豆粕中尿酶活性测定
脲酶快速检测方法(1)
大豆制品中尿素酶活性的测定方法
方法一尿素酶活性快速测定法——酚红法（粗略法）
1. 原理：尿素酶 +
尿素 氨气（用酚红作指示剂） 2.试剂
（1） 0.1N 氧化钠：称0.4g 氢氧化钠溶于100ml 水中。
（2） 0.1N 硫酸：将1.4ml 浓硫酸溶于l000ml 水中（先加水后加入硫酸） 3.尿素—酚红溶液：
0.14g 酚红溶于35ml 水中+7ml0.1N 氢氧化钠
混合 0.1N 硫酸滴定 琥珀色 21g 尿素溶于300ml 水中
方法：将一匙粉碎过的黄豆粕放入小玻皿中，将已调好的尿素——酚红溶液加入小玻皿中的豆粕上，直至完全锦湿，停留5min ，观察豆粕的红色反应。
稀硫酸0.2N
尿素—酚红试剂：将1.2g 酚红溶解于30ml0.2N 的氢氧化钠中，用蒸馏水将之稀释至约300ml,加入90g 尿素（分析纯）并溶解之，用蒸馏水稀释至2L ，加入14ml1.0N 硫酸或70ml0.2N 的硫酸；用蒸馏水稀释至最后体积3L ；溶液应具有明亮的琥珀色。
（过段时间溶液变为深桔红色，可滴入稀硫酸溶液搅拌之，直至溶液再次成为琥珀色。
方法：将一匙粉碎过的黄豆粕放入小玻皿中，将已调好的尿素——酚红溶液加入小玻皿中的豆粕上，直至完全锦湿，停留5min ，观察豆粕的红色反应。
溶液保质期最好3个月，最好一个月内用完。
尿酶活性度的简易鉴别法1
尿酶活性度的简易鉴别法尿素酶是一种人和动物胃肠道及泌尿道细菌感染中常见的酶，它既是人和动物中某些致病菌的致病因子之一，又是某些氮源性腐败物转化所必须具备的酶之一. 它是人类首次获得晶体并发现含有Ni离子的金属酶。
大豆饼粕是我国最常用的一种植物性蛋白质饲料，蛋白质含量42%～45%，可高达47%。
但未经热处理或热处理不彻底的大豆饼粕中含有对畜禽有害的抗胰蛋白酶、脲酶、血球凝集素、皂角苷、甲状腺肿诱发因子以及抗凝血因子等抗营养因子，其中抗胰蛋白酶的影响最大，可导致动物胰腺肿大、胆功能异常，影响饲料蛋白质的消化、利用，降低其生物学效价，进而影响畜禽的正常生长发育和生产性能，尤其是对肉仔鸡。
目前认为较好的大豆热处理方法是120℃高压处理15min或者105℃蒸煮30min。
若加热过渡，在灭活抗胰蛋白酶等抗营养因子的同时，也会破坏热敏氨基酸，特别是赖氨酸、精氨酸、大大降低大豆饼粕的消化率及生物学价值。
因此，加热程度不同，加工后大豆饼粕中有毒有害物质的含量不同，其营养价值和饲喂效果也不同。
测定抗胰蛋白酶活性，可直接反映大豆饼粕中抗营养因子水平及加热程度，但该法比较复杂，因此在生产中广泛采用间接的方法——测脲酶活性法。
脲酶活性与抗胰蛋白酶活性呈高度正相关，而且脲酶活性的测定方法与测定其他抗营养因子的方法相比较有简便、快速和经济的优点。
许多国家都制定了脲酶活性标准，我国规定：大豆粕的脲酶活性不得超过0.4。
（GB/T 8622—2006）方法一：一、原理通过在有苯酚红指示剂的情况下，大豆饼粕中含有的尿素酶将试剂中尿素转化成为氨气使样面呈碱性红色反应，作为变性测量。
苯酚红指示剂：PH1.2（橙）—3.0（黄），PH6.5（棕黄）—8.2（紫红）二、仪器：量筒、量杯、玻璃棒、培养皿、不锈钢勺、试剂瓶、滴瓶、烧杯、天平（适量为0.01g）。
三、试剂：1、0.1mol NaoH2、0.05mol H2SO43、尿素苯酚红溶液溶解0.14g 苯酚红于7ml0.1mol NaoH和35ml蒸馏水中，溶解21g尿素（分析纯）于300ml蒸馏水中。
大豆制品中尿素酶活性测定方法_1
大豆制品中尿素酶活性测定方法中华人民共和国专业标准蛋白酶活力测定法ZBX66030-87Measurementofproteinaseactivity本方法适用于酿造酱油时在制品菌种、成曲的蛋白酶活力测定。
1福林法试剂及溶液:以下试剂都为分析纯福林试剂(Folin试剂):于2000mL磨口回流装置内,加入钨酸钠(Na2WO4·2H2O)100g,钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)25g,蒸馏水700mL,85%磷酸50mL,浓盐酸100mL,文火回流10h。
取去冷凝器,加入硫酸锂(Li2SO4)50g,蒸馏水50mL,混匀,加入几滴液体溴,再煮沸15min,以驱逐残溴及除去颜色,溶液应呈黄色而非绿色。
若溶液仍有绿色,需要再加几滴溴液,再煮沸除去之。
冷却后,定容至1000mL,用细菌漏斗(No4～5)过滤,置于棕色瓶中保存。
此溶液使用时加2倍蒸馏水稀释。
即成已稀释的福林试剂。
碳酸钠溶液:称取无水碳酸钠(Na2CO3),定容至1000mL。
三氯乙酸(TCA)溶液:称取三氯乙酸(CCL3COOH),定容至1000mL。
磷酸盐缓冲液:称取磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O),定容至1000mL,即成溶液(A液)。
称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O),定容至1000mL,即成溶液(B液)。
取A液28mL和B液72mL,再用蒸馏水稀释1倍,即成的磷酸盐缓冲液。
2%酪蛋白溶液:准确称取干酪素2g,称准至,加入氢氧化钠10mL,在水浴中加热使溶解(必要时用小火加热煮沸),然后用磷酸盐缓冲液定容至100mL即成。
配制后应及时使用或放入冰箱内保存,否则极易繁殖细菌,引起变质。
100μg/mL酪氨酸溶液:精确称取在105℃烘箱中烘至恒重的酪氨酸,逐步加入6mL1N盐酸使溶解,用盐酸定容至100mL,其浓度为1000μg/mL,再吸取此液10mL,以盐酸定容至100mL,即配成100μg/mL的酪氨酸溶液。
大豆制品脲酶活性测定.
