第三章 人工抗体的制备经典.ppt
抗体的制备方法与原理
抗体的制备方法与原理抗体是一种能够识别和结合特定抗原的蛋白质，广泛应用于医学诊断、治疗和研究领域。
抗体的制备方法包括动物免疫和体外选择性放大两种主要途径。
以下将详细介绍这两种方法及其原理。
一、动物免疫法制备抗体动物免疫法是制备多种特异性抗体的主要方法，常用的动物包括小鼠、兔子、大鼠等。
制备抗体的主要步骤如下：1.抗原选择：首先需要选择目标抗原，可以是蛋白质、多肽、糖蛋白、核酸等。
抗原应具有免疫原性，能在动物体内引起免疫反应。
2.免疫原免疫：将抗原与适当的佐剂混合后注射到动物体内，佐剂可以增强抗原的免疫原性，如完全弗氏佐剂、佐科克佐剂等。
注射的剂量和时间间隔需根据具体实验目的和动物种类进行优化。
3.收集血清和分离抗体：免疫一定时间后，收集动物的全血或血清，离心分离血清，其中包含了目标抗体。
4.抗体纯化：通常使用亲和层析、凝胶过滤层析等方法将血清或血浆中的抗体纯化出来。
亲和层析是最常用的抗体纯化方法，利用特定配体或抗原结合柱将目标抗体捕获，再洗脱得到纯抗体。
二、体外选择性放大法制备抗体体外选择性放大法是指通过技术手段进行人工放大和筛选特定抗体，主要包括以下步骤：1.生成抗体文库：将来自多个个体免疫系统的B细胞或血浆细胞收集起来，提取RNA或DNA，然后利用逆转录酶合成cDNA或文库，得到抗体基因的cDNA文库。
2.构建抗体显示系统：将抗体基因文库插入适当的表达载体中，如噬菌体、酵母、哺乳动物细胞表达系统等。
3.筛选特异性抗体：利用高通量筛选技术，如细胞表面展示、比对深度测序等，可通过抗原结合的特异性来筛选出具有高亲和力的抗原结合片段或全长抗体。
4.抗体表达和纯化：通过选择后的抗体基因进行表达，再经过蛋白纯化和检验等步骤，最终得到目标抗体。
抗体制备的原理主要是基于免疫系统的免疫应答机制。
当机体受到抗原的刺激后，机体会产生一系列免疫应答，其中包括B细胞的活化和分化。
经过抗原的结合和识别，B细胞会分泌具有高亲和力的抗体。
多克隆抗体制备的技术_PPT幻灯片
• 纯化：盐析法
•
凝胶过滤法
•
离子交换层析法
•
亲和层析法
•
电泳分离法
• 浓缩：吸收浓缩
•
蒸发浓缩
•
超滤浓缩
• 研钵乳化法 • 直接在旋涡振荡器上乳化 • 组织捣碎器乳化 • 注射器乳化 • 胶体磨
二、动物免疫
（一）免疫动物的选择
选择动物时应考虑以下因素： ①抗原来源与动物种属的关系。抗原的来源与免疫 动物种属差异越远，其免疫源性越强，免疫效果越 好，而同种系或亲缘关系越近，免疫效果越差。 ②动物个体的选择。适龄、健康、体重符合要求的 正常动物（以雄性为佳）；抗体需要量少时，选用 家兔、豚鼠和鸡等小动物；抗体需要量大时，可选 用绵羊、山羊、马、驴等大动物。 ③抗原性质与动物种类
•
合成类载体：人工合成的多肽聚合
物
2.连接方法
半抗原与载体的连接有物理法和化学法。
• 物理法 是用物理吸附法将载体与半抗原连 接，其原理是通过电荷和微孔来吸半抗原， 吸附载体主要有PVP和CMC等；
• 化学法 是利用某些功能基团把半抗原连接 到蛋白质类或多肽类聚合物载体上。不同的 半抗原应选用不同的方法进行连接。
（二）免疫方法
• 根据抗原的性质、免疫原性和动物的免疫 反应性来决定免疫途径、免疫次数和间隔 时间等肉注射
•
静脉注射
•
腹腔注射以及淋巴结内注射
• 注射间隔时间：
• 带佐剂的皮内、皮下注射，一般为间隔 2～ 4 周免疫一次。
• 不带佐剂的皮下或肌肉注射，一般为 1～2 周间隔时间；肌肉或静脉免疫的，可 5 天 左右的间隔时间。
抗原的提取与纯化
• 提取：
• 水溶液提取法 • 有机溶剂提取法 • 纯化： • 超滤，盐析，电泳，凝胶过滤，离子交换，
人工抗体的应用 的注意点
人工抗体的应用的注意点一、人工抗体的定义人工抗体是由人工合成的分子构建的抗体，具有与天然抗体相似的结构和功能。
人工抗体的制备过程是通过基因工程技术将抗体的可变区域与稳定区域分离，再与人工合成的稳定区域进行连接，从而获得具有特定抗原结合能力的人工抗体。
二、人工抗体的制备人工抗体的制备过程包括选择目标抗原、设计人工抗体的可变区域、合成稳定区域和连接两者。
