结核分枝杆菌与实验室生物安全
结核杆菌实验室生物安全规程
结核杆菌真验室死物仄安规程之阳早格格创做1、真验室管造造度（1）真验室出心处必须揭上死物伤害标记，证明伤害果子，死物仄安级别，考查室控造人战相关控造人姓名战电话.（2）真验室应有明隐的天区区分，浑净区，办传染区战传染区.（3）无论加进真验室时间少短，必须挖写处事日志.要庄重按照真验室的十足支配规程.（4）举止结核菌支配时，需有二名处事人员共时加进真验室，尽管防止单独考验天戴网处事.（5）正在对于大批量的痰标本战菌株举止分散培植战药敏考查前，英语核心新主任战真验室主任计划，需要时加强防止步伐.（6）考查室人员应搞结核菌素考查，考查截止为阳性时，应交种卡介苗，并搞佳备案记录.（7）中去进建，瞅赏人员必须教习真验室的十足规定造度战有关支配规程，经考查室主任接受圆可加进真验室.2、标本支集人员仄安央供（1）标本支集人员的防备：痰标本有病人自止留与，支集吐拭子等特殊标本，支集人员应脱防备服，戴一次性心罩，帽子，戴医用脚术脚套.（2）支集标本传染器材的处理：支集标本的痰盒，试管等传染器材军需下压处理.3、标本运支仄安央供痰标本需留置正在特造的痰盒内（曲径4cm，下2cm的光心盖稀关的塑料盒），并搁置正在博用的痰标本运支箱内，运支历程中切勿倒置，宽防痰液中溢.由有博人支至痰检真验室，标本支达后痰标本运支箱考验天戴网即时用乙醇或者是碳酸等化教消毒剂或者下压的办法真足消毒.4、真验支配仄安央供（1）结核病细菌教真验室央供结核病细菌教真验室应为死物仄安Ⅲ级真验室，用于临床诊疗，教教，属中度伤害.应具备仄安设备，慢冲间真验室条件应谦脚处事任务的央供，有完备的考查办法，考查室的环境应浑净，卫死，宁静，无传染，考查室内的管线树坐应整齐，要有仄安管造步伐战报警，应积及慢救办法，房间数量很多于七间，包罗真验室准备室，培植体造备室，隐微镜查看室，图片查看室，交种室，培植室下压消毒室等.具备完备的品量包管体系中应有粗确的分级责任造度，以保证考验的处事品量，包管考验，复核，科研截止等各项报告的准确稳当性.（2）真验室仪器设备及功能的央供结核菌素查看时必须正在二级死物仄安柜内举止，无菌支配内禁搁纯物，并应造定大天，门窗，墙壁，办法等的定期浑净，灭菌规程，支配间不紫中线灯；真验室内应光芒明明.具备本能良佳的Ⅱ型死物仄安柜，恒温培植仪器，单目死物隐微镜，蒸汽凝固灭菌箱，下压蒸汽灭菌锅等仪器设备，并对于百般仪器博人管造，定期喊阎检定，对于分歧格，待建，待检的仪器，要有明隐德状态标记，并应即时举止相映的处理.所有使用人应经考核合格后圆可支配仪器.（3）对于考验人员的仄安央供进止结核菌处事的人员须经训练后圆能介进支配，并庄重依照支配准则战其余国家尺度举止各项考查，准确治疗考查截止.训练尺度由各等第的真验室根据国家尺度战确定自止造订，通过考核后，还须与有资格的处事人员一共处事3个月，才搞赢得支配资格.非博业技师人员，无博业技能职称者不得进止考验的技能处事.（4）加进真验室的规定造度a.非真验室处事人员一律克制加进考查区.b.真验室内克制饮食，吸烟，交待访客战喧哗.c.举止结核菌支配时，需有二名处事人员共时加进真验室.d.处事人员如有皮肤益伤，收热，感冒战妊娠六个月以上者，不克不迭加进读君真验室.e.处事完成，查看各真验室火，电，防火设备，挨启防匪报警拆置.f.进止与毒菌有关的处事后，7日内不可离启真验室天圆都会.如出现身体不适局里，应正在真验室天圆天举止医教瞅察.果处事本果必须离启时，用心服抗结核药物防止.（5）不料事变及处理a.真验历程中，支配台或者大天的传染，如菌液溢出，挨破结核分枝杆菌培植皿战药敏管等，应坐时喷洒消毒液，待消毒液真足浸泡30分钟后，举止浑理.浑理后的东西，下崖灭菌.b.真验历程中，如传染物溅降正在身体表面，或者有割伤，烧伤，烫伤，熏染动物咬伤等情况，应坐时举止慢迫处理：皮肤表面用消毒液荡涤，伤心以碘酒到底消毒，眼睛用无菌死理盐火浑洗.事变的情况应报告真验室主任战上级收袖.c.真验历程中，如爆收气溶胶传染，应坐时关关真验室，用消毒液喷雾战紫中线映照传染的天区，24小时后再举止终终消毒.d.举止毒菌支配后，有疑似症状出现时，应坐时背真验室主任报告，瞅察便医.（6）传染物处理及消毒a.考查用试管，吸管及其余器械，需拆载加盖不漏的容器内，经下压灭菌后，拿出真验室.b.培植物及污物，经下压灭菌后，拿出真验室.c.出真验室的换衣程序：先用消毒液浸泡脚套5分钟，依次与消心罩，眼镜，防备服，三角头巾，鞋，正在浸泡脚套后脱去脚套.d.洗脚后以75%酒粗棉球揩里部裸露部位，用3%硼酸火漱心，离启真验室.e.真验室内，已经消毒的污火克制曲交排进大众排火系统.以消毒的污物集结倒进博用污物坑(污物坑的深度2---3米)，禁绝混进住户死计垃圾.5、死物标本保存仄安央供结核分枝杆菌菌株必须由博人控造，依照卫死部（1985）《华夏医教微死物菌种支躲管造办法》确定真止.应正在4℃博用冰箱内保存，并央供单人单锁，有庄重的菌株收与战销毁造度.。