（5）计算 UA=pH(B管)-pH(A管)
2、滴定法 （1）原理： 将粉碎的大豆制品与中性尿素缓 冲溶液混合，在30℃保持30min后， 尿素酶催化尿素水解产生氨，用过 量的盐酸溶液中和氨，再用氢氧化 钠标准溶液回滴。
（2）脲酶活性定义 在30℃和pH＝7的条件下，每分 钟每克大豆制品分解尿素后，所释 放的氨态氮的毫克数。
（3）方法： 粉碎→称取0.05±0.001g→放入试 管→加入尿素0.2g、指示剂5滴→加 蒸馏水25mL→摇动10s→立即置于 30±0.5℃水浴锅→计时观察溶液变 红时间→5 min后取出试管，摇匀继 续观察
空白试验：不加尿素，其他同上。 品质判定：如果溶液为明显的粉红 色，则认为该大豆制品脲酶活性超 标，为不合格产品。 •0-1min变红，活性非常强（＞ 1.0）； •1-2min变红，活性大概0.5-1.0； • 2-5min变红，活性大概0.3-0.5。
高温、高湿、高压，粒度小，时间 长脲酶活性低。但是，加工过度， 一些氨基酸会被破坏。所以脲酶活 性过高（豆制品过生）或过低（豆 制品过熟）都表明豆制品质量较差。
三、测定原理： 脲酶活性测定实际上是在一定条件 下(pH=7.0，T=30℃)，测定每克试 样、每分钟分解尿素所产生的氨的 量。
脲酶 NH2CONH2→→2NH3↑+CO2
此时溶液应具有明亮的琥珀色； （过 段时间溶液会变为深橘红色， 可滴入稀硫酸溶液搅拌之，直至溶 液再次变为琥珀色）
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（3）方法： 将一满匙样品放入表面皿中， 摊平，将以调好的尿素-酚红试剂滴 入表面皿中的样品上，直至完全浸 湿，停留5min，观察样品的颜色反 应。 如果红斑面积多于20%，则认为 该样品脲酶活性超标，为不合格产 品。
发酵豆粕脲酶活性、胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原的测定研(精)
发酵豆粕脲酶活性、胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原的测定研究彭辉才1粱明振1’张宏福2(1广西大学动物科技学院,广西南宁530005;2北京畜牧兽医研究所营养学国家重点实验室, 北京海淀区100094摘要:豆粕中最主要的抗营养因子是胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原;本试验对8种发酵豆粕进行测定,前两者含量极低未检出。
用SDS-PAGE凝胶电泳定性检测大豆抗原中的B一伴大豆球蛋白(B--Conglycinin和大豆球蛋白(Glycinin,6种条带模糊,抗原消失,结果表明,生物发酵是一种有效的钝化抗营养因子的方法。
关健词:胰蛋白酶抑制因子凝集素13一伴大豆球蛋白大豆球蛋白测定发酵豆粕指是通过现代生物发酵技术对原料豆粕进行发酵处理后的产物。
发酵过程中可产生蛋白酶、非淀粉多糖酶和植酸酶等多种酶活,其目的就是消除抗营养因子,把大分子量的大豆蛋白质分解为多肽、寡肽、小肽,从而增加水溶性,提高消化率,利于动物消化吸收。
这些酶把纤维类物质分解为糖,部分糖被转化为乳酸,并产生大量有益微生物,使豆粕转化成高营养价值的功能性饲料。
发酵豆柏可替代日粮中血浆蛋白粉、鱼粉、肠膜蛋白和乳清粉等动物性饲料原料,可替代日粮中控制腹泻的预防性抗生素,大大降低生产成本,减少畜禽养殖对动物性饲料原料的依赖,杜绝动物性饲料原料所带来的疾病传播,提高养殖业的安全与效益。
大豆的抗营养因子有蛋白酶抑制因子(protease inhibitors,大豆凝集素(SBA、大豆抗原、非淀粉多糖(NSP、植酸(phytic acid、单宁、大豆寡糖、脲酶、.大豆异黄酮、大豆皂甙、致甲状腺肿因子、生氰糖甙等。
这些抗营养因子会导致人和动物胰腺肿大、过敏反应、生长缓慢、日粮养分利用率下降以及其他一些不良生理反应。
本试验测定起主要抗营养作用的胰蛋白酶抑制因子、凝集素及大豆抗原中的大豆球蛋白和B一伴大豆球蛋白。
1材料与方法1.1腮酶的测定脲酶活性测定参照国标GB8622--88执行。
豆粕脲酶活性相关资料
V：消耗氢氧化钠体积，ml。
滴定法（续）
操作方法
称取0.2000g试样，转入比色管中，加入10ml尿素缓冲液， 立即盖好盖子并剧烈摇动。置于30±0.5℃恒温水浴上准确保 持30min后立即加入10ml0.1mol/l盐酸，迅速冷却到20℃， 将比色管内容物全部转入烧杯，用水冲洗比色管2～3次，立 即用标准氢氧化钠溶液滴定至PH＝4.7。
大豆中脲酶活性测定
为什么要测定脲酶？
脲酶毒性
一般脲酶并没有毒性作用，但在一定温度和pH值条件下，生 大豆的脲酶遇水迅速将含氮化合物分解成氨，引起氨中毒。 大豆中的抗营养因子：胰蛋白酶抑制剂最重要
评估胰蛋白酶抑制剂活性