在选择目标抗原时，需要考虑抗原的特异性和免疫原性。
在设计可变区域时，需要根据目标抗原的结构和功能确定合适的抗原结合位点。
稳定区域的选择需要考虑抗体的结构稳定性和抗原结合能力。
最后，通过连接可变区域和稳定区域，完成人工抗体的制备。
三、人工抗体的特点人工抗体具有以下几个特点：1. 高度可定制化：人工抗体的制备过程可以根据特定的需要进行定制，可以设计出具有不同特性和功能的人工抗体。
2. 抗原结合能力强：人工抗体可以通过合理设计的可变区域与抗原结合，具有高亲和力和高特异性。
3. 结构稳定性好：人工抗体的稳定区域经过精心设计，具有良好的结构稳定性，能够在不同环境条件下保持其功能。
4. 生产成本低：与传统的动物源性抗体相比，人工抗体的生产成本相对较低，且能够实现大规模生产。
四、人工抗体的应用注意点在应用人工抗体时，需要注意以下几个问题：1. 抗原选择：选择合适的抗原对于人工抗体的应用至关重要。
抗原的选择应基于充分的实验数据和临床需求，确保人工抗体能够准确识别目标抗原。
2. 抗原结合特异性：人工抗体的设计应确保其与目标抗原的结合具有高特异性，以避免与其他相关分子发生非特异性结合。
3. 抗体稳定性：人工抗体的稳定性对于其应用的效果和持久性至关重要。
在设计人工抗体时，应考虑其在不同环境条件下的稳定性，以确保其性能不受影响。
4. 免疫原性评估：在应用人工抗体前，需要对其免疫原性进行评估，以避免可能的免疫反应和副作用。
免疫原性评估可以通过体外和体内实验进行。
5. 功能评估：人工抗体的功能评估是确定其在特定应用场景中的效果和可行性的关键步骤。
单克隆抗体
克隆化方法
经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一 般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞 有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。克隆化的阳性杂交瘤 细胞，经过一段时期培养之后，也还会因为细胞突变或特定染色体的丢失，使部分细胞丧失产生抗体的能力，所 以需要再次或多次克隆化培养。克隆化次数的多少由分泌能力强弱和抗原的免疫性强弱而决定。一般说，免疫性 强的抗原克隆次数可少一些，但至少要3～5次克隆才能稳定。克隆化的方法很多，包括有限稀释法、显微操作法、 软琼脂平板法及荧光激活分离法等。
周期第1天采血0.2ml（获得0.1ml免疫前血清） 第一次免疫（抗原加弗氏完全佐剂） 第14天第二次免疫（抗原加弗氏不完全佐剂） 第21天采血和ELISA检测 第35天第三次免疫（抗原加弗氏不完全佐剂） 第42天采血和ELISA检测 第56天第四次免疫（抗原溶于PBS或盐水） 第61天细胞融合
细胞融合
融合的方法很多，常用的有转动法和离心法。融合时脾细胞和骨髓瘤细胞的比例为1:1至10:1不等。3:1或 5:1最为常用。
1．试剂与材料 (1)供融合用的脾细胞及骨髓瘤细胞。 (2)1640培养液100ml。 (3)完全1640液100ml。 (4)2.5%FCS－1640液50ml。 (5)HAT培养液100ml。 (6)50%PEG：取分子量4000，高纯度的（日本进口或Serva）PEG10g放入25ml瓶中高压灭菌，使用前用预热 于40℃的1640液10ml等量（W/V）混合，以酚红检查pH，一般不必调pH。如pH有改变，可用HCl或NaHCO3调整。 (7)10ml和50ml的灭菌沉淀管或瓶。 (8)40孔塑料培养盘。
免疫ppt课件第3章免疫球蛋白(S)
特点：纯度高，特异性强，效价高，少或无
交叉反应
应用：诊断、治疗
第三节免疫球蛋白的功能
ห้องสมุดไป่ตู้
Ig的功能
分泌型 V区的功能 （特异性结合抗原） 膜型
体内
中和毒素 中和病毒 …
体外 免疫诊断
B细胞抗原识别受体
C区的功能
激活补体 结合细胞表面Fc受体
穿过胎盘与粘膜
调理作用
ADCC作用
介导Ⅰ型超 敏反应
V区功能
特异性结合抗原
与Ag的结合具有高度特异性。 与抗原结合后，可介导体内的多种生理和病理 效应（中和病毒、毒素，介导炎症反应），体外可 产生凝集、沉淀现象用于检测等。
