ ｔ ｏ ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ —
ＸＩ Ａ０ Ｌ ｕ— ｗ ｅ ｉ ， ａ ｎ ｄ Ｔ Ｏ ＮＧ Ｐ ｅ ｉ — ｊ ｉ ｎ． ａ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ｏ ｆ Ｏ ｒ ｔ ｈ ｏ ｐ ａ ｅ ｄ ｉ ｃ ｓ ｎｄ ａ Ｔ ｒ ａ ｕ ｍ ａ ｔ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， Ｚ ｈ ｅ ｊ ｉ ｎｇ ａ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ，
Ｋ Ｌ 、 Ｍ— Ｃ Ｓ Ｆ的 — ＭＥ Ｍ 完全 培 养 基 重 悬 ， 接 种 至 ６孔 培 养 板 与 直 径 ３ ５ ｍ ｍ 培 养 皿 中。 破 骨 细 胞 的 冻 存 ： 取 上 述 细胞 悬 液， 离心 后 用 Ｄ ＭＳ Ｏ、 Ｆ Ｂ Ｓ 、 ｏ ｔ — ＭＥ Ｍ（ １ ： ２ ： ７ ） 冻存液 ， 按 常规 程 序 将 细 胞 冻 存 于一 １ ９ ６ ｏ Ｃ 液 氮 中。 破 骨 细胞 的复 苏 ： 从 液氮中
小鼠破骨细胞形成和活化的两种调控机制
小鼠破骨细胞形成和活化的两种调控机制顾建红1，刘俊栋1,2，翟必华1,3，刘学忠1，卞建春1，刘宗平1*（1. 扬州大学兽医学院，扬州 225009；2. 江苏畜牧兽医职业技术学院，泰州 225300；3.福建进出口检验检疫局，福州 350001）摘要：分离四周龄C57雌性小鼠的脾细胞，加入鼠巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）【±鼠重组白介素-1α（IL-1α）】体外培养，同时加入骨保护素（osteoprotegerin, OPG）和可溶性NF-κB 活化子配体（sRANKL）以区别RANKL /RANK/ OPG机制。
采用形态学、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色、骨吸收陷窝检测鉴定破骨细胞（osteoclasts, OC）的形成和活化。
结果显示，TNF-α(±IL-1α)确实能诱导脾细胞融合产生TRAP阳性的多核细胞并在象牙片上产生吸收陷窝，加入OPG不能阻断其诱导OC形成和产生骨吸收陷窝。
认为M-CSF存在的情况下，TNF-α确能以一种独立于RANKL /RANK/ OPG 之外的机制诱导OC的形成和活化，并且IL-1α能显著促进TNF-α的诱导作用（P＜0.05）。
关键词：破骨细胞；肿瘤坏死因子α；鼠重组白介素-1α；脾细胞；巨噬细胞集落刺激因子Two regulative mechanisms involved in osteoclast formation andactivation in miceGu Jianhong 1, Liu Jundong1,2, Zhai Bihua1,3, Liu Xuezhong1,Bian Jianchun1, Liu Zongping1*（1. College of Veterinary Medicine, Yangzhou University, Jiangsu, Yangzhou 225009, China;2. Jiangsu Animal Husbandry & Veterinary College, Jiangsu, Taizhou 225300, China；3. Fujian Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Fuzhou 350001, China) Abstract: M-CSF and TNF-α(±IL-1α) were added to spleen cells obtained from C57 female rat, meanwhile, OPG and sRANKL were also added to these cultures to distinguish the pathway of osteoclastogenesis. The formation and activation of osteoclasts were detected by ways of morphologic observation, histochemical staining for tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) and detection of lacunar resorption through scanning electron micrograph. The results indicated that osteoclast differentiated from spleen cells in the presence of M-CSF and TNF-α, and that lacunar resorption was stimulated by adding IL-1αsignificantly. The process of M-CSF and TNF-αis distinct from the RANKL /RANK/ OPG signaling pathway.Keyword: osteoclast; TNF-α; IL-1α; spleen cell; M-CSFOC是一种高度分化的多核巨细胞，与单核细胞、巨噬细胞系均来自于骨髓生血前体细胞[1]。
