耐甲氧西林的葡萄球菌(MRS)检测
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌实验室诊断方法
ＤＯＩ ： １ ０ ． １ １ ６ ５ ５ ／ ｚ ｇ ｙ ｗｙ ｌ ｅ ２ ０１ ５ 个菌落溶入 ５ ０ １ 蒸馏水 ， ９ ９℃干浴 １ ０
ｍｉ ｎ ， ３ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ 离心 １ ｍｉ ｎ ， ２ Ｉ ｘ ｌ 上 清液 用 于 ２ ５ ｌ 的Ｐ Ｃ Ｒ反
ＡＴ Ｃ Ｃ２ ９ ２ １ ３ 。
注： 头孢西丁结果可以预测苯唑西林敏感 或者耐药
２ ． １ Ｄ Ｎ Ａ提 取 ： 取冻存实验菌株在 ５ ％的哥 伦 比亚 羊 血 平 板
１ ． ２ 微量 肉汤稀释法 ： 微量肉汤稀释法培养基用阳离子校正
ＭＨ肉汤 （ Ｃ Ａ ＭＨ Ｂ ） ，检测苯唑西林的 ＭＩ Ｃ值需要添加 ２ ％
Ａ Ｔ Ｃ Ｃ ４ ３ ３ ０ ０ ． ｍ ｅ ｃ Ａ 阳性 （ 抑 菌 圈直 径 ≤２ １ ｍｍ） 。
表 １ 金黄色葡萄球菌对苯唑西林的折点
Ｓ Ｃ Ｃ ｍｅ ｃ 基 因型别 ： 一般来说 ． 甲氧西林耐药 的金黄色葡 萄球菌 都携 带有 ｍ ｅ ｃ Ａ基 因 ，但其 耐药 程度 却不 尽一 致 ， Ｍｅ ｃ Ａ基因位于一个可移动 的元件上 ，被称为金黄色葡萄球
郝 崇华 万艳红 裴世静 张燕军 王淑峰 戎建荣
252例耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的检测及相关性探讨
外科 烧 伤 患者 、有基 础疾 病 、抗 茵药物 等 的应 用等 呈现正 性 相 关。结 论 ＭＲ Ｓ Ａ 对 临床 应 用的 大部 分抗 菌 药的耐 药率 均很 高 ，仅对 小部 分 抗 菌 药较 为敏 感 ，磷 霉素 对其 敏 感率 占 ７ ６ ． ２ ％， 由于 不 良反应 小 ，建 议 临床 对 ＭＲ Ｓ Ａ 患者磷 霉素敏 感株 考 虑应 用磷 霉 素 ，未 发现 耐 万古 霉素 和替 考拉 宁 的茵株 ，表明万 古霉 素和 替考拉 宁 对 ＭＲ Ｓ Ａ仍 保持 很 高的抗 茵活 性 。 【 关键 词 】耐 甲氧 西林金 黄 色葡萄球 菌 ；检 测 ；抗 茵药 ；耐 药性 ；相 关性 中 图分类 号 ：Ｒ ９ ７ ８ ． １ 文献标 识码 ：Ｂ 文 章编 号 ：１ ６ ７ １ － ８ １ ９ ４（ ２ ０ １ ５ ）３ １ － ０ ０ ３ ８ － ０ ２
脊液１ 例。
霉素和替考拉宁Ｒ ￣ ＭＲ Ｓ Ａ 仍保持很高的抗菌活性，报道如下。
１资 料与 方法 １ ． １一般 资料 ：研 究对象 为２ ０ ０ ８ 年１ 月 至２ ０ ｌ ４ 年９ 月３ １ 日，在 我 院住 院 患者进 行微 生 物送 检患 者 １ ２ ５ ３ ７ 例 ，标本 中分 离 出的 致病 菌９ ９ ９ ８ 株 ，其 中金黄色葡萄 球菌５ ２ ５ 株 ，在金黄色 葡萄球菌 ５ ２ ５ 株 ￣ＭＲ Ｓ Ａ 感 染２ ５ ２ 株（ ４ ８ ． Ｏ ％） ，男 １ ８ ５ 例 ，女６ ７ 例 ｝年龄 １ ６ － ８ ９ 岁 ：＞６ ０ 岁的１ ６ ２ 例 （ ６ ４ ． ２ ９ ％），平均５ ６ ． ８ ２ 岁。
－
限公司） ；Ｘ Ｋ 型 细菌鉴 定／ 药敏 分析仪 及其 系统（ 山东 鑫科生 物科 技股
份 有限公 司） ；ＹＣ Ｐ ２ ０ ０ （ ５ ０ ） ￣ 氧化碳培养箱 （ ５ ０ 是北京 勤诚盛达科学 仪 器有 限公司） ；细菌药敏纸片 （ 英 国Ｏ Ｘ Ｄ Ｉ Ｄ 公 司）。
牛乳源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测与耐药性分析
牛乳 源 耐 甲氧 西林 金黄 色 葡萄 球菌 的
检测 与耐 药性 分析
姜 慧娇 ，苏 艳， 韦 海 娜 ，黄 莹
８ ３ ０ ０ ５ ２ ） （ 新疆农业大学 动物医学学院 ， 乌鲁木齐 摘
要： 从 新 疆 昌吉 、 伊 犁、 石 河 子 ３个 地 区 奶 牛 养 殖 场 乳 腺 炎 奶 样 中 共 分 离 １ ３ ４株 金 黄 色 葡 萄 球 菌 ， 对 其 中
呈现多重耐药现象 。
关 键 词 ： 牛乳 腺炎 ；金 黄 色 葡萄 球 菌 ；耐 甲 氧西 林 金 黄 色 葡 萄 球 菌 ；ｒ ｎ ｅ ｃ Ａ基因 ； 耐 药 性
中 图分 类 号 ：￥ ８ ５ １ ． ６ １ １ 文献标识码 ： Ａ
Ａｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｎ Ｄｅ ｃ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｍｅ ｔ ｈ ｉ ｃ ｉ ｌ ｌ ｉ ｎ — Ｒｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｔ Ｊ Ｓ ｆ ｐ Ｚ Ｄ ｃ Ｄ ｃ ｃ ａ ｕ ｒ ｅ ｕ ｓ
