不规则抗体筛查标准操作规程
不规则抗体筛检质控品SOP
不规则抗体筛检质控品标准操作程序（SOP）一、用途本试剂盒用于长春博迅生物技术有限责任生产的抗人球蛋白检测卡（12卡/盒）、不规则抗体检测试剂（人血红细胞）（4%，5ml/瓶）进行的不规则抗体筛检实验的室内质量控制。
二、准备工作1、将质控品从冰箱取出后平衡至室温。
2、观察检测卡外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡平衡至室温（18－25℃），再用专用离心机离心5分钟。
三、操作步骤1、将抗人球蛋白检测卡做好标记；2、将不规则抗体检测试剂（人血红细胞）用低离子强度盐溶液稀释到细胞浓度为0.8%；3、将0.8%的红细胞按照Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ顺序加到抗人球蛋白检测卡1~3管和4~6管中，50μl/管。
4、分别在前3管加入样本1，后3管加入样本2，50μl/管。
5、将检测卡置37℃孵育器中15分钟。
6、即刻使用专用离心机离心5分钟（900 rpm 2分钟，1500 rpm 3分钟），取出，肉眼判定结果。
结果判定：1、本产品为非定值质控品，格局表中所提供的结果仅为定性结果，因此建议各实验室对每批号的产品自行建立相应的参考值。
2、抗体筛检：室内质控品按阳性(样本2)、阴性(样本1)设计，阳性质控品含有已知其特异性的不规则抗体，阴性质控品不含有不规则抗体。
3、质控品检测结束后，用户可将检测结果与参考值进行比较，阳性质控结果与预期结果比较出现超过1+凝集强度的差异，或阴性质控出现阳性结果时，均视为失控。
失控后要分析查找原因，必要时重复实验，确认失控原因消除后开展正常检测工作。
质控品抗A 抗B 不规则抗体样本1 + + 0样本2 0 0 +“0”代表阴性，“+” 代表阳性。
特异性及效价：O血清：与A1、B型红细胞均发生凝集，与O型红细胞不发生凝集，与O型RhD(+)红细胞间接抗人球蛋白试验呈阴性，无溶血及其他不易分辨现象；O血清与A1型红细胞反应，效价≥8，与B型红细胞反应，效价≥8。
AB血清(含IgG型抗D抗体)：与A1、B、O型红细胞均不发生凝集，与O型RhD(+)红细胞间接抗人球蛋白试验呈阳性，无溶血及其他不易分辨现象；试管抗人球法效价为2~8；微柱凝胶法效价为4~16。
BIOVUE不规则抗体筛选操作规程
BioVue不规则抗体筛查操作规程一、项目名称、检验方法名称1．项目名称：不规则抗体筛查2．检验方法名称：柱凝集二、方法学原理该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。
具有已知抗原的人红细胞将与血浆中相应的抗体发生凝集反应，BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。
将试剂卡离心后，发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面，而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。
三、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物1．试剂卡品牌：美国强生奥索(Ortho-Clinical Diagnostica,Inc)2．代号：BioVue －poly Cassettes3．包装规格：400卡/箱试剂卡(707300);100卡/箱试剂卡(707350)4．试剂成分：抗人球蛋白(lgG,C3b/C3d)检测卡有6根微柱组成，每一柱中含有缓冲液，其成分为牛血清蛋白，大分子增强剂以及0.1％叠氮钠，0.01M的EDTA.成分描述第1～6柱：抗人球蛋白、抗-lgG、-C3d;多特异性抗－lgG(兔)抗－C3b(鼠单克隆)(克隆F7G3) 抗－C3d(鼠单克隆)(克隆C4C7) FD＆C1＃蓝色染料FD＆C5＃黄色染料5．试剂的储存与效期：储存方法：2～25℃环境保存。
请勿将试剂存放在自动除霜的冰箱中，也不要冷冻保存。
并且不要放在离热源（如孵育箱、辐射器、大型设备、冰箱、冰柜等）很近或阳光直射的地方。
效期：试剂盒上有记载四、仪器品牌、型号BioVue专用离心机；BioVue专用孵育器五、样本的采集与准备：在采集标本前对病人/献血者无特殊要求，血液采集应符合相关的技术标准及管理规范。
含有或不含有抗凝剂的标本均可使用。
标本采集后应尽快进行检测。
如果实验不能立即进行，应将标本置于2－8℃保存。
六、试剂准备：抗人球蛋白(IgG,C3b/C3d)检测卡为即用型产品。
每一微柱中含有仅适用于一个测试的试剂。
不规则抗体筛查流程步骤
不规则抗体筛查流程步骤下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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不规则抗体筛检卡使用
不规则抗体筛检卡标准操作方法
（一）原理：微柱凝胶免疫反应的本质是红细胞凝集试验，也可称之微柱凝胶血凝试验（Microcolumn Gel Heamagglutination Assay，MGHA）在微柱凝胶管中，红细胞和相应抗体结合后，形成红细胞凝集团块。