小鼠关节软骨细胞使用说明
小鼠关节软骨细胞小鼠关节软骨细胞产品说明：为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠关节软骨细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠关节软骨细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
小鼠关节软骨细胞产品简介：产品名称：小鼠关节软骨细胞组织来源：小鼠膝关节软骨组织产品规格：5×105cells/25cm2培养瓶小鼠关节软骨细胞简介：小鼠关节软骨细胞分离自正常小鼠膝关节软骨组织，细胞为圆形或偏梭形，单层贴壁生长，呈规律性分布，可能出现同源细胞群，每 2-8 个细胞为一个群生长，细胞质丰富，细胞核为圆形或卵圆形，细胞增殖能力差。
体外培养的软骨细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。
本公司生产的小鼠关节软骨细胞采用胶原酶消化制备而来，细胞总量约为 5×105cells/25cm2 培养瓶，细胞纯度可达 90%以上，且不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
Transwell小室内建立小鼠成骨-破骨细胞共培养体系
Ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｍ ｏｕｓｅ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ—ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ ｅｅｌｌ ｃｏ ｃｕ ｌ ｔｕｒｅ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ａ Ｔｒａｕ ｓ ｗｅｌｌ ｃｈａｍ ｂｅｒ Ｍ Ｏ Ｇｕｏ－ｙｅ，ＺＨＡ ＮＧ Ｓｈｕｎ－￣ｏｎｇ ．
ｔｉｖａｔｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．ＲＡＮＫＬ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｏｕｓｅ ＲＡ Ｗ ２６４．７ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｉｎｔｏ ｍ ａｔｕｒｅ ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ．ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ．ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ ｃｅｌｌ ｃｏ－ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｙｓｔｅｍ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｉｎ Ｔｒａｎｓｗｅ１１ ｃｈａｍｂｅｒ．Ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓ ａｎｄ ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｖ ＣＣＫ 一８ ｅｘｐｅｒ ｉｍ ｅｎｔｉｎｇ，Ａｌｉｚａｒ ｉｎ Ｒｅｄ ｓｔａｉｎｉｎｇ，ＴＲＡＰ ｓｔａｉｎｉｎｇ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＯＰＧ ，Ａ ＬＰ ，ＲＡＮＫＬ，ＴＧＦ—ｂｌ ｇｅｎｅ ａｎｄ ＲＡＮＫＬ ｐｒｏ． ｔｅｉｎ ｉｎ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ ＭＣ３Ｔ３一Ｅ１ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＰＣＲ，Ｗ ｅｓｔｅｒｎ—Ｂｌｏｔ ｍｅｔｈｏｄｓ．Ａｌｓｏ，ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＲＡＮＫ．ＮＦ—ＫＢ ｉｎ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｍｅｔＩｌｏｄ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｃｏ．ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ Ｍ ｏｕｓｅ ＭＣ３Ｔ３－Ｅ １ ｃｅｌｌቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ ａｎｄ ＲＡＷ ２６４．７ ｃｅｌｌ ｗｅｒｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｉｎ Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ ｃｈａｍｂｅｒ．Ｃｏ．ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｙｓｔｅｍ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｃｅｌｌ ｄｉｖｉｓｉｏｎ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓ ａｎｄ ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ．Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓ ｗｅｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｗｈｉｌｅ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｗｅｒｅ
破骨细胞trap染色步骤
破骨细胞trap染色步骤破骨细胞（osteoclasts）是一种在骨组织内进行重要功能的多核巨噬细胞。
破骨细胞能够吸附到骨表面，通过溶酶体释放酸性蛋白酶，降低骨矩阵的pH值，从而溶解败坏的骨组织。
trap染色是一种常用的破骨细胞特异性染色方法，能够准确地识别并观察破骨细胞的形态和活性。
trap染色的原理基于破骨细胞在酸性环境中释放的酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP）活性。
TRAP是一种破骨细胞特异性的酶，能够催化酸性磷酸酶反应。
在trap染色中，使用一种叫做红碱性磷酸酶耐受的反应试剂，能够在破骨细胞所在的区域产生红棕色沉淀物，从而可视化破骨细胞的分布和形态。
下面是trap染色的步骤：1. 取得骨组织标本并保持其完整性。
可以使用钳子、锯子等工具在实验室条件下取得骨组织标本。
确保取得的标本相对完整，不要过分损伤，以保持破骨细胞的形态和活性。
2. 固定标本。
使用4%的中性缓冲福尔马林或其他适当的固定液固定标本。
固定可以使标本保存并保持其形态结构，同时也有助于切片过程。
3. 制备切片。
将固定的骨组织标本进行切片处理。
通常使用切片机或显微刀将骨组织切成较薄的片段，一般为4-10 μm。
切片的厚度可以根据实验的需要进行调整。
4. trap染色。
将切片放置在含有trap染色试剂的反应液中，通常包括硝酸钒、酒石酸和4-硝基苯胺等。
将切片和反应液放置在37℃的恒温箱中进行染色反应，通常需要1-2小时。
反应时间可以根据实验条件进行调整。
5. 停止反应。
当标本呈现所需的染色强度时，使用缓冲液将反应停止。
多数情况下，使用去离子水或含有6%硫酸的缓冲液进行停止反应。
停止反应有助于保持染色效果和标本结构。
6. 洗涤和干燥。
将标本在流动水中洗涤，去除多余的染色试剂。
然后用纯净水冲洗几次，最后用纸巾轻轻吸干。
7. 封片和观察。
将切片放在显微镜玻璃片上，使用透明的封片剂封闭标本。
破骨诱导培养基说明书
破骨诱导培养基说明书产品简介菩禾生物自主研发的破骨诱导分化培养基（货号：PH-X002（原代巨噬），PH-X004（RAW264.7诱导）），体外诱导原代骨髓单核细胞（BMMs）向破骨方向分化。
该培养基包括促进原代骨髓单核细胞向破骨方向分化的基础培养基，优质胎牛血清，细胞因子以及青链霉素。
包装组成成分破骨诱导分化操作规程：所需材料：●PBS●原代骨髓单核细胞BMMs●菩禾生物破骨诱导分化培养基操作方法与步骤为了得到最好的诱导结果，请执行下述操作步骤：1.骨髓单核细胞的分离：分离雌性、4-5周龄的C57BL/6小鼠的股骨和肱骨，剪开两端，用注射器冲洗管腔，收集细胞，200目筛网过滤，收集滤液，1200rpm/min, 5min, 去上清，37℃，5%CO2培养箱中培养16-24h。
收集未贴壁细胞，1200rpm/min, 5min, 去上清。
2.破骨细胞诱导：将上述沉淀用37℃预热的破骨诱导分化培养基重悬，计数，环境中培养。
按3X104/cm2铺板，37℃、5%的CO23.每隔48h换液，诱导分化8-12天。