新 疆 农 业 大 学 学 报
２ ０ １ ３ ， ３ ６ （ １ ） ： １ ６ ～２ ０
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｘ ｉ ｎ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ
文 章 编 号 ：１ ０ ０ ７ — ８ ６ １ ４ （ ２ ０ １ ３ ） ０ １ － ０ ０ １ ６ — ０ ５
Ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ Ｂｏ ｖ ｉ ｎｅ Ｍ ｉ ｌ ｋ ａ ｎｄ Ｉ ｔ ｓ Ｒｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ ｔ ｏ Ｄｒ ｕ ｇ ｓ
Ｊ Ｉ ＡＮＧ Ｈｕ ｉ — ｊ ｉ ａ ｏ，Ｓ Ｕ Ｙａ ｎ，Ｗ ＥＩ Ｈａ ｉ — ｎ ａ ，ＨＵＡＮＧ Ｙｉ ｎ ｇ
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 检测(荧光PCR法)
汇报人：XX
01
03
05
02
04
荧光PCR法是一种 基于DN聚合酶链 反应的检测方法
荧光PCR法通过荧 强弱来定 量分析DN序列
荧光PCR法具有高 灵敏度、高特异性 、快速、简便等优 点
灵敏度高：能够检测到极低浓度的MRS 特异性强：能够准确区分MRS和其他细菌 快速简便：操作简便，检测时间短 结果准确：检测结果准确可靠，重复性好
护公众健康
灵敏度高：荧光PCR法具有 较高的灵敏度，能够检测到 极低浓度的MRS
特异性强：荧光PCR法具有 较高的特异性，能够准确区 分MRS和其他细菌
快速高效：荧光PCR法具 有快速高效的特点，能够在 短时间内完成MRS的检测
自动化程度高：荧光PCR法 可以实现自动化操作，提高 检测效率和准确性
荧光PCR法在MRS检测中的前景展望：提高灵敏度和特异性，提高检测准确性和 可靠性，降低检测成本，提高检测效率，推动MRS检测技术的发展。
汇报人：XX
临床诊断：用于检 测MRS感染，快速 准确
科研研究：用于研 究MRS的传播、变 异和耐药性
公共卫生：用于监 测MRS的流行病学 和防控策略
食品检测：用于检 测食品中的MRS污 染，保障食品安全
样本类型：血液、 尿液、痰液等
采集方法：无菌操 作，避免污染
保存条件：低温、 干燥、避光
处理方法：离心、 过滤、稀释等
样品采集：采集患者样本，如血液、痰液等
核酸提取：使用核酸提取试剂盒提取样本中的DN或RN
荧光PCR反应：将提取的核酸与荧光PCR反应试剂混合，进行 PCR反应
荧光PCR检测：使用荧光PCR检测仪检测反应产物，判断样本 中是否存在MRS
五种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测方法的比较
摘要 ： 目的 评价 快速 、 准确检测耐 甲氧西林 金黄色 葡萄球 菌 （ ＭＲ Ｓ Ａ） 的方法 。方法 收集上 海市第七 人
民医院临床分离的金黄色葡萄球菌 １ ５ ８株 、 表 皮葡萄球菌 １ ２株 、 溶血葡萄球菌 １ ０株 、 人 葡萄球菌 １ 株， 用 ＭＲ Ｓ Ａ Ｉ Ｄ产 色培养基法 、 苯 唑西林最 低抑菌浓度 （ ＭＩ Ｃ） 法、 头孢 西丁纸片扩散法 、 青霉 素结合 蛋 白（ Ｐ Ｂ Ｐ ２ ａ ） 乳胶凝集 法 ４种方法检测 ＭＲ Ｓ Ａ， 并与荧光 聚合 酶链 反应（ Ｐ Ｃ Ｒ ） 检测 ｍ ｅ ｃ Ａ基 因进行 比较。结果 ＭＲ Ｓ Ａ Ｉ Ｄ产色培养基法检 出 ＭＲ Ｓ Ａ １ ２ ４株 ， 敏感 性和特异性分别为 １ ０ ０ ． ０ ％、 ９ １ ． ９ ％， 头孢西 丁纸片扩 散法检 出 Ｍ Ｒ Ｓ Ａ １ １ ９株 ， 敏感性 和特
较好 的一 致性 。结论 头孢西丁纸片 扩散法 检 出 ＭＲ Ｓ Ａ的敏感性 和特 异性 最高 ， Ｉ Ｄ产 色培养 基法 检测 ＭＲ Ｓ Ａ
比常规方 法报告时间缩短 ２ ４ ｈ ， 是一种快速 、 简便 、 特异性好且 便于临床实验室检测 ＭＲ Ｓ Ａ的方 法。 关键 词 ： 耐 甲氧西林金 黄色 葡萄球菌 ； ｍ ｅ ｃ Ａ基 因 ； 头孢 西丁 ； 产色培养基
Ｓ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｈ Ｐ ｅ ｏ ｐ ｌ ｅ ｓ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ Ｚ ， ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ ２ ０ ０ １ ３ ７， ｉ ｎ ａ）