第三章 免疫球蛋白
概念
抗体〔antibody，Ab 〕— 是介导体液免疫 的重要效应分子，是B细胞识别抗原后分化为 浆细胞所产生的糖蛋白，存在于血清等体液中， 能与相应抗原特异性结合，显示免疫功能。
免 疫 球 蛋 白 〔immunoglobulin.Ig 〕— 指 具有抗体活性或化学构造与抗体相似的球蛋 白，称免疫球蛋白。可分为分泌型sIg和膜 型mIg。前者存在于体液中，即抗体；后者 存在于B细胞膜上， 即BCR。
IgG
出生后3个月开始合成， 3-5岁接近成人
分布于血液和体液中 血清中含量最高75-80% 抗感染的主要抗体 可发挥调理作用、激活 补体、ADCC作用等 唯一可通过胎盘的抗体
IgM
分子量最大的抗体,只分 布于血液中
个体发育过程中最早合成 和分泌的抗体。 感染早期 合成分泌的抗体。
天然的血型抗体
细菌等颗粒性抗原的作用，主要通过IgG的Fc与 吞噬细胞上的 IgG Fc受体结合，从而增强吞噬细 胞的吞噬作用。
第3章免疫原和抗血清的制备
二、免疫程序
免疫原的剂量
中间剂量范围内，免疫原剂量增加可获得高效价抗体 特异性要求高，应小量短程，可溶性抗原加用佐剂。对效价 要求高，则可大量长程加佐剂。
免疫间隔时间
第一次和第二次间隔10～20天，三次及以后间隔7～10天
免疫途径
皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、淋巴结
一、特异性IgG抗体
盐析法：硫酸铵盐析法、硫酸钠盐析法 凝胶过滤法：常结合盐析法 离子交换层析法：DEAE纤维素、QAE-sephadex、QAE纤维 素 亲和层析法：纯化抗原或SPA交联Sepharose 4B制成亲和层 析柱
二、单价特异性抗血清
亲和层析法：杂抗原交联Sepharose 4B柱 吸附剂方法：借助双功能试剂用不含特异抗原的抗
使包膜的渗透压改变而溶解。
优点是: 作用温和 适用于:破碎细菌、破碎细胞（提取核酸)
3、免疫球蛋白片段的制备： 非共价键解离法－改变pH 、利用强变 性剂 共价键解离法－氧化法和还原法 溴化氰裂解法 酶解法－木瓜酶 、胃蛋白酶
IgG片段的制备
1.酶裂解法：
IgG
木瓜酶
Fc+2Fab
Fc段可用于制备抗重链血清。
透析除去未反应
的半抗原
得人工免疫原 （半抗原+载体）
2.戊二醛法：
半抗 原氨 基
N-CH-(CH2)3-CH-N
载体 氨基
第二节 免疫佐剂
免疫佐剂（immunoadjuvant）：预先或与 抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原 的免疫应答或改变免疫应答的类型的物质 称为免疫佐剂,简称佐剂（adjuvant）。
小结
免疫原是诱导机体产生抗体并能与抗体发生反应的 物质。半抗原是指仅有抗原性而无免疫原性的物质， 与载体结合后可具有免疫原性。
抗体制备过程PPT课件
背部皮下，每处注射0.2 ml, 共2～4点。待肿瘤到达一定大小后(一般10～20天
)那么可采血，从血清中获得单克隆抗体含量可到达1-10mg／ml。但采血量有
限。
+
② 腹水的制备 常规是先腹腔注射0.5mlPristane(降植烷)或液体石腊于
BaLb／c鼠，1～2周后腹腔注射1×106个杂交瘤细胞，接种细胞7～10天后可
+ 1. 有限稀释法的程序
+
① 制备饲养细胞悬液(同融合前准备)
+
② 阳性孔细胞的计数，并调细胞数在1～5×10３／ml
+
③ 取130个细胞放入含饲养细胞完全培养液，即20个细胞／ml，100μl
／孔加A、B、C三排为每孔2个细胞。余下细胞悬液补加含饲养细胞的完全培
养液,细胞数为10个／ml，100μl／孔加D、E、F三排，为每孔1个细胞。余下
备的，与其它抗原无交叉反响性。与其它常规免疫 血清相比，单抗的特异性高、效价高、质地均一， 便于精制浓缩，应用单抗可以提高检测方法的敏感 性和特异性。同时，他又可作为提纯抗原、制备疫 苗、生产生物制剂和用于根底研究的重要手段。
+ 3 .生产简单，易于标准化 + 一旦选育成功一株高效价的杂交瘤细胞株，经鉴定