大豆饼粕中胰蛋白酶抑制剂抑制动物的生长和引起胰腺肥大。 而直接测定大豆饼粕中的胰蛋白酶抑制剂的活性比较困难、 耗时。脲酶和胰蛋白酶抑制剂在加热时有相近的速率变性， 并且脲酶对热的抵抗力比胰蛋白酶抑制剂强，又易于测定， 所以常用脲酶活性指标来判断大豆饼粕加热的程度和估计大 豆饼粕中胰蛋白酶抑制剂是否已经被破坏。
另取比色管做空白试验，加入10ml尿素缓冲液，10ml0.1 mol/l盐酸。称取与上述试样量相当的试样，迅速加入比色管中，
立即盖好比色管并剧烈摇动，在30±0.5℃恒温水浴上准确保 持30min，冷却到20℃，将比色管内容物全部转入烧杯，用 水冲洗比色管2～3次，用标准氢氧化钠溶液滴定至PH＝4.7。
滴定法（续）
仪器与器皿 pH计 恒温水浴 比色管 10ml移液管
滴定法（续）
试剂
尿素：分析纯 尿素缓冲液：4.45g磷酸氢二钠和3.40g磷酸二氢钾溶于水并
稀释至1000ml，再将30g尿素溶于此缓冲液中。 0.1mol/l盐酸 0.1mol/l氢氧化钠标准溶液
质检豆粕总结(3篇)
质检豆粕总结第1篇豆粕中存在着许多抗营养因子，如胰蛋白酶_、低聚糖、大豆凝血素、植酸、脲酶、大豆抗原蛋白(致敏因子)及致甲状腺肿素等，这些抗营养因子不仅影响饲料的适口性，还会影响饲料的营养价值和动物的物质消化吸收以及体内的一些生理过程，严重影响了动物的健康和生产性能。
通常检测豆粕品质的方法有以下几种：1.尿素酶活性(UA)测定法UA测定法是用于测定大豆中脲酶活性的方法，也是测定豆粕中胰蛋白酶_的间接方法，是评定大豆粕的加工程度是否适当及营养品质优劣的传统方法。
将粉碎的大豆粕与中性尿素缓冲溶液混合，在30±℃温度下保持30min，尿素酶催化尿素水解产生氨，在中性条件下用过量的盐酸中和氨，再用氢氧化钠回滴，计算出每分钟每克大豆粕释放氨态氮的毫克数来表示尿素酶的活性(UA)。
通常认为豆粕中脲酶活性越低，豆粕的营养价值就越高，但如果加热过度又会引起氨基酸的被破坏。
2.蛋白溶解度(PS)测定法此方法被认为是一项优于UA测定方法的评估大豆加工过度与加工不足的最佳方法。
方法主要是用氢氧化钾溶解豆粕，测定其中的蛋白含量占未用氢氧化钾处理的豆粕中的蛋白含量的百分比，来表示蛋白溶解度。
其原理是：加热使游离氨基酸与其他化合物的基团形成不能为消化酶所打开的分子间和分子内的结合键，因而降低了蛋白质的溶解。
一般情况下蛋白溶解度低于70%的豆粕营养价值已受到破坏，低于65%几乎可以肯定豆粕加热过度，严重过熟，致使蛋白的消化利用率会非常低。
近年来由于加工技术的改进，PS有增高的趋势。
有研究表明，豆粕蛋白在氢氧化钾溶液中的溶解度和脲酶活性呈正相关。
3.营养成分检测评定根据我国国家标准GB/T19541-2004，饲料用大豆粕的质量标准及分级标准主要以粗蛋白、粗纤维、粗灰分为质量指标，按含量分为三级。
三级大豆粕质量指标必须全部符合相应等级规定，二级饲用大豆粕为中等质量指标，低于三级者为等外品。
测定豆粕各项营养成分是评定豆粕营养价值的重要方法。
大豆制品尿素酶活性测定的影响因素
在 豆粕 中含有 一种 酶 叫 尿素 酶 ， 是 豆 粕 中含 它
有的几种天然酶类之一 ， 在许多高等植物 中都含有
尿 素酶 ， 特别是 胡 芦科 和 豆科 植 物 中含量 很 高 。判 断 豆粕加 热程 度的 主要 指标 是 尿素 酶 活性 ， 尿素 酶 本 身无 营养意义 ， 但它 与抗胰 蛋 白酶 的含量 接 近 ， 而
１ ６ 结 果表 述 ．
１样品 ， 分别称取 ０ １ 、． ０ｇ ． ０ｇ ０ ２ 、
０ ４ 、． ０ｇ０ ８ ． ０ｇ ０ ６ 、． ０ｇ五组 试 样 于 三 角 瓶 内 ， 每组
３ ０ 仿工业实验磨 ， ０ ８ｍｍ筛网；Ｆ Ｄ １０ 配 ． Ｊ Ｓ 一
＊ 收 稿 日期 ： ０ ２ ０ — ２ ２１－ ４ ８
匀 。置于（０ ． ℃） ３ ±０ ５ 空气摇床中， 计时 。隔 ５ｍ ｎ ｉ 放人第二个与此相同的三角瓶做平行试验 。
１４３ 称 取试样 ０ ２０ ， 入 另一 三 角瓶 中 ， ．． ． ００ｇ 放 加 １ ＯｍＬ磷 酸缓冲液 ， 好 橡 胶 塞 ， 匀 ， 为空 白试 塞 摇 作 验， 与前 一个 三角 瓶 间 隔 ５ｍｉ 于 同一 空 气摇 床 ｎ置 中 。隔 ５ｍｉ ｎ放入第 二 个与 此相 同 的三 角瓶 做空 白
平 行试 验 。
高。因此 ， 尿酶活性用来作为豆粕加热是否偏生的
间接估 测指 标 ， 有重要 意义 。 具 本 文分 别从样 品称样 量 、 粉碎 后样 品放 置时 间 、 粉碎 粒度 三方 面 ， 研究 其 在 豆 粕 尿 素 酶活 性 测 定 上
的影 响 。 １ 材 料 与 方 法
・
４ ・ ６
粮 油仓储 科技 通讯 ２ １ （） ０ ２４
大豆制品中尿素酶活性的两种快速检测法
大豆制品中尿素酶活性的两种快速检测法饲料公司酚红法1原理酚红指示剂在pH6.4~8.2时由黄变红，大豆制品中所含的尿素酶，在室温下可将尿素水解产生氨。
