血凝和血凝抑制实验

2、在第1孔内加入25ul病毒抗原，然后依次倍比稀 释至第11孔，最后弃25ul（也就是可以一次做2个抗 原效价测定）
3、每孔加入1％鸡红细胞悬液25ul
4、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分 钟
5、结果判定
医学课件ppt
7
血凝效价测定
医学课件ppt
8
结果判定标准
1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100 ％凝集；
以出现＋＋（50％凝集）的抗原最高稀释 倍数为该抗原的血凝价（1:128）？？？ 。
25ul 1:256稀释的病毒抗原为该抗原的一 个血凝单位。
医学课件ppt
10
血凝抑制试验
1、将病毒抗原稀释成4个血凝单位（1/128×4=1:32）
2、在血凝板上1－12孔内各加入25ul生理盐水；
3、在第1孔内加入被检血清25ul，然后倍比稀释至第 10孔，最后弃25ul；
医学课件ppt
16
注意事项
• 1、在稀释移取混匀的操作过程中动作要慢， 以免损坏红细胞（表现为分离是上清液为淡 红色，正常情况第一次分离后上清液为淡黄 色，之后直至清亮为清洗干净）。
• • 2、在吸取过程中一定要将中间的白细胞层吸
取干净。
医学课件ppt
17
1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100 ％凝集；
2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而 稍向孔底集中，即75％凝集；
3、 ＋＋：红细胞形成一个环状，四周有下凝集块， 即50％凝集；
4、 ＋：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四 周稍有凝集块，即25％凝集；
5、－：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即 无凝集。
医学课件ppt
13
血凝抑制价的判定
以出现完全抑制凝集(即不凝集) 的血清最 高稀释倍数为该血清的血凝抑制价（1:4 ）即抗体为22。
医学课件ppt
14
六、注意事项
1、红细胞用前请摇匀 2、用枪加样定要准，尽量不 要有气泡 3、结果判定有耐心 4、HA和HI勿相混
医学课件ppt

15
红细胞的制备
• 1、采SPF鸡血20-40ml于加抗凝剂的试管中（真空 采血管）
医学课件ppt
3
三、实验原理
1、血凝试验（HA）原理：某些病毒或病毒的血凝 素能选择性地使某种动物地红细胞发生凝集，这种 凝集红细胞的现象称为血凝（HA）,也称直接血凝 反应。
病
毒
红
颗
细
粒
胞
医学课件ppt
4
2、血凝抑制试验（HI）原理：当病毒的悬液中加入 特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其 血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或 血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制， 称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血凝抑制反应 。
2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而 稍向孔底集中，即75％凝集；
3、 ＋＋ ：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即 50％凝集；
4、 ＋ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四 周稍有凝集块，即25％凝集；
5、－ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即 无凝集；
医学课件ppt
9
血凝价的判定
血凝(HA)与血凝抑制(HI)试验
一、实验目的 二、实验内容 三、实验原理 四、实验材料 五、实验方法与结果判定 六、注意事项 七、红细胞制备
医学课件ppt
1
一、实验目的
1、掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操 作方法和结果判定方法 2、了解新城疫有关背景知识
医学课件ppt
2
二、实验内容
1、血凝试验(HA)检测新城疫抗原的效价 2、血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体（疫 苗注射后的抗体检测）
抗原
抗体
I am late！
医学课件ppt
5
四、实验材料
1、血凝板（96孔90ºV型） 2、新城疫阳性血清 3、被检血清（1份） 4、1％红细胞悬液 5、稀释液 6、移液器（50ul, 2人/把） 7、枪头
医学课件ppt
6
五、实验方法与结果判定
血凝试验（HA)
1、在血凝板上第一排和第二排的1－12孔内各加入 25ul生理盐水
4、第1－11孔内加入4单位抗原25ul（第11孔为抗原对 照第12孔为红细胞对照）；
5、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟
6、每孔加入1％鸡红细胞悬液25ul；
7、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟
8、结果判定
医学课件ppt
11
血凝抑制效价测定
医学课件ppt
12
结果判定标准
• 2、用生理盐水以1:5的比例稀释鸡全血后放入离心 管中以1500r/min离心10min，
• 3、离心后用移液器吸取上清液，再次加入生理盐水 稀释并以1500r/min离心10min。
• 4、离心后用移液器吸取上清液，再次加入生理盐水 稀释并以1800r/min离心8min。
• 5、离心后用移液器吸取上清液，剩余红细胞配制为 10%的红细胞溶液，4℃保存备用。