沙门氏菌检测的基准方法(20210201165718)

沙门氏菌检测的基准方法

内容

1 范围

2 参考标准

3 定义

4 原理

4.1 概要

4.2 前增菌——非选择性液体培养基

4.3 增菌——选择性液体培养基

4.4 划平板和鉴定

4.5 确认

5 培养基、试剂和血清

5.1 概要

5.2 培养基和试剂

5.3 血清

6 设备和玻璃器皿

7 采样

8 检验样品的制备

9 程序

9.1 试验样品和原始悬浮液

9.2 非选择性前增菌

9.3 选择性增菌

9.4 划平板和鉴定

9.5 确认

10 结果表示

11 检验报告

12 质量保证附录A （标准化）程序图表

附录B （标准化）培养基和试剂的成份及准备附录C （非标准化）实验室间试验结果参考书目

、尸、-

前言

ISO （国际标准化组织）是国际标准化团体的全世界同盟。通常由ISO技术委员会来执行国际标准的制订工作（ISO成员体）。通常由ISO技术委员会来完成国际标准的准备工作。在委员会中，若对建立的技术委员会有兴趣的话，每个成员体有权作为代表。国际组织、政府或非政府组织，通过ISO联系，也可以参加这项工作。在所有电工标准方面，ISO与国际电工委员会（IEC）紧密合作。

国际标准按照ISO/IEC 指南第三章所列的规则草拟。

技术委员会的主要任务是准备国际标准。被技术委员会采用的国际标准草案以投票方式在成员体内运行。至少要75%成员体的投票赞成，才能作为一个国际标准发布。

要引起注意的可能性是:本国际标准的一些要素可能是专利权主体。ISO 不应承担鉴定部分或全部的这种专利权。

ISO6579是由食品ISO/TC34技术委员会、微生物SC9分委员会所准备的。第四版删除或更换了第三版(ISO6579: 1993),并已作了技术性修订。附录A和附录B形成了本

国际标准的标准化部分。附录C仅为资料。

介绍

因为有大量的不同种类的食品和饲料产品，本基准方法可能对某些产品并不完全适用, 而另一些产品可能得用到其他方法。既然这样，如果为论证技术上的原因而绝对需要时，那么就可使用这些产品指定的不同方法。不过，应尽可能地使用本基准方法。

在下一次审查这个国际标准时，我们会考虑所有有用关于这些指标所涉及的范围内以及个别产品不遵照这些指标的原因的信息。

（产品的）检测方法无法在短时间内达到统一,而且,对于某些产品,可能已经有与本基准方法不符的国际标准/或国家标准存在。但是我们希望, 在以后审查这些标准时能进行修改, 使其同本国际标准保持一致, 以保证除了因技术原因确实需要外不会发生背离本基准方法的情况.

微生物学——检测沙门氏菌方法的通用指南

警告——为了保护实验室工作人员的身体健康，在适当装备的实验室、在熟练的微生物学家的控制下检测沙门氏菌、特别是伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌，这是非常关键的。另外最要关注的是所有培养物的处置。

1 范围

本国际标准详述了沙门氏菌的基准方法，包括伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏

菌。

在绪论中受讨论的局限性，本国际标准适用于

——供人类消费或动物饲养所使用的产品。

——在食物生产和处理范围内的环境样品。

警告——本方法并不包括所有的伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌。

2 标准的参考资料

通过本文中的参考目录，下列标准化文件包含组成本国际标规定的条款。对后来更正或修订的陈旧参考资料，这些条款并不适用。然而，鼓励那些基于赞同本国际标准的成员，去调查下面提到的大多数新版标准化文件应用的可能性。对更新的参考资料，最新版的标准化文件作了参考应用。ISO和IEC的成员保持对现行有效国际标准的注册。

ISO6887-1，食品和动物饲料的微生物学一一微生物检验中测试样品、原始

悬浮液及十倍稀释液的制备——第一章：原始悬浮液和十倍稀释液制备的通用规则

ISO 7218：1996，食品和动物饲料的微生物学——微生物检验的通用规则

ISO 8261，牛奶及奶制品——微生物检验中测试样品、原始悬浮液及十倍稀释液制备的通用指南

3 术语和定义

应用下列定义来表达本国际标准的用途。

3.1 沙门氏菌：在选择性培养基上形成典型或少典型的菌落，当依照本国际标准进行试验时，它们表现出特有的生化反应和血清学特征的微生物。

3.2 沙门氏菌检测：当依照本国际标准进行试验时，在一定重量或体积的产品中，测定这些沙门氏菌的存在与否。

4 原理

4.1 概要沙门氏菌检测需四个连续阶段（也可以见附录A）

注沙门氏菌可能少量存在，并经常伴随着相当数量的其它肠杆菌属或其它菌属。因此，选择性增菌是必需的；此外，为尽可能地检测到受伤沙门氏菌，经常需要进行前增菌。4.2 前增菌——非选择性液体培养基

将试验部分接种于缓冲蛋白胨水，在37C±仁C培养18h± 2h。

对于某些食品，则需利用其它的前增菌程序，见9.1.2 。数量比较庞大时，在接种测试样品前应将缓冲蛋白胨水加热到37C±1C。

4.3 增菌——选择性液体培养基

将4.2得到的培养物接种到RVS肉汤和MKTTr肉汤。

RVS肉汤在41.5 C±1C孵育24h± 3h,MKTTr肉汤在37C±1C孵育24h± 3h 4.4 划平板和鉴别

从4.3 中获得的培养物接种于两种选择性固体培养基上。

――木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂（XLD琼脂）

――对XLD琼脂的任何其它补充性的选择性培养基，特别是适合于分离乳糖阳性的沙门氏菌、伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌的培养基，实验室可以选择使用。

XLD琼脂在37C±「C孵育，在24h± 3h后检查结果。第二种选择性琼脂按照厂家说明书进行孵育。

注作为资料，亮绿琼脂、亚硫酸铋琼脂等，可用作第二种平板划线培养基。

4.5 确认

挑选可疑沙门氏菌的菌落进行次培养，再按4.4 所描述的划线分离，通过适当的生化试验和血清学试验加以证实。

5 培养基、试剂和血清

5.1 概要供常规实验室使用，见ISO 7218。

5.2 培养基和试剂

注由于培养基和试剂的数量庞大，为了表述清晰，我们认为将它们的组成和配制在附录

B 中列出更适当。

5.2.1 非选择性前增菌液：缓冲蛋白胨水

见B.1

522第一种选择性增菌液：RVS肉汤

见B.2

5.2.3第二种选择性增菌液：MKTTr肉汤

见B.3

5.2.4 固体选择性平板培养基

5.2.4.1第一种培养基：木糖赖氨酸去氧胆酸盐琼脂（XLD琼脂）

见B.4

5.2.4.2 第二种培养基

第二种培养基的选择是留给检测实验室自定。在它的准备使用时应准备按厂家说明书准确执行。

5.2.5 营养琼脂见B.5

5.2.6 三糖/ 铁琼脂（TSI 琼脂）

见B.6

5.2.7 尿素琼脂（Christensen ）

见B.7

5.2.8 L- 赖氨酸脱羧酶培养基

见B.8

5.2.9 B -半乳糖苷酶检测试剂（或依照厂商说明书使用的比色盘）

见B.9

5.2.10 V-P 反应试剂

见B.10

5.2.11 吲哚反应试剂