2常规病理检查
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常规组织病理学 技术
常规病理学技术（病理工作流程）
常规组织处理
快速冰冻
细胞学检查
固定
取材
取材
取材 脱水，透明，浸蜡
包埋
OCT包埋 切片
固定
染色 镜下观察，诊断
组织固定
Hale Waihona Puke Baidu目的：
? 保持组织和细胞的形态学特征，防止因为酶活性或微生物而 使组织坏死，自溶及腐败。
? 保持组织和细胞中可溶性成分不被溶解。 ? 减少蛋白质、脂肪、糖、酶等细胞成分丢失。 ? 维持细胞膜，内质网，核膜等细胞结构的完整。
处理措施：
固定后能够充分水洗，可减少分子间交联。 抗原修复还可使抗原再现。 缩短固定时间(8～24小时)，降低固定温度(4℃) 可减少交联。
甲醛（分子式 :HCHO ）固定的缺点 :
? 甲醛内杂质含量多，影响酶染色 ? 含甲酸，固定液酸化，影响染色 ? 产生甲醛颗粒，影响观察，尤以多血的肝，
脾组织常见 ? 易挥发，污染环境
组织固定
目的：
? 使组织中的各种物质沉淀和凝固起来，产生不同的折射率， 造成光学上的差异，以便染色后易于鉴别和观察。
? 固定剂兼有硬化作用，使组织硬化增加组织硬度，便于制片。 ? 防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态结构。 ? 经过固定的组织，能对染料产生不同的亲和力而着色清晰，
便于辩认。
组织固定
常用甲醛固定液
10%中性缓冲福尔马林固定液： 100ml40% 福尔马林 900ml 蒸馏水 NaH2PO4 4g Na2HPO4 6.5g
最常用的固定液，抗原保存好，合适免疫组化染色。
乙醇（alcohol ）固定
优点：
--保存组织中易溶于水的物质，如尿酸结晶和糖原
---常与其他试剂配制成多种混合固定液：加快固定时兼有 脱水的作用
氯化汞（Ｍercury bichloride ）
--能沉淀蛋白质，它不能固定脂肪、类脂和糖类。
--穿透力较弱，单独使用可使组织收缩。多与醋酸和铬盐 （重铬酸钾）配成混合固定液。 --固定后细胞的结构，特别是核的细微结构显示清晰。 --易产生汞盐的沉着，损害切片刀，因此染色前必须脱汞。
苦味酸（Ｐicric acid ）
-
甲醛（分子式 :HCHO ）固定的优点 :
? 组织形态结构保存好 ? 固定均匀，穿透性强 ? 组织收缩少 ? 增加组织硬度，便于切片 ? 价格便宜
甲醛（分子式 :HCHO ）固定的缺点 :
? 封闭抗原决定簇：
醛基与抗原蛋白氨基交联形成羧甲基， 使抗原决定簇的空间构象发生改变，可能 部分和完全遮盖抗原决定簇，使之不能完 全暴露，导致免疫组织化学染色产生假阴 性。
固定的机制和原理有很多种，包括 : ? 反应基团间的共价结合 ? 交联的共价结合 ? 脱水与酸性物质作用 ? 盐的形成和热能 ? 共同作用
组织固定
理想的固定剂：
? 保留蛋白，mRNA 以及DNA的生化特征。 ? 支持组织化学染色，免疫组化，原位杂交和各种其他技术。 ? 能快速渗透和固定组织。 ? 适合各种不同的组织和不同大小标本的固定。 ? 固定剂易于回收和处理，价格合理。 ? 无毒，无害，无可燃性。
组织固定
固定剂的种类：
1、按照化学性质分类
? Ⅰ类：醛类：甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二 醛，丙二醛等。
? Ⅱ类：氧化剂类：四氧化锇（奥酸），高锰酸钾，重铬 酸钾等。
? Ⅲ类：蛋白变性类：甲醇，乙醇，醋酸等 ? Ⅳ类：其他：氯化汞，苦味酸等 。
2、按照成分分类：
? 单一固定液：如甲醛，酒精，醋酸，锇酸，丙酮等 ? 混合固定液：中性甲醛，AF液等
缺点：
--可溶解脂类物质，要求保留脂类物质时不能使用酒精 --对组织收缩较大，单纯酒精固定组织收缩明显，变硬变 脆，制片困难 --渗透力差，组织表面已固定，组织中间固定不佳 --沉淀核蛋白，球蛋白，白蛋白，影响核染色 --价格贵
醋酸（Ａcetic acid ）固定
--对染色质固定较好。