在一定离心力下，该凝集团块位于胶表面或胶中；而红细胞未和相应抗体结合，仍为分散的
红细胞，在同样的离心力下，红细胞沉降到微柱管尖底部。
（二）操作步骤：
1、红细胞悬液的制备：将筛检红细胞或谱细胞配成0.8%浓度的悬液。
2、将准备好的不规则抗体筛检卡做好标记；
3、将配好的筛检细胞或谱细胞悬液加入标好的微管中，各一滴（或50μl）；
4、分别立即加入被检者血清1滴（或50μl）；
5、加样后的试剂卡，置37℃孵育器中孵育15分钟；
6、使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500 rpm3分钟），取出肉眼
观察结果。
（三）结果判定：根据所提供的筛检红细胞或谱细胞的反应格局来判定结果例：按Ⅰ(-)、Ⅱ(4+)、Ⅲ(-)的实验结果及提供如下的筛检红细胞反应格局来分析
阴性结果用排除法,阳性结果用可能包含法。
以前五种抗原为例：
Ⅰ(-)：可排除D、C、e；
Ⅱ(4+)：判断可能含有D、C、E、c、e；
Ⅲ(-)：可排除D、C、c、e；
综上，可认为：此样品血清中可能含有-E。
不规则抗体筛选操作规程
不规则抗体筛选操作规程一．试剂和仪器1.抗人球蛋白（IgG,C3b/C3d）多特异检测试剂卡或抗人球蛋白（IgG）单特异检测试剂卡。
2.上海血液生物医药有限公司3%抗筛试剂红细胞悬液3.离心机和孵育器二．标本收集与处理1．血清或血浆都可以使用。
2．如果在直接抗人球蛋白实验中加入了血浆标本，因为钙离子的失活，补体依赖的抗体可能无法检测出来，所以建议使用血清标本。
三．操作步骤1．取出试剂卡，平衡至室温；使用前离心确保无气泡和断层。
2．观察卡的反应液面高度，确保试剂液面高于凝胶平面3mm左右，否则请勿使用；撕开试剂卡上的锡纸，撕开后的微柱请于1小时内进行下面操作。
3. 分别向反应柱内加入50 ul患者血清或血浆。
注意，加样时，吸头请勿触及微柱管壁。
4．再分别向反应柱内加入10ul 3%红细胞悬液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(抗筛红细胞)。
5．观察柱中的反应物各组分是否混匀，必要时轻弹几下微柱充分，使反应物混匀。
6．在孵育仓中37℃孵育15分钟。
7．用离心机离心5分钟，离心必须在加样后30分钟内进行。
8. 从微柱正反两面判读并记录结果。
四．结果判读阳性结果（＋）：红细胞凝集为阳性结果。
阴性结果（－）：无溶血及红细胞未凝集为阴性结果。
溶血会导致玻璃珠上方呈粉红色或红色。
如果发现溶血现象，则应先将血清或血浆置于56℃水浴30min以灭活补体，然后再重复试验，观察红细胞凝集现象。
4 + 反应：红细胞在柱中玻璃珠上面凝集，并形成一个环形带。
3 + 反应：发生凝集的大部分红细胞停留在玻璃珠的上半部分。
2 + 反应：发生凝集的红细胞分布于整个玻璃珠床，柱的底部有少量细胞。
1 + 反应：大部分凝集的红细胞停留在玻璃珠床的下半部分，柱的底部有少量红细胞。
阴性反应：所有红细胞均穿过玻璃珠床，在柱的底部形成一个平整的红细胞聚集带。
五.注意事项1. 试剂卡应保存在2～25℃，请勿冷冻保存；请勿将试剂卡放入自动除霜的冰柜中，也不要放在离热源很近或阳光直射的地方。
6.不规则抗体筛检卡标准操作规程
不规则抗体筛检卡标准操作程序一、准备工作（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。
（二）检测标本的准备：1．红细胞悬液的制备：将筛检红细胞或谱细胞配成0.8%浓度的悬液。
2．血清标本的制备：采集被检对象静脉血，放入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清；或者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置 12小时，或37℃放置2小时后离心，2000r/min,10分钟，取上清（该上清不得有絮状物或沉淀）。
二、操作步骤1. 将准备好的不规则抗体筛检卡做好标记；2. 将配好的筛检细胞或谱细胞悬液加入标好的微管中，各一滴（或50μl）；3. 分别立即加入被检者血清1滴（或50μl）；4. 加样后的试剂卡，置37℃孵育器中孵育15分钟；5. 使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500 rpm3分钟），取出肉眼观察结果。
结果判定：根据所提供的筛检红细胞或谱细胞的反应格局来判定结果例：按Ⅰ(-)、Ⅱ(4+)、Ⅲ(-）的实验结果及提供如下的筛检红细胞反应格局来分析阴性结果用排除法,阳性结果用可能包含法。
筛检细胞反应格局以前五种抗原为例：Ⅰ(-)：可排除D、C、e；Ⅱ(4+)：判断可能含有D、C、E、c、e；Ⅲ(-）：可排除D、C、c、e；综上，可认为：此样品血清中可能含有-E三、注意事项1．应用直接抗人球蛋白微柱凝胶免疫试验检测病人红细胞时，一定要用适量EDTA的试管采血液标本，该标本不能放入4℃-10℃冰箱保存，以避免红细胞在病人体外致敏所致假阳性反应。
2．红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。
尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验。
如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本实验。