二级生物安全实验室涉及主要菌种及样本
二级生物安全实验室涉及主要菌种及样本
二级生物安全实验室是研究和操作较高级别生物材料的实验室，拥有更严格的安全措施和操作规范。
在二级生物安全实验室中，主要涉及以下菌种和样本：
1. 流感病毒：包括甲型流感病毒和乙型流感病毒等。
这些病毒是引起流感的主要病原体。
2. 结核分枝杆菌：结核分枝杆菌是引起肺结核的病原体，具有较高的传染性和致病性。
3. 空肠弯曲菌：空肠弯曲菌是引起食物中毒和胃肠炎的主要病原微生物之一。
4. 传染性单核细胞增多症病毒：也称为巨细胞病毒，是一种引起多种感染性疾病的病原体。
5. 慢性乙型肝炎病毒：这是一种引起慢性乙型肝炎的病毒，具有较高的传染性和病原性。
6. 肺炎支原体：肺炎支原体是引起肺炎的主要病原菌之一，可引起呼吸道感染。
在二级生物安全实验室中，使用以上菌种和样本时要严格遵守操作规程，确保实验过程的安全性和有效性。
分枝杆菌分离培养的实验室生物安全
投稿邮箱：sjzxyx88@·医学检验·（下转第114页）0 引言由于分枝杆菌有较强的传染性，操作结核分枝杆菌的实验室人员结核病发病率比其他人群高3倍，因此在进行分枝杆菌分离培养时实验室安全问题已经成为结核病防治机构实验室必须关注的问题[1]。
就更好地保障实验室的生物安全问题，本人根据多年的工作经验，总结一些粗浅的看法。
分枝杆菌分离培养实验室的生物安全工作的开展，应严格遵循科学合理、安全第一、严格管理、远离病原、预防为主、简便易行的原则[2]，具体实施如下。
1 实验室要配备必须的安全设施（1）有独立的实验室，室内有上下水，分区与布局符合生物安全防护的基本要求；（2）实验室出口处应设专用洗手池，应设紧急洗眼设施；（3）实验室的墙壁、天花板和地面要平整，易清洁、不渗水、耐化学品和消毒剂的腐蚀，地面应防 滑；（4）实验室门应带锁可自动关闭，并有可视窗；（5）实验室应设实验操作间和准备间，具有足够的空间进行实验和放置物品；（6）实验室所在建筑内应配备高压蒸气灭菌器，并按期检查和验证，以保证符合要求；（7）实验室内应配备Ⅱ级生物安全柜，紫外线灯，废物桶，感应水龙头；（8）实验室必需有可靠的电力供应和应急照明，重要设备如生物安全柜、培养箱、冰箱等宜用设备电源；（9）实验室出入口应有在黑暗中明确辨认的标识。
2 要做好个人防护实验室工作人员要配备专用防护服，进入实验室应使用专用防护服，操作时应戴一次性N95口罩、一次性帽子、鞋套和一次性乳胶手套。
3 操作环节中严格遵守相关操作规程实验前首先要用生物安全柜内及实验室内紫外线照射1h，工作人员进入实验室前必须穿好防护服，戴上口罩、帽子、手套、鞋套，并检查有无破损，女检验员头发装束在帽内；操作人员在操作时应严格遵守实验室安全操作规程和标准化操作程序（SOP）；操作过程中警惕分枝杆菌气溶胶的产生，禁止一切与实验无关的活动，保证聚精会神完成操作，实验过程中禁止吸烟、饮食及用嘴湿润铅笔或标签等，也不要以手抚摩头、面部等。
细菌,结核分枝杆菌真菌控制流程
细菌,结核分枝杆菌真菌控制流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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结核病实验室安全管理
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结核 病 实 验 室安全 管理
曹鸿远
结核分枝杆菌属于二 类传染 性病原微 生物 ， 通过 呼吸道 传播 ， 由于结核病 与艾 滋病 的双重感 染 以及 耐多药结 核病 的 逐步蔓延 ， 结核 医院及 其实验 室人员存 在着很 大 的生 物安全 风险 。因此 ， 对结 核病 实验室生 物安全 主要风 险 因素 进行分
规 范 的处 理 可对 实验 室 和周 围 环境 造成 污染 。
进入实验室 ； 实验室人员 必须在 身体状况 良好 的情况下才 能
进入实验室 ， 特别是进 入负压 的 Ｂ Ｌ２实验 室工作 时更必 须 Ｓ一 保证在健康状态 ； 未经 生物安全 知识培训 者不得 从事相关 实 验操作 。 ３ 实验室环境 消毒 。每 天用 有 效浓 度 的含 氯消 毒剂 喷 ． 洒、 擦拭工作 台、 椅子等 ， 对地面进行湿式清扫 ， 持清洁。房 保
要 严格 登记 。
８ 消毒灭菌效果监测 。对使用 中的消毒剂 、 ． 灭菌剂 、 力 压
房 间面积为 １ ２平 方米 ， ～ 按呼吸道感染病房标准设计 。其 它标本采集 窗 口大部 以玻璃遮 挡 ， 留部分 活动 区域 以便 于 仅 标本采集 ， 配备换气扇 、 紫外线灯和感应性洗手池 等。
四、 其它 ： 佩戴 Ｎ ５口罩在负 压实 验室 内较长 时 间工 如 ９ 作 时， 由于 Ｎ ５口罩 对面 部的压 迫 ， 导致 操作人 员烦 躁 甚 ９ 可
至晕厥或诱发其他心血管疾病 等 。
实验 室安全管理措 施。
一
