滤袋法同时测定NDF、ADF、ADL的含量

滤袋法测粗纤维的含量

1、滤袋用2B铅笔编号，于105 ℃烘干1 h，取出于干燥器冷却30 min，准确称重。记录每个滤袋重量W1。

2、准确称取0.5 g样品放入袋中（记录样品的重量W2及所在的滤袋编号），每个样品做2个平行样，另取1个空滤袋作为空白。用封口机封口。

3、往1000 ml搪瓷杯中加入中性洗涤剂400 ml（每个滤袋约需80 ml）和2-3滴正辛醇；若试样淀粉含量高，加入1 ml 高温α-淀粉酶；将搪瓷杯置于电磁炉上，盖上冷凝器，接通自来水，加热溶液至即将微沸时，将滤袋内容物打散、展平，放入搪瓷杯中，用重物压在滤袋上以防浮起。要求溶液在2-5 min内微沸，保持微沸处理1-2 h。

4、将处理完的滤袋在离心机内甩干2 min，放入装有90－100 ℃沸纯水的烧杯中洗涤至pH为中性（试纸测定），然后将滤袋放入离心机中甩干2 min。

5、分别用石油醚、丙酮浸泡滤袋，于烧杯中超声提取5 min后取出，将滤袋放入离心机中甩干5 min，放在打开的通风橱下吹1 h（若采用测脂肪后的样品，石油醚萃取步骤可免，仅用丙酮萃取即可）。

6、待丙酮完全挥发干净（！）后，将滤袋放入干净坩埚内于105 ℃烘箱中烘2 h，取出放在干燥器里冷却并称重。重复上述步骤至恒重，记录重量W3。按下列公式计算NDF：

NDF = W3 - W1

7、往1000 ml搪瓷杯中加入酸性洗涤剂400 ml（每个滤袋约需80 ml）和2-3滴正辛醇；将搪瓷杯置于电磁炉上，盖上冷凝器，接通自来水，加热溶液至即将微沸时，将测定NDF之后的滤袋内容物打散、展平，放入搪瓷杯中，用重物压在滤袋上以防浮起。要求溶液在2-5 min内微沸，保持微沸处理1-2 h。

8、将处理完的滤袋在离心机内甩干2 min，放入装有90－100 ℃沸纯水的烧杯中洗涤至pH为中性（试纸测定），然后将滤袋放入离心机中甩干2 min。

9、将滤袋放在250 ml烧杯中，加入丙酮浸没，于烧杯中超声提取5 min后取出，将滤袋放入离心机中甩干5 min，放在打开的通风橱下吹1 h。

10、待丙酮完全挥发干净（！）后，将滤袋放入干净坩埚内于105 ℃烘箱中烘2 h，

取出放在干燥器里冷却并称重。重复上述步骤至恒重，记录重量W4。按下列公式计算ADF：

ADF = W4 - W1

11、将测定完ADF之后的滤袋（必须确保完全干燥！）内容物打散、展平，置于500 ml的烧杯中，倒入50-100 ml 72%的硫酸；将100 ml小烧杯压在上面使滤袋浸没。开始时搅拌滤袋，并在30分钟内将100 ml烧杯上、下提起约30次（注意：浓硫酸不要溅到手上！）。

12、3小时后将硫酸倒掉，然后用水淋洗除掉酸。再用蒸馏水重复淋洗至pH为中性（试纸测定），然后将滤袋放入离心机中甩干2 min。

13、将滤袋放在250 ml烧杯中，加入丙酮浸没，于烧杯中超声提取5 min后取出，将滤袋放入离心机中甩干5 min，放在打开的通风橱下吹1 h。

14、待丙酮完全挥发干净（！）后，将滤袋放入干净坩埚内于105 ℃烘箱中烘2 h，取出放在干燥器里冷却并称重。重复上述步骤至恒重，记录重量W5。按下列公式计算ADL：

ADL = W5 - W1

15、将测定完ADL的干燥滤袋放入干净坩埚内，称量坩埚与滤袋的总重量W6（或者称量每个坩埚重量W6’）。将装有滤袋的坩埚放入马福炉中，300 ℃炭化至无烟（炉门微开），550 ℃灼烧3 h后取出，让坩埚和滤袋初步冷却，在尚温热时置于干燥器中使其完全冷却后称重。多次灰化至恒重（相差<0.002g），称量坩埚及残留物重量W7。按下列公式计算分别木质素、灰分，以及半纤维素、纤维素的重量：

半纤维素重量= NDF - ADF

纤维素重量= ADF - ADL

木质素重量= W6 - W7 - W1（或者= ADL - 灰分重量）

灰分重量= W5 - 木质素重量（或者= W7 - W6’）

粗纤维重量= 木质素重量+ 半纤维素重量+ 纤维素重量

16、重复性

每个样本取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。粗纤维含量<10%时，允许相对偏差5%；粗纤维含量>10%时，允许相对偏差10%。

表1 实验结果表