3．血清标本：血清标本必须充分去纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍阴性红细胞沉淀，呈假阳性反应。
不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程
不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程1.检验目的不规则抗体筛选和鉴定可在交叉配合之前进行或一起进行，这样有利于患者抗体的早期确认及鉴定，发现临床上有意义的抗体，避免一些可能的情况而造成病情的延误。
2.检验方法分盐水介质法、抗球蛋白法和微柱凝胶法。
3.检验原理让待检者的血清与已知血型的试剂红细胞即筛选红细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套）起反应，以发现在37℃中有反应活性的抗体。
这种抗体可引起新生儿溶血病、溶血性输血反应、或使输入的红细胞存活期缩短等。
当不规则抗体筛选试验阳性后，再进行不规则抗体鉴定，即利用谱红细胞（11套鉴定细胞）与待检者的血清反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别。
4.标本要求受检者不抗凝静脉血4.0ml，分离血清，48小时内使用5.试剂5.1.筛选红细胞：由2或3人份的O型红细胞组成为一套试剂，每套试剂筛选红细胞中至少有以下常见的抗原：D、C、E、c、e、M、N、S、s、P、Le a、Le b、K、k、Fy a、Fy b、Jk a、Jk b等。
每次用3套试剂（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）进行抗体筛选，见表1005-1。
5.2.鉴定谱细胞：除包括常见的抗原以外还有：C w、Kp a、Kp b、Js a、Js b、Lu a、Lu b、Xr/min a等。
每次用11套试剂进行抗体鉴定，见表1005-2。
5.3.抗球蛋白试剂：多特异性抗球蛋白血清（IgG、C3d）。
5.4.致敏红细胞（质控细胞）。
5.5.0.9%生理盐水。
5.6.Coombs微柱凝胶卡。
6.器材试管、吸管、37℃水浴箱、台式离心机、滤纸、微量加样器等。
7.操作程序7.1.盐水介质法7.1.1．取受检者血清2滴于标记有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的3支小试管中。
7.1.2．对应加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套2%～5%筛选红细胞生理盐水悬液1滴，37℃孵育30分钟。
7.1.3.以3000r/min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并记录反应情况于表1005-1中。
如果抗体筛选试验阳性，继续做以下试验。
不规则抗体筛选操作规程
不规则抗体筛选操作规程一．试剂和仪器1.抗人球蛋白（IgG,C3b/C3d）多特异检测试剂卡或抗人球蛋白（IgG）单特异检测试剂卡。
2.上海血液生物医药有限公司3%抗筛试剂红细胞悬液3.离心机和孵育器二．标本收集与处理1．血清或血浆都可以使用。
2．如果在直接抗人球蛋白实验中加入了血浆标本，因为钙离子的失活，补体依赖的抗体可能无法检测出来，所以建议使用血清标本。
三．操作步骤1．取出试剂卡，平衡至室温；使用前离心确保无气泡和断层。
2．观察卡的反应液面高度，确保试剂液面高于凝胶平面3mm左右，否则请勿使用；撕开试剂卡上的锡纸，撕开后的微柱请于1小时内进行下面操作。
3. 分别向反应柱内加入50 ul患者血清或血浆。
注意，加样时，吸头请勿触及微柱管壁。
4．再分别向反应柱内加入10ul 3%红细胞悬液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(抗筛红细胞)。
5．观察柱中的反应物各组分是否混匀，必要时轻弹几下微柱充分，使反应物混匀。
6．在孵育仓中37℃孵育15分钟。
7．用离心机离心5分钟，离心必须在加样后30分钟内进行。
8. 从微柱正反两面判读并记录结果。
四．结果判读阳性结果（＋）：红细胞凝集为阳性结果。
阴性结果（－）：无溶血及红细胞未凝集为阴性结果。
溶血会导致玻璃珠上方呈粉红色或红色。
如果发现溶血现象，则应先将血清或血浆置于56℃水浴30min以灭活补体，然后再重复试验，观察红细胞凝集现象。
4 + 反应：红细胞在柱中玻璃珠上面凝集，并形成一个环形带。
3 + 反应：发生凝集的大部分红细胞停留在玻璃珠的上半部分。
2 + 反应：发生凝集的红细胞分布于整个玻璃珠床，柱的底部有少量细胞。
1 + 反应：大部分凝集的红细胞停留在玻璃珠床的下半部分，柱的底部有少量红细胞。
阴性反应：所有红细胞均穿过玻璃珠床，在柱的底部形成一个平整的红细胞聚集带。
五.注意事项1. 试剂卡应保存在2～25℃，请勿冷冻保存；请勿将试剂卡放入自动除霜的冰柜中，也不要放在离热源很近或阳光直射的地方。
不规则抗体检测标准操作流程
不规则抗体检测标准操作流程
不规则抗体检测标准操作流程(SOP)
目的:输血前进行检验查,可对有妊娠史,多次输血史,大量输血的病人进行不完全抗体的初选.
