免疫实验技术

ELISA的类型： (1)双抗体夹心法
测抗原
1）已知抗体包被 2）洗板 3）加待检抗原标本 4）洗板 5）加酶标记抗体 6）洗板 7）加底物显色，测定
（2）间接法
测抗体
1）己知抗原包被 2）洗板 3）加待检病人血清 4）洗板 5）加酶标记抗人IgG 6）洗板 7）加底物显色，测定
（3）竞争法 测抗原或抗体
测定抗原：在待测管中加入受检抗原和酶标抗原， 使它们同固相抗体进行竞争性结合。
酶联免疫吸附试验（ELISA）
间接法
Ag
待检血清 酶标抗抗体
检测 抗体
待检抗原
双抗体法 抗原竞 争法
ห้องสมุดไป่ตู้
Ag
检测 抗原
待检抗原 Ag Ag 酶标抗原 检测 抗原
2、胶体金免疫技术 以胶体金为标记物的抗原抗体反应。常 与膜载体技术结合，包括斑点金免疫渗滤 试验和斑点金免疫层析试验等。 斑点金免疫层析试验(dot gold immunochromatographic assay，DICA) 以硝酸纤维素膜为载体 如早早孕试验
三、 免疫标记技术
原理： 利用酶、荧光素、胶体金、发光物 质以及放射性核素等标记物来标记抗原或 抗体，再与标本中的抗体或抗原反应，最 后测定复合物中的标记物。 优点：特异、敏感、快速，可作定性、定 量或定位测定。
依据检测物分两类： 1.免疫组化技术(immunohistochemical technique)，用于组织/细胞中抗原或抗体的定位； 2.免疫测定(immunoassay)，用于液体标本中抗原 或抗体的检测。 依据标记物的不同，可分为： 酶免疫技术、荧光免疫技术、金免疫技术、 化学发光免疫技术和放射免疫技术。
1、直接凝集反应
（1）玻片凝集试验 ABO血型鉴定 （2）试管凝集试验 肥达试验
效价（滴度）：以出现明显抗原抗体反应现象的
最高稀释度作为待检抗原（或抗体）的含量。
凝集反应（agglutination)
颗粒型抗原 细菌、细胞
抗体 电解质 ＋ ＋ （凝集素） （生理盐水）
37℃～50℃数小时
凝集反应（凝集成团）
（1）单向扩散试验 （Single redial diffusion test）
预先混有抗 体
（2）双向扩散试验 （Double diffusion test）
（3）对流免疫电泳
_
作用及特点：
Ag
Ab
+
抗体球蛋白移向阴极，抗原分子移向阳极，当两 者在适当比例处相遇，即形成灰白色沉淀线。 检查乙型肝炎抗原及甲胎蛋白，敏感度比双向扩 散法高约10倍，只需1～2小时即可获得检验结果。 不能定量测定。
沉淀试验（precipitation test）
可溶性抗原 细胞裂解液
抗体 电解质 ＋ ＋ （沉淀素） （生理盐水）
37℃～50℃数小时
沉淀反应（清澄液中出现混浊沉淀）
沉淀反应分类
（1）琼脂扩散试验 a.单向琼脂扩散试验 b.双向琼脂扩散试验 （2）免疫电泳试验 对流免疫电泳：原理：在阴极孔内加抗原，阳 极孔内加抗体。通电后，抗原带负电荷较多，分子 较小，向阳极泳动；抗体分子带负电荷较少，加上 分子量大，在琼脂的电渗作用下向阴极泳动。 （3）环状沉淀试验
免疫学实验技术
浙江大学医学院
利用免疫学原理来检测抗原、多种免疫 分子(抗体、补体、细胞因子和粘附分 子等)及免疫细胞的实验过程。 有助于疾病的辅助诊断、治疗及预后判 断 。
一、 凝集反应
颗粒性抗原（细胞、细菌等）或吸附于免疫无 关载体上的可溶性抗原与相应抗体，在适量电解质 的存在下，形成肉眼可见的凝集团块。
2、间接凝集反应
指可溶性抗原(或抗体)吸附在乳胶颗粒或 红细胞等载体表面与相应抗体(或抗原)结合反 应，在适宜的条件下，出现凝集现象。 正向间接凝集反应 用可溶性抗原包被载 体以检测抗体。 反向间接凝集反应 用抗体包被载体以检 测抗原。
二、沉淀反应
可溶性抗原与相应抗体结合，当两 者比例合适，并有适量电解质存在时， 形成肉眼可见的沉淀物或沉淀线。
三种试剂：
①固相抗原或抗体 即把抗原或抗体用合适的方法连接到固相载体表 面，同时保留它们的免疫活性； ②酶标抗原或抗体 即把某些酶用合适的方法连接到抗原或抗体表面， 同时保留它们的免疫活性以及酶的催化活性。常 用的酶是辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶 (AP)； ③酶作用的底物 常用的底物是邻苯二胺
1. 直接凝集试验
含有已知抗体 待检菌液 生理盐水 的诊断血清
特点
玻片法
待检血清
简便、快速 不能定量 简便、快速 UUUU 能定量
伤寒、副伤寒
试管法 盐
水 已知抗原
肥达氏试验（widal test)
ABO血型鉴定
红细胞表面抗原 抗A抗体 抗B抗体 血型
A B H A,B
+ +
+ +
A B O AB
1、酶免疫技术
酶免疫技术是以酶标记的抗体或抗原进行抗原抗 体反应。
酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA) 属固
相酶免疫测定
ELISA原理： 把待测标本(含有未知抗体或抗原)和酶 标抗原或抗体按不同的顺序与固相抗原或 抗体起反应，再洗涤固相载体，随后加入 酶的底物，底物受酶催化转变为有色产物。 根据颜色的深浅对待测物质定性或定量。
荧光免疫技术 化学发光免疫技术 细胞免疫功能测定 流式细胞测定技术及HLA分型技术 请同学们参看免疫实验视听教材和 CAI课件