料离心管内用不完全培养液洗1次，1200rpm,8分钟。
+
(4) 弃上清，用滴管吸净残留液体，以免影响PEG的浓度。
+
(5) 轻轻弹击离心管底，使细胞沉淀略加松动。
+
(6) 在室温下融合可先以预热40℃:
+
① 30秒内参加预热的1ml45％PEG(Merek,分子量4000)含5％DMSO，边加
第三章 人工抗体的制备
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五、单克隆抗体的应用
（一）在血清学技术方面。
（二）在免疫学基础研究方面。
（三）在肿瘤治疗方面。如生物导弹。
（四）在抗原纯化方面。
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第三节 基因工程抗体
一、概念： 利用基因工程技术制备的抗体分子，称为基因工程抗体。这是分子水平的抗体。
优势：去除或减少 无关结构，保留或 增加天然抗体特异 性和生物学活性。
五、全套抗体基因库
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第四节 催化抗体
一、概念： 是具有催化活性的免疫球蛋白，也叫抗体酶。具有抗体的高度选择性和酶的高效催化性。
优点： 具有抗体的高
度选择性和酶的高
效催化性。
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二、催化抗体的制备：
如：细胞融合法、基因工程抗体技术、引入辅助因子法等。
三、催化抗体的应用：
如：在抗肿瘤方面的应用。在戒毒上也有重要应用价值。
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基本制备过程：
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一、嵌合抗体：
是指在同一抗体分 子中含有不同种属来 源抗体分子片段的抗 体。
嵌合抗体多为“鼠-
人”类型。
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二、重构抗体：
将鼠抗体超变区基因嵌入人抗体Fab骨架区编码基因中，再将 此DNA片段与人Ig恒定区基因相连，转染杂交瘤细胞，并表达嵌合的V 区抗体。
三、单链抗体：
单
需适当选择 产生高纯度抗体
无 悬浮培养：0.01~0.05
中空纤维： 小鼠
体外培养液：无7
三、建立B细胞杂交瘤与单克隆抗体生产基本过程
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四、单克隆抗体的优势
高度均一性： 纯度很高的均一性抗体
高度专一性： 只对抗原分子上某一抗原决定簇起反应。
(完整版)医学免疫学全套PPT课件
2. 组成 （1）屏障结构 皮肤和粘膜屏障，血脑屏障，胎盘屏障 （2）吞噬细胞 吞噬、分解生物大分子，杀灭病原体。 （3）正常组织和体液中的杀菌物质 抗体、补体、溶菌酶等
（二）适应性免疫（获得性免疫）
1. 特征 （1）个体出生后，由于接触抗原而获得。 （2）针对性强（特异性强），也称特异
第一章 免疫学概论
免疫学是一门古老又年轻的学科。
免疫学（Immunology）:
是研究机体免疫系统识别和清除有害生物 及其成分的应答过程及机制的科学；
是研究免疫系统对自身抗原耐受，防止自 身免疫病发生的科学；
是研究免疫功能异常与相应疾病发病机制 及其防治措施的科学。
第一节 免疫的基本概念
1. 人工主动免疫和被动免疫的研究
减毒疫苗（鸡霍乱杆菌、炭疽杆菌、狂
犬病毒）
Pasteur
抗毒素血清（白喉杆菌外毒素、破伤风 杆菌外毒素）
2. 免疫应答机制的研究
细胞学说：吞噬细胞发挥吞噬作用
体液学说：体液中产生了针对各种病原 微生物的相应抗体，并发现在试管中这 些抗体能与相应的病原微生物发生凝集、 沉淀等现象。
抗原籍表位结合
相应淋巴细胞 表面受体
相应抗体
表位是免疫细胞识别的标志及免疫反应 具有特异性的物质基础。
2.种类 分两类 (1)构象表位（决定簇）
①序列上不相连的多肽或多糖，由空间 构象形成的；
