实验八芦丁含量测定20120425

芦丁又名芸香甙，维生素P，属黄酮类化合物， 临床上主要用于治疗脑溢血，高血压，视网 膜出血等疾病。 芦丁的含量测定有高效液相色谱法，紫外分 光光度法和可见分光光度法。
二、实验原理
黄酮类化合物的结构性质 结构中含有酚羟基和环酮 基结构，可与某些金属盐 试剂生成有色络合物，在 510nm波长处有吸收，用 可见分光光度计测其含量。 本实验利用什么原理 本实验利用黄酮甙与亚 硝酸钠、硝酸铝反应在 碱性时显红色的反应测 定芦丁的含量。
标准曲线：一份称样量，但是可以定量很宽 的线性范围；中间可能存在的误差---称样时 引入的误差 标准对照法：2份或者2份以上的称样量，只 能定量90-110%的含量，且不能存在较大的 截距
注意事项
移液管,容量瓶的正确使用 NaOH每吸一次可以放两个,比色杯不要甩 容量瓶易翻倒,注意放好 注意放的时间 NaNO2加0.3ml,不是0.03ml. 标准浓度看黑板,各浓度要计算 蒸馏水要加至刻度后摇(用滴管),容量瓶拿在手上看刻度 浓度的测定,以1号为空白,从低浓度至高浓度来测. 数据当场交,报告回去做.
芦丁的测定各试剂用量
编号 1 2 1.00 3 2.00 4 3.00 5 4.00 6 5.00 3.00 5.00 4.00 3.00 2.00 1.00 2.00 7
标准溶液(ml) 0 样品溶液(ml) 30%乙醇(ml) NaNO2(ml) Al(NO3)3(ml) NaOH(ml)
全部都加0.30ml,摇匀后放置6分钟
四、思考题 相同厚度的各比色皿透光性不一 致时，为什么要在经过多次洗涤后 各皿透光率差异无改变下才使用校 正值？ 工作曲线法和标准对比法分别适 用何种情况？从本实验结果看，能 否用标准对比法？
仪器的操作
1、预热： 仪器开机后灯及电子部分需热平衡，故开机预热30分钟后才能进行测定工作 预热： 预热 2、调零： 调零： 调零 目的： 目的：校正基本读数标尺两端（配合100%T调节）进入正确测 试状态 调整时机： 调整时机：开机预热30分钟后，改变波长或测试一段时间，以及做高精 度测试之前 操作： 操作： 将拉杆拉出半格（或打开盖子）遮断光路，然后按“0%”键， 即能自 动调整零位 3、调整 调整100%： ： 调整 目的： 目的：校正基本读数标尺两端（配合调零）进入正确测试状态 调整时机：同上 调整时机 操作： 空白样品置入样品室光路中，盖下盖子（打开光门）然后按 操作 “100%T” 键，即能自动调整100%。 4、调波长：用↑、↓箭头调节波长，调至所需波长 调波长： 调波长
全部都加0.30ml,摇匀后放置6分钟
全部都加4ml,摇匀后放置15分钟后在510nm条件下测定A
结果 1、列出浓度C与吸光度A对应表格 2、用作图法绘制芦丁工作标准曲线 3、用计算器回归求标准曲线方程A=()C+( ), 要求r=0.998以上 4、从图中读出芦丁的浓度,并计算瓶中芦丁样 品的浓度 5、计算器回归求芦丁样品的浓度并计算瓶中芦 丁样品的浓度。
要使得测定浓度准确 应当考虑影响测定准确的因素：
1 显色反应的完全程度（取决于）： 介质的pH 显色剂的用量 反应温度 反应时间
2 吸光度的物理测定条件
如何确定反应最佳条件
在建立方法时，需要通过实验确定最佳反应 条件，为此改变其中一个因素（例如介质的 pH值暂时固定其他因素，显色后测量相应溶 液的吸光值，通过吸光度-pH曲线确定反应的 酸度范围，其他几个影响因素的适宜值也可 以按这一方法分别确定。
可见分光光度法与紫外的区别： 可见分光光度法与紫外的区别：
1、光源不同，紫外用氢灯作光源，可见用钨灯 2、测定波长不同，紫外波长范围180～350nm 可见波长范围320～1000 3、可见需显色，紫外不需显色 可见分光光度测定中通常是被测物质与显色剂反应，生成 有色物质，然后测定其吸光度，进而求得被测物质的含量。
三、实验内容
仪器 光电分光比色计 使用方法见附件 比色皿的校核 将同样厚度的四个比色皿分别编号标记，都装空白溶 液，在所用波长（510nm）下比较各比色皿的透光率，应相同，若有显 著差异，应将比色皿重新洗涤后再装空白溶液测试，经洗涤可使透光率 的差异减小时，可通过多次洗涤使透光率一致。若经几次洗，仍然不一 致可如下校正：以透光率最大的比色皿为100%透光，测定其余各皿的透 光率，分别换算成吸收度作为各比色皿的校正值。测定溶液时，以上述 100%透光率的比色皿作空白，用其他各皿装溶液，测得吸收度值然后碱 去所用比色皿的校正值。
讲 解 提 纲
一、分光光度法的特点 二、可见分光光度法与紫外的区别 三、分光光度计测定物质含量的原理 四、工作曲线法测定芦丁含量 五、本次实验注意事项 六、仪器的操作
分光光度法的特点（包括紫外和可见） 分光光度法的特点（包括紫外和可见）
分光光度法与其他测定方法比较有这样一些特点 1、首先，它的应用广泛，在国际上发表的有关分析的论文 总数中，分光光度法占28%，我国约占所发表论文总数的 33%。 2、灵敏度高，由于新的显色剂大量合成，并在应用研究方 面取得了重要进展，使得测定物质的灵敏度提高。 3、选择性好，目前有些元素只要控制适当的显色条件就可 以直接进行光度法测定。 4、准确度高，浓度测量的相对误差在1～3%范围 5、分析成本低，操作简便快速。
芦丁的测定（标准曲线制备与芦丁测定一起完成） 芦丁的测定（标准曲线制备与芦丁测定一起完成）
精密移取芦丁标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml和样 品液3.0ml置10ml容量瓶中→各加30%乙醇使成5.0ml→各精 密加入亚硝酸钠溶液（1→20）0.3ml,摇匀，放置6分钟→各 加硝酸铝（1→20）0.3ml,摇匀，再放置6分钟。→各加氢氧 化钠试液4ml,用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15分钟。 在510nm波长下测定各瓶溶液的吸收度（以第一瓶作空白） 以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线。测定样 品的浓度。
分光光度计测定物质含量的原理： 分光光度计测定物质含量的原理： （紫外与可见基本相同） 均采用一个能产生多个波长的光源，通过系 列分光装置后产生特定波长的光源，光源透 过被测样品后，部分光源被吸收，计算样品 的吸光值，由比尔-朗白定律求得样品的浓度。
Байду номын сангаас
实验八 工作曲线法测定芦丁含量
可见分光光度法
一、实验目的 （1）掌握可见分光光度计的使用 （2）掌握光电比色的一般操作。 （3）学会用作图法及计算器回归 法求芦丁样品的浓度