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：０ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｐ ｉ ｄ ａ ｎ ｄ ａ ｃ ｃ ｕ ｒ ａ ｔ ｅ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｍ ｅ ｔ ｈ ｉ ｃ ｉ ｌ ｌ ｉ ｎ ． ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｔ
重症监护病房的MRSA
重症监护病房的MRSA重症监护病房的MRSA（甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌）是一种严重的医院感染问题，对患者的健康和生命构成威胁。
为了有效控制和预防MRSA感染，在重症监护病房中，需要采取一系列的预防措施和标准操作程序，以确保患者的安全和医疗质量。
以下是针对重症监护病房的MRSA感染的标准操作程序：1. 患者筛查：- 所有入住重症监护病房的患者应进行MRSA筛查，包括新入住患者和转入患者。
- 筛查方法可以采用鼻腔拭子样本，样本采集应遵循正确的操作步骤和无菌技术。
- 筛查结果应及时记录，并通知相关医护人员。
2. 隔离措施：- 对于MRSA阳性的患者，应立即采取隔离措施，如单间隔离或与其他MRSA阳性患者共享隔离间。
- 隔离间内应配备必要的隔离设施，如洗手设备、个人防护用品等。
- 所有进入隔离间的医护人员应佩戴适当的个人防护用品，如手套、口罩、护目镜等。
3. 感染控制手卫生：- 所有医护人员和访客进入重症监护病房前，应进行必要的手卫生，包括洗手或使用洗手液。
- 手卫生应遵循正确的手卫生程序，包括湿润双手、搓手至少20秒、彻底冲洗和干燥双手。
- 医护人员应定期接受手卫生培训，并进行手卫生合规性监测。
4. 环境清洁和消毒：- 隔离间内的表面、设备和器械应定期进行清洁和消毒，以确保无菌状态。
- 清洁和消毒应使用适当的消毒剂和方法，如含氯消毒剂或酒精消毒剂。
- 清洁和消毒操作应遵循正确的程序和操作步骤，确保彻底清洁和有效消毒。
5. 医护人员个人防护：- 所有医护人员在接触MRSA患者时，应佩戴适当的个人防护用品，包括手套、口罩、护目镜等。
- 个人防护用品应正确佩戴和使用，避免交叉感染的风险。
- 医护人员在接触MRSA患者后，应及时更换和处理个人防护用品，避免污染其他区域。
6. 患者教育和宣传：- 对于入住重症监护病房的患者，应进行MRSA感染的教育和宣传。
- 患者应了解MRSA感染的风险和预防措施，如正确的手卫生、个人防护用品的使用等。
重症监护病房的MRSA
重症监护病房的MRSA重症监护病房的MRSA（甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌）是一种常见的医院感染病原体，对抗生素具有高度的耐药性。
本文将详细介绍重症监护病房中MRSA的定义、病因、传播途径、临床表现、诊断方法、治疗原则以及预防措施等相关内容。
一、定义重症监护病房的MRSA是指在重症监护病房（ICU）环境中感染或者携带MRSA的患者。
MRSA是一种对甲氧西林类抗生素产生耐药性的金黄色葡萄球菌。
它通常会引起严重的感染，对治疗造成挑战。
二、病因MRSA的耐药性主要是由于其产生了一种名为PBP2a的特殊蛋白质，使其对甲氧西林等β-内酰胺类抗生素产生耐药性。
MRSA感染主要通过两种途径获得：一是通过医疗操作，如手术、导尿、静脉插管等；二是通过接触感染源，如患者、医护人员、医疗设备等。
三、传播途径重症监护病房中MRSA的传播主要通过接触传播和空气传播两种途径。
接触传播是指通过直接接触感染者的皮肤、伤口、分泌物等传播病原体。
空气传播则是指通过患者咳嗽、打喷嚏等方式将病原体悬浮在空气中，被他人吸入而感染。
四、临床表现重症监护病房的MRSA感染可表现为各种临床症状，如发热、皮肤红肿、脓液渗出、呼吸难点等。
对于重症监护病房的患者来说，MRSA感染可能导致严重的并发症，如败血症、心内膜炎、肺炎等。
五、诊断方法重症监护病房中MRSA感染的诊断主要依靠以下几种方法：1. 细菌培养：通过采集患者的分泌物、伤口渗出物或者血液等样本进行细菌培养，检测是否存在MRSA。
2. PCR检测：利用聚合酶链反应（PCR）技术检测患者样本中的MRSA DNA，快速准确地确定是否感染MRSA。
3. 荧光染色：利用荧光染色技术观察样本中是否存在MRSA，该方法快速简便，适合于临床实验室。
六、治疗原则重症监护病房中MRSA感染的治疗原则主要包括以下几个方面：1. 抗生素治疗：根据药敏试验结果选择敏感的抗生素进行治疗，如万古霉素、利奈唑胺等。
2. 外科处理：对于有明显脓液积聚或者局部坏死的病例，需要进行外科处理，如手术引流、切除坏死组织等。
下呼吸道耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性检测及分析
