如何分析琼脂糖凝胶电泳图

凝胶电泳结果分析

常见问题原因对策

DNA条带模糊DNA降解实验过程中应避免核酸酶污染。

电泳缓冲液陈旧电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，

PH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电

泳效果。TBE建议使用10就更换。

所用电泳条件不合适电泳时电压不应超过20V/cm，温度

<30℃，巨大DNA链电泳，温度

<15℃，检查所用电泳缓冲液的缓冲能力，

注意经常更换。

DNA上样量过多减少凝胶中DNA上样量

DNA含盐过高电泳前通过乙醇沉淀去除多余盐分。

有蛋白污染电泳前酚抽提去除蛋白。

DNA变性电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀

释DNA。

出现片状拖带或涂抹带PCR扩增时出现涂抹带、片状

带或地毯样带，往往由于酶量多

或者酶的质量差，dNTP浓度高，

Mg2+浓度高，退火温度过低，

循环次数多。

减少酶量或更换酶，减少dNTP浓度，适

当降低Mg2+浓度，增加模板量，减少循

环次数。

不规则DNA 带迁移电泳条件不合适电泳时电压不应超过20V/cm，温度

<30℃，巨大DNA链电泳，温度

<15℃，检查所用电泳缓冲液的缓冲能力，

注意经常更换。

DNA变性电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀

释DNA。

带弱或无DNA 带DNA上样量不够增加DNA上样量，聚丙烯酰胺凝胶电泳

比琼脂糖电泳灵敏度高，上样量可适当降

低。

DNA降解实验过程中应避免核酸酶污染。

DNA跑出凝胶缩短电泳时间，降低电压，增加凝胶浓度。EB染色的DNA所用光源不合

适

应用短波长（254nm）的紫外光源。

DNA带缺尖DNA跑出凝胶缩短电泳时间，降低电压，增加凝胶浓度。

分子大小相近的DNA带不易分

辨

增加电泳时间，核准正确凝胶浓度

DNA变性电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀

释DNA。

DNA链大，常规电泳不合适。在脉冲凝胶电泳上个分析。

电泳时ladder 扭曲配胶的缓冲液与电泳的缓冲液

不是同时配制。

同时配制，电泳缓冲液高出胶的1-2mm

即可。

电泳时电压过高电泳时电压不应超过20V/cm。