操作:
1、取3—5名“O”型正常人抗凝血(新鲜血常规抗凝血)进行等量混合。
2、用无菌生理盐水洗涤3—5次。
3、配制成2%红细胞悬液(上述离心沉淀红细胞1ml加生理盐水49mL混匀)待用。
4、取病人(受血者)血清或血浆100mL和2%红细胞悬液100mL等到量混合，然后离心，侄去上清液，混匀，倒在玻片上，显微镜观察是否凝集。
5、如有凝集，说明该受血者体内存在不规则抗体，毅然交叉配血不能进行。
6、如无凝集才能配血。
不规则抗体筛查试验操作规程
XXX医院不规则抗体筛查试验操作规程1.目的为规范红细胞不规则抗体筛选、鉴定的技术操作，保证检查结果准确和临床输血安全、有效，依据《输血实验室管理程序》有关条款的要求制定本规程。
2.适用范围本规程适用于本院红细胞不规则抗体的筛查。
3.职责输血科具有专业技术资格的人员负责红细胞不规则抗体的筛选和鉴定，但只对所筛选或鉴定的标本负责。
4.相关文件试剂采购、保存和使用管理程序设备采购、使用管理程序消毒与清洁管理程序标本采集、运输、保存和报废管理程序5.相关记录仪器设备的采购、使用和维护记录仪器的温度记录恒温水温箱的换水和消毒记录消毒液的配置记录清洁消毒记录试剂采购、使用记录标本交接和报废记录6.实验原理采用盐水介质法、凝聚胺法或抗球蛋白法等试验使受检者血清（血浆）与筛选红细胞反应，检测受检者血清（血浆）中是否存在红细胞不规则抗体，红细胞不规则抗体阳性者进一步与谱红细胞反应，根据反应格局鉴定抗体特异性。
7.仪器设备和检测环境7.1.仪器设备等：玻璃试管(75X12mm)、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、交叉配血专用离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。
7.2. 检测环境：室温应控制在18~27℃，湿度应保持在30~70%。
8.试剂①生理盐水、凝聚胺试剂、直接抗人球蛋白试剂（抗IgG,C3d），均为有合格证件的正品。
②市售O型筛选红细胞：为三支以上不同人份的3%筛选红细胞，均为有合格证件的正品。
或自制O型筛选红细胞：选择已确认ABO血型为O型的健康者，采集EDTAK抗凝血2标本离心，取少许红细胞置于试管中，用生理盐水离心洗涤3次得压积红细胞[3400转/分钟（1000g），每次离心1分钟，离心后将上清液全部倒出]，再取30µl游离红细胞加入到标记为Ⅰ号的试管中，然后加入1ml生理盐水混匀，即得Ⅰ号O型3%的筛选红细胞；依同样方法分别制备不同人份的Ⅱ号和Ⅲ号O型3%的筛选红细胞。
不规则抗体检测标准操作规程
不规则抗体检测标准操作规程1 目的规范不规则抗体检测过程，保证不规则抗体检测质量，保障临床输血安全。
2 职责输血科(血库)工作人员负责不规则抗体检测相关工作。
3 适用范围适用于输血科(血库)工作人员从事不规则抗体检测。
4 生物安全要求所有用于临床不规则抗体检测的标本，均视为存在潜在的生物安全危害,被血液污染的物品必须放入医疗专用垃圾袋，损伤性废弃物放入利器盒。
5 设备和材料5.1 标本: 血浆或血清。
5.2 试剂：标准Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅲ号不规则抗体筛选红细胞、低离子强度溶液（LIM）等。
5.3设备：血型血清学专用离心机、标本离心机、移液器、试管架等。
5.4 耗材：清洁干燥一次性塑料吸嘴、速干手消毒液/消毒纸巾、污物桶、医疗废弃物专用袋、医疗废弃物处置标签、一次性橡胶手套等。
6 环境不规则抗体检测环境要求宽敞明亮、干燥通风、安全卫生、整洁有序。
7 操作步骤7.1 方法：凝胶柱法。
7.2 原理：由于输血或妊娠等外源性抗原的同种免疫作用，使机体对外源性抗原产生同种免疫抗体，当再次输入相应抗原时就会产生抗原抗体反应。
应用特定的抗体筛选红细胞（Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅲ号），与受检者血清/血浆在二种介质（盐水、凝聚胺）中反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别(IgM、IgG)。
7.3 试剂及器材:特定的Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅲ号2%～5%筛选红细胞；低离子强度溶液（LIM）、凝聚胺溶液、悬浮液；生理盐水。
试管架；清洁干燥试管；清洁干燥吸管；清洁干燥载玻片；生物显微镜；血库专用离心机。
7.4 操作步骤7.4.1 检查所用试剂的批号、外观、有效期及相应的器材。
7.4.2 检查标本的状态。
盐水法：7.4.3 取洁净试管3支，分别标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，用滴管分别加入受检者血清/血浆2滴。
7.4.4 再对应加入2%～5%Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅲ号抗体筛选细胞1滴，混匀。
7.4.5 1000 ×g离心15秒或按试剂说明书操作，察看上清液有无溶血，轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集结果，记录盐水介质反应情况。
不规则抗体筛查操作方法
不规则抗体筛查操作方法抗体筛查是一种常用的实验技术，用于检测人体中是否存在某种特定的抗体。
不规则抗体指的是那些不符合正常免疫反应模式的抗体，其产生可能与某些疾病或异常情况相关。
本文将介绍一种不规则抗体筛查的操作方法，包括前处理、抗原标记、试剂制备、试管操作等环节。
1. 前处理：首先，需要准备样本，通常是血液或血浆样本。
将样本离心分离血细胞和血浆，取出血浆备用。