ＭＲ Ａ多 重 耐 药 导 致 临 床 治 疗 困难 ， 其 是 ＶＩＡ 和 Ｖ Ｓ 尤 Ｓ Ｒ Ｓ 的 出现 使 抗 菌 剂 的 选 择 需 更 加 慎 重 ， 根 据 药 敏 结 果 选 用 Ａ 应 其他 敏感 抗 菌 剂 或 联 合 应 用 两 种 抗 菌 剂 ， 防止 单 用 １ 抗 菌 剂 种 出 现 耐药 株［ １ 。实 验 表 明 ， 合 用 药 可 降 低 抗 菌 剂 的 最 低 抑 联
国际检 验 医学杂志 ２１ 年 ７月第 ３ 卷 第 １ 期 ０１ ２ ０
Ｉｔ ａ ｄＪｌ ２１， １３， ．０ ｎ Ｌ ｂＭｅ， ｙ ０１Ｖｏ ２Ｎｏ１ Ｊ ｕ ．
・
临床检 验研 究 ・
下 呼 吸道 耐 甲氧西 林 金 黄 色葡 萄球 菌 的耐 药 性检 测 及分 析
叶 振 东 乔 亚 峰 张 国雄 范 晓 怡 ， ， ，
国际检验 医学杂 志 ２１ 年 ７月第 ３ ０１ ２卷第 １ ０期
Ｉｔ ａ ｄＪｌ ０１Ｖ １ ２Ｎ ．０ ｎ Ｌ ｂＭｅ ， ｙ２１，ｏ． ， ｏ１ Ｊ ｕ ３
续表 １
ＭＲ Ａ 和 ＭＳ Ａ 对 常 规 抗 菌 剂 的 耐 药 率 （ ） Ｓ Ｓ
糖 肽 类 抗 菌 剂 成 为 治 疗 ＭＲ Ａ 感 染 的 最 后 一 道 防 线 。 １ ９ Ｓ ９６ 年 ５月 日本 出 现 了 对万 古 霉 素不 敏 感 金 黄 色 葡 萄球 菌 （ ＩＡ） Ｖｓ 之 后 ， 美 国 、 国 、 国等 亦 出 现 ＶＩＡ。而 美 国在 ２ ０ 在 法 英 ｓ ０ ２年 ６
ｌ ｗｅ ｅ ｐｉ ａ ｏ ｙ ｔ ａ ｔ ｉ ｆ ｃ ｉ ｎ ｏ ｒ ｒ ｓ ｒ ｔ ｒ ｒ ｃ ｎ ｅ ｔｏ
ＹｅＺ ｅ ｄ ｎ ， ａ ｈ ｎ ｏ ｇ Ｑｉｏ
检验科细菌耐药性监测标准操作程序SOP文件
检验科细菌耐药性监测SOP文件一、耐甲氧西林葡萄球菌（Methicillin-Resistant Staphylococci,MRS）MRS是引起临床感染的常见病原菌，同时也是引起医院感染的重要病原菌之一，其耐药特点是耐受甲氧西林的同时，还对临床广泛应用的多种抗生素呈现多重耐药，因而该菌所致感染已成为临床治疗的一大难题。
（一）MRS测定方法1、纸片扩散法接种物：直接悬液法从非选择琼脂平皿上挑取少许单个菌落至无菌生理盐水调至浓度0.5 McFarland,具体操作同常规纸片法药敏试验。
苯唑西林纸片，1R g/片，检测MRS平板应置于35℃ （而不是37℃）孵育24h （而不是16〜18h）。
结果判断：金黄色葡萄球菌：S：三13mm；I：11〜12mm；R:W10mm。
凝固酶阴性葡萄球菌：S：三18mm；R W17mm。
对于苯唑西林纸片周围的抑菌圈内有任何小菌落或稀薄“菌膜”生长都应列为MRS。
2、琼脂筛选法：如果纸片试验结果中介时，可做琼脂筛选法，培养基为MH琼脂+6R g/ml苯唑西林+4%NaCl,调整菌液浓度0.5McFarland,于35℃孵育24h,凡有任何生长即使一个菌落均报MRS。
（二）MRS监测意义对于MRS,应报告对所有头抱菌素类和其他B -内酰胺酶类耐药，喹喏酮类药物，除氟哌酸外，环丙氟哌酸，氟嗪酸有较好抗菌活性（耐药率10〜23%之间），利福平敏感率在90%以上，未见耐万古霉素菌株，但已有万古霉素中介金黄色葡萄球菌。
二、高水平耐药的肠球菌（HLAR）及耐万古霉素的肠球菌（VRE）（一）药敏测定方法1、常规测定方法：采用K-B纸片扩散法，头抱菌素不用做（均为耐药），氨苄，庆大霉素，替考拉宁，万古霉素一定要做。
2、高水平氨基糖甙类耐药性测定：⑴高含量纸片扩散法：通常测定庆大霉素和链霉素的高度耐药性，具体操作如常规纸片法药敏试验。
药敏纸片：庆大霉素：120R g/片；链霉素300p g/片结果判断：R：W6mm；I：7~9mm；S：三10mm⑵含单一高浓度抗生素琼脂平皿法：稀释法：庆大霉素：R：三500R g/ml；链霉素：R：2000p g/ml3、万古霉素耐药性测定：纸片扩散法，具体操作如常规纸片法药敏试验，万古霉素纸片为：30p g/片，检测平皿置35℃24h （而不是16〜18h）,并注意抑菌圈内有无小菌落或薄膜生长。
苯唑西林纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌
年） 抗菌药物 敏感 性试验执行标准 ： 金黄色 葡萄球菌 ： 抑菌 圈
直径 ≤ １ ０ ｍｍ 为 耐 药 ， １ １ ～１ ２ ｍｍ 为 中 介 ， ≥１ ３ ｍｍ 为 敏 感 ；
凝 固酶阴性葡萄球菌 ： 抑菌圈 直径≤ １ ７ ｍｍ 为耐药 ， ≥１ ８ ｍｍ
为敏 感 。
朱 兆宇 池 勇 信 阳职业技术学 院 ， 河南省信 阳市 ４ ６ ４ ０ ０ ０ 摘要 目的 ： 评 价苯唑西林纸 片扩 散法检测耐 甲氧西林 葡萄 球菌 （ ＭＲ Ｓ ） 在 临床 的应 用价值 。方 法 ： 以Ｐ Ｃ Ｒ法检 测 葡萄 球菌的 ｍｅ ｃ Ａ基 因为标 准 ， 评价 苯唑西林纸片扩散法 对耐 甲氧西林 葡萄球菌 的检 出率 。结果 ： 苯唑西林 纸 片扩 散法 与 Ｐ Ｃ Ｒ法检测 ｍｅ ｃ Ａ基 因的符合率为 ９ １ ． ６ ７ 。结论 ： 苯 唑西林 纸片扩 散法 与 Ｐ Ｃ Ｒ检测 ｍｅ ｃ Ａ基 因的符合 率 较高 ， 简便 易行 ， 但检测 敏感性不高 ， 特异性较弱 ， 可作为一个筛选试 验 。 关键 词 苯唑西林 纸片扩散法 耐 甲氧西林 葡萄球菌 检测