释放的氨可使酚红指示剂变红，根据变红的时间长短来判断尿素酶活性的大小。
2仪器和试剂2.1粉碎装置粉碎时应不产生强烈发热（如研钵、球磨机）；2.2天平感量0.01 g；2.3 试管直径18 mm，150 mm；2.4尿素；2.5酚红试剂1g/L乙醇溶液。
3测定步骤将试样研细，称取0.02 g试样，称准至0.01 g，转入试管中。
加入0.02 g结晶尿素及2滴酚红指示剂，加20~30 mL蒸馏水，摇动10 s。
观察溶液颜色，并记下呈粉红色的时间。
4尿素酶活性的测定结果表示1 min内呈粉红色为：活性很强；1~5 min内呈粉红色为：活性强；5~15 min内呈粉红色为：有点活性；15~30 min内呈粉红色为：没有活性。
注：通常，10 min以上不显粉红色或红色的大豆制品，其尿素酶活性即认为合格。
饲料公司pH-增值法本法是美国、日本和前苏联等国常用方法。
尿素水解释放的氨是碱性的，可使溶液pH值升高。
试样反应30 min后，与空白溶液的pH之差数，可间接用来表示氨量的多少。
1. 仪器设备1.1 恒温水浴须能保持温度于30℃±0.5℃；1.2 酸度计（pH计）具有玻璃电极、甘汞电极、可测试5 mL 的溶液。
此为一种精密仪器，须装有温度补正器，其敏感度应为±0.02 pH单位或更佳。
仪器操作及pH值测定均应依照制造商的说明，该pH计应在测定前以标准缓冲液加以校正。
1.2试管20 mm×150 mm并配有橡皮塞。
2. 试剂2.1 取0.05 mol/L磷酸盐缓冲液溶解3.403 g磷酸二氢钾（KH2PO4）于约100 mL新蒸馏水中，溶解4.335 g磷酸氢二钾（K2HPO4）于约100 mL的蒸馏水中，然后将此两种溶液合并配成1000 mL。
大豆制品脲酶活性测定解读
样品粉碎：至少60%通过400微米 试验筛。 （4）操作步骤 准确称取0.400±0.00lg样品2份， 分别置于2支试管中。一支试管加入 20mL磷酸缓冲液，作为空白试验（A 管），另一支加入20mL尿素缓冲液 （B管）。
盖塞混匀，在30℃恒温水浴中准 确保持30min。在此期间，每隔5min 摇匀一次。取出立即在流水中冷却， 5min内测定溶液pH值。
（4）注意事项： • 1.对于样品较粗、具有大块状的样品， 最好将其稍微粉碎，亦不可太细， 否则不容易观察； • 2.样品一定要铺平，容易观察； • 3.溶液保质期为3个月，最好1个月内 用完； • 4.此方法容易受颗粒度影响。
（二）定量法 1、 pH增值法 （1）原理： 脲酶水解尿素产生氨，使溶液的 pH值升高，通过测定样品溶液的pH 值和空白的pH值之差来计算脲酶的 活性。脲酶活性定义为：在30℃和 pH=7的条件下，每分钟每克大豆制 品分解尿素后所释放的氨态氮的毫 升数。
高温、高湿、高压，粒度小，时间 长脲酶活性低。但是，加工过度， 一些氨基酸会被豆制品质量较差。
三、测定原理： 脲酶活性测定实际上是在一定条件 下(pH=7.0，T=30℃)，测定每克试 样、每分钟分解尿素所产生的氨的 量。
脲酶 NH2CONH2→→2NH3↑+CO2
（5）计算 UA=pH(B管)-pH(A管)
2、滴定法 （1）原理： 将粉碎的大豆制品与中性尿素缓 冲溶液混合，在30℃保持30min后， 尿素酶催化尿素水解产生氨，用过 量的盐酸溶液中和氨，再用氢氧化 钠标准溶液回滴。
（2）脲酶活性定义 在30℃和pH＝7的条件下，每分 钟每克大豆制品分解尿素后，所释 放的氨态氮的毫克数。
（3）方法： 粉碎→称取0.05±0.001g→放入试 管→加入尿素0.2g、指示剂5滴→加 蒸馏水25mL→摇动10s→立即置于 30±0.5℃水浴锅→计时观察溶液变 红时间→5 min后取出试管，摇匀继 续观察
豆粕尿素酶快速检验法
豆粕尿素酶快速检验法-酚红法一、原理酚红指示剂在PH6.4~8.2时由黄变红，大豆制品中所含的尿素酶，在室温下可将尿素水解产生氨，释放的氨可使酚红指示剂变红，根据变红的时间长短来判断尿素酶活性的大小。
二、试剂1、尿素：AR2、酚红：0.1%乙醇(70%)溶液三、步骤称取0.2g试样（称准至0.01g）转入试管中，加入0.02g结晶尿素及两滴酚红指示剂，加20—30mL蒸馏水，摇动10S，观察颜色，并记下呈粉红色的时间。
2、1min内呈粉红色为活性很强，说明加热不够，不可接受这种原料，过生。
3、1—5 min内呈粉红色为活性强。
4、5—15 min内呈粉红色为有点活性，豆粕可用。
5、15—30min内呈粉红色为没有活性，豆粕过熟，营养损失严重，蛋白质量下降（一般在1—10 min内观察）通常10min以上不显粉红色或红色的大豆制品，其尿素酶活性即认为丧失。
附：尿素酶活性与呈色时间对照表油脂分析方法一、酸价的测定（GB 5530—85）酸价（酸值）是指中和1.0g油脂所含游离脂肪酸所需氢氧化钾的毫克数。
同一油脂，酸价高，表明油脂因水解而产生的游离脂肪酸多。
可直接说明油脂的新鲜度和质量的优劣。