②一般位于抗原分子的表面。
③易被相应的淋巴细胞识别，启动免疫 应答，称为功能性表位。
子物质。如药物、多糖、类脂等。
载体 赋予半抗原具有免疫原性的蛋白质分子，
即为载体。 半抗原 结合 某些蛋白质 抗原（完全抗原）
详细介绍抗体的生产制备ppt课件
③人工合成佐剂： 如双链多聚肌苷酸：胞苷酸（poly I：C）、双链多聚腺苷 酸：尿苷酸（poly A：U）；
④油剂：如弗氏完全佐剂、花生油乳剂等；
⑤纳米佐剂
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应用最多的是弗氏佐剂和细胞因子佐剂
弗氏佐剂：
不完全佐剂:液体石蜡+羊毛脂 完全佐剂:液体石蜡+羊毛脂+卡介苗 弗氏佐剂：抗原=1：1 乳化成“油包水”乳液
常用载体：蛋白质类如：牛血清白蛋白、人血清清蛋白、兔血清清蛋白 等。多肽聚合物：如多聚Lys（赖氨酸）
大分子聚合物：如羟甲基纤维素；
半抗原－载体连接方法：常用物理法和化学法。
物理吸附的载体有羟甲基纤维素等，其借助电荷和微孔吸附半抗原；
化学法则是利用某些功能基团把半抗原连接到载体上。
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（2）细胞破碎：提取细胞可溶性抗原，需将细胞破碎，常用方法有冷热交替 法、超声破碎法，反复冻融法、自溶法和酶处理法等。
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（3）蛋白提纯
① 超速离心法：常用密度梯度介质有蔗糖、甘油；
② 选择性沉淀法（盐析沉淀法）：其原理是根据蛋白质理化 特性的差异，采用各种沉淀剂或改变某些条件促使蛋白质抗 原成分沉淀，从而达到纯化的目的。如选用33～50％饱和度 的硫酸胺收集沉淀物；
3.抗体的人工制备
第三章抗体的人工制备由一个祖先细胞增殖而形成的一群细胞称为克隆(clone，无性繁殖系)一个B细胞克隆只能产生针对一种抗原表位的抗体;一个浆细胞只能分泌一种类型的抗体第1节多克隆抗体一、多克隆抗体的概念①将抗原物质经不同途径注入动物体内，经数次免疫后采取动物血液，分离出血清，由此获得的抗血清即为多克隆抗体(polyclonal antibody, PcAb)，简称多抗。
②从天然感染康复动物采取的血清。
无论是细菌抗原，还是病毒抗原，都含有多种抗原成分。
即使是纯蛋白质抗原分子也含有多种抗原表位，进入机体后可激活多种淋巴细胞克隆，机体可产生针对各种抗原或抗原决定簇(表位)的抗体, 由此获得的抗血清是一种多克隆的混合抗体，具有高度的异质性。
进一步讲，针对同一抗原决定簇的抗体仍是由不同B细胞克隆产生的不同质的抗体。
二、多克隆抗体制备的基本过程1.抗原制备2.动物免疫3.试血测定抗体效价4.血清分离与保存5.多抗纯化与标记三、多克隆抗体的用途1.用于血清学实验——作为阳性血清或标记抗体(血清凝集实验/沉淀实验/补体结合实验/中和实验/免疫标记技术/免疫转印技术) 2.治疗制剂——可用于一些传染病的紧张预防和治疗第 1 页/共 6 页第2节单克隆抗体一、单克隆抗体的概念单克隆抗体是指由一个B细胞分化增殖的子代细胞(浆细胞)产生的针对单一抗原决定簇的抗体。
将产生特异性抗体的B细胞与骨髓瘤细胞融合，形成B细胞杂交瘤，这种杂交瘤细胞既具有骨髓瘤细胞无限繁殖的特性，又具有B细胞分泌特异性抗体的能力，由克隆化的B细胞杂交瘤产生的抗体即为单克隆抗体(monoclonal antibody，McAb)，简称单抗。
二、单抗与多抗的比较与多克隆抗体比较，单克隆抗体具有无可比拟的优越性：高特异性、高纯度、均质性好、亲和力不变、重复性强、效价高、成本低并可大量生产等。
三、建立B细胞杂交瘤与单克隆抗体的制备1.B细胞的制备小鼠脾细胞悬液2.骨髓瘤细胞的制备免疫相同来源的小鼠骨髓瘤细胞3.饲养细胞的决定融合之前, 将饲养细胞制成所需的浓度参加培养板孔中。
详细介绍抗体的分离纯化
步骤如下: 1.加入固体PVP到样品溶液中,至最终浓度为3%(w/v); 2.在4度搅拌4小时; 3.17,000g离心; 4.丢弃沉淀; 5.使用脱盐柱将样品换到适合纯化的缓冲液中;