２ 结 果
２ ． １ ｍｅ ｃ Ａ 基 因检 测 结 果
从 临 床分 离 的 ４ ８株 葡 萄 球 菌 属
１ ． １ ． ３ 培养 基 ： 水解 酪蛋 白 （ Ｍｕ ｅ ｌ ｌ ｅ ｒ － Ｈｉ ｎ ｔ ｏ ｒ ， Ｍ－ Ｈ） 琼脂 ， 购
自广 东 省 江 门 市 凯 林 贸 易 有 限公 司 。 １ ． １ ． ４ 试剂： ｍｅ ｃ Ａ基 因实 时荧光定 量 Ｐ Ｃ Ｒ 检 测 试 剂 盒 系 达 安 基 因 股 份 有 限 公 司 生 产 。Ｄ ＮＡ 提 取 液 ： ＴＲ Ｉ ｚ ｏ ｌ ， 氯仿 ， Ａ 液； 上游 引物 ： ５ ’ 一 Ａ ＧＡＴ ＡＡＡＣ ＡＡ ＧＡＡ Ｃ Ｃ Ｔ Ｃ Ｔ ＧＣ Ｔ （ ）３ ’ ； 下 游引物： ５ ， ＿ Ｔ ＴＴＡＡ Ｃ Ｃ Ｃ ＡＡＴ Ｃ ＡＴ Ｔ Ｇ Ｃ ＴＧ Ｔ － ３ ’ ； 引 物探 针 ： ５’ 。 ＴＴ Ｃ Ｃ Ａ ＧＡＴ ＴＡ Ｃ Ａ ＡＣ ＴＴ Ｃ ＡＣ Ｃ ＡＧ－ ３’ 。 靶 基 因 为 ｍｅ ｃ Ａ基 因 ， 扩增终产 物的片段大小 为 ９ ２ ｂ ｐ 。
耐甲氧西林葡萄球菌的检测及耐药分析
航 空 航 天 医 药
２１年１ ０ ０ 月
８ ７
耐 甲氧 西 林 葡 萄球 菌 的检 测及 耐 药分 析
刘 玉 红
（ 黑龙江省双鸭山市传染病医院检验科 ， 黑龙 江 双鸭 山 １５０ ） ５ １０
摘要 目的： 了解 临床分 离的耐 甲氧 西林 葡萄球 菌 （ Ｓ 的检 测及 耐 药性 ， ＭＲ ） 为临床 治疗和控制 该类 感染提 供 帮助。方 法 ： 用琼脂扩散法 ， 美 国临床 实验室标准化委 员（ Ｃ Ｌ ）９ ９年标 准解释 结果 。结果 ： 甲氧西 采 按 Ｎ Ｃ Ｓ １９ 耐 林 葡萄球 菌的检 出率及耐药情况。结论 ： 甲氧 西林 葡萄球 菌的检 出率较 高 ， 制该 ＭＲ 耐 控 Ｓ感染应积极进行 病原 学监 测 、 理 使 用 抗 茵 药物 。 合 关键词 耐甲氧西林 ； 葡萄球 菌； 医院感染 ； 药 耐 中图分类号 ：Ｒ ４ ． ４６５ 文献标识码 ：Ｂ 文章编号 ：１０ ９ ３ （０ ０ Ｏ — ０ ７— １ ０ ５— ３ ４ ２ １ ） １ ０ ８ ０
—
１ ９．７
４ 马越 ， 蕾 ．中国 ５ 姚 １所 医院 ２ ０ ０２年葡萄球 菌属 临床分 离株的耐药性 ［ ］ Ｊ ．中国抗 感 染化 疗杂 志，０６， （ ） ２０ ２ １ ：
２ ～２ ４ ６．
（ 收稿 日期 ： ０ ２ ９—１ — ９ ０ １ ０）
用 医学，０ ４ １ （ ）６ ６ ． ２０ ，６ ２ ：７～ ７ ２ 姚 春 艳 ， 伟 灵 ． 葡 萄 球 菌 医 院 感 染 的 耐 药 性 分 析 府 ［ ］ 中华 医院感染学杂志 ，０ ５ １ （ ） １４～１６ Ｊ． ２０ ，４ １ ：０ ０． ３ 雷延 昌， 希恩 ．金黄 色葡萄球 菌的耐 药性及其耐 氟喹 桂 诺酮机制的研 究Ｉ ．中华 内科 杂 志，０ ５ ４ （ ） １６ １ Ｊ ２０ ，０ ３ ：７
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌三种筛查方法比较
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌三种筛查方法比较目的: 以PCR检测的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的mecA基因为金标准，比较耐甲氧西林金葡菌快速胶乳凝聚检测法、头孢西丁纸片法、苯唑西林纸片法三种检验方法在MRSA筛查中的特异性和敏感性。
方法：采用NCCLS 推荐的30 μg头孢西丁纸片法和苯唑西林纸片法，以及快速乳胶法检测。
结果：苯唑西林纸片法检测MRSA阳性47株，阴性36株，敏感性94%，特异性94.7%。
头孢西丁纸片法检测MRSA阳性49株，阴性38株，敏感性98%，特异性100%。
快速胶乳检测法检测MRSA阳性49株，阴性37株，敏感性98.0%，特异性97.4%。
结论：头孢西丁纸片法、快速胶乳检测法与PCR法这个金标准有很高的一致性。
标签：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）；头孢西丁纸片法；快速乳胶检测法；苯唑西林纸片法；筛查耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 的临床院感率不断上升，在世界各地医院都有感染流行，甚至发生暴发流行，几乎在所有使用抗生素的地方都有MRSA 存在，已引起全球范围内的广泛关注[1]。
