黑曲霉生产菌的扩大培养

• ④种龄：18~24h
• （3）种子质量要求 • ①镜检：菌丝粗壮，结成菊花状小球体， 无异味，无杂菌，无异常菌丝。 • ②pH2.0~2.5 • ③酸度：0.5%~2.0% • ④柠檬酸含量：0.5g/dL左右
二、影响种子质量的因素
• 1.影响斜面种子质量的因素 • （1）培养基
• （2）C、N源 • C源影响 • 对糖蜜发酵菌种来说：蔗糖最适宜，麦芽 着生孢子糖次之，葡萄糖和乳糖不大适宜。 • 蔗糖浓度40~80g/L。 • N源影响： • 对糖蜜发酵，优劣次序：硝酸铵＞硫酸铵 ＞尿素， • 对淀粉质原料，硫酸铵或尿素对产酸影响 不大。
第七节 黑曲霉生产菌的扩大培养
一、菌种的扩大培养 种子： 将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状 态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁 瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一 定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称 为种子。 菌种的扩大培养： 从少量的微生物原种开始，经过束带繁殖 培养，为每次发酵提供相当数量的健壮的菌种 培养物。
• 3.孢子悬浮液的制备 • 将符合质量要求的三角瓶麸皮，在无菌 操作下，每瓶加入500ml无菌水，摇匀，切 勿将棉塞打湿，在火焰下并入接种罐中。
4.种子罐扩大培养 • （1）种子罐种子培养基
（2）种子培养条件 • ①接种量：随发酵罐容积改变。5000L种子 罐接 入20瓶麸曲孢子（70g麸皮/1000ml）。 • ②培养温度: 35℃左右 • ③供氧：搅拌转速150r/min，通风量 • 0.3~0.4m3/min。
1.斜面培养 • 培养条件： • 有利于菌种的繁殖和孢子生长，不产酸，培养 基以“多碳少氮”为原则。 • 蔗糖合成培养基
• 严格无菌操作 • 在斜面上划波浪线，尽量利用斜面培养基
2.麸曲三角瓶培养
• 培养基制备： • 新鲜麸皮过筛，按麸皮：水=1：1拌匀，分装 1000ml三角瓶，每瓶40g，纱布封口，0.1MPa表 压下灭菌40~60min，摇散冷却。35℃培养1d， 无气味异常或染菌即可使用。 • 培养操作： • 无菌操作条件下，将2ml斜面菌种的孢子悬浮液， 于32℃下培养20h后，白色菌落盖满表面，摇瓶 一次，使培养基疏松、铺平，再培养4h，培养基 结块，白色菌丝生长旺盛，但未产生孢子，升温 到35℃左右，12h摇瓶一次，知道孢子长出后停 止。 • 麸曲可直接作种子罐种子，也可作为二级种子。
• （3）培养条件与时间
• 酸性液体培养6d为佳，固体培养6~8d适宜。
2.影响三角瓶麸曲质量的因素
• • • • • • • （1）麸皮的质量 霉烂、虫咬，灭菌困难 营养成分减少，不利于黑曲霉生长 淀粉蛋白质过多，生长旺盛，但孢子着生减少 水分过多，不利于生长 （2）水分 过少易形成干曲，过多影响疏松度，且热量散发 不出，一般麸皮：水1：1.1~1.3. • （3）培养条件
• 相对湿度60%~70%，温度35℃左右，经常摇
瓶及换气。
3.影响ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ子罐质量的因素
• （1）培养基成分 • 产酸水平随种子培养基成分的加富而提高。
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（2）通风量 对10m3罐 0~6h：0.0185~0.0187 m3/（m3· min） 17~11h：0.03 m3/（m3· min） 12~16h：0.075 m3/（m3· min） 19h后：0.094 m3/（m3· min） 20~24h：0.145~0.15 m3/（m3· min） 24h：0.18 m3/（m3· min）
种子的要求： 总量及浓度能满足要求 生理状况稳定 活力强，移种至发酵后，能够迅速生长 无杂菌污染
种子扩培的两个阶段
实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等 实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室 完成，因此将其称为实验室阶段的种子培养。 培养基：保证培养基的质量，有利于菌体的生长 减少传代次数 孢子培养时注意湿度，子斜面使用一般不超过1个月 生产车间阶段：种子培养在种子罐里面进行，一般在工厂归发 酵车间管理，因此形象地称这些培养过程为生产车间阶段。 培养基：控制成本，驯化；营养比发酵培养基丰富。