1、原理油脂中的游离脂肪酸与氢氧化钾产生中和反应，从氢氧化钾标准溶液消耗量，可计算出游离脂肪酸的量。
RCOOH+KOH RCOOK+H2O2、试剂1．中性乙醚—乙醇（2∶1）混合溶液，临用前用0.1mol/L氢氧化钾溶液中和至微红色。
2．1%酚酞乙醇指示剂溶液。
3．0.1mol/L氢氧化钾标准溶液。
3、操作步骤准确称取试样3~5g置于锥形瓶中，加入混合溶液50mL，振摇溶解（必要时可水浴温热），加入3~4滴1%酚酞乙醇指示剂，用0.1mol/L氢氧化钾标准溶液滴定至淡红色且在30s内不褪色为终点，记下消耗的碱液毫升数。
4、计算酸价（mgKOH/g）=C×V×56.1÷m游离脂肪酸含量FFA%=C×V×M÷m式中c—氢氧化钾标准溶液的浓度，mol/L；V—消耗氢氧化钾标准溶液的体积，mL；56.1—与1mL1mol/L氢氧化钾标准溶液相当的脂肪酸的质量，mg；m—样品的质量，g。
豆粕质量与尿酶活性和蛋白溶解度
豆粕质量与尿酶活性和蛋白溶解度沈慧乐杨秀文引 言大豆蛋白是家禽日粮中最为重要的，也是质量最好的植物蛋白饲料，除蛋氨酸略缺乏外，其它各种氨基酸都接近理想平衡。
如同其它蛋白质饲料一样，豆粕质量受各种营养素含量的影响，如能量、蛋白质、纤维素和氨基酸等，例如普通豆粕与去皮豆粕间在以上指标方面就有很大的差别（见表1）。
去皮豆粕由于纤维素含量低而有较高的能量水平。
但是蛋白质水平高的豆粕不一定保证低纤维和高能量水平，例如某些未去皮中国豆粕的蛋白质含量可高达48%甚至50%，而仍然含有6%至7%的纤维素。
因此高蛋白水平豆粕的代谢能水平仍然可能因纤维素含量高而下降，尚未见到这些高蛋白质“高纤维素”豆粕的代谢能测定值。
但一般可以估计：在去皮豆粕纤维素正常含量3.5%以上时，每增加1%纤维素使每公斤猪饲料的代谢能下降32至42大卡，而每公斤禽饲料则下降将近60大卡。
另一方面，豆粕质量在很大程度上受加工方面问题的影响而使它的氨基酸含量和氨基酸消化率以致于能量受到影响。
本文主要讨论由加工不足或加热过度所引起的豆粕质量变异以及对生产性能的影响，同时介绍目前可行的鉴定豆粕质量的方法—尿酶活性（pH变化值）与0.2%氢氧化钾蛋白溶解度，并加以评估。
一、生大豆——抗胰蛋白酶与尿酶众所周知，豆粕必须经过适度热加工以破坏大豆中所含的数种抗营养物质。
其中对畜禽影响最大者为抗胰蛋白酶（Tripsin Inhibitor），有幸的是这些抗营养因子在加热后都会遭到破坏。
适度加热是豆粕加工的关键，因为加热不足或过度都会降低豆粕的营养价值。
抗胰蛋白酶是生大豆中的一种蛋白酶抑制物，它在消化道内能使胰蛋白酶和凝乳酶失活，从而降低蛋白质的消化率，并引起胰脏代偿性增大，由于胰酶富含硫氨基酸，因此，大量分泌消化酶可能加剧大豆蛋白含硫氨基酸的缺乏现象。
抗胰蛋白酶的测定方法很耗时也很昂贵，因此需要寻找一种简易而快速的测定方法。
生大豆中含不等量尿酶（Urease）。
C08大豆粕尿素酶检测方法md
粉碎机
孔径0.45mm（40目）
2
分析天平
感量0.0001g。
4
PH计
带有甘汞电极,准确度在+0.02PH值范围之内
试剂
序号
试剂名称
规格
序号
试剂名称
规格
1
尿素
分析纯
3
磷酸二氢钾
分析纯
2
分析纯
4
磷酸氢二钾
分析纯
注：1.0.05M磷酸盐缓冲液：取分析纯KH2PO43.403g溶于蒸馏水，再取分析纯
K2HPO44.355g溶于蒸馏水，将这两种溶液的混合液后定容至1000ML，用酸(或碱)溶液调节PH值至7.0（调节时最好用PH计调节）。该缓冲液有效期90天。
1适用范围:适用于由大豆制得的产品和副产品中尿素酶活性的测定。
2引用标准：AOCS Ba 9-58《脲酶活性》
3方法原理：试样与缓冲尿素溶液反应，使试样中的尿素酶分解尿素，释放出氨基氮，测定溶液的PH值，以PH值得增量表示。
4检验方法
ห้องสมุดไป่ตู้4.1试剂仪器
仪器
序号
仪器名称
规格
序号
仪器名称
规格
1
烧杯
100ml
2.尿素缓冲液：取分析纯尿素15克，溶于磷酸盐缓冲液500ML。调整该溶液的PH值至7.0。
4.2试样制备：取具有代表性的试样，粉碎至40目。用四分法缩减至200g，装于密封容器。防止试样的成分变化或变质。
4.3分析步骤：
将试样粉碎到至少60%过40目筛(0.45mm以下)，分别称取两份0.800克的样品于2个烧杯中，其中一个加40ml尿素缓冲液，另一个加入40ml磷酸盐缓冲液做空白试验；摇匀后放入30±0.5℃的恒温水浴锅槽中，每5分钟摇匀一次，反应30分钟后，在5分钟内测定两个试管中溶液的PH值。
大豆中尿酶活性的测定原理
大豆中尿酶活性的测定原理
大豆中尿酶活性的测定原理基于尿酶催化尿素分解产生氨和二氧化碳的反应。
其测定步骤如下：
1.取适量大豆样品，加入磷酸盐缓冲液中，使其均匀混合。
2.分别加入尿素和尿酰酸，使其与大豆中的尿酶反应。
3.等待一定时间后，加入酚和氯化铁，使其产生褐色化合物，然后用紫外光谱仪测量其吸光度。