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苯酚红
苯酚红是一种在实验室细胞培养中的pH指示剂,虽然并不直接的影响纯化,但是苯酚红可能结合 到某些纯化介质上,应该尽可能早的被除去。苯酚红能够在pH>7时结合在阳离子柱上。
任何离子通过柱时的
移动速率取决于与离 子交换剂的亲和力、 电离程度和溶液中各 种竞争性离子的性质 和浓度。
离子交换层析对物质的分离通常是在一根充填有离子交换剂 的玻璃管（1.5 cm×15 cm）中进行的。 24
透析法 超滤法 葡聚糖凝胶G50层析法。
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第三节 离子交换层析法
离子交换层析法（ion exchange chromatography， IEC） 是利用离子交换剂上可交换离子与组分中的离子发生可逆交换时结
合力的差别，而进行分离的一种技术。
广泛应用于很多生命物质的分析、制备和纯化等。
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沉淀剂
可用于高脂蛋白的样品,例如腹水
沉淀脂蛋白
可能会不可逆的使蛋白变 性,适合于小肽 的制备或 者制备电泳样品 沉淀聚集的核酸蛋白 沉淀聚集的核酸蛋白 沉淀核酸 沉淀血清或者腹水中的大 量蛋白,仅把免
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0.1% (w/v) 1% (w/v) 1% (w/v) 1:15 (w/w) 抗体含量应该大于 1mg/ml
注意： • 对于少量的样品或者蛋白能吸附在滤膜上，可以用10000×g离心15分钟。 • 对于细胞样品，可以在40000到50000×g离心15分钟，若样品需要短处理时间，可以减少到10到 15分钟。 • 离心时使用冷冻功能，并且在冷室或者离心机中提前预冷转子。 • 血清样品可以在离心之后用玻璃绒毛过滤以除去剩余的酯类。
抗体的制备ppt课件
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c、有机溶剂沉淀法：有机溶剂能降低溶液的 介电常数，从而增加蛋白质分子上不同电 荷的引力，导致溶解度降低而沉淀，有些 有机溶剂能破坏蛋白质的水化膜而使蛋白 质沉淀，例Cohn地温酒精可将血浆蛋白分 为五组。IgG属CohnⅢ。
d、其它沉淀剂：常用聚乙二醇(PEG)和硫酸 葡聚糖。PEG浓度3~4%可沉淀IC，6~7%沉淀 IgM，8~12%沉淀IgG，12~15%沉淀其它球 蛋白，25%则沉淀白蛋白。
1、佐剂的条件：
A、增加抗原的表面积，并改变抗原 的活性基团构型，从而增加抗原的 免疫原性。
完整最新版课件
32
B、与抗原结合能延长抗原在局部组织 中的存留时间，达到持续刺激基团 产生高效价的抗体。
C、 可以激活免疫活性细胞，增强体 液免疫、细胞免疫和非特异免疫功 能。
D、 无毒、无副作用。
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B、冷热交替法：将材料投入沸水中，90 ℃左右维持数分钟，立即置于冰浴中。 在细菌或病毒中提取蛋白质及核酸可用 此法。
C、超声波破碎法：是利用超声波的机械振 动而使细胞破碎的方法。微生物和组织 细胞破碎多用此法，但真菌厚膜孢子则 较难打破。
完整最新版课件
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D、酶处理法：酶在一定的条件下能消化细 菌和细胞。例如在碱性(pH8.0)下，溶菌 酶可专一破坏G+菌细胞壁。此法适用于 多种微生物。
1
4
Ag
2 3
抗原(antigen，Ag)
完整最新版课件
3
▪ 3.单克隆抗体
(Monoclonal Antibody, McAb)
由一个识别一种抗原表位的B细胞克隆产生 的同源抗体。
▪ 4.多克隆抗体
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..........