PCR法检测MRSA特异的青霉素结合蛋白2α（PBP2α）的mecA 基因，是国际公认的金标准，但因为设备、试剂费用高，实验要求严格等因素临床实验室难以常规开展。
本实验通过检测已经经过PCR法检测过的菌株88例，探讨苯唑西林纸片法、头孢西丁纸片法、快速乳胶检测法三种方法的敏感性、特异性和临床实用性。
现报道如下：1 材料与方法1.1 实验材料和试剂1.1.1 菌株来源实验菌株为2003年5月来本院微生物实验室从临床标本分离出的金黄色葡萄球菌88株，标准参考菌株ATCC 25923来自军事医学科学院微生物流行病研究所。
1.1.2 材料和试剂MRSA快速胶乳检测试剂由英国Oxoid公司生产。
头孢西丁纸片（30 μg）、苯唑西林纸片（1 μg）购自北京天坛药物生物技术公司。
水解酪蛋白（M-H）琼脂为杭州天和微生物试剂有限公司产品。
耐甲氧西林的葡萄球菌(MRS)检测
耐甲氧西林的葡萄球菌（MRS）检测1、苯唑西林琼脂筛选试验培养基：MH琼脂+4﹪ΝαCL和苯唑西林（6ug/ml）倾注成平板。
方法：对琼脂可进行“点”接种，或者用棉拭子蘸取相当于0.5麦氏单位的菌悬液进行“划线”接种。
35℃孵育24小时，为最好地从凝固酶阴性葡萄球菌中检测耐甲氧西林菌株，需要奖平板35℃孵育48小时。
结果判断：任何生长即为MRS质控菌株：金黄色葡萄球菌ATCC29213——敏感株2、纸片扩散法（K-B法）苯唑西林和头孢西丁检测mecA基因介导的葡萄球菌耐药性解释标准菌种头孢西丁纸片法（mm）苯唑西林纸片法（mm）S I R S I R金黄色葡萄球菌和路邓葡萄球菌≥22 －≤21 ≥13 11﹣12 ≤10凝固酶阴性葡萄球菌≥25 －≤24注：1、用透射光观察苯唑西林抑菌圈内如有任何可见的生长，都表示苯唑西林耐药，而头孢西丁用反射光观察抑菌圈内如有任何可见的生长，都表示头孢西丁耐药。
2、根据此解释标准耐药者既为耐甲氧西林的葡萄球菌药敏实验纸片扩散法的操作流程于纯培养平板上挑取相同的菌落4-5个放入2ml无菌生理盐水中稀释呈0.5麦氏单位。
用无菌棉签蘸取菌液在试管壁上挤压几次，压去多余的菌液，涂布整个MH平板表面，反复数次，每次旋转平板60度，使整个平板涂布均匀。
涂布后的平板于室温中干燥3-5分钟，用无菌镊子取药敏纸片贴于平板表面，并用镊尖轻压一下纸片，使其贴平。
每张纸片的间距不小于24mm，纸片的中心距平板的边缘不小于15mm，90mm的平板上宜贴6张药敏纸片。
将贴好纸片的平板置35o孵育18-24小时后取出判断结果。
判断结果：根据（CLSI规则）抑菌环的大小，判断为敏感（S）、耐药（R）、或中度敏感（I）。
不应报告为敏感抗生素和微生物组合依据CLSI规则第十八版信息下列抗生素/微生物组合在体外可表现活性，但在临床上无效，不应报告敏感。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌预防与控制措施
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的预防与控制措施耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ MRSA）是一种流行范围广、致病力强、发病率和死亡率高的病原菌。
人体一旦感染，特别是抵抗力降低的患者如住重症监护室的患者、应用免疫控制剂者、较长时间应用光谱抗菌药物的患者和老年人，可引起败血症、肺炎和毒血症等，延长患者住院时间，如治疗不及时，可危及患者的生命。
一、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）感染的临床表现发热，精神差，局部感染症状，而最常有的是肺部感染，其他如皮肤、泌尿道、产妇生殖道感染，重者为败血症。
二、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的监测和报告1、微生物实验室发现耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）时应按紧迫值报告要求向所在临床科室、院感科报告。
做到早发现、早诊治、早隔断、早治疗。
2、经管医生如确诊为医院感生病例，必定在24 小时内填卡上报院感科。
三、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ MRSA）预防①合理使用抗生素。
认真落实《抗菌药物临床应用的基根源则》和《卫生部办公厅关于进一步加强抗菌药物临床应用管理的知识》要求，严格执行抗菌药物临床应用的基根源则，正确、合理的推行抗菌药物的给药方案，加强抗菌药物临床合理应用的管理，减少也许延缓耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的产生。
②早期检出带菌者。
加强对从其他医院转入者及 MRSA易感者的检查，重点筛查高危人群，提高病原学监测送检率。