4.根据标准曲线计算大豆中尿酶的活性。
其中，尿酸的浓度会随着尿酶的活性增加而降低，而产生的氨和二氧化碳则随同反应中的尿酶一同释放出来。
通过相应的化学反应，可以将其转化为吸光度可测量的化合物，最终得到尿酶的活性值。
豆粕中尿素酶活性检测的意义及检测方法探讨
养 因子 是 指 植物 代 谢 产 生 的并 以不 同机 制 素 酶 活 性 降 低 甚 至 失 活 ， 且 尿 素 酶 活 性 而 （） １国家标 准方 法（ Ｂ ６ ２ ２ ０ ） Ｇ ８２ － ０ ６ 所 对 动物 产 生 抗 营 养 作 用 物 质 的 总 称 ， 抗 相 对 于 抗 胰 蛋 白 酶 因 子 也 便 于 测 定 ， 以 如 本法 是 将 尿 素 酶 活 性 定 义 为在 ３ ℃ ± Ｏ 胰 蛋 白酶 因子 、 维生 素 因子 等 ， 中 以抗 通 常采 用 测 定 尿素 酶活 性 的 方法 来 作 为 评 ０ ５ Ｆ Ｈ７ 抗 其 ． ℃￣ｐ 的情 况 下 ， 克 大 豆 制 品每 分 Ｉ 每 胰 蛋 白 酶 因 子 对 动 物 影 响 最 为 主 要 ， 胰 定大 豆 粕 加 工 程 度是 否 适 当 及营 养 品 质 的 钟 分 解 尿 素 所 释 放 的 氨 基 氮 的 质 量 。 测 抗 其
１豆粕 中尿素酶活性检测的意义
众 所 周知 ， 豆 含 有 较丰 富的 蛋 白质 、 大
过 程 是 一 步 非 常 关 键 的 工 艺 ， 度 加 热 不 Ｔｌ ５ ｌ ２ ０ 《 适 ９ ４ 一 ０ ４ 饲料 用大 豆粕 》 ， 定 了豆 中 规 仅 可 使 大 豆 中 的 蛋 白质 变 性 ， 高 氨 基 酸 粕的感 官性状 、 提 夹杂 物要求 外 ， 还规 定 了豆 粕 白质 、 分和粗 纤维 来分等 级 ， 水 还需 要通过 测 定氢氧化钾 蛋 白质溶解 度和尿素酶 活性（ ． ≤０
脂 肪 、 水化 合物 等 营 养 成分 ， 碳 是饲 料 生 产 的 消 化 率 ， 可 使 大部 分 热 不 稳 定 抗 营 养 技术指标及 质量分 级标 准 ， 又 不仅主要依据粗 蛋
脲酶活性&蛋白溶解度测定方法
出口大豆饼粕脲酶活性测定方法pH增值法、盐酸中和法1.适用范围本方法适用于大豆饼粕类脲酶活性的测定。
2.方法一2.1.术语脲酶活性：在规定的操作条件下，使试样中的脲酶分解尿素释放出氨基氮，以溶液pH值的变量表示。
2.2.原理概要将研细的试样与缓冲尿素溶液混合，在30℃作用30min后，测定溶液的pH值。
2.3.主要试剂和仪器2.3.1.主要试剂磷酸缓冲溶液：将3.403g KH2PO4和4.355g K2HPO4溶解并稀释至1000mL。
临用前，以强酸或强碱调节其pH至7.0，其使用期限不超过90d；缓冲的尿素溶液：溶15g尿素（NH2CONH2）于500mL磷酸缓冲溶液中。
加入5mL甲苯，用于防腐和防止霉菌生长。
按上法调节其pH至7.0。
2.3.2.仪器分析天平：感量0.1mg；研磨器：易于清理，研磨过程中不发热，并能达到要求的磨粉细度；恒温水浴：能控制于30±0.5℃；pH计：备有玻璃电极和甘汞电极，灵敏度不低于±0.02pH单位，同时附有温度补偿；试管：直径22mm，长150mm，具橡胶塞；烧杯：容量10mL；单刻度移液管：10mL；精密计时器；标准筛。
2.4.试样的制备用研磨器将约10g的样品，在不升高温度的条件下尽可能研细，使其通过60目标准筛的量不少于60％。
收集全部磨碎物于广口瓶中，小心混合并立即进行分析。
2.5.过程简述准确称取试样0.200g，放入试管内，加10mL缓冲的尿素溶液，塞好橡胶塞，混匀。
置于30±0.5℃水浴中，记下时间。
隔5min放入第二个与此相同的试管作重复试验。
另称试样0.200g，放另一试管内，加10mL磷酸缓冲溶液，塞好橡胶塞，混匀，作为空白试验。
与上管间隔5min置于同一水浴中。
在消化过程中，每隔5min将试管内容物都摇匀一次。
每个试管都在消化30min后，从水浴中取出，倒出上清液于小烧杯中。
并在从水浴中取出后恰好5min时，测定pH 值读数。
豆粕尿素酶活性的测定
豆粕中尿素酶活性的测定（PH差值法）1.参考标准无1.适用范围适用于用PH增值法测定豆粕中脲酶活性的方法。
2.原理豆粕中的脲酶可以使用尿素分解产生氨，使体系中pH增加，用pH计测定pH 变化，以判断脲酶活性。
3.仪器和工具4.1粉碎机4.2可调节温度的恒温水浴锅4.3酸度计：精确至0.014.4碘瓶：50ml4.5天平：感量0.01g4.6天平：感量0.1g4.7秒表4.试剂5.1磷酸二氢钾（KH2PO4）5.2磷酸氢二钾（K2HPO4）5.3 50%磷酸二氢钾溶液5.4 50%磷酸氢二钾溶液5.5 尿素[CO(NH2)2 ]5.6 pH7.00磷酸缓冲液：用天平（4.6）称取磷酸二氢钾（5.1）17.1g溶于100ml蒸馏水，再称取烘干的磷酸氢二钾(5.2)21.7g于100ml蒸馏水，将这两种溶液的混合液共配制5000ml。