间每天在无人时紫外线照射 ２次 ， 每次不少于 ３ ０分钟 。
生物安全知识培训伤负压的bsl2实验室内工作突然断电等时应按照预先制实验室每年定期对工作人员进行培训保证其掌握实验订的应急程序紧急处理并按事故的等级划分向有关负责人室技术规范操作规程生物安全防护知识和实际操作技能或主管部门报告同时作好实验室相关感染记录医院生物安并进行考核
抗酸杆菌痰涂片检验的实验室生物安全
抗酸杆菌痰涂片检验的实验室生物安全抗酸杆菌痰涂片检验作为对传染性肺结核的诊断手段比X线诊断准确性高；作为实验方法，技术相对简单，容易标准化和完成操作；其投入设备少、成本低；从收到标本到报告结果的时间短，能够及时、准确地评价涂阳患者的治疗效果，被我国设为结核病控制项目的主要实验室检验方法。
但结核分枝杆菌（抗酸杆菌）为二类高致病性病原菌，其自身的生物学特性使其容易在实验室造成对工作人员及相关人员的感染和环境的污染，形成对公众的伤害，操作结核分枝杆菌的实验室人员结核病发病率比其他人群高三倍，因此抗酸杆菌痰涂片检验的实验室安全问题已经成为当前结核病防治机构实验室必须关注的问题目前，在市、县、乡级结核病防治机构没有建立BSL-2实验室的情况下，就更好地保障实验室的生物安全问题，本人根据多年的工作经验，谈一些粗浅的看法。
实验室的生物安全工作的开展应遵循科学合理、安全首位、软件在先、严格管理、远离病原、预防为主、使用方便、厉行节约的原则，具体实施如下：实验室首先要配备必须的安全设施：1）有独立的实验室，室内有上下水，通风良好；2）室内设通风柜、高压灭菌器、紫外线灯、废物桶、感应水龙头；3）标本的收集、涂片、染色、镜检、登记和涂片的储存应在各自独立的区域；4）设有独立生物咳痰室，内设紫外线灯（按1.5W每立方米计算），每个病人咳痰后必须打开紫外线灯灭菌，如果没有此设施，要叮嘱病人在远离人群的开放空间留取标本，防止肺结核病人咳漱产生的结核杆菌气溶胶造成对人的传播及对环境的污染。
其次要做好个人防护，实验室工作人员要配备一次性聚氯乙烯手套、一次性帽子、口罩、鞋套和防护服。
第三要使用以下消毒剂：5%的苯酚溶液、75%的酒精、甲醛、2%的戊二醛及2%的乙醛溶液。
在操作环节上，严格遵守以下方法和措施：实验前首先要用紫外线灯将操作台面及室内照射一小时，工作人员进入实验室前必须穿好防护服、戴上口罩、手套、鞋套，病检查有无破损；女检验员长发束在帽内；操作人员在操作时应严格遵守实验室安全操作规程和标准化操作程序（SOP)；在实验过程中，禁止一切与实验无关的活动，保证集中精力完成操作；在操作过程中，要警惕分枝杆菌气溶胶的产生，涂片操作要小心谨慎，动作轻缓，固定和染色操作时产生气溶胶的几率较大，Allen Bw实验结果表明，样品热固定不能杀灭所有涂片标本中的结核杆菌，若涂片长时间暴露在高温中，残留活菌减少，并仅见于涂片厚的部分，从而提高热固定时痰液对细菌的保护作用，新鲜痰液粘滞度越大，加热固定时对细菌的保护作用越强，为避免此风险，操作人员要做到双手伸入操作台操作，面部通过通风柜的玻璃与操作台面隔开（在操作过程只利用通风柜的屏障功能）；完成涂片后立即染色，若不能及时染色涂片，应浸泡在2%乙醛溶液中，不可以将涂片暴露在空气中，涂片在空气中暴露的时间越长，感染的机会越大，这是操作者尤其需要注意的问题；另外涂片不能涂抹太厚尤其是新鲜痰液；经过染色的结核分枝杆菌已不能存活。
结核病实验室人员的呼吸防护
呼吸防护口罩是否可以清洗和消毒？
• 口罩不能进行清洗，不建议进行消毒或灭菌处理。这些处理都可能 会破坏口罩的某些性能。
• 常用的消毒方式中，紫外线、过氧化氢、环氧乙烷、次氯酸钠漂洗 等方法不会明显影响口罩滤材的过滤性能；但高温处理（如微波、 高温蒸汽）可导致滤材性能降低。*
• 紫外线、微波易破坏口罩的鼻垫、头带性能，可能影响佩戴密合性， 从而导致其防护性能下降。
• 美国职业安全健康管理局(OSHA)《呼吸保护标准》 29CFR1910.134, 适用于所有职业场所呼吸器的使用，其中 包括适合性检验的要求、方法适用性和雇主的责任。
• GB/T 18664 附录E，包括适合性检验要求和适用的方法举 例。
注：GB/T 18664《呼吸防护用品的选择、使用与维护》在 编写中以OSHA 29CFR1910.134作为重要参考。
定性适合性检验——适合性检验
– 7个“规定动作” : • 正常呼吸 • 深呼吸 • 抬头/低头 • 左右转头 • 说话 • 弯腰 • 正常呼吸
– 每个动作1分钟 – 当尝到相同强度的味道时，说明泄漏。 – 受检者允许做两次。两次测试不通过，认为此款
面罩不适合该受检者。
现场演示
呼吸防护的有效性总结
观看录像
用加湿器产生的水雾说明……
常见口罩的种类、区别及应用
口罩种类
医用防护口罩 外科口罩 纱布口罩
一次性医用口罩 N95口罩/
FFP2/FFP3
医疗 符合 医疗注
器械 GB/YY 标 册证 准
✓ GB19083 - ✓ II 类 2003
✓ YY0469 - ✓ II 类 2004
?