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二、单抗与多抗的比较
特性
对免疫原的要求
抗体产生细胞 同质性 特异性
稳定性 标准化 交叉反应 沉淀反应
多抗
免疫原纯度高， 抗体纯度才高
多克隆性 高度异质 较高，与抗原上 多种决定簇结合
较好 较难 很常见
有
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单抗
不纯的抗原即可 产生高纯度抗体
嵌合抗体多为 “鼠-
人”类型。
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二、重构抗体：
将鼠抗体超变区基因嵌入人抗体Fab骨架区编 码基因中，再将此DNA片段与人Ig恒定区基因相连， 转染杂交瘤细胞，并表达嵌合的V区抗体。
三、单链抗体：
是将 Ig 的 H 链和 L 链的 V 区基因相 连，转染大肠杆菌表达的抗体分子，又称单链 FV分子。
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第四节 催化抗体
一、概念： 是具有催化活性的免疫球蛋白，也叫抗体
酶。具有抗体的高度选择性和酶的高效催化 性。
优点： 具有抗体的高
度选择性和酶的高 效催化性。
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二、催化抗体的制备：
如：细胞融合法、基因工程抗体技术、引入辅 助因子法等。
三、催化抗体的应用：
如：在抗肿瘤方面的应用。在戒毒上也有 重要应用价值。
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第三节 基因工程抗体
一、概念： 利用基因工程技术制备的抗体分子，称
为基因工程抗体。这是分子水平的抗体。
优势：去除或减少 无关结构，保留或 增加天然抗体特异 性和生物学活性。
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基本制备过程：
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一、嵌合抗体：
是指在同一抗体分 子中含有不同种属来 源抗体分子片段的抗 体。
单克隆性 高度同质 高，与特定 决定簇 结合
较差 简单 不常见 大多数没有
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二、单抗与多抗的比较
特性
适用的血清学实验
供应量 有效抗体含量
（mg/mL）
无关Ig含量 （mg/mL）
其他血清蛋白
多抗
适用大多数 抗体纯度才高
有限 0.1~1.0
10~15
有
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单抗
需适当选择 产生高纯度抗体
高度专一性： 只对抗原分子上某一抗原决定簇起反应。
大量产生及稳定性： 杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖之传代。
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五、单克隆抗体的应用
（一）在血清学技术方面。
（二）在免疫学基础研究方面。
（三）在肿瘤治疗方面。如生物导弹。
（四）在抗原纯化方面。
（五）用于制备抗独特型抗体疫苗。
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第三章 抗体的人工制备
人工抗体有四类： 多克隆抗体 单克隆抗体 基因工程抗体 催化抗体
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第一节 多克隆抗体
一、概念： 采用传统免疫方法，将抗原物质经
不同途径注入动物体内，数次免疫后采 血，分离血清，由此获得抗血清即为多 克隆抗体。简称多抗。
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二、多克隆抗体用途
无限 悬浮培养：0.01~0.05 中空纤维：1.0~5.0 小鼠腹水： 1.0~5.0 体外培养液：无 小鼠腹水： 0.5~1.0
体外培养：少量 牛血清白蛋白
小鼠腹水：少量杂蛋白
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三、建立B细胞杂交瘤与单克隆抗体生 产基本过程
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四、单克隆抗体的优势
高度均一性： 纯度很高的均一性抗体
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四、其他基因工程抗体：
如:Ig相关分子：将抗体分子部分片段连接到与抗体 无关的序列上得到。
噬菌体抗体：将已知特异性的抗体分子的所有V 区基因在噬菌体中构建基因库，用噬菌体感染细菌， 模拟免疫选择过程，使具有相应特异性的重链和轻 链可变区在噬菌体表面呈现出来。
五、全套抗体基因库
1.用于抗原物质的鉴别、定位、分析和提纯。 2.作为疾病的诊断、检疫试剂。 3.作为人和动物的某些疾病的治疗制剂。
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三、多克隆抗体制备过程
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第二节 单克隆抗体
一、概念： 是指由一个B细胞分化增殖的子代细胞
（浆细胞）产生的针对单一抗原决定簇的抗 体，简称单抗。