结核分枝杆菌实验室检测方法的研究进展

ｔｓ，ａ ｄ ｌ ｔ ｅ ｓｔｖｔ ｎ ｐ ｃｆ ｉ ｎ ｓ ｒｄ ａ ｎ ｓｓ ｈ ｕ ｅｃ ｌｓｓ ｄａ ｎ ｓｓ ｈ ｓ ａｗａ ｓ ｂ ｅ ｒ ｂｅ ｅ ｔ ｎ ｉｌ ｓ ｎ ｉ ｉ ａ ｄ ｓ ｅ ｉｉ ｔ ｉ ｅｏ ｉｇ ｏ ｉ，ｔｅ ｔｂ ｒｕｏ ｉ ｉｇ ｏｉ ａ ｌ ｙ ｅ ｎ ａ ｐｏ ｌｍ ｉ ｔｅ ｉ ｙ ｃ ｙ ｎ
【 ｓｒ ｃ】Ｔ ｂ ｒｕｏｉ ｃ ｕｅ ｙ ｍ ｃｂ ｃｅｉｍ ｕ ｅｃ ｌ ｉ ｈ ｓ ｂ ｃｍｅ ａ ｎｅｔ ｕ ｉ ａｅ ｗｔ ｅｔｒｓｏ Ａｂｔａ ｔ ｕ ｅｃ ｌｓ ａ ｓｄ ｂ ｙ ｏ ａｔｒ ｓ ｕ ｔｂ ｒｕｏ ｓ ａ ｅ ｏ ｎ ｉｆｃｉ ｓ ｄｓ ｓ ｉ ｆａｕｅ ｆ ｓ ｏ ｅ ｈ
该 法 有 较 高 的初 代 分 离 率 ， 著 缩短 了报 告 时 间 ， 显 阳性 标
罗 氏法 阳性 率 达 ３ ．％， 均 检 时 间 为 １ ， 染 率 为 ８３ 平 ８ｄ 污
２１ 。 ．％
１ ． ３噬 菌 体 生 物 扩 增 法
其 方 法 是 由 Ｗ ＩＳ Ｌ ＯＮ 等 于 １９ ９ ７年 建 立 的 一 种 结 核 分
ｇ ｉ ｇ ｔ ｅ ｉｗ ｈ ｕ ｒ ｎ ｉ ａ ｉ ｎ ｎ ｒ ｇ ｅ ｓ ｓ ｏ ｅ ｔ ｇ ｍｅ ｈ ｄ ｏ ｃ ｂ ｃ ｅ ｉ ｍ ｕ ｅ ｃ ｌ ｓｓ ｂ ｔ ｏ ｎ ｏ ｎ ｏ ｒ ｖｅ ｔ ｅ ｃ ｒｅ ｔｓｔ ｔｏ ｓａ ｄ ｐ ｏ ｒ ｓ ｅ ｆｔ ｓ ｉ ｔ ｏ ｓｆ ｒ ｍｙ ｏ ａ ｔ ｒｕ ｔ ｂ ｒ ｕ ｏ ｉ ｏ ｈ ｈ ｍｅ ａ ｄ ｕ ｎ
及抗 原 抗 体反 应 法等 ， 这些 方 法特 异 性 、 感 度 较差 ， 但 敏 且
以用 于分 枝杆 菌药 敏 试验 及 菌型 鉴定 。但该 法含 有 微量 的
放 射 线 ， 染 率 比 罗 氏 高 ， 环 境 和 操 作 人 员 身 体 有 一 定 污 对
的影 响且 仪 器 价格 昂 贵 、 剂 需 进 口 ， 以一 般 只在 有 条 试 所 件 的临床 实验 室 应朋 。 Ｉ
ａ ｒａ ． ｂ ｏ ｄ
【 ｙｗｏ ｄ】Ｍｙｏ ａ ｔｒ ｍ ｂ ｒｕｏｉ Ｔ ｂ ｒｕｏｉ Ｔ ｓ ｎ ｔｏ ； ｓａｃ ｒｇｅｓ Ｋｅ ｒ ｓ ｃ ｂｃｅｉ ｔ ｅｃ ｌｓ ； ｕ ｅｃ ｌｓ ； ｅｔ ｇｍｅｈｄ Ｒｅｅｒｈｐｏｒｓ ｕ ｕ ｓ ｓ ｉ
近 年来 ， 于人 口的 剧 增 、 界 范 同 内 大 面 积 的人 口 由 世
ｃ ｉ ｉ ．Ｔ ｅ ｅ ｔ ａ ｄ ｓｕ ｙ ａ ｆｓ ｎ ｉ ｌ ａ ｏ ａ ｏ ｅ ｔｎ ｔ ｏ ｔ ｉ ｈ ｓ ｎ ｉ ｖｔ ｎ ｐ ｃｆｃｔ ｏ — ｌ ｃ ｏ ｄ ｔ ｃ ｎ ｔ ｄ ａ ｔ ａ ｄ ｓｍｐ ｅ ｌ ｂ ｒ ｔ ｒ ｔ ｓｉ ｇ ｍｅｈ ｄ ｗｉ ｈ ｇ ｅ ｓｔ ｉ ａ ｄ ｓ ｅ ｉ ｉ ｆ ｒ ｍｙ ｎ ｙ ｈ ｉ ｙ ｉ ｙ