注意：●BMMs分离的效果不好●长时间在培养箱外观察●培养基无预热●晃动培养板●培养箱频繁开关●换液未按照上述规程操作以上情况都会造成破骨诱导不成功或者分化效率低破骨诱导实例：QC测试并证明诱导培养基有以下特性：1.包含了原代骨髓单核细胞向破骨方向分化需要的所有成分。
2.实验比较同类产品，TRAP染色证明其具有最佳诱导破骨能力。
3.无菌检测证明无细菌、真菌和支原体4.证明无内毒素产品使用注意事项：1.需避光，2-8℃保存，有效期为1个月。
2.所有产品请于保质期内使用。
3.产品使用前需37℃预热。
4.产品使用时避光操作。
本产品仅用于科研用途，不可用于诊断、治疗、临床、家庭及其他用途。
破骨细胞
破骨细胞在骨吸收部位，与骨接触后，由基质产生的信号向胞内分泌囊泡含H-ATP酶，向微环境释放蛋白水解酶。
其中，无机钙及磷酸盐的降解是通过A TP酶介导的质子分泌。
在吸收陷窝处产生一个酸性环境，而有机基质，主要由胶原和弹性蛋白组成，由半胱氨酸、天冬氨酸蛋白酶降解，其中组织水解酶K起主要作用。
DC分泌IL1/6、TNFα。
增加破骨细胞释放TRAP和组织水解酶K，还可以促进破骨细胞生成通过刺激T 细胞表达RANKL。
未成熟的DC可发育为破骨细胞样的细胞，巨噬细胞在炎症中融合主要依赖IL4RANKL-induced differentiation of osteoclasts in vitro was performed asdescribed previously (12). In brief, primary osteoclast precursors (nonad-herent mouse bone marrow cells, splenocytes, and RAW 264.7) were sus-pended in -MEM supplemented with 10% FBS and cultured in a 24-wellculture plate at 1 106cells per well. After 48 h, the culture medium wasreplaced with fresh culture medium with or without 100 ng/ml mouse re-combinant soluble RANKL (Wako Pure Chemical). After 4 days, cellswere dehydrated with ethanol-acetone (1:1) for 1 min, dried, and stained atroom temperature with TRAP staining solution. TRAP-positive cells ap-peared dark red. We counted TRAP-positive multinucleated cells contain-ing three or more nuclei as osteoclasts.常用的评价方法有生化指标的测量、骨密度测量、骨组织计量学观察、骨生物力学指标检测等。
小鼠成骨细胞和破骨细胞共培养模型的建立
小鼠成骨细胞和破骨细胞共培养模型的建立鲁秀敏;陈林;苏楠;李福兵;赵玲【期刊名称】《中国骨质疏松杂志》【年(卷),期】2008(14)3【摘要】目的建立小鼠成骨细胞和破骨细胞共培养模型,为探讨成骨细胞和破骨细胞之间的相互调控作用奠定基础.方法利用24 h内新生小鼠颅骨和4～8周龄成年小鼠四肢长骨分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞,采用间接接触的培养模式将接种了骨髓单核细胞的玻片或骨片置入提前24 h接种了成骨细胞的培养皿中进行共培养.共培养一定时间后进行破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色鉴定和骨吸收功能检测,并进一步采用RT-PCR对破骨细胞标志酶基因基质金属蛋白酶.9(MMP-9)、TRAP 和组织蛋白酶K (Cathepsin K ) 的表达进行检测.结果共培养5天后可见TRAP(+)多核细胞形成,13天TRAP(+)多核细胞数目达到高峰;骨吸收陷窝在共培养7天后开始出现,随着培养时间的延长,陷窝面积呈增加趋势;破骨细胞标志基因TRAP 在共培养3天时开始表达,而MMP-9和 Cathepsin K则在共培养5天后表达.结论共培养体系中成骨细胞对破骨细胞调控作用显著,诱导的破骨细胞具有噬骨能力,该共培养模型可用于成骨细胞和破骨细胞之间的相互调控作用研究.