促红生长素(EPO)

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重组人促红素注射液（CHO细胞）
【商品名】益比奥 【规格】1万国级单
位/瓶 【生产厂家】沈阳
三生制药 【成分】重组人促
红素。辅料：人 血白蛋白、氯化 钠、一水枸橼酸、 二水枸橼酸三钠
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构建基因组噬菌体文库克隆EPO基因
血细胞 中提取基 因组DNA
BamHⅠ酶切
回收酶切片段
插入噬菌体 EMBL3载体
EPO是促红细胞生成素的英文简称。 人体中的促红细胞生成素是由肾脏 和肝脏分泌的一种激素样物质，能 够促进红细胞生成。服用红细胞生 成素可以使患肾病贫血的病人增加 血流比溶度（即增加血液中红细胞 百分比）。人体缺氧时，此种激素 生成增加，并导致红细胞增生。
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EPO 的应用
EPO兴奋剂是 根据促红细胞 生成素的原理 人工合成，它 能促进肌肉中 氧气运输，从 而使肌肉更有 劲、工作时间 更长.
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目录
• 1、促红生成素的简介 • 2、促红生成素的作用原理 • 3、EPO 的应用 • 4、用量用法 • 5、不良反应及禁忌 • 6、临床意义 • 7、 重组EPO • 8、重组EPO的生物学活性检测 • 9、检验方法 • 10、EPO的血清检测 • 11、市场前景
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促红生成素的简介
英文名称：erythropoietinin;
实验组
皮下注射 rHuEPO
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对照组
同等剂量的 生理盐水
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EPO的血清检测
采用 酶免 检测 试剂 盒检 测。
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检测原理
采用双抗体夹心法检测EPO。 两种不同的抗体，分别包被微孔板 和标记HRP酶。当 标本中含有相应 的抗原时，会形成抗体-抗原-抗体酶的复合物。未结合的物质通过洗 涤去除。加入显色底物显 色，通过 测量颜色的变化来判断标本中抗原 的浓度。
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酶联反应
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检验步骤
1 准备 (1).测试前将试剂盒组分置于室温
(18- 25℃)平衡30分钟，测试后应 立即放回2-8℃保存。 (2).如果EPO浓度高于160mU/ml， 稀释后检测。
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2、反应
(1).取出所需要的板条。
(2).分别向孔中加入50µl标准品、质 控血清或标本。
(3).每孔中加入50µl酶结合物。震动 10-20秒混匀。
2、抑制炎症 ：抑制细胞表面炎症因子，降低正常细
胞对炎症效应。
3、抑制炎症 :作用于小肠内膜表面EPO受体，促粘
膜增生发育，继而小肠对脂类 及氨基酸类物质 吸收功能。
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用量用法
静脉注射开始应用较低剂量 50～100IU/kg，每周3次，如果在 4周内，网状红细胞计数、血细胞 比容和血红蛋白水平未见明显增加， 本品的剂量可递增
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应用案例
在2008年北京奥运会中第一例 的兴奋剂检查呈阳性的西班牙自行 车选手玛丽亚·莫里诺，就是被发现 使用使用促红细胞生成素(EPO)， 国际奥委会于2008年8月11日宣布 取消其参赛资格。
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EPO作为兴奋剂的使用
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其它应用
1、对心脏的作用：促进新血管的形成和减少心肌 梗塞 面积，控制细胞凋亡，进而保护以及组织免受 缺氧、毒素及氧化应激系统诱导损伤。
定义1：分在子哺质乳量动为物4肾6脏kD和a的肝糖脏蛋产白生细的胞一因种 子 。能刺激幼稚红细胞的增生，血 红蛋白化和红细胞的成熟。
：由肾脏分泌的调节红系祖细胞生长 定义2 的细胞因子。
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人体内约
90%的促红
细胞生成素
由肾脏产生,
对红细胞的
正常分裂、
发育和成熟
。起着关键
性的调控作
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用.
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促红生成素的作用原理
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4，计算
（1).以标准品的吸光度为Y轴，浓度为X轴 作图。
（2).根据质控血清和标本的吸光度值，从 标准曲线上反算EPO的浓度。
转 加肝素的剂量。必要时补铁，使患者的转铁蛋 氨 白饱和度维持在20%以上
酶
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临床意义
1．肾性贫血患者EPO水平较低，在进行治 疗过程中，往往通过注射EPO来提高体 内EPO水平进行治疗，从而帮助病人增 加红细胞数量，此时EPO水平有所上升。
2．其他贫血如缺铁性贫血、巨细胞性贫血 患者EPO水平不降低，但也可以使用 EPO治疗，此时浓度也会有所升高
3. 生障碍性贫血和骨髓造血功能不全患者 EPO水平升高。
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重组EPO
天然的 hEPO制品一般是从贫血 病患者尿中提取的，所以药源极为匮 乏，不能满足需要。因此，在20世 纪80年代就开始rhEPO的研究，从 胎儿肝中克隆出 人促红细胞生成素 基因, 并研制成功 重组人EPO。
目前国内外在获取EPO基因后， 首选中国仓鼠卵巢(CHO)细胞表达系 统来表达生产重组人EPO。
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不良反应及禁忌
谷丙转氨酶
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常见有血压升高、心悸。偶见瘙痒感、皮
疹及GOT或GPT值升高、恶心、呕吐、眩晕、
头痛、发热、血钾升高等。 血液透析不能控制
动脉血压升高的患者、铅中毒及感染患者禁用，
天 冬 氨
有药物过敏者、变态反应体质者慎用。应及时 对用本品治疗者的血压进行监测，必要时给抗
酸 高血压药物。应注意血管栓塞情况，有时需增
(4).37℃孵育30分钟。
(5).扣除孔中液体，并用洗液洗涤5次。
(6).在干净的纸巾或毛巾上拍干，尽 量去除残留的水分。
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3、显色
(1).每孔各加入1滴显色底物A和B， 置于室温(18-25℃)避光显色15分 钟。
ຫໍສະໝຸດ Baidu(2).每孔加入1滴终止液，轻轻震动几 次混匀。
(3).在30分钟内，以630nm作为参考 波长，测量450nm处的吸光度 (A450)。
筛选完整EPO 基因的插 入片段
克隆
PCR方法 从基因组模板 中扩增EPO基 因片段为探针
构建基因组 噬菌体文库
转入CHO
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中表达。
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重组EPO的生物学活性检测
正常功能状况下，EPO的主要生物学 性状是增加红细胞的产生，因此红细胞数目
的增多，血红蛋白含量的增加及红细胞压积的改
变，此三项指标可以用于反映EPO的体内 生物学活性，这也是比较特异性的检测指 标。
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检验方法
可由SD大鼠来完成。其大致做 法为：一周两次，连续3周对实验 动物皮下注射rHuEPO；实验对照 组则同等剂量的生理盐水，在实验 结束时，检测实验组与对照组红细 胞计数、血红蛋白含量及血球压积， 以确定rHuEPO的体内生物学活性。
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检验结果记录
组别
注射方式
检验类别
红细胞计数
血红蛋白含 量 血球压积