病 。由于 细菌学 检 查 阳性 率 低及 血清 学诊 断 的敏 感性 和 特 异性 不高 等原 因 ， 因此 结核 病 的诊 断一 直是 临床 上 的
难题 。发现 和研 究 对结 核 分枝 杆菌 诊 断较 敏感 和特 异 性且 快 速 、 便 的实 验 室 检测 方 法 ， 结核 病 的预 防 和诊 简 对 断 具 有 重 要 的 意 义 笔 者 就 目前 国 内 外 结 核 分 枝 杆 菌 的 检 测 方 法 现 状 及 其 进 展 作 一 综 述 。
Ｒｅ ｅ ｒ ｈ ｐｒ ｇ ｅ ｓ ｏ ａ ｒ ｔ ｒ ｅ ｔｎｇ ｍ ｅｈｏ ｏ ｙ ｏ ａ ｔ ｒｕｍ ｕ— ｓ ａ ｃ ｏ ｒ ｓ ｆ ｌ ｂｏ ａ ｏ ｙ ｔ ｓｉ ｔ ｄｓ ｆ ｒ ｍ ｃ ｂ ｃ ｅ ｉ ｔ
ｂｅ ｃ ｌ ｓｓ ｒ ｕ ｏ ｉ
ＬＩ ａ ｚ ｅ ＬＵＯ ａ ｗｅ ＮＧ Ｘｉ ｎ ｈ ｎ ｎ ｎ Ｃ ｉ ｉａ ａ ｏ ａ ｏ ｙ ｌｎ ｃ ｌ Ｌ ｂ ｒ ｔｒ ，Ｙｉｈ ｕ Ｈｏ ｐ ｔｌ ｏ ａ ｉ ｏ ａ ｈ ｎ ｓ ｄ ｃ ｎ ，Ｇｕ ｎ ｘ ｈ ａ ｇ Ａｕ ｏ ｏ ｕ ｇｏ ，Ｙｉｈ ｕ ｚ ｏ ｓ ｉ ｆ Ｔｒ ｄ ｔ ｎ ｌ Ｃ ｉ ｅ ｅ Ｍｅ ｉ ｉ ｅ ａ ｉ ａ ｇ ｉ Ｚ ｕ ｎ ｔ ｎ ｍｏ ｓ Ｒｅ ｉ ｎ ｚｏ ５ ６ ０ Ｃｈ ｎ ４ ３ ０， ｉ ａ
为分枝 杆菌 ， 可立 即进 行分 枝杆 菌 鉴定 和药 敏 试验 ． 并 ． １． ． ３变色 液体 培养 基培 养 法 分 枝杆 菌 变色 液体 培养 基 为 ２
营养丰 富． 有多种维生素 、 氨酸钠 、 种抗生素及 『 含 多 ｌ ‘
油 、 ｍ 清 、 色 剂 及 磷 酸 盐 缓 冲 液 的 选 择 性 培 养 基 。ｌ 内 马 变
２３ １第Ｏ 第１ ０年 月 ２ １ 卷 期
。 ・ 综
述 ・ 。
结核 分枝杆菌实验室检测 方法 的研究进展
凌 显桢 （ 述 ） 综 罗建 文 （ 校 ） 审 ５ ６０ ４ ３０ 广 西 壮 族 自治 区 宜 州 市 中 医 院 检 验 科 ， 西 宜 州 广
【 摘要】 核 病是 由结 核 分枝 杆 菌引 起 的传染 病 。它 已成 为严 重 危害 人 民身体 健 康 、 结 发病 率 及病 死率 很 高 的传 染
核 分枝 杆 菌 和耻垢 分 枝 杆 菌 的特 点 ，先 用 特异 性 ＭＴ Ｂ噬 菌体 迅 速 感 染 、 解 标 本 中的 ＭＴ 再 用 杀 病 毒剂 清 除 所 裂 Ｂ；
分 枝 杆 菌 分 子 鉴 定 的 方 法 有 ：Ｃ 菌 种 鉴 定 方 法 ： ＰＲ Ｐ Ｒ直接 测 序 鉴 定 法 ： Ｃ — Ｎ Ｃ Ｐ Ｒ Ｄ Ａ探 针 鉴 定 法 ： Ｃ 限 制 Ｐ Ｒ一
