鸡新城疫血凝和血凝抑制实验

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1份 1管 1瓶 1块 1支
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一、鸡新城疫的血凝试验(HA)
• 【方法与步骤】
（一）制备鸡红细胞悬液：
1.用注射器抽取抗凝剂。
2.用上述注射器，采用无菌法抽取健康的未免疫鸡
的静脉血。
3.混匀，加生理盐水适量，洗涤离心，共离心三次 （第一、二次2000转/分5分钟、第三次3000转/分 5分钟）洗去血清及白细胞。
• 2. 在96孔微量反应板上进行，用固定病毒稀释血清的方法，先在第1孔加50L生 理盐水。
• 3.自第3孔至12孔各加50L 4个血凝单位的新城疫病毒液。
• 4.第１孔加被检鸡血清50L，吹吸混合均匀，吸50L至第2孔，依此倍比稀释至第 10孔，吸弃50L，稀释度分别为：1:２、1:4、1:8 …… ；第12孔加新城疫阳性 血清50L，作为血清对照。振荡混合均匀，置室温中作用20min 。
取鸡免疫血清。
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鸡群卵黄抗体的制备
1.取鸡蛋卵黄20ml，加入等量生理盐水， 振荡，摇匀。
2.加入等量氯仿40ml，振荡30分钟。 3.取振荡的卵黄液3000～4000rpm30分钟。 4.取上清液作为抗体检测材料
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二、鸡新城疫的血凝抑制试验(HI)
• 【方法】
• 1. 根据HA试验结果，确定病毒的血凝价，配制出4个血凝单位的病毒液。
+
+
-
-
以100% 凝集的病毒最大稀释度为该. 病毒血凝价，即为一个凝集单位 8
一、鸡新城疫的血凝试验(HA)
• 【 结果判定 】
• 置于振荡器上振荡1分钟，静置后30 min开始观察结果，待对照孔 红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集，沉于孔底， 平铺呈网状，即为100% 凝集（++++），不凝集者（-）红细胞沉 于孔底呈点状。
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血凝试验（HA）和血凝抑制试验 (HI)
HA和HI的原理
⒈HA试验：许多病毒表面有血凝素，能与各种动物的红细胞表面受 体结 合，而出现红细胞凝集现象，简称为病毒的血凝现象 。
2.HI试验：病毒的红细胞凝集现象，可以被特异性免疫血清所抑制， 称HI试验。
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一、鸡新城疫的血凝试验(HA)
• 【材料】 • 新城疫病毒鸡胚接种尿囊液 • 0.5％鸡血球悬液 • 生理盐水或PBS • 96孔微量血清盘 • 微量加样器
鸡新城疫的实验室诊断及免疫效果的评价
目的
1、掌握鸡新城疫的临诊要点。 2、了解和掌握鸡新城疫的实验室诊断和
免疫监测技术。
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1百度文库
内容 1、鸡新城疫的临诊要点。 2、鸡新城疫的实验室诊断。
NDV的分离及鉴定； NDV毒力的鉴定 3、鸡新城疫的免疫效果评价
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鸡新城疫的免疫监测
血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI)
3. 自右至左依次向各孔加入0.5% 鸡红细胞悬液50L， 在振荡器上振荡，室温下静置后观察结果。
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一、鸡新城疫的血凝试验(HA)
• 【病毒血凝试验的操作方法（单位：L）】
孔号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
病毒稀释 度
1:2
1:4
1:8
1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 对照
50 50 50 50
50 50 50
50
50
50
50
50
生理盐水
病毒液 50 50 50 50
50 50 50
50
0.6%红细 50 50 50 50
50 50 50
50
胞
微型振荡器1min，静置30min
50
50
50
50
50
50
50
弃50
结果观察 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++
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病
1
2 3 4 56 78
9
10
毒对 照
对照
50 50 50 50 50 50 50 50
50 50 50 50 50 50 50 50
50 50 50 50 50 50 50 50 震荡混匀，室温30-40min - - - - - - + ++
50 50 50 50
50 50
+++
++ ++
50
• 5. 自第l孔至12孔各加0.5% 鸡红细胞悬液50L，振荡混合均匀，室温下静置30-
40min后观察结果
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二、鸡新城疫的血凝抑制试验(HI)
• 【病毒血凝抑制试验的操作方法（单位：L） 】
孔号 滴度lg2 材料
8单位病毒 4单位病毒 被检鸡血清
0.6%红细胞
结果观察
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
• 以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单 位。从表4-1看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:128，则l:128为 1个血凝单位，1:64、l:32分别为2、4个血凝单位，或将128/4=32， 即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。
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二、鸡新城疫的血凝抑制试验(HI)
• 【材料】 除血球凝集试验所用材料外，血清
⒋ 取纯红细胞0.6ml，加生理盐水稀释99.4ml，即
成1%的鸡红细胞悬液。
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一、鸡新城疫的血凝试验(HA)
（二）加样
1. 在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50L 生理盐水。
2. 于左侧第1孔加50L病毒液，混合均匀后，吸 50L至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50L； 第12孔为红细胞对照。
生理盐水 50
弃50 50 50
++ ++ ++ ++
以100％抑制凝集（完全不凝集）的被检血清最. 大稀释度为该血清的血凝抑制效价，即HI效价1。3
二、鸡新城疫的血凝抑制试验(HI)
• 【结果判定】 • 以100％抑制凝集（完全不凝集）的被检血清最大稀释
度为该血清的血凝抑制效价，即HI效价。凡被已知新 城疫阳性血清抑制血凝者，该病毒为新城疫病毒。 • 从表4-2看出，该血清的HI效价为1:64，用以2为底的 负对数(-log2)表示，即6log2。