同时微生物室应采用正确的检测手段，发现 MRSA，及时向临床和院感科报告，以便控制感染和隔断治疗。
③加强消毒与环境保洁。
医护人员检查病人前后要严格洗手消毒，应用一次性口罩、帽子、手套，医疗用品要固定，以防交织感染。
每天按要求对环境及物体表面进行干净与消毒。
四、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的控制措施1、微生物实验室负责耐甲氧西林金葡菌（MRSA）的监测，一旦发现MRSA 耐药模式，马上通知患者所在临床科室和院感科。
2、临床科室接到检验科报告后，马上报告科主任、护士长，并采用相应的预防控制措施。
耐甲氧西林葡萄球菌的检测方法
葡萄球 菌 （ Ｃ Ｓ 。目前 ＭＲ Ａ感染 、 ＭＲ Ｎ ） Ｓ 乙型肝炎 和
量 等 ）细 菌接 种量 、 、 孵育 温度及 培养 时间等 ［ ３ 】 。 １ ． 量 肉汤稀 释（ Ｃ 法 ２微 ＭＩ ） 美 国疾 病控 制 中心 （ Ｄ ）推 荐使 用含 ２ ／ Ｃ Ｃ ０ｇＬ Ｎ Ｃ 的 Ｍ 肉汤培 养基 ， ａ１ Ｈ 同时加 入 ｃ ２ Ｍ ２ 将 苯 ａ 、 ｇ＋ ＋ ，
ａ ｃ ｒ ｔ ｅｅ ｔｏ ． ｔｗａ ｐ ｄｔ ｅｐ ｕ ｏｐ ｅ ｅ ｔａ ｄ ｃ ｎ ｒ ｌ ｈｉ ｉｅ ｓ ． ｃ ｕ ａ ｅｄ ｔｃｉ ｎ Ｉ ｓｈｏ ｅ ｂｅｈ ｌｆ ｌｔ ｒ ｖ ｎ ｎ ｏ ｔｏ ｓｄ ｓ ａ ｅ ｏ ｔ
Ｋ ｙ ｏ ｄ ｍｅｈ ｃ ｌ ｎ ｒ ｓｓ ｎ ｔｐ ｙ ｏ ｏ ｃ ｓ ｄ ｔ ｃｉｎ ｅ ｗ ｒ ｓ： ｔ ｉｉ ｉ — ｅ ｉｔ ｔ ａ ｈ ｌｃ ｃ ｕ ： ｅｅ ｔ ｌ ａ Ｓ ｏ
１５浓 度梯 度 （ ｔｓ） ． Ｅ ｅｔ法
在 ＭＨ琼 脂 （ ２ ＬＮ Ｃ ） 含 Ｏｇ ａ １平板 上 ， 上 苯 唑 ／ 贴
分 辨 率 高 、 易判 断结 果 、 容 能在 一 张膜 上 检 测 大 量
标本 ， 缺点是 探 针 的制备 成本 较高 。
100检测快速但成本高需时也较长对生长缓慢或延迟表达耐药性的mrs在34h内难以达到检测水平容易漏检或误报mrst12基因检测法meca基因作为耐甲氧西林葡萄球菌的分子标志在葡萄球菌属中广泛分布目前在葡萄球菌属以外的细菌中尚未检出且meca基因与葡萄球菌对甲氧西林的耐药性有很好的相关性cijsi指出
唑西 林 进 行倍 比稀 释 ， ０１５ ｇ Ｌ～ ６ ｇｍ ， 从 ．２ ／ ｍ １ ／ Ｌ 菌 浓度 为 １ ４ｍ ，５ ０ ／ Ｌ ３ ℃孵育 ２ ， Ｃ＜２ ／ Ｌ为 ４ｈ ＭＩ ｇｍ
MRSA耐药机制及检测方法
• MRSA，methicillin resistant Staphylococcus aureus（耐甲氧西林金黄色葡萄球菌）
1961年在英国由Jevons 首次发现，是引起医院 感染的重要病原菌之一
overview
• MRSA是携带mecA基因、编码低亲和力青霉 素结合蛋白，导致耐甲氧西林、所有头孢菌 素、碳青霉烯类、青霉素类+青霉素抑制剂 抗生素的葡萄球菌
•femC的作用引起谷氨 酰胺合成酶基因glnA
转录和活化及异谷氨
酰胺的酰胺化，其失
活时，糖肽的交叉连 接降低，MRSA对β-内
酰胺酶类抗生素耐药 性降低
femF基因的编码产物 涉及L-赖氨酸与胞壁酰 二肽链的连接，其突变 失活时引起的耐药性的 改变得具体机制还有待 研究。 femD和femE对细菌的 确切作用还未阐明
影响mecA表达的因素
• mecA基因的基本调节基因为mecI和mecR1
mecI基因编码mecI蛋白为抑制因子，当其
结合到mecA基因的启动子上时，抑制mecA基 因地转录，从而不能产生PBP2a
mecR1基因编码mecR1蛋白为诱导因子，
当其接触到诱导剂β-内酰胺类抗生素时被活化， 活化的mecR1蛋白能够去除mecI蛋白对mecA 基因地阻遏作用，使mecA编码产生PBP2a蛋 白
Detection for MRSA
传统方法
药物敏感试验方法 NCCLS推荐使用药 敏纸片法、苯唑西林 (oxacillin)盐琼脂筛 查法、β-内酰胺酶检 测、E-test 试验和试 管双倍稀释法等 缺点：易受培养基成 分影响，较耗时，且 错误应用抗生素会引 起更为严重耐药的耐 药菌株的出现
MALDI- TOF MS细菌指纹图谱法
二种方法检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的评价
二种方法检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的评价摘要耐甲氧西林葡萄球菌（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA）是一种常见的致病菌，对治疗造成较大难度。
因此，快速、准确地检测MRSA成为临床检验的重要课题。
本文对MRSA的两种检测方法进行了评价并比较分析。
背景MRSA是一种致病菌，它在医疗机构中有很高的感染率。