ｃ ｂ ｃｅｉ ｍ ｕ ｅｃ ｌｓｓｐ ａ ｓａ ｍｐ ｒａ ｔｓｇ ｉ ｃ ｎ ｅ ｉ ｈ ｒｖ ｎｉｎ ａ ｄ ｄ ａ ｎ ｓｓｏ ｕ ｅ ｃ ｌｓｓ Ｔ ｅａｔｃｅ ｉ ｏ ａ ｔｒｕ ｔｂ ｒｕ ｏ ｉ ｌｙ ｎ ｉ ｏｔｎ ｉｎｆ ａ ｃ ｎ ｔｅｐ ｅ ｅ ｔｏ ｎ ｉｇ ｏ ｉ ｆｔ ｂ ｒｕｏ ｉ． ｈ ｒｉｌ ｓ ｉ
管 内氧 气被 利 用 ， 内荧 光指 示 剂将 在特 定 光源 的 激 活下 管
释 放 荧 光 。 养 仪 将 报 警 ， 性 指 示 器 呈 红 色 ， 时 该 标 本 培 阳 同 所 存 位 置 将 在 液 品 显 示 屏 的 『 性 位 置 上 得 到 示 ． 性 ５ 日 ．阳 ＭＧＩ 养 管 可 取 ｆ 后 卣 接 涂 片 进 行 抗 酸 染 色 以 确 定 是 否 Ｔ培 Ｉ Ｊ
１ ． Ａ Ｔ Ｃ Ｈ Ｉ ６ ． ２Ｂ Ｃ Ｅ Ｇ Ｔ ９ ０全 自 动 分 支 杆 菌 培 养 仪 待 检 标 ２ 本 接 种 在 ＭＧ Ｔ培 养 管 中 ， 有 分 枝 杆 菌 生 长 时 ， 巾 的 Ｉ 当 管 营养 成分 和 氧 气将 不 断地 被 消 耗 ， Ｉ 培养 管 中 的荧 光 ＭＧ Ｔ 显 示 剂 将 随 着 管 内 氧 气 浓 度 的 变 化 而 发 生 反 应 。 旦 培 养 一
１１１直 接 厚 涂 片法 直 接 厚 涂 片法 检 …率 比普 通 涂 片 法 ．．
高 １ ％～ ９ ． 种 方 法 快 速 、 用 低 ， 日前 闰 内 常 用 方 ４ ｌ％ 这 费 是
法， 也是 《 结核 病诊 断 细菌 学 检验 规范 》 规定 的方 法 ．
１１ 集 菌 涂 片 法 通 过 加 大 被 检 标 本 的 体 积 或 通 过 离 心 、 ．． ２
ｆ 键 词 】结 核 分 枝 杆 菌 ； 核 病 ； 测 方 法 ； 究进 展 关 结 检 研
【 图分 类号】 ７ ．１ １ 中 Ｒ３ ８９ ＋
【 文献 标识 码】 Ａ
【 文章 编号 】 ６ ４ ４ ２ （ ０ ３） １ ａ） ０ ２ — ２ １ ７ — ７ １２ １ Ｏ （ 一 ０ １ ０
ＣＨＮＡ Ｍ０Ｄ Ｎ ＭＥ ＣＩＥ 中 国 当代 医药 Ｉ ＥＲ ＤＩ Ｎ ２ １
・
综
源自文库
述 ・
染 问题 ， 自动 化 程 度 高 Ｉ 。 ３２ 分枝 杆 菌 分 子 菌 种 鉴 定 ．
２１ ０ ３年 １月 第 ２ ０卷 第 ｌ 期
枝 杆 菌 快 速 检 测 的新 技 术 。 根 据 噬 菌 体 能 够 感 染 ，裂 解 结
浮游 等 方法 ， 集标 本 巾 的抗 酸 杆菌 ， 富 与厚 涂 片法 相 比 ， 方
法 操 作 繁 琐 、 床 应 用 不 多 。 涂 片 抗 酸 染 色 法 ， 然 有 简 临 虽