并用酸度计(4.3)调节pH值，pH小于7.00时，加入少量50%磷酸氢二钾溶液（5.4），当pH大于7.00时，加入少量50%磷酸二氢钾溶液(5.3)，最终使得缓冲液的pH为7.00(±0.01)。
5.7 pH7.00尿素缓冲液：用天平（4.6）称取尿素（5.5）150.0g，溶于5000ml磷酸缓冲液（5.6）中。
并用酸度计(4.3)调节pH值，pH小于7.00时，加入少量50%磷酸氢二钾溶液（5.4），当pH大于7.00时，加入少量磷酸二氢钾溶液(5.3)，最终使得缓冲液的pH为7.00(±0.01)。
5.操作步骤用粉碎机（4.1）粉碎样品，用天平（4.5）分别称取三份样品约0.80g（±0.02g）的样品于3个50ml的碘瓶（4.4）中，其中两个加40ml尿素缓冲液（5.7），另一个加入40ml磷酸缓冲液(5.6)（空白），塞上塞子，摇匀后放入30℃（±1℃）的恒温水浴锅中，用秒表(4.7)准确计时，每10分钟摇匀一次，反应30分钟后，在5分钟内用酸度计(4.3)测定pH值。
大豆中脲酶活性的测定
c.试剂：尿素 磷酸氢二钠 磷酸二氢钾 尿素缓冲液（PH6.9至7.0） 4.45克磷酸 氢二钠和3.40克的磷酸二氢钾溶于水并稀 释至1000ml，再将30克尿素溶于此缓冲 液中。 盐酸 氢氧化钠 0.1mol/L标准溶液
操作方法
称取0.2克已粉碎的样品，转入试管中， 加入10ml的尿素缓冲液，立即盖好试管并剧烈 振动，马上置于30℃的恒温水浴中，准确计时 保持30分钟。然后加入10ml0.1mol/L盐酸溶液， 迅速冷却到20℃，将试管内容物全部转入烧杯， 用5ml水冲洗试管2－3次，立即用标准氢氧化 钾标准液滴定至PH=4.70。 另取试管作为空白管，加入10ml的尿素缓 冲液，然后加入10ml0.1mol/L盐酸溶液。称取 与上述试样量相当的试样，迅速加入此试管中， 立即盖好试管并剧烈振动，马上置于30℃的恒 温水浴中，准确计时保持30分钟，冷却到20℃， 将试管内容物全部转入烧杯，用5ml水冲洗试 管2－3次，立即用标准氢氧化钾标准液滴定至 PH=4.70。
快速测定方法2
在培养皿上放入少量的豆饼粕，在样品上 滴入少量指示剂并搅拌，将其平铺于培养皿中， 放置5min后观察结果。 无任何红点出现，再放置25min仍然无红点出 现，说明豆粕过熟； 有少量红点出现，说明脲酶活性较低，豆粕可 用； 样品表面有25％被红点覆盖，豆粕可用； 样品表面有50％被红点覆盖，应慎用； 样品表面有75％－100％被红点覆盖，脲酶活 性过高，豆粕过生，不可用；
4.操作步骤
准确称取0.4克样品2份，分别置于2支试
管中。一支试管加（A管），另一支加入20ml尿素缓冲
液（B管）。盖塞混匀，在30℃恒温水浴中准
确保持30min。在此期间，每隔5min摇匀一次。
取出立即在流水中冷却，5min内测定溶液的
饲料成分分析实验：快速估测尿酶活性法
快速估测尿酶活性法（可选择方法一）目的：在有指示剂酚红存在的条件下，豆粕（饼）中的尿素酶活性可按尿素转变成氨的方法定性测定。
方法一：仪器及试剂1.培养皿2.稀硫酸（H2SO4）0.2N或更稀些，带滴管。
3.尿素—酚红试剂。
将1.2克酚红溶解于30ml0.2N的NaOH中，用蒸馏水将之稀释至约300ml，加入90g尿素并溶解之，用蒸馏水稀释至2l，加入14ml 1.0N的H2SO4或70ml o.2N的H2SO4，用蒸馏水稀释至最后体积3l，溶液应具明亮的琥珀色。
测定步骤1.在一个150ml的烧杯中倒入少量试剂，注意溶液必须呈明亮的琥珀色。
若溶液已转变为深桔红色，滴人稀硫酸深液并搅拌之，直至溶液再度呈境拍色。
2.量一场匙粉碎很好的豆饼粉，放置于培养皿中。
3.在样品上加入两场匙试剂，轻轻搅拌，将样品平铺于培养皿中。
若仍有干豆饼斑点，则再加入试剂，直至将豆饼浸湿。
4.放置5分钟后观察：a.没有任何红点出现：再任其放置25分钟，若仍无红点出现，说明豆饼过熟。
b.少量红点：少量尿素酶活性，豆饼可用。
c.豆饼表面约有25％为红点覆盖：少量尿素酶活性；豆饼可用。
d.豆饼表面约有50％为红点覆盖：有尿素酶活性。
e.豆饼表面的75％－100％为红点覆盖：尿素酶活性很高，不应接受这种原料，因为豆饼过生。
方法二：仪器与试剂1.粉碎装置（不强烈发热）2.天平：感量1%3.试管：直径18mm，长180mm4.尿素：分析纯5.酚红：分析纯0.1%乙醇（20%）溶液测定步骤将所测试样研细，称去0.02g，转移到试管中，加入0.02g结晶尿素及两滴酚红指示剂，加之20—30ml蒸馏水，摇动10s。
观察溶液颜色，并记录呈粉红色时间。
尿酶活性结果表示：1min内呈粉红色为——活性很强1~5min内呈粉红色为——活性强5~15min内呈粉红色为——有点活性15~30min内呈粉红色为——没有活性一般在10min以上不显粉红色，尿酶活性合格，30min以上不变色说明加热过度；10min内显粉红色说明加热不足，1min内呈粉红色说明过生。