如果需要检测特定器官或组织的抗原，还需进行相应的前处理，如组织细胞抗原的制备。
2. 抗原标记：将待检测的抗原标记。
标记可采用放射性同位素、酶标记、荧光标记、金标记等方法。
标记时需要注意选择合适的标记物，以确保标记效果稳定和信号强度足够。
3. 试剂制备：制备抗体和其他试剂。
抗体可通过动物免疫、杂交瘤细胞技术等方法获得，然后纯化和浓缩。
其他试剂包括缓冲液、辅助试剂等。
制备试剂时需要严格控制操作条件，避免交叉污染和分装误差。
4. 试管操作：a. 将样本和标记的抗原加入试管中，混匀，使抗原与抗体充分结合。
b. 对于各类试管进行不同的操作，如剥夺试验、沉淀试验、凝集试验、间接荧光试验等。
具体操作时需要根据试管类型选择合适的剂量和条件。
c. 通过观察试管内的反应情况，判断是否存在不规则抗体。
不规则抗体的存在可通过沉淀、荧光、凝集等形式观察到，如试管内有沉淀物形成、荧光强度异常高或低、凝集抗体间距不均匀等。
5. 结果分析：根据试管内的反应结果，可判断是否存在不规则抗体。
如果需要进一步确认，还可进行其他检测方法，如免疫组织化学、免疫电镜等。
同时，还需要将结果与临床资料结合，分析不规则抗体是否与某种疾病或异常情况相关。
总结：不规则抗体筛查操作方法主要包括前处理、抗原标记、试剂制备和试管操作等环节。
通过对样本和标记抗原进行混合、加热、冷却等处理，观察试管内的反应情况，可以判断是否存在不规则抗体。
这项技术在疾病诊断和研究中具有重要意义，能够帮助医生确定病情和制定合适的治疗方案。
不规则抗体筛选试验标准操作规程(sop)
不规则抗体筛选试验标准操作规程一、目的为规范微柱凝胶抗球蛋白检测卡在红细胞不规则抗体筛选试验中的应用，保证实验结果的准确性和有效性。
二、适用范围输血科进行的微柱凝胶卡式不规则抗体试验。
三、原理红细胞血型抗原—抗体反应体系在微柱凝胶卡微孔上端反应室反应后，如红细胞血型抗原与相应特异性抗体发生凝集反应后，离心后被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或者颗粒间隙之中，不能通过凝胶筛网，而未发生抗原—特异性抗体凝集的红细胞则可以通过凝胶筛网沉降至微柱凝胶底部。
四、步骤和方法1、取微柱凝胶抗球蛋白检测卡放入专用离心机，3000r/min离心1min后撕开锡纸膜，正立放置待用。
2、在标记为I、II、III的各反应腔中分别加入对应的I、II、III号筛选红细胞稀释液（1滴细胞+3滴lis液）50微升，再在标记为I，II，III的各反应腔中分别加入对应的受检者血清（血浆）20微升，加入后轻轻震荡3次使其充分混合。
3、将检测卡在微柱凝胶专用孵育器中37℃孵育15min后，用专用离心机以1800r/min·2min，2500r/min·1min离心后取出判断结果。
5、结果判读：I、II、III型红细胞任何一种出现阳性反应，表明该血清（血浆）不规则抗体筛选阳性。
五、质量控制微柱凝胶试剂卡，试剂筛选红细胞在有效期内使用。
六、注意事项1、检测卡若在冰箱储存，使用前须放置实验室5—10min平衡至室温。
2、撕开微柱凝胶卡锡纸膜时，注意避免各微柱间特异性抗体试剂的交叉污染。
3、细菌污染，纤维蛋白析出及抗凝不佳的血，可产生假阳性结果，建议使用血清。
4、严格遵循离心力，离心时间要求，离心速度过快，离心时间过长均易产生假阴性结果。
5、由于试剂生产厂家，批号不同等因素，红细胞浓度，吸取样品的量及离心条件等环节要求有所差异，以试剂说明书为准。
不规则抗体筛检操作作业指导书
不规则抗体筛查实际操作作业指导1.目的用于检测血浆中是否存在抗体（IAT）2.原理血液中一些IgG类抗体或补体C3（主要是免疫性抗体）与红细胞表面相应抗原结合后，在盐水介质中不出现肉眼可见凝集反应，但在加入抗IgG或抗C3抗体后，以其搭桥则出现凝集反应，该实验称为抗人球蛋白试验（Coomb’s Test）。
包括直接抗人球蛋白试验（DAT）和间接抗人球蛋白试验（IAT）。
直接抗人球蛋白试验用于检测红细胞是否被抗体致敏，间接抗人球蛋白试验用于检测血浆中是否存在抗体。
3.样品3.1样品类型：血浆或血清3.2患者准备：应避免高脂食物或未知药物影响，可能的情况下，在大量用药前采集标本3.3容器和添加剂类型：EDTA-K2抗凝血3ml～5ml，在低速离心机1000g条件下离心5min，离心后应无溶血、无凝块、无明显乳糜。
紧急情况下可以使用抗凝动脉血，5ml～10ml全血分离得到的血清也可以4.环境和安全控制4.1实验环境（1）环境温度：18℃～30℃（2）环境相对湿度：15%～80%RH（无冷凝）（3）实验室的噪音、防震、防尘、防腐蚀、防磁与屏蔽等方面的环境条件应符合检验项目和检测仪器设备对环境条件的要求，室内采光良好。
4.2人员安全（1）操作人员二级防护（2）所有血液样本及与血液接触的材料均视为传染性物质（3）对设备进行清洁或清除污染、处理样本、处置废弃试剂卡、处理稀释样本管等遵照实验室生物危害注意事项。
5.方法学微柱凝胶法6.程序性步骤试剂卡做好标记（病人姓名、日期）→分离被检者血清（或血浆）→用低离子强度溶液将筛检红细胞或谱红细胞配成1%浓度（I/II/III）→分别加入50ul在标记好的三个微管中（仅暴露所需反应孔）→立即加入被检者血清（或血浆）50ul在三个微管内→ 37℃孵育15min →专用离心机900r2min 转1500r3min →取出判读结果7.结果判读红细胞层下沉阴性，红细胞层未下沉为阳性8、措施计划1.鉴定卡和病人编号一致2.样本溶血、脂血慎用3.抗筛细胞浓度为4%，所需1%抗筛细胞仅需75ul抗筛细胞加入25ul生理盐水混匀后即可使用。
血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤
肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）