便 、 捷 、 本 低廉 的 优 点 ， 其 敏 感性 低 ， ３ ．％ ， 快 成 但 为 ６８ 特异 性 为 ９ ．％ ． 不 能 区 分 结 核 与 非 结 核 分 枝 杆 菌 ｌ ４３ 且 ２ Ｉ 。
１ 培 养 法 ． ２
熊 围亮等Ｉ Ｉ 报道应 用变 色液 体 ： 培养 基检测 痰标本 阳性 率 达
５ ．％ ， 均 检 出 时 间 为 ７ｄ 污 染 率 为 ２８ ； 照 的 改 良 ３２ 平 ， ．％ 对
１ ． Ｂ Ｃ Ｅ — Ｂ ４ Ｏ快 速 检 测 系统 其 主要 原 理是 测 ．１ Ａ Ｔ Ｃ Ｔ 一 ６ ２ 定结 核 分枝 杆 菌的代 谢 产物 。在米 氏 ７ ２培 养基 中加入 Ｈ１ 含放射 性 ｔ ４ Ｃ的量 ， 用生长 指数 ＧＩ 值表示 ， 于 １ 阳性＿ 大 ９为 ３ Ｉ 。
原 因 ，在 世 界 上许 多 地 方 结 核 病 发 病 率 出 现 了 回 升 的 现 象 。结 核分 枝 杆 菌是 结核 病 的主要 致 病 菌 ， 在人 群 中传 可 播 ， 外 界环 境 的抵 抗 力 强 ， 产 生耐 药 菌株 Ｉ 对 易 ” 。传 统 检 测 结 核 分 枝 杆 菌 的 方 法 有 涂 片 找 结 核 分 枝 杆 菌 法 、 养 法 以 培
大 流 动 、菌 株 变 异 和 耐 药 性 的 产 生 、 Ｉ 感 染 流 行 等 种 种 ＨＶ
本 最 早 仅需 ２ｄ就 能 检 出 ，阴性 一 般 １ 月 可发 报 告 ： 个 而 传 统 的改 良罗 氏法 最早 检 出一 般 为 ２ ０ｄ左右 ，阴性 ２个
月 发 报 告 。 此 方 法 不 仅 可 用 于 分 枝 杆 菌 的 分 离 ， 时 也 可 同
ｓ ｖ ｒ ｌ ａ ｇ ｎ ｅ ｐ ｅ Ｓ ｈ ａ ｔ ，ｈ ｇ ｎ ｉ ｅ ｃ ａ ｅ ａ ｄ ｈ ｇ ａａ ｉ ａ ｅ ｅ ｅ ｅ ｙ ｄ ｍａ ｉ ｇ ｐ ｏ ｌ ｅ ｌ ｈ ｉｈ ｉ ｃ ｄ ｎ ｅ ｒ ｔ ｎ ｉ ｈ ｆ ｔｌｔ ｒ ｔ ．Ｄｕ ｏ ｌ ｗ ｐ ｓｔｖ ａ ｅ ｂ ａ ｔ ｒ ｌ ｇｃ ｙ ｅ ｔ ｏ ｏ ｉ ｅ ｒ ｔ ｙ ｂ ｃ ｅ ｉ ｏ ｉ ｉ ｏ
性 片 段 长 度 多 肽 性 鉴 定 法 ； Ｃ 一 链 构 象 多 肽 性 分 析 鉴 Ｐ Ｒ 单 定 法 及 Ｐ Ｒ 基 因 芯 片 鉴 定 法 等 前 ４种 方 法 只 能 鉴 别 部 Ｃ 一
操作 繁 琐 、 时 。近年来 ， 验室 研究 了一 系 列 的新技 术 耗 实 和方 法 ． 对传 统 的检 测 技 术加 以补 充 ， 补 了其 不 足 ， 得 弥 取
了很 大 的 进 步 ． 对 其 研 究 进 展 综 述 如 下 ： 现 １细 菌 学 诊 断 技 术
１１涂 片 法 ．