【总页数】5页(P159-163)【作者】鲁秀敏;陈林;苏楠;李福兵;赵玲【作者单位】400042,重庆,第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;400042,重庆,第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;400042,重庆,第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;400042,重庆,第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;400042,重庆,第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R322.7+1【相关文献】1.Transwell小室内建立小鼠成骨-破骨细胞共培养体系 [J], 莫国业;马延怀;张顺聪;李永贤;郭惠智;郭丹青;李大星;唐永超;莫凌;罗培杰2.小鼠囊胚与不同侵袭转移潜能肝癌细胞系共培养模型的建立及生物学行为观察[J], 李大强;王智彪;白晋;赵颉;胡凯;王媛;杜永洪3.人骨髓间充质干细胞与成骨细胞共培养诱导破骨细胞方法的建立和鉴定 [J], 梅红;李一雷;王心蕊;张丽红;刘巍;王建民;李玉林4.成骨细胞和破骨细胞在模拟微重力条件下共培养体系的建立 [J], 曹新生;杜挺媛;张舒;王冰;吴燕红5.小鼠破骨细胞骨髓诱导模型的建立及功能观察 [J], 鲁秀敏;苏楠;李福兵;赵玲;陈林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
小鼠破骨细胞
小鼠破骨细胞产品说明：
为使能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠破骨细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠破骨细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
小鼠破骨细胞注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
小鼠破骨细胞其他相关小鼠原代细胞：
小鼠小肠粘膜上皮细胞小鼠大隐静脉平滑肌细胞
小鼠肺微血管内皮细胞小鼠冠状动脉平滑肌细胞
小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠大隐静脉内皮细胞
小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞小鼠冠状动脉内皮细胞
小鼠气管上皮细胞小鼠骨细胞
小鼠气管平滑肌细胞小鼠滑膜细胞
小鼠肺成纤维细胞小鼠骨骼肌细胞
小鼠支气管上皮细胞小鼠表皮细胞
小鼠支气管成纤维细胞小鼠真皮成纤维细胞
小鼠肺大静脉平滑肌细胞小鼠破骨细胞
小鼠肺大动脉平滑肌细胞小鼠皮肤肥大细胞
小鼠肺大动脉内皮细胞小鼠前脂肪细胞
小鼠肺动脉成纤维细胞小鼠成骨细胞
小鼠肺大静脉内皮细胞小鼠关节软骨细胞
小鼠气管和支气管上皮细胞小鼠胎儿表皮角质形成层细胞小鼠胰岛细胞小鼠成年表皮角质形成层细胞小鼠胰腺星状细胞小鼠皮下脂肪细胞
小鼠胰腺导管上皮细胞小鼠内脏脂肪细胞
小鼠颌下腺上皮细胞小鼠脑动脉血管内皮细胞
小鼠腮腺细胞小鼠脑动脉血管平滑肌细胞小鼠乳腺上皮细胞小鼠脑静脉血管内皮细胞
小鼠胰腺上皮细胞小鼠脑静脉血管平滑肌细胞小鼠甲状腺上皮细胞小鼠脑膜细胞
小鼠淋巴管内皮细胞小鼠神经胶质细胞
小鼠淋巴成纤维细胞小鼠海马神经元细胞
小鼠外周血白细胞小鼠脑微血管内皮细胞
小鼠骨髓基质细胞小鼠脑成纤维细胞
小鼠食管上皮细胞小鼠神经小胶质细胞
小鼠食管平滑肌细胞小鼠雪旺氏细胞
小鼠肠动脉内皮细胞小鼠小脑颗粒细胞
小鼠肠静脉内皮细胞小鼠嗅鞘细胞
小鼠肝实质细胞小鼠视网膜微血管内皮细胞小鼠肝动脉内皮细胞小鼠小梁网细胞
小鼠肝动脉平滑肌细胞小鼠视网膜色素上皮细胞
小鼠小肠血管内皮细胞小鼠视网膜muller细胞
小鼠小肠隐窝上皮细胞小鼠虹膜色素上皮细胞
小鼠肝内胆管上皮细胞小鼠晶状体上皮细胞
小鼠胃粘膜上皮细胞小鼠角膜上皮细胞
小鼠肝窦内皮细胞小鼠视网膜神经节细胞
小鼠肝星形细胞小鼠角膜成纤维细胞
小鼠直肠平滑肌细胞小鼠脉络膜血管细胞
小鼠小肠平滑肌细胞小鼠牙乳头细胞
小鼠结肠平滑肌细胞小鼠肝外胆管上皮细胞
小鼠肠上皮细胞小鼠肝Kupffer细胞
小鼠肠微血管细胞小鼠骨髓间充质干细胞
小鼠肠巨噬细胞小鼠下丘脑神经元细胞
小鼠子宫内膜上皮细胞小鼠睾丸支持细胞
小鼠卵巢颗粒细胞小鼠心肌微血管内皮细胞
小鼠子宫颈上皮细胞小鼠真皮微血管上皮细胞
小鼠子宫平滑肌细胞小鼠胚胎成纤维细胞
小鼠卵巢上皮细胞小鼠心脏干细胞
小鼠子宫成纤维细胞小鼠神经干细胞
小鼠卵巢成纤维细胞小鼠骨髓来源内皮祖细胞
小鼠肾实质细胞小鼠椎间盘髓核细胞
小鼠肾系膜细胞小鼠肾足突细胞
小鼠膀胱上皮细胞小鼠肾小管平滑肌细胞
小鼠膀胱平滑肌细胞小鼠肾成纤维细胞
小鼠肾动脉内皮细胞小鼠尿道上皮细胞
小鼠肾动脉平滑肌细胞小鼠输尿管上皮细胞小鼠肾小管上皮细胞小鼠肾管状上皮细胞小鼠肾小球内皮细胞小鼠心肌细胞
小鼠前列腺上皮细胞小鼠心肌成纤维细胞小鼠肾上皮细胞小鼠主动脉内皮细胞小鼠膀胱成纤维细胞小鼠主动脉平滑肌细胞小鼠血管外膜成纤维细胞。