MRSA与其他耐药菌相比具有更高的耐药性。
MRSA感染会导致严重的疾病，例如败血症和肺炎等。
快速准确地检测MRSA对治疗和控制感染至关重要。
临床检验中常用的方法有传统的质控耐药菌检测方法和聚合酶链式反应（PCR）检测方法。
这些方法的准确性和速度直接决定了诊断的精确度和治疗方案的制定。
本文将对这两种检测方法进行评价和比较分析，以期为临床检验提供一定帮助。
传统检测方法传统的质控耐药菌检测方法是一种常用的MRSA检测方法。
这种方法基于细菌对抗生素的敏感性而设计。
通过对细菌的培养以及对其对特定抗生素的反应，检测细菌对抗生素的敏感性，从而得出细菌是否为MRSA的结论。
优点：•经济实用•操作简单缺点：•检测周期较长，需要几天时间才能得到结果•容易出现假阴性结果，即存在MRSA但检测结果为阴性PCR检测方法PCR检测方法是一种新兴的MRSA检测方法，它使用高灵敏度和高特异性的PCR技术来检测MRSA。
这种方法使用MRSA特异性的引物和探针对MRSA进行特异性扩增和检测。
优点：•检测速度快，仅需数小时即可得到结果•检测精度高，准确率高达99%•可进行高通量检测，适用于大量样本的处理缺点：•技术门槛高，需要特殊的仪器和对技术的掌握•检测成本较高比较分析两种MRSA检测方法各有优缺点，针对不同的需求可以选择不同的检测方法。
例如，需要快速得到检测结果时，可以选择PCR检测方法；而传统质控耐药菌检测方法则适合用于大规模样本的分析。
在MRSA检测过程中，为了避免假阴性结果的出现，可采用同时使用两种检测方法的策略，以降低假阴性结果的发生。
耐甲氧西林葡萄球菌检测方法的研究
耐甲氧西林葡萄球菌检测方法的研究
刘海英
【期刊名称】《国外医学：微生物学分册》
【年(卷),期】2000(023)003
【摘要】耐甲氧西林葡萄球菌（ＭＲＳ）的检测大致分为３个方面，药敏试验、
ｍｅｅＡ基因和青霉素结合蛋白２ａ（ＰＢＰ２ａ）检测，药敏试验易受实验体系中多种因素影响，自动化检测仅属定性筛选试验，Ｅ－Ｔｅｓｔ法操作简便，准确性好，因价格昂贵，临床应用受限。
ｍｅｅＡ基因检测耗时短，特异性、敏感性高，但ｍｅｅＡ基因阳性的菌株，其表型不一定就耐药株，琼脂筛选法仍是检测的金标准。
ＰＢＰ２ａ含量分析在一定程度上解决了表型与
【总页数】3页(P25-27)
【作者】刘海英
【作者单位】广州军区总医院检验科
【正文语种】中文
【中图分类】R378.11
【相关文献】
1.耐甲氧西林葡萄球菌mecA基因的LAMP检测方法研究 [J], 李霞;张宏伟;郑文杰;黄金海
2.耐甲氧西林葡萄球菌临床检测方法评价 [J], 陈烨;王蕊;卢红;邓晶晶;刘晶;王洋;刘举
3.耐甲氧西林葡萄球菌微稀释法表型检测方法评价及分析 [J], 张栋林;许英;陈阿红;
王姝;钱学深
4.耐甲氧西林葡萄球菌常规检测方法的比较 [J], 许丽虹
5.耐甲氧西林葡萄球菌荧光定量PCR检测方法的实验研究 [J], 江凌晓;刘思平;龙军;钟慧;彭永正
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耐甲氧西林的葡萄球菌（MRS）检测
1、苯唑西林琼脂筛选试验
培养基：MH琼脂+4﹪ΝαCL和苯唑西林（6ug/ml）倾注成平板。
方法：对琼脂可进行“点”接种，或者用棉拭子蘸取相当于0.5麦氏单位的菌悬液进行“划线”接种。
35℃孵育24小时，为最好地从凝固酶阴性葡萄球菌中检测耐甲氧西林菌株，需要奖平板35℃孵育48小时。
结果判断：任何生长即为MRS
质控菌株：金黄色葡萄球菌ATCC29213——敏感株
2、纸片扩散法（K-B法）
苯唑西林和头孢西丁检测mecA基因介导的葡萄球菌耐药性解释标准
菌种头孢西丁纸片法（mm）苯唑西林纸片法（mm）
S I R S I R
金黄色葡萄球菌和路邓葡萄球菌≥22 －≤21 ≥13 11﹣12 ≤10
凝固酶阴性葡萄球菌≥25 －≤24
注：1、用透射光观察苯唑西林抑菌圈内如有任何可见的生长，都表示苯唑
西林耐药，而头孢西丁用反射光观察抑菌圈内如有任何可见的生长，都表示头孢西丁耐药。
2、根据此解释标准耐药者既为耐甲氧西林的葡萄球菌
药敏实验纸片扩散法的操作流程
于纯培养平板上挑取相同的菌落4-5个放入2ml无菌生理盐水中稀释呈0.5麦氏单位。
用无菌棉签蘸取菌液在试管壁上挤压几次，压去多余的菌液，涂布整个MH平板表面，反复数次，每次旋转平板60度，使整个平板涂布均匀。
涂布后的平板于室温中干燥3-5分钟，用无菌镊子取药敏纸片贴于平板表面，并用镊尖轻压一下纸片，使其贴平。
每张纸片的间距不小于24mm，纸片的中心距平板的边缘不小于15mm，90mm的平板上宜贴6张药敏纸片。
将贴好纸片的平板置35o孵育18-24小时后取出判断结果。
判断结果：根据（CLSI规则）抑菌环的大小，判断为敏感
（S）、耐药（R）、或中度敏感（I）。
不应报告为敏感抗生素和微生物组合
依据CLSI规则第十八版信息
下列抗生素/微生物组合在体外可表现活性，但在临床上无效，
不应报告敏感。