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豆粕中酶活性测定
尿酶(Urease)：生大豆中含不等量尿酶，尿酶本身无营养意义，但是它与抗胰蛋白酶含量接近，而且遇热失活的程度与抗胰蛋白酶相似，因此以尿酶活性用作豆粕加工适宜度的简单估测指标。
但是加工适宜度不仅取决于畜种、年龄和畜禽阶段，也取决于大豆品种及储存状况。
严寒损伤的大豆储存6个月以上，则抗胰蛋白酶含量会增加，但是未受损伤的大豆就没有这种现象。
附录A大豆制品中尿素酶活性测定方法
GB/T 8622-1988
A.1 适用范围
本标准适用于由大豆制得的产品和副产品中尿酶活性的测定。
本法可确认大豆的湿热处理程度。
A.2 定义
本标准所指尿素酶活性定义如下：
在(30±0.5)℃和pH7的条件下，每分钟每克大豆制品分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。
A.3 原理
将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30min，尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。
用过量盐酸中和所产生的氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴。
A.4 仪器设备
A.4.1 样品筛：孔径200mm;
A.4.2 酸度计：精度0.02pH，附有磁力搅拌器和滴定装置;
A.4.3 恒温水浴：可控温(30±0.5)℃;
A.4.4 试管：直径18mm，长150mm，有磨口塞子;
A.4.5 精密计时器;
A.4.6 粉碎机：粉碎时应不生强热(例如球磨机)
A.4.7 分析天平：感量0.0001g;
A.4.8 移液管：10mL。
A.5 试剂和溶液
A.5.1 尿素：分析纯;
A.5.2 磷酸氢二钠：分析纯;
A.5.3 磷酸二氢钾：分析纯;
A.5.4 尿素缓冲溶液(pH6.9至7.0)：4.45g磷酸氢二钠和3.40g磷酸二氢钾溶于水并稀释至1000mL，再将30g尿素溶在此缓冲溶液中，可保存1个月。
A.5.5 盐酸：分析纯，c(HCL)=0.1mol/L溶液;
A.5.6 氢氧化钠：分析纯，c(NaOH)=0.1mol/L标准溶液。
A.6 试样的制备
用粉碎机将10g试样粉碎，使之全部通过样品筛。
对特殊试样(水分或挥发物含量较高而无法粉碎的产品)应先在实验室温度下进行预干燥，再进行粉碎，当计算结果时应将干燥失重计算在内。
A.7 测定步骤
称取约0.2g已粉碎的试样，称准至0.1mg，转入试管中(如活性很高只称0.05g试样),移
入10mL尿素缓冲溶液，立即盖好试管并剧烈摇动，马上置于(30±0.5)℃恒温水浴中，准确计时保持30min。
即刻移入10mL盐酸溶液，迅速冷却到20℃。
将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次，立即用氢氧化钠标准溶液滴定至pH4.70。
另取试管作空白试验，移入10mL尿素缓冲液，10mL盐酸溶液。
称取与上述试样量相当的试样，也称准至0.1mg，迅速加入此试管中。
立即盖好试管并剧烈摇动。
将试管置于(30±0.5)℃的恒温水浴，同样准确保持30min，冷却至20℃，将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次，并用氢氧化钠标准溶液滴定至pH4.70。
A.8 测定结果的计算
A.8.1 计算方法
以每分钟每克大豆制品释放氮的毫克量表示的尿素酶活性U，按下式计算：
14×c(V0-V)
30×m
U=
式中：c ——氢氧化钠标准溶液浓度，mol/L;
V0 ——空白试验消耗氢氧化钠溶液体积，mL;
V ——测定试样消耗氢氧化钠溶液体积，mL;
m ——试样质量，g。
注：若试样经粉碎前的预干燥处理时，则
14×c(V0-V)
30×m
U= ×(1-S)
式中：S——预干燥时试样失重的百分率。
A.8.2 重复性
同一分析人员用相同方法，同时或连续两次测定结果之差不超过平均值的10%，以其算术平均值报告结果。
附录 B 大豆制品中尿素酶活性快速检验
将1份尿素、5份水，10份豆粉或豆粕置于小塑料袋中，封口30秒，如豆粕中有尿酶存在，它会将尿素转化为氨，打开袋口可闻到氨气，正常豆粕无气味。
附录 C 大豆制品中尿素酶活性酚红法检测
取约0.02g粉碎好的试样,放入试管中,加5mL水、0.02g尿素和2滴0.1%的酚红乙醇(20%)溶液,振摇10秒。
观察溶，液颜色并记录时间。
1min内变粉红色，酶活很强;1～5min 变色，活性强;5～15min，略有活性;15～30min，无活性;10min不变色者，合格。