各试管分别加入重悬液2滴（100ul），轻轻混匀
肉眼观察凝集是否在1min内消失
显微镜检查
三.交叉配血试验（生理盐水法+凝聚胺法）
1.标本准备
分离供血者血浆与红细胞
三次洗涤，制备供血者2%-5%红细胞悬液
2.排管标记
排管，主侧、次侧及自身对照管
3.加样
各试管分别加入相应的备检血清2滴（100ul）及2%-5%备检红细胞悬液1滴（50ul）
4. 结果观察
离心（2档），观察结果
先看上清液有无溶血
轻轻混匀，肉眼观察有无凝集
结果判断并记录
各试管分别加入低离子介质0.65ml，轻轻混匀（参照试剂说明书）
各试管再分别加凝聚胺溶液2滴（100ul）混匀，离心
2.加样 各试管分别加入相应的患者血清2滴（100ul）及筛选细胞1滴（50ul）。
3.结果观察
离心（2档），观察结果
先看上清液有无溶血，轻轻混匀，肉眼观察有无凝集，结果判断并记录。
各试管分别加入低离子介质0.65ml，轻轻混匀（参照试剂说明书）
各试管再分别加凝聚胺溶液2滴（100ul）混匀，离心
先观察上清液有无溶血
血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤
一.血型鉴定
1.排管并标记患者红细胞悬液管、患者血浆管、患者ABO正定型试管、患者ABO反定型试管、患者RhD定型试管。
2.标本准备 分离患者的血浆，取一滴压积红细胞，三次洗涤，制备患者2%-5%红细胞悬液。
3.加样
ABO正定型：1滴（50ul）抗A、抗B试剂加1滴（50ul）患者红细胞悬液。
先观察上清液有无溶血
不规则抗体筛查标准操作规程
不规则抗体筛查标准操作规程(一)检验目的检测受血者、孕妇等血清中是否存在抗A、抗B以外的不规则抗体，为交叉配血、ABO血型正确定型(不规则抗体干扰反定型)以及新生儿溶血病产前、产后诊断提供参考依据。
(二)检验原理1.盐水介质法IgM类不规则抗体可以在室温盐水介质中发生凝集反应，使用手工试管法就可以判断受检者血液中是否存在IgM类不规则抗体。
2.凝聚胺法利用多聚季胺盐类——凝聚胺携带很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，引起正常红细胞可逆性凝集。
无抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，当加入中和液后，则凝集消散，而被不规则抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，则不能消散，以此来判断受检者血液中是否存在不规则抗体。
3.微柱凝胶法微柱凝胶卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗人球蛋白试剂，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶上端，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。
4.玻璃珠微柱法微柱卡的每一个微管中装填有直径均一的玻璃微珠和抗人球蛋白试剂(抗-IgG和抗补体C3)，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，而未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。
(三)适用范围适用于手工凝聚胺法、手工微柱凝胶法、手工玻璃珠微柱法、全自动微柱凝胶法、全自动玻璃珠微柱法不规则抗体筛查及鉴定试验。
(四)设备性能参数各种用于不规则抗体筛查试验的检测系统性能指标参见相应说明书。
(五)器材与试剂1.器材KA-2200血清学专用离心机、B600-A型低速离心机、WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro Au-toVuelnnova全自动血型配血系统、阅片灯箱、卡式专用离心机、孵育器、塑料软试管、塑料硬质试管(75m m×l2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液器、一次性移液枪头。
不规则抗体筛选试验标准操作规程(sop)
不规则抗体筛选试验标准操作规程一、目的为规范微柱凝胶抗球蛋白检测卡在红细胞不规则抗体筛选试验中的应用，保证实验结果的准确性和有效性。
二、适用范围输血科进行的微柱凝胶卡式不规则抗体试验。
三、原理红细胞血型抗原—抗体反应体系在微柱凝胶卡微孔上端反应室反应后，如红细胞血型抗原与相应特异性抗体发生凝集反应后，离心后被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或者颗粒间隙之中，不能通过凝胶筛网，而未发生抗原—特异性抗体凝集的红细胞则可以通过凝胶筛网沉降至微柱凝胶底部。
四、步骤和方法1、取微柱凝胶抗球蛋白检测卡放入专用离心机，3000r/min离心1min后撕开锡纸膜，正立放置待用。
2、在标记为I、II、III的各反应腔中分别加入对应的I、II、III号筛选红细胞稀释液（1滴细胞+3滴lis液）50微升，再在标记为I，II，III的各反应腔中分别加入对应的受检者血清（血浆）20微升，加入后轻轻震荡3次使其充分混合。
3、将检测卡在微柱凝胶专用孵育器中37℃孵育15min后，用专用离心机以1800r/min·2min，2500r/min·1min离心后取出判断结果。
5、结果判读：I、II、III型红细胞任何一种出现阳性反应，表明该血清（血浆）不规则抗体筛选阳性。
五、质量控制微柱凝胶试剂卡，试剂筛选红细胞在有效期内使用。
六、注意事项1、检测卡若在冰箱储存，使用前须放置实验室5—10min平衡至室温。