GB 19084 （作废）
• 重复使用防护口罩有如下一些限制因素：二次污染的可 能性、使用卫生性、口罩材料和结构耐用性。
微生物安全等级分类四级
微生物安全等级分类四级
微生物安全等级分类四级（Biosafety Level 4, BSL-4）是最高级别的生物安全实验室，用于处理最危险的病原体，包括那些对人类健康和环境造成重大威胁的病原体。
BSL-4实验室通常采用高度密闭的设计和高级别的防护措施，以防止病原体的泄露和传播。
实验室内的工作人员必须穿着特殊的防护服和手套，并在实验室内采取严格的卫生和安全措施，以确保实验室内的安全。
BSL-4实验室通常用于研究和处理以下病原体：
1. 高度传染性的病原体，如埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉萨热病毒等。
2. 能够引起严重疾病的病原体，如结核分枝杆菌、鼠疫杆菌等。
3. 其他对人类和环境造成严重威胁的病原体，如霍乱弧菌、沙门氏菌等。
BSL-4实验室的建设和运行需要高度的技术和管理支持，以确保实验室内的安全和有效的生物安全措施。
结核分枝杆菌生物安全三级实验室表面去污染消毒剂杀菌效果的研究
结核分枝杆菌生物安全三级实验室表面去污染消毒剂杀菌效果的研究韩文东;孙志平;丁悦娜;瞿涤【摘要】在高致病性病原微生物实验活动过程中，选择有效的消毒剂对实验室环境去污染非常重要，这也是避免实验室获得性感染发生的有效途径。
本研究针对结核分枝杆菌 H37Rv ，应用滤膜过滤悬液定量杀菌实验进行消毒剂验证，其中75．0％乙醇、含有效氯1000 mg／L的次氯酸钠及Safespore消毒剂可高效杀灭结核分枝杆菌，37．5％乙醇作用延长至10 min也可有效杀灭结核分枝杆菌，这为选择针对结核分枝杆菌的生物安全三级实验室表面消毒剂提供了依据。
%The application of effective disinfectants during experimental activities of high‐pathogenic microorganism is crucial for decontamination of laboratory environment to prevent laboratory‐acquired infections .In this study , the quantitative germicidal disinfectant validation experiments using membrane filtration suspension were conducted against Mycobacterium tuberculosis (M . tuberculosis) H37Rv .Sodium hypochlorite solution (containing 1 000 mg/L active chlorine ) , 75% ethanol/water , and Safespore disinfectant killed M . tuberculosis efficiently .When the concentration of ethanol decreased to 37 .5% ,it was still able to kill M . tuberculosis by prolonging killing time to 10 min . The results suggest that 75%ethanol/water is suitable as conventional disinfectant and sodium hypochlorite solution (containing 1 000 mg/L active chlorine) is suitable under emergency and accident in biosafety level 3 laboratories (BSL‐3) .【期刊名称】《微生物与感染》【年(卷),期】2015(000)005【总页数】7页(P301-307)【关键词】结核分枝杆菌;生物安全三级实验室;表面去污染;消毒剂【作者】韩文东;孙志平;丁悦娜;瞿涤【作者单位】上海复旦大学三级生物安全防护实验室，复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室，上海200032;上海复旦大学三级生物安全防护实验室，复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室，上海200032;上海复旦大学三级生物安全防护实验室，复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室，上海200032;上海复旦大学三级生物安全防护实验室，复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室，上海200032【正文语种】中文结核分枝杆菌生物安全三级实验室表面去污染消毒剂杀菌效果的研究韩文东，孙志平，丁悦娜，瞿涤上海复旦大学三级生物安全防护实验室，复旦大学基础医学院教育部／卫生部医学分子病毒学重点实验室，上海200032摘要：在高致病性病原微生物实验活动过程中，选择有效的消毒剂对实验室环境去污染非常重要，这也是避免实验室获得性感染发生的有效途径。
结核病实验室要求
一、实验室生物安全实验室环境安全：根据我国《病原微生物实验室生物安全管理条例》、《实验室生物安全通用要求》、《人间传染的病原微生物名录》和《医疗机构临床实验室管理办法》的规定，结核分枝杆菌大量活菌操作须在符合生物安全三级（Laboratory Biosafety Level 3）的环境中进行；样本检测（包括涂片、显微镜观察、样本的病原菌分离纯化、药物敏感性试验、生化鉴定、免疫学实验、PCR核酸提取等初步检测活动），可以在符合生物安全二级（Laboratory Biosafety Level 2）的环境中进行。