---对脂肪、糖元不能固定。 -- 能使组织膨胀，可抵偿因乙醇、升汞、甲醛等固定液引起的组 织收缩和硬化，故常配成5%混合固定液。 -- 穿透速度最快，固定时间短。 -- 5％醋酸的pＨ值在2≈8，此时可停止细菌和酶的活动，可防止 组织自溶变性。
组织固定
常用的固定方法
? 蒸汽固定法：甲醛或锇酸可产生蒸汽。用于保存可溶性 成分；小而薄的组织，冷冻干燥组织
? 灌注固定法：肺，肾脏，肝脏等 ? 细胞涂片的固定：浸入法和滴加法，浸入法应注意相互
污染的问题 ? 微波固定法：微波加热可缩短固定时间，但时间和温度
掌握困难
常用固定液介绍
甲醛（分子式 :HCHO ）固定:
重铬酸钾
--强氧化剂，不能与酒精等还原剂混合，常配成 0.5%水溶 液固定组织。 --单独固定组织不能沉淀蛋白质，但加入冰醋酸转变为铬 酸，（即酸化重铬酸钾），可使蛋白质凝固沉淀。 --与甲醛混合是固定线粒体、高尔基复合体和嗜铬细胞等 优良固定剂，若配成Eenker 氏液，能很好的固定细胞质、 胞核及染色体。 --穿透速度快，组织收缩小，固定的组织必须流水充分洗 涤（6—12h），否则影响染色。 对酸性染料染色良好，对碱性料染较差，若加入升汞及醋 酸等，则对细胞核染色极佳。
--能沉淀蛋白质，但对脂肪和类脂无固定作用。 --穿透力很慢，细胞收缩显著，但不会使组织硬化。 --有软化皮肤的作用，配制的Bouin 氏液对头皮及全身皮肤制 片效果甚好。 --固定时间太久会影响HE染色。 --糖元较好的固定剂。
丙酮
--可以作固定剂，又可作脱水剂，穿透速度快，可使蛋白 质沉淀凝固，2毫米以下的组织固定半小时至 1小时即可。 --可引起组织较强的收缩使之变硬，对核固定不佳。 --对某些酶的固定很好，如碱性磷酸酶、酸性磷酸酶等。 --一般多与氯化汞、甲醛混合液使用，先用低浓度丙酮再 经高浓度丙酮固定以减少组织收缩和过度硬化。
? 纯甲醛是一种蒸汽
? 溶于水后成为37%~40%的甲醛溶 液（又称福尔马林溶液）
? 固定液为10%的中性福尔马林 （即约含4%W/V的甲醛溶液）
? 甲醛在水溶液中形成HOCH2OH （亚甲基氢氧化合物）复合物
甲醛（分子式 :HCHO ）固定:
? 甲醛的亚甲基氢氧化合物能与蛋白质末端多 种不同的功能基团结合，使蛋白多肽分子间 形成桥键，使蛋白质不再发生改变，保存原 位。
常规病理学技术（病理工作流程）
常规组织处理
快速冰冻
细胞学检查
固定
取材
取材
取材 脱水，透明，浸蜡
包埋
OCT包埋 切片
固定
染色 镜下观察，诊断
组织固定
Hale Waihona Puke Baidu目的：
? 保持组织和细胞的形态学特征，防止因为酶活性或微生物而 使组织坏死，自溶及腐败。
? 保持组织和细胞中可溶性成分不被溶解。 ? 减少蛋白质、脂肪、糖、酶等细胞成分丢失。 ? 维持细胞膜，内质网，核膜等细胞结构的完整。
处理措施：
固定后能够充分水洗，可减少分子间交联。 抗原修复还可使抗原再现。 缩短固定时间(8～24小时)，降低固定温度(4℃) 可减少交联。
甲醛（分子式 :HCHO ）固定的缺点 :
? 甲醛内杂质含量多，影响酶染色 ? 含甲酸，固定液酸化，影响染色 ? 产生甲醛颗粒，影响观察，尤以多血的肝，
脾组织常见 ? 易挥发，污染环境
组织固定
目的：
? 使组织中的各种物质沉淀和凝固起来，产生不同的折射率， 造成光学上的差异，以便染色后易于鉴别和观察。
? 固定剂兼有硬化作用，使组织硬化增加组织硬度，便于制片。 ? 防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态结构。 ? 经过固定的组织，能对染料产生不同的亲和力而着色清晰，
便于辩认。
组织固定
常用甲醛固定液
10%中性缓冲福尔马林固定液： 100ml40% 福尔马林 900ml 蒸馏水 NaH2PO4 4g Na2HPO4 6.5g
最常用的固定液，抗原保存好，合适免疫组化染色。
乙醇（alcohol ）固定
优点：
--保存组织中易溶于水的物质，如尿酸结晶和糖原
---常与其他试剂配制成多种混合固定液：加快固定时兼有 脱水的作用
氯化汞（Ｍercury bichloride ）
--能沉淀蛋白质，它不能固定脂肪、类脂和糖类。
--穿透力较弱，单独使用可使组织收缩。多与醋酸和铬盐 （重铬酸钾）配成混合固定液。 --固定后细胞的结构，特别是核的细微结构显示清晰。 --易产生汞盐的沉着，损害切片刀，因此染色前必须脱汞。