2、撕开微柱凝胶卡锡纸膜时，注意避免各微柱间特异性抗体试剂的交叉污染。
3、细菌污染，纤维蛋白析出及抗凝不佳的血，可产生假阳性结果，建议使用血清。
4、严格遵循离心力，离心时间要求，离心速度过快，离心时间过长均易产生假阴性结果。
5、由于试剂生产厂家，批号不同等因素，红细胞浓度，吸取样品的量及离心条件等环节要求有所差异，以试剂说明书为准。
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不规则抗体筛查标准操作规程(一)检验目的检测受血者、孕妇等血清中是否存在抗A、抗B以外的不规则抗体，为交叉配血、ABO血型正确定型(不规则抗体干扰反定型)以及新生儿溶血病产前、产后诊断提供参考依据。
(二)检验原理1.盐水介质法IgM类不规则抗体可以在室温盐水介质中发生凝集反应，使用手工试管法就可以判断受检者血液中是否存在IgM类不规则抗体。
2.凝聚胺法利用多聚季胺盐类——凝聚胺携带很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，引起正常红细胞可逆性凝集。
无抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，当加入中和液后，则凝集消散，而被不规则抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，则不能消散，以此来判断受检者血液中是否存在不规则抗体。
3.微柱凝胶法微柱凝胶卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗人球蛋白试剂，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶上端，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。
4.玻璃珠微柱法微柱卡的每一个微管中装填有直径均一的玻璃微珠和抗人球蛋白试剂(抗-IgG和抗补体C3)，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，而未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。
(三)适用范围适用于手工凝聚胺法、手工微柱凝胶法、手工玻璃珠微柱法、全自动微柱凝胶法、全自动玻璃珠微柱法不规则抗体筛查及鉴定试验。
(四)设备性能参数各种用于不规则抗体筛查试验的检测系统性能指标参见相应说明书。
(五)器材与试剂1.器材KA-2200血清学专用离心机、B600-A型低速离心机、WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro Au-toVuelnnova全自动血型配血系统、阅片灯箱、卡式专用离心机、孵育器、塑料软试管、塑料硬质试管(75m m×l2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液器、一次性移液枪头。
2.试剂Diana DG Gel Coombs卡、DiaMed Coombs卡、Othro BioVue Coombs卡、生理盐水、凝聚胺配套试剂(LIM 液、Re-suspending液、Polybrene液)专用稀释液(DII.2、DG GEL sol或BLISS液)、3系3％抗筛细胞、3系1％抗筛细胞、10系或16系1％鉴定谱细胞(可由3％鉴定谱细胞经专用稀释液稀释获得)。
(六)样本要求EDTA-K2或EDTA-K3：抗凝静脉血≥3ml，经B600-A 型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜。
紧急情况下可以使用抗凝动脉血。
(七)校准步骤各类全自动血型检测系统的校准操作过程分别见《WADiana全自动血型配血系统标准操作规程胍SWING-SAXO血型配血系统标准操作规程》《Techno全自动血型配血系统标准操作规程》《Othro AutoVue lnnova全自动血型配血系统标准操作规程》。
(八)操作程序1.盐水介质法不规则抗体筛查及鉴定操作程序(1)取4支洁净硬质试管分别做好标记I、Ⅱ、Ⅲ、自身对照。
(2)每支试管中分别加入患者血浆(或血清)2滴，再加入相应3％I、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞和自身红细胞各1滴并混匀。
(3)使用血清学专用离心机在1 000g条件下离心15秒。
(4)结果判定：一系或多系红细胞发生凝集，自身对照不凝集的判断为阳性，提示存在IgM类不规则抗体。
2.手工凝聚胺法不规则抗体筛查及鉴定操作程序(1)取3支洁净硬质试管分别做好标记I、Ⅱ、Ⅲ。
(2)每支试管中分别加入患者血浆(或血清)2滴，再加入相应3％I、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞1滴并混匀。
(3)在每支试管中加入低离子液(LIM)0.65ml及聚凝胺(Polybrene)试剂2滴混匀，血清学专用离心机在1 000g条件下，离心15秒。
(4)离心后弃上清，不要沥干，观察细胞扣，轻轻振摇，如果有凝集现象则加入重悬液2滴，拖拉辗转，1分钟内观察结果：3管中任意1管或多管出现凝集者为抗体筛选阳性，应进一步使用10系或16系谱细胞鉴定抗体的特异性，操作方法与筛查试验相同，同时应加自身对照管，以判断自身抗体同时存在的可能性。
3管均无凝集为阴性。
3.手工微柱凝胶法不规则抗体筛查及鉴定操作程序(1)按试验所需取相应张数(反应孔数)的凝胶Coombs卡(Diana／DiaMed)，撕掉卡上的封口锡纸，剩余孔保留锡纸，在反应孔的下方分别标明患者姓名和筛查细胞系别。
(2)先将3系1％抗筛细胞各50µ1分别加入相应的反应孔中，再将患者血清(或血浆)25µl依次加入相应反应孔内。
(3)加样完毕，重新将锡纸盖好，将凝胶卡放入卡架中，连同卡架一起放入专用的孵育器37℃孵育15分钟。
(4)放入配套的专用离心机，按要求离心10分钟。
(5)目测并记录结果，任何一系或多系细胞出现阳性结果，抗筛结果即为阳性，应转入抗体鉴定试验。
(6)使用10系或16系1％鉴定谱细胞进行抗体特异性鉴定，操作步骤与抗体筛查相似，只是细胞谱由3系增加到10系或16系，同时需要增加自身对照孔，以判断自身抗体同时存在的可能性。
4.手工玻璃珠微柱法不规则抗体筛查及鉴定操作程序(1)按实验所需取相应张数(反应孔数)的玻璃珠微柱Coombs卡，撕掉卡上的封口锡纸，剩余孔保留锡纸，在反应孔的下方分别标明患者姓名和筛查细胞系别。
(2)先向每个反应柱内加入50µ1 BILSS液，再分别向反应柱内加入10µl 3％I、Ⅱ、Ⅲ号抗筛红细胞。
最后向反应柱内加入40µl患者血清或血浆。
注意，加样时，枪头请勿触及微柱管壁。
观察柱中的反应物各组分是否混匀，必要时轻弹几下微柱充分，使反应物混匀。
(3)加样完毕，重新将锡纸盖好，将玻璃珠微柱卡放入卡架中，连同卡架一起放入专用的孵育器37℃孵育15分钟。
(4)Biovue离心机离心5分钟，离心必须在加样后30分钟内进行。
(5)目测并记录结果，任何一系或多系细胞出现阳性结果，抗筛结果即为阳性，应转入不规则抗体鉴定试验。
(6)使用10系或16系1％谱细胞进行抗体特异性鉴定，操作步骤与抗体筛查相似，只是细胞谱由3系增加到10系或16系，同时需要增加自身对照孔，以判断自身抗体同时存在的可能性。
5.WADiana全自动不规则抗体筛查操作程序参照《WADiana全自动血型配血系统标准操作规程》进行。
6.SWING-SAXO系统不规则抗体筛查操作程序参照《SWING-SAXO血型配血系统标准操作规程》进行。
7.Techno全自动血型／配血系统不规则抗体筛查操作程序参照《Techno全自动血型配血系统标准操作规程》进行。
8.Othro AutoVue lnnova全自动不规则抗体筛查操作程序参照《Othro Au-toVuelnnova全自动血型配血系统标准操作规程》进行。
9.检验结果的输入与确认(1)启动“检验程序”，输入用户名及口令后，进入检验程序。
(2)非传输结果及镜检结果的‘输入：单击“检验”菜单，选择“检验结果录入／修改”，通过申请序号或ID号进行检验结果的录入及修改。
(3)检验结果的确认：检验结果应由实验室负责人或授权人员进行确认，方法为单击“结果处理”菜单，选择“报告确认”进入结果确认，通过选择“工作单元”“报告日期”“单张”或“批量”后，按“提取”键提取已经传输或录入的检验结果，经两人核对无误后按“确认”键进行确认。
(九)质量控制1.室内质量控制(1)凝聚胺试剂：每日(或当日更换试剂包装时)进行试剂质控，具体操作参照《输血相容性检测室内质量控制管理制度》进行。
(2)手工抗人球蛋白试剂：每日(或当日更换试剂批号时)进行过程质控，具体操作参照《输血相容性检测室内质量控制管理制度》进行。
(3)手工及全自动卡式抗人球法：每日(或当日更换试剂批号时)进行过程质控，具体操作参照《输血相容性检测室内质量控制管理制度》进行。
2.室间质量评价参加卫生部临检中心组织的全国输血相容性检测室间质量评价活动。
(十)干扰因素1.严重的黄疽、溶血或脂血使全自动血型检测系统判读结果时出现假阳性。
2.冷凝集素或异常球蛋白增高会使红细胞出现异常凝集，出现假阳性结果。
(十一)结果计算及测量不确定度不适用。
(十二)生物参考区间阴性。
(十三)检验结果可报告区间阴性或阳性。
(十四)警告／危急值不规则抗体筛查结果阳性，条件具备时应进行抗体鉴定，而后应立即进行配血筛查，寻找合适的供者。
如果找不到合适的供者，应及时通知临床医生(手术患者应停止手术或手术延期)；如果找到合适的供者，需要和临床医生确认申请量是否足够，是否需要追加申请量。
(十五)实验室解释不规则抗体筛查试验结果阳性可能是由于既往输血、妊娠原因导致，也有部分不规则抗体在无明确抗原刺激条件下自然产生。
阳性结果可能会造成配血困难，提高新生儿溶血病的发生概率。
(十六)安全性预警措施1.实验室及工作人员一般安全防护措施参见《实验室安全与卫生管理制度》。
2.发生血液标本溢出时，应参照《实验室消毒与清洁管理制度》对污染的环境进行消毒处理。
3.操作人员发生职业暴露时，应参照《实验室职业暴露预防与处置管理制度》及时进行相应处理。
4.在仪器运转过程中，勿触及样品针、移动的传输装置等，避免造成人身伤害。
禁止触摸仪器密封面板内的电路，防止造成电击损伤。
5.对突发传染性疾病的血液标本应启动特殊的安全防护程序。
(十七)变异潜在来源产生不规则抗体的患者多数由于后天免疫造成，一般都有输血史或妊娠史，少数人也会产生天然抗体。
(十八)不规则抗体筛查试验特别注意事项1.凝聚胺法(1)离心后，倒掉上清，不要沥干，让管底残留约0.1ml 液体。
(2)按照加样顺序进行结果观察，确保每一个反应结果都能在1分钟内观察，否则弱凝集散开会出现假阴性。
(3)凝聚胺法可能造成某些低效价或低反应活性的IgG 类不规则抗体漏检。
2.手工微柱凝胶法(1)凝胶卡手工加样顺序：先加红细胞悬液，后加血清或血浆，红细胞均为o.8％～1％的反应浓度。
(2)稀释液要室温平衡15分钟以上。
3.全自动卡式不规则抗体筛查参照各仪器标准操作规程中约定的注意事项。
4.微柱(凝胶、玻璃珠)抗人球法此类方法因在37℃条件下检测可能造成某些低效价IgM不规则抗体漏检，但此类抗体在37℃时多无反应活性或反应活性低而无临床意义。
当怀疑漏检的不规则抗体影响血型鉴定或交叉配血时，应增加盐水介质不规则抗体筛查和(或)抗体鉴定试验，发现并确定抗体的特异性，以消除其对血型鉴定或交叉配血的干扰。