实验室所用设施、设备和材料（含防护屏障）均应符合相关的标准和要求。
实验室操作安全：由具有相关专业知识和操作技能的工作人员进行实验室操作，实验人员应该认真负责，格按照标准化、规化的操作程序进行各项实验室操作。
菌种或样本运输安全：为保障人体健康和公共卫生安全，在运输可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本时，须按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》的要求进行包装、运输、操作、保藏和管理。
废弃物处理安全：为防止疾病传播，保护环境，保障人体健康，医疗废弃物的处理应格按照《中华人民国传染病防治法》和《中华人民国固体废物污染环境防治法》，以及《医疗废物管理条例》的相关规定妥善处理。
（一）痰涂片镜检实验室基本要求1.实验室应分区（痰涂片染色区域和读片镜检区域），布局应符合生物安全二级防护的要求。
2.准入规定，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，未经批准任人不得进入实验室工作区域，实验室的门应随时关闭。
3.个人防护，在实验室工作时，应穿防护服、隔离衣，并佩戴口罩（面具）和手套等。
4.实验室墙壁、天花板和地板应易清洁、不渗液，并耐化学品和消毒剂的腐蚀，地面应防滑。
5.实验操作台面应耐热、防水，耐消毒剂、酸、碱和有机溶剂的腐蚀。
6.实验室应保证操作时的照明，避免不必要的反光和闪光。
结核分枝杆菌培养药敏实验及质量控制
13
基本步骤：
制备培养基 标本前处理（去污染） 接种 孵育 报告结果
2007-10-11
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一、培 养 基
酸性罗氏（Lowenstein-Jensen）培养基
天门冬素
3.6g
或谷氨酸钠（纯度99%以上）7.2g
KH2PO4 MgSO4.7H2O 枸橼酸镁
14.0g 0.24g
结核分枝杆菌（MTb）结核病的病原体 • 1882年郭霍（Robert Koch）发现 • 繁殖时有分支生长的趋势，故称分支杆
菌 • 具有抗酸性,又称抗酸杆菌,用抗酸染色
的方法检查分枝杆菌 • 分枝杆菌有致病性和非致病性两大类 • 主要引起肺結核的致病性分枝杆菌有人
型、牛型、非洲、田鼠分枝杆菌
二、痰涂片镜检标准化操作
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污染率过高？
可能原因
解决方法
标本保存不当 涂片留取后24小时内培养，不能及时 (时间、温度） 培养的4oC冰箱保存。
前处理不充分 4％，1－2倍，充分混旋，20分钟。
材料灭菌不佳 接种用吸管需高压灭菌。
操作不当
培训，严格按操作规程操作。
培养基因素
统一供应，4oC直立保存，1个月内使 用
2007-10-11
耐药性测定常用方法
• 绝对浓度法:是我国30 多年来一直沿用的药敏 试验方法，为目前我国大多数结核病专科医院 常规使用的用于临床检测的方法。
• 比例法:是WHO 全球耐药监测项目中推荐的标 准药敏试验方法，目前为我国流行病学监测和 耐多药结核病规划管理项目所采用的方法。
• 二者在临界药物浓度接种菌量、结果判读方法 等方面都有一定差别。
INH （异烟肼）
0.2
SM （链霉素）
结核病实验室生物安全
高压灭菌器使用
灭菌过程中： 随时查看所设定温度（121度）、压力是否 正确。（121度，30分钟）
灭菌后： 开门前务必确定內锅压力表已经归零。 灭菌器中各项物品及灭菌器本身均高温， 取出物品时应戴手套。 随时保持锅內清洁，以延长使用年限。
个人防护装备 (PPE)
在生物安全实验室中，这些器材和用品主要是保 护实验人员免于暴露于生物危害物质（气溶胶、喷 濺物以及意外接种等）危险的一种物理屏障。
或培养基中的结核分枝杆菌。
生物安全意识至关重要！！ 谢谢 ！！
的类型 正确的使用方法 使用前应仔细检查，不使用标志不清、破
损或泄漏的防护用品
个人防护
出实验室前，一定要洗手！
废弃物处理
传染性废弃物对实验员和环境危险性极大. 在废弃物离开实验室前必须高压灭菌或去
污染处理.
结核菌污染物品灭菌
结核分枝杆菌对湿热敏感 100℃煮沸5min可杀死痰中结核杆菌。 121℃压力蒸汽30min，可杀灭动物脏器、痰
BSL-1
BSL-2
BSL-3
原则：定向气流
实验室生物安全控制要素
设施设备
管理
个人防护装备
标准操作程序
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结核菌是通过气溶胶传播
可能产生气溶胶的操作
涂片 培养液的倾倒和转移； 高速混合含菌液体； 滴加、接种培养物； 取样器和振荡器的使用； 容器内外压力不同时打开容器
实验室仪器设备操作及其危险性
样本检测，包括样本的病原菌分离纯化、 药物敏感性实验、生化鉴定、免疫学实验、 PCR核酸提取、涂片、显微观察等初步检测活 动，可以在符合生物安全二级（BSL-2）的环 境中进行。
Ⅱ级生物安全柜
用于保护操作人员、处理样品安全与环境安 全的通风安全柜，柜内保持负压状态，适用 于生物危险度等级为1、2、3的媒质的操作。
县医院免疫科结核杆菌实验室生物安全规程
县医院免疫科结核杆菌实验室生物安全规程1、实验室管理制度(1)实验室入口处必须贴上生物危险标志，注明危险因子，生物安全级别，试验室负责人和相关负责人姓名和电话。