苦味酸（Ｐicric acid ）
-
甲醛（分子式 :HCHO ）固定的优点 :
? 组织形态结构保存好 ? 固定均匀，穿透性强 ? 组织收缩少 ? 增加组织硬度，便于切片 ? 价格便宜
甲醛（分子式 :HCHO ）固定的缺点 :
? 封闭抗原决定簇：
醛基与抗原蛋白氨基交联形成羧甲基， 使抗原决定簇的空间构象发生改变，可能 部分和完全遮盖抗原决定簇，使之不能完 全暴露，导致免疫组织化学染色产生假阴 性。
固定的机制和原理有很多种，包括 : ? 反应基团间的共价结合 ? 交联的共价结合 ? 脱水与酸性物质作用 ? 盐的形成和热能 ? 共同作用
组织固定
理想的固定剂：
? 保留蛋白，mRNA 以及DNA的生化特征。 ? 支持组织化学染色，免疫组化，原位杂交和各种其他技术。 ? 能快速渗透和固定组织。 ? 适合各种不同的组织和不同大小标本的固定。 ? 固定剂易于回收和处理，价格合理。 ? 无毒，无害，无可燃性。
组织固定
固定剂的种类：
1、按照化学性质分类
? Ⅰ类：醛类：甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二 醛，丙二醛等。
? Ⅱ类：氧化剂类：四氧化锇（奥酸），高锰酸钾，重铬 酸钾等。
? Ⅲ类：蛋白变性类：甲醇，乙醇，醋酸等 ? Ⅳ类：其他：氯化汞，苦味酸等 。
2、按照成分分类：
? 单一固定液：如甲醛，酒精，醋酸，锇酸，丙酮等 ? 混合固定液：中性甲醛，AF液等
缺点：
--可溶解脂类物质，要求保留脂类物质时不能使用酒精 --对组织收缩较大，单纯酒精固定组织收缩明显，变硬变 脆，制片困难 --渗透力差，组织表面已固定，组织中间固定不佳 --沉淀核蛋白，球蛋白，白蛋白，影响核染色 --价格贵
醋酸（Ａcetic acid ）固定
--对染色质固定较好。
---对脂肪、糖元不能固定。 -- 能使组织膨胀，可抵偿因乙醇、升汞、甲醛等固定液引起的组 织收缩和硬化，故常配成5%混合固定液。 -- 穿透速度最快，固定时间短。 -- 5％醋酸的pＨ值在2≈8，此时可停止细菌和酶的活动，可防止 组织自溶变性。
组织固定
常用的固定方法
? 蒸汽固定法：甲醛或锇酸可产生蒸汽。用于保存可溶性 成分；小而薄的组织，冷冻干燥组织
? 灌注固定法：肺，肾脏，肝脏等 ? 细胞涂片的固定：浸入法和滴加法，浸入法应注意相互
污染的问题 ? 微波固定法：微波加热可缩短固定时间，但时间和温度
掌握困难
常用固定液介绍
甲醛（分子式 :HCHO ）固定:
重铬酸钾
--强氧化剂，不能与酒精等还原剂混合，常配成 0.5%水溶 液固定组织。 --单独固定组织不能沉淀蛋白质，但加入冰醋酸转变为铬 酸，（即酸化重铬酸钾），可使蛋白质凝固沉淀。 --与甲醛混合是固定线粒体、高尔基复合体和嗜铬细胞等 优良固定剂，若配成Eenker 氏液，能很好的固定细胞质、 胞核及染色体。 --穿透速度快，组织收缩小，固定的组织必须流水充分洗 涤（6—12h），否则影响染色。 对酸性染料染色良好，对碱性料染较差，若加入升汞及醋 酸等，则对细胞核染色极佳。
--能沉淀蛋白质，但对脂肪和类脂无固定作用。 --穿透力很慢，细胞收缩显著，但不会使组织硬化。 --有软化皮肤的作用，配制的Bouin 氏液对头皮及全身皮肤制 片效果甚好。 --固定时间太久会影响HE染色。 --糖元较好的固定剂。
丙酮
--可以作固定剂，又可作脱水剂，穿透速度快，可使蛋白 质沉淀凝固，2毫米以下的组织固定半小时至 1小时即可。 --可引起组织较强的收缩使之变硬，对核固定不佳。 --对某些酶的固定很好，如碱性磷酸酶、酸性磷酸酶等。 --一般多与氯化汞、甲醛混合液使用，先用低浓度丙酮再 经高浓度丙酮固定以减少组织收缩和过度硬化。
? 纯甲醛是一种蒸汽
? 溶于水后成为37%~40%的甲醛溶 液（又称福尔马林溶液）
? 固定液为10%的中性福尔马林 （即约含4%W/V的甲醛溶液）
? 甲醛在水溶液中形成HOCH2OH （亚甲基氢氧化合物）复合物
甲醛（分子式 :HCHO ）固定:
? 甲醛的亚甲基氢氧化合物能与蛋白质末端多 种不同的功能基团结合，使蛋白多肽分子间 形成桥键，使蛋白质不再发生改变，保存原 位。