(2)实验室应有明显的区域划分，清洁区，办污染区和污染区。
(3)无论进入实验室时间长短，必须填写工作日志。
要严格遵守实验室的一切操作规程。
(4)进行结核菌操作时，需有两名工作人员同时进入实验室，尽量避免单独工作。
(5)在对大批量的痰标本和菌株进行分离培养和药敏试验前，应与中心新主任和实验室主任讨论，必要时加强预防措施。
(5)试验室人员应做结核菌素试验，试验结果为阴性时，应接种卡介苗，并做好登记记录。
(7)外来进修，参观人员必须学习实验室的一切规章制度和有关操作规程，经试验室主任批准方可进入实验室。
2、标本采集人员安全要求(1)标本采集人员的防护：痰标本有病人自行留取，采集咽拭子等特殊标本，采集人员应穿防护服，戴一次性口罩，帽子，戴医用手术手套。
(2)采集标本污染器材的处理：采集标本的痰盒，试管等污染器材均需高压处理。
3、标本运送安全要求痰标本需留置在特制的痰盒内(直径4cm，高2cm的光口盖密闭的塑料盒)，并放置在专用的痰标本运送箱内。
运送过程中切勿倒置。
严防痰液外溢。
由有专人送至痰检实验室。
标本送达后痰标本运送箱及时用乙醇或是碳酸等化学消毒剂或高压的办法彻底消毒。
4,实验操作安全要求(1)结核病细菌学实验室要求结核病细菌学实验室应为生物安全III级实验室，用于临床诊断、教学，属中度危险，应具备安全设备。
缓冲间实验室条件应满足工作任务的要求，有完善的试验设施，实验室的环境应清洁、卫生、安静、无污染。
试验室内的管线设置应整齐，要有安全管理措施和报警。
应急及急救设施房间数量不少于七间，包括实验室准备室、培养机制备室、显微镜检查室、图片检查室接种室、培养室高压消毒室等。
具备完善的质量保证体系中应有明确的分级责任制度，以确保检验的工作质量，保证检验、复核、科研结果等各项报告的准确可靠性。
结核分枝杆菌与实验室生物安全
结核分枝杆菌与实验室生物安全广东省结核病防治研究所钟球钱明附件广东省结核病防治研究所钟球钱明§ 结核病的定义§ 结核病的疫情§ 结核病病原学§ 结核病的流行§ 结核病实验室生物安全§ 结核病实验室安全防护§ 结核病实验室废物处理§ 结核病职业暴露§ 结核病是由结核分枝杆菌（偶尔可由牛型或非洲型分枝杆菌）引起的一种细菌性疾病。
结核病可累及全身各个器官，但以肺结核最为常见。
该病具有传染性强，散播面广，不分地域均可发生。
结核病可由呼吸道、消化道、皮肤等途径感染，但其主要传播途径是以空气为传播因子的呼吸道传染，而排菌的肺结核病人传染性更大，是传播感染的主要传染源。
结核病的疫情n 感染人数约为20亿n 新发活动性肺结核病人890万(141/10万)n 新发涂阳肺结核病人 390万n 结核病发病率每年增加1%n 估计患病人数为1550万例（患病率为246/10万）其中包括HIV+TB38万例n 死于结核病为180万例，结核病死亡率为29/10万,其中包括HIV+TB死亡27万例结核病病原学§ 结核分枝杆菌是引起人类结核病的主要病原体。
1882年由德国医生Koch发现。
在微生物分类中，结核分枝杆菌属于厚壁门、裂殖菌纲、放线菌目、分枝杆菌科、分枝杆菌属。
分枝杆菌复合群共包括人型、牛型、非洲型和田鼠型，而人型结核分枝杆菌是人类主要的致病菌。
结核分枝杆菌的形态§ 结核分枝杆菌菌体具有多形态特征，除正常典型形态外，受不良生长条件的影响。
如物理因素、化学因素，特别是药物因素，而呈现异常变化，其各种形态可归纳为杆菌型（基本形态）、滤过型、颗粒型和球菌型（L型）4种类型。
§ 1. 杆菌型（基本形态）结核分枝杆菌正常典型的形态是直或稍弯曲、两端钝圆的杆菌。
菌体长1～4μm，宽0.3～0.6μm，无芽胞、无荚膜、无鞭毛，生长发育期间有分枝生长倾向。
结核杆菌实验室生物安全规程教程文件
结核杆菌实验室生物安全规程1、实验室管理制度(1)实验室入口处必须贴上生物危险标志，注明危险因子，生物安全级别，试验室负责人和相关负责人姓名和电话。
(2)实验室应有明显的区域划分，清洁区，办污染区和污染区。
(3)无论进入实验室时间长短，必须填写工作日志。
要严格遵守实验室的一切操作规程。
(4)进行结核菌操作时，需有两名工作人员同时进入实验室，尽量避免单独检验地带网工作。
(5)在对大批量的痰标本和菌株进行分离培养和药敏试验前，英语中心新主任和实验室主任讨论，必要时加强预防措施。
(6)试验室人员应做结核菌素试验，试验结果为阴性时，应接种卡介苗，并做好登记记录。
(7)外来进修，参观人员必须学习实验室的一切规章制度和有关操作规程，经试验室主任批准方可进入实验室。
2、标本采集人员安全要求(1)标本采集人员的防护：痰标本有病人自行留取，采集咽拭子等特殊标本，采集人员应穿防护服，戴一次性口罩，帽子，戴医用手术手套。
(2)采集标本污染器材的处理：采集标本的痰盒，试管等污染器材军需高压处理。
3、标本运送安全要求痰标本需留置在特制的痰盒内(直径 4cm，高 2cm 的光口盖密闭的塑料盒)，并放置在专用的痰标本运送箱内，运送过程中切勿倒置，严防痰液外溢。
由有专人送至痰检实验室，标本送达后痰标本运送箱检验地带网及时用乙醇或是碳酸等化学消毒剂或高压的办法彻底消毒。
4、实验操作安全要求(1)结核病细菌学实验室要求结核病细菌学实验室应为生物安全Ⅲ级实验室，用于临床诊断，教学，属中度危险。
应具备安全设备，缓冲间实验室条件应满足工作任务的要求，有完善的试验设施，试验室的环境应清洁，卫生，安静，无污染，试验室内的管线设置应整齐，要有安全管理措施和报警，应积及急救设施，房间数量不少于七间，包括实验室准备室，培养机制备室，显微镜检查室，图片检查室，接种室，培养室高压消毒室等。
具备完善的质量保证体系中应有明确的分级责任制度，以确保检验的工作质量，保证检验，复核，科研结果等各项报告的准确可靠性。
结核病实验室要求内容
一、实验室生物安全实验室环境安全：根据我国《病原微生物实验室生物安全管理条例》、《实验室生物安全通用要求》、《人间传染的病原微生物名录》和《医疗机构临床实验室管理办法》的规定，结核分枝杆菌大量活菌操作须在符合生物安全三级（Laboratory Biosafety Level 3）的环境中进行；样本检测（包括涂片、显微镜观察、样本的病原菌分离纯化、药物敏感性试验、生化鉴定、免疫学实验、PCR 核酸提取等初步检测活动），可以在符合生物安全二级（Laboratory Biosafety Level 2）的环境中进行。
实验室所用设施、设备和材料（含防护屏障）均应符合国家相关的标准和要求。
实验室操作安全：由具有相关专业知识和操作技能的工作人员进行实验室操作，实验人员应该认真负责，严格按照标准化、规范化的操作程序进行各项实验室操作。
菌种或样本运输安全：为保障人体健康和公共卫生安全，在运输可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本时，须按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》的要求进行包装、运输、操作、保藏和管理。
废弃物处理安全：为防止疾病传播，保护环境，保障人体健康，医疗废弃物的处理应严格按照《中华人民共和国传染病防治法》和《中华人民共和国固体废物污染环境防治法》，以及《医疗废物管理条例》的相关规定妥善处理。
（一）痰涂片镜检实验室基本要求1.实验室应分区（痰涂片染色区域和读片镜检区域），布局应符合生物安全二级防护的要求。
2.准入规定，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，未经批准任何人不得进入实验室工作区域，实验室的门应随时关闭。
3.个人防护，在实验室工作时，应穿防护服、隔离衣，并佩戴口罩（面具）和手套等。
4.实验室墙壁、天花板和地板应易清洁、不渗液，并耐化学品和消毒剂的腐蚀，地面应防滑。
5.实验操作台面应耐热、防水，耐消毒剂、酸、碱和有机溶剂的腐蚀。
6.实验室内应保证操作时的照明，避免不必要的反光和闪光。
结核分枝杆菌与实验室生物安全[医学材料]
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一级防护屏障
生物安全柜是最重要的安全设备，形成最主要 的防护屏障；
为消除或减少人员暴露于有害生物材料所配备 其他安全设备（如离心机负压罩等）；
必须给实验室工作人员配备必要的个体防护用 品：手套、口罩、鞋套、面罩、正压服等。
验室的特殊要求等；
•正在进行感染性试验时
禁止他人进入，或经负责
人同意后进行安全防护后
进入；
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• 工作人员接受必要的免疫接种，免疫耐受或正在
进行免疫抑制剂治疗的病人须经同意方可进入工
作；必要时留本底血清；
• 新员工必须接受培训方可进入工作，老员工必须
接受再培训；
• 尽量减少利器使用，严格按照规范操作；
➢ 事件原因：
• 意外事故—皮肤损伤；
• 虽抗结核治疗，但证实实验室感染；
• 意外事故感染预案—做好评估、处理和监测。
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二、结核杆菌的生物安全防护
➢实验室生物安全：
• 指实验室的生物安全条件和状态不低于容许 水平，可避免实验室人员、来访人员、社区 及环境受到不可接受的损害，符合相关法规、 标准等对实验室生物安全责任的要求。
• 实验室感染以气溶胶形式的呼吸道感染和皮肤感染。
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产生气溶胶的操作及预防
• 1. 接种：应使用无弹力的铂丝接种环，结核菌接种 后接种环火焰灭菌易崩散，酒精灯烧灼时要特别注 意。
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2. 混匀：吸管吸吹 菌液时不要产生气 泡，应沿容器壁排 出。
3. 研磨：最 好使用组织研 磨器，乳钵易 产生气溶胶。
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•
2. 化学因素的影响 化学消毒剂的种类很 多，其杀菌的机制因化学药物种类不同而 异。乙醇使菌细胞蛋白质变性、凝固而产 生杀菌作用。结核分枝杆菌直接接触70%～ 75%乙醇5～30分钟可被杀死，因此可用于 皮肤消毒。但由于乙醇能凝固蛋白，使痰 表面形成一层把菌体包裹起来的膜，短时 间内不能杀死细菌，故乙醇不能用于痰的 消毒。
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•
1. 物理因素影响 结核分枝杆菌生存能 力较强，在温室和阴暗处干燥痰内可以存 活6～8个月，粘附在飞扬的空气尘埃中可 保持传染性8～10天。结核分枝杆菌一般 较耐低温，在-6～8℃能存活4～5年。
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干热对结核分枝杆菌杀伤力弱，痰内 结核分枝杆菌在100℃下需要4～5小时被 杀灭。湿热对结核分枝杆菌杀伤力强， 在60℃30分钟、70℃10分钟、80℃5分钟 和90℃1分钟可将其杀死，因此煮沸与高 压蒸气消毒是最有效的方法之一。
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结核病的疫情
感染人数 约为20亿 新发活动性肺结核病人 890万(141/10万) 新发涂阳肺结核病人 390万 结核病发病率每年增加1% 估计患病人数为1550万例（患病率为246/10万） 其中包括HIV+TB38万例 死于结核病为180万例，结核病死亡率为29/10 万,其中包括HIV+TB死亡27万例
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结核病病原学
• 结核分枝杆菌是引起人类结核病的主要 病原体。1882年由德国医生Koch发现。 在微生物分类中，结核分枝杆菌属于厚 壁门、裂殖菌纲、放线菌目、分枝杆菌 科、分枝杆菌属。分枝杆菌复合群共包 括人型、牛型、非洲型和田鼠型，而人 型结核分枝杆菌是人类主要的致病菌。
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结核分枝杆菌的形态
• 结核分枝杆菌菌体具有多形态特征， 除正常典型形态外，受不良生长条件 的影响。如物理因素、化学因素，特 别是药物因素，而呈现异常变化，其 各种形态可归纳为杆菌型（基本形 态）、滤过型、颗粒型和球菌型（L型） 4种类型。
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1. 杆菌型（基本形态）结核分枝杆菌正 常典型的形态是直或稍弯曲、两端钝圆的 杆菌。菌体 长1～4μm，宽0.3～0.6μm， 无芽胞、无荚膜、无鞭毛，生长发育期间• • • •
结核病的定义 结核病的疫情 结核病病原学 结核病的流行 结核病实验室生物安全 结核病实验室安全防护 结核病实验室废物处理 结核病职业暴露
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• 结核病是由结核分枝杆菌（偶尔可由牛型或 非洲型分枝杆菌）引起的一种细菌性疾病。 结核病可累及全身各个器官，但以肺结核最 为常见。该病具有传染性强，散播面广，不 分地域均可发生。结核病可由呼吸道、消化 道、皮肤等途径感染，但其主要传播途径是 以空气为传播因子的呼吸道传染，而排菌的 肺结核病人传染性更大，是传播感染的主要 传染源。
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2. 滤过型 早在1901年，Foutes在检查细 菌滤器滤过的结核分枝杆菌培养滤液时， 在电子显微镜下观察到球状微粒体。1991 年，Khomeko在豚鼠损坏性肺结核模型中 证实了滤过型的存在。此球状微粒体可通 过细菌滤膜，称为滤过型 。
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3. 颗粒型 1907年莫赫(Much)在结核性冷 性脓肿、浆液性渗出液、干酪性淋巴结等 脓液中观察到革兰染色阳性颗粒，称为莫 赫颗粒。莫赫颗粒的重要意义在于这些颗 粒型体仍有生机与活力，在适宜的营养条 件下，可重新获得增殖，发育生长出典型 结核分枝杆菌。
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结核分枝杆菌对光线和射线敏感，在太阳光 直射下2～7小时死亡。病人用过的物品在强阳 光下直晒半日，基本可达到消毒的目的。10～ 1mg/ml菌悬液，液层厚度3mm，用10W紫外线 灯在距离确 0.5m处持续照射3分钟，在距离1m 处持续照射 10分钟，经培养无细菌生长。但紫 外线穿透力弱，难以透入固体物质内部和液体 深层，因此紫外线通常用于空气和物体表面消 毒。
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结核分枝杆菌的生长特性
• 结核分枝杆菌生长缓慢，繁殖一代在 人工培养基内约需要15～20小时，在静 脉感染未经免疫小鼠肺中约需要15小时， 在巨噬细胞内约需要15～20小时，在家 兔角膜中约需要20～22小时。
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结核分枝杆菌的抵抗力
• 结核分枝杆菌因细胞壁含大量类脂质， 尤其是腊样物质，具有疏水性，对物理 和化学因素的作用均较一般致病菌抵抗 力强。
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结核分枝杆菌的染色特性
• 结核分枝杆菌本身无颜色，观察结核 分枝杆菌必须染色后进行。结核分枝杆 菌革兰染色阳性，但革兰染色不易着色。 经苯胺染料着色后，能抵抗酸和酸乙醇 脱色，此种特性称为抗酸性。Z-N染色 法为最常用的一种抗酸染色方法，经此 法染色后，分枝杆菌，包括结核分枝杆 菌呈红色，而标本中其他细菌、细胞、 杂质等均呈蓝色
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苯酚主要通过破坏菌细胞膜而致细胞质内容 物漏出，使菌体蛋白质变性、凝固，抑制菌体 脱氢酶和氧化酶等酶系统杀死结核分枝杆菌。 2%苯酚 5分钟、5%苯酚1分钟能杀死结核分枝 杆菌培养物。5%苯酚与痰液等量混合，24小时 才能杀死结核分枝杆菌。煤酚皂溶液作用机制 与苯酚相似，0.5%煤酚皂60分钟，1%煤酚皂45 分钟，2%煤酚皂10分钟，5%煤酚皂5分钟，即 能杀死结核分枝杆菌培养物。5%～10%煤酚皂 等量混入痰标本，12小时可杀灭结核分枝杆菌。
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4. 球菌型（L型） 结核分枝杆菌在体内外 受物理、化学、免疫等因素的影响，维持菌 体固有形态的细胞壁缺损或丧失，产生细胞 壁缺陷型。细胞壁缺陷型细菌是1935年 Kilienberger在英国Lister医学研究院研究念珠 状链杆菌时首先发现的，故以Lister医学研究 院的第一个字母，将细胞壁缺陷